黄芪甲苷对人膝骨关节炎退变软骨细胞MMP-1和MMP-3 mRNA表达的影响

目的:观察黄芪甲苷对原代培养骨关节炎患者的膝关节软骨细胞的金属蛋白酶-1和金属蛋白酶-3mRNA表达影响,初步探讨黄芪甲苷防治膝骨关节软骨退变的作用机制。方法:原代培养骨关节炎患者的膝关节软骨细胞,用第三代细胞进行试验。将5个不同浓度的黄芪甲苷,分别作用于关节软骨细胞4、8、24、48、72h后,采用Real Time-PCR法检测细胞中金属蛋白酶-1(MMP-1)和金属蛋白酶-3(MMP-3)的mRNA表达。结果:黄芪甲苷浓度为25~100mmol/L,作用于退变关节软骨细胞24~72h时,软骨细胞MMP-1 mRNA的表达量与对照组比较显著降低。黄芪甲苷浓度为50~100mmol/L,作用于退变关节软骨细胞48~72h时,软骨细胞MMP-3 mRNA的表达量显著低于对照组。结论:黄芪甲苷可延缓膝骨关节炎关节软骨细胞的退变,抑制软骨细胞MMP-1和MMP-3mRNA的表达可能是其作用机制之一。     

香豆雌酚对新生大鼠成骨细胞增殖分化的影响

目的:观察香豆雌酚对大鼠成骨细胞(OBs)增殖分化的影响,初步探讨香豆雌酚对OBs的作用机制.方法:用不同浓度香豆雌酚干预OBs,根据不同时间分别用酶消化法测碱性磷酸酶活性和羟脯氨酸含量、放免法测骨钙素含量及半定量RT-PCR法检测OBs内OPG/RANKL基因的表达. 结果:香豆雌酚呈浓度和时间依赖性促进大鼠OBs增殖及碱性磷酸酶表达;干预12h,各浓度组羟脯氨酸含量呈浓度依赖性增高,其中10-8mol·L-1作用最大(P=0.022);培养12h,OBs表达骨钙素呈浓度依赖性,24h达高峰,其中10-8mol·L-1有显著性差异(P=0.012),48h有所下降;不同浓度、时间组香豆雌酚均能促使OBs增加表达OPG mRNA,同时有抑制RANKL mRNA表达的作用,其在24h 10-8mol·L-1浓度作用强度最大(P=0.038),10-5mol·L-1则呈现抑制作用.结论:香豆雌酚能促进OBs的增殖分化,其作用呈浓度和时间依赖性,且至少部分有OPG/RANKL途径的参与.     

超声波治疗兔膝骨关节炎对MMP-1和MMP-13表达的影响

目的探讨兔膝骨关节炎模型软骨基质金属蛋白酶(MMP)-1、-13超声波治疗前后在软骨组织中的表达及其作用机制。方法 30只新西兰大白兔随机分为正常对照组(A组)、模型组(B组)和超声波治疗组(C组),每组10只。B、C组骨关节炎造模后6周,C组实施超声波治疗,8周后取各组软骨予HE染色,免疫组化行MMP-1和MMP-13分析,观察软骨HE改变、MMP-1和MMP-13表达的变化。结果 HE染色结果采用Mankin′s评分比较,A组与B组、B组与C组比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。软骨免疫组化MMP-1、-13测定,A组与B组、B组与C组比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论超声波能有效治疗膝OA,其作用机制可能是减少软骨MMP-1、-13的含量,降低Ⅱ型胶原的降解、促进新的Ⅱ型胶原的生成,从而有利于软骨细胞外基质的合成,有利于软骨细胞的修复。     

膝骨关节炎患者血清MMP-3、TIMP-1水平变化及相关性研究

目的观察膝骨关节炎(KOA)患者血清基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、基质金属蛋白酶组织抑制物-1(TIMP-1)变化并进行相关性研究。方法采用酶联免疫吸附法(ELISA)对60例KOA患者(KOA组)及30例正常对照组血清MMP-3、TIMP-1、白细胞介素-1β(IL-1β)、转化生长因子-β(TGF-β)进行检测;采用流式细胞术检测外周血CD4+CD25+CD127low/-调节性T细胞(Treg)比例;依据KOA严重程度指数(LequesneMG)评分标准将60例KOA患者分为轻、中、重3组,并以60岁为界限将KOA患者分为<60岁组(26例)、≥60岁组(34例),分析KOA患者血清MMP-3、TIMP-1变化及与LequesneMG积分、症状量化积分、国际普适生活质量量表(SF-36)积分、焦虑自评量表(SAS)积分、抑郁自评量表(SDS)积分、红细胞沉降率(ESR)、超敏C-反应蛋白(hs-CRP)、IL-1β、TGF-β、CD4+CD25+CD127low/-Treg的相关性。结果①与正常对照组比较,KOA组血清MMP-3水平显著升高,TIMP-1水平显著降低(P<0.05)。②重度组血清MMP-3、TIMP-1水平显著高于轻度组及中度组,中度组显著高于轻度组(P<0.05)。③与<60岁组比较,≥60岁组血清MMP-3、TIMP-1显著升高(P<0.05)。④相关性分析显示KOA患者血清MMP-3、TIMP-1与LequesneMG积分、SAS积分、ESR、hs-CRP、IL-1β、TGF-β呈正相关,与SF-36各维度积分呈负相关,MMP-3与CD4+CD25+CD127low/-Treg呈负相关(P<0.05)。结论 KOA患者血清MMP-3显著升高,TIMP-1显著降低,其表达失调可能参与KOA发病过程。     

MMP-1、TIMP-1在兔实验性膝骨关节炎中的表达

目的 观察基质金属蛋白酶1(MMP-1)及其抑制剂(TIMP-1)在兔实验性骨关节炎中的表达,探讨骨关节炎的发病机制是否与MMP-1及TIMP-1的异常表达有关.方法 20只日本大耳白兔随机分为2组:A组正常对照组,B组模型组.B组用1.6%木瓜蛋白酶膝关节腔内注射,建立兔膝骨关节炎模型,4周后观察软骨组织形态学的变化及软骨中MMP-1、TIMP-1的表达.结果 B组软骨病理损害程度重于A组(P<0.01),MMP-1表达明显高于A组(P<0.01),TIMP-1表达高于A组(P<0.05).结论 MMP-1与TIMP-1与骨关节炎软骨退变有关,其异常表达在骨关节炎关节软骨退变的病理过程中发挥关键作用.     

TRPV4通道在膝骨关节炎软骨细胞中的功能表达*

目的 基于瞬时感受器电位离子通道家族（TRP）香草素受体亚家族成员Ⅳ型（TRPV4）的特点，探讨其在人类软骨细胞中的功能性表达，以及对于膝骨关节炎（KOA）的意义。方法 人类KOA软骨细胞原代培养。分别用浓度为0、1、10和100?ng/ml，以及浓度为1和10?μg/ml的脂多糖（LPS）全培孵育24?h，或用浓度为1?μg/ml的LPS全培分别孵育0、4、8、12、24和48?h，qRT-PCR检测软骨细胞TRPV4的基因表达。软骨细胞分为空白组、LPS组、LPS+TRPV4抑制剂组，行实时荧光钙成像观察各组钙离子内流情况，并提取培养上清液，酶联免疫吸附试验（ELISA）检测基质金属蛋白酶MMP-1、MMP-3及MMP-13水平。结果 浓度为1、10、100?ng/ml和1?μg/ml的LPS均能增加人类软骨细胞TRPV4通道的基因表达（P?<0.05）；实时荧光钙成像分别观察20、40和60?s的荧光强度发现：LPS组荧光强度较空白组增加（P?<0.05），LPS+TRPV4抑制剂组荧光强度较LPS组降低（P?<0.05）；此外，LPS组的MMP-1、MMP-3及MMP-13水平高于空白组（P?<0.05），而LPS+TRPV4抑制剂组低于LPS组（P?<0.05）。结论 在KOA的炎症环境下，TRPV4不仅存在表达量升高，还存在功能表达增强。TRPV4通道可能通过影响MMP-1、MMP-3及MMP-13的表达水平参与KOA软骨降解的过程。     

血管内皮生长因子对关节软骨细胞mmP-1及mmP-3表达的影响

目的:探讨血管内皮生长因子(VEGF)对关节软骨细胞mmP-1及mmP-3表达的影响。方法:原代培养SD乳鼠的关节软骨细胞。实验分为4组,每组加入不同因素:A组(对照组)不加任何处理因素;B组:10ng/ml VEGF;C组:10ng/ml IL-1β;D组:10ng/mlVEGF+10ng/ml IL-1β,应用定量PCR方法检测软骨细胞中mmP-1及mmP-3mRNA的表达水平。结果:mmP-1 mRNA表达水平:与A组比较,B、C、D组明显升高,B、C组明显低于D组。mmP-3 mRNA表达水平:与A组(对照组)比较,B、C、D组mRNA表达明显升高。D组明显高于B、C组。结论:VEGF能够明显上调软骨细胞mmP-1、-3的mRNA表达。     

抗骨增生片对兔膝骨关节炎软骨组织病理形态及MMP-1、TIMP-1的影响

目的：观察抗骨增生片对兔膝骨关节炎软骨组织病理形态、基质金属蛋白酶-1（MMP-1）及其抑制剂（TIMP-1）的影响,探讨抗骨增生片是否能调节关节软骨MMP-1及TIMP-1的表达而起到对软骨的保护作用。方法：30只日本大耳白兔随机分为3组：正常对照组（A）,模型对照组（B）,抗骨增生片组（C）。用1.6%木瓜蛋白酶膝关节腔内注射,建立兔膝骨关节炎模型,C组灌胃给药4周后,观察软骨组织病理形态的变化及软骨中MMP-1、TIMP-1的表达。结果：C组软骨病理损害程度轻于B组（P〈0.05）,MMP-1表达明显低于B组（P〈0.01）,TIMP-1表达高于B组（P〈0.05）。结论：抗骨增生片能减轻膝骨关节炎关节软骨退行性改变,其对关节软骨的保护作用与调节MMP-1及TIMP-1的表达有关。     

不同干预因素对膝骨关节炎患者滑液中MMP-3和TIMP-1的影响

目的:观察透明质酸钠(hyaluronic acid,HA)、硫酸氨基葡萄糖(glucosamine sulfate,GS)、关节镜下关节清理术(arthroscopic debridment,AD)治疗膝骨关节炎(osteoarthritis,OA)时,对关节液内基质金属蛋白酶-3(matrix metalloproteinase-3,MMP-3)、组织型金属蛋白酶抑制剂-1(tissue inhibitor of metallo-proteinase-1,TIMP-1)水平的影响,并探讨其治疗OA的机制.方法:60例膝OA病人(64关节)分为HA组和GS HA组,并于HA组和GS HA组选取部分病例组成HA'组和GS HA'组,再与AD组比较.于治疗前和治疗后4周、6月抽取关节液样本,采用双抗体夹心ELISA法测定关节液内MMP-3和TIMP-1水平.结果:HA组和GS HA组治疗4周时关节液中MMP-3水平及MMP-3/TIMP-1比值均较治疗前降低(P＜0.01),且在治疗半年后MMP-3水平和MMP-3/TIMP-1比值下降仍有统计学意义(P＜0.01).GS HA组治疗4同时TIMP-1水平较治疗前显著升高(P＜0.01);HA组治疗4周时TIMP-1水平虽较治疗前升高,但无统计学意义(P＞0.05).AD组治疗4周与治疗前比较,关节液中MMP-3水平降低(P＜0.01),TIMP-1水平升高(P＜0.01),MMP-3/TIMP-1比值降低(P＜0.01);且在治疗半年后MMP-3水平、MMP-3/TIMP-1比值下降仍有统计学意义(P＜0.01);但治疗6月后与治疗4周比较,TIMP-1水平降低(P＜0.01),MMP-3/TIMP-1比值升高(P＜0.01).HA组与GS HA组比较,GS HA组治疗4周时TIMP-1升高水平显著高于HA组(P＜0.01).AD组与相应的HA'组、GS HA'组比较,治疗4周时AD组的TIMP-1升高最明显(P＜0.01),其余指标无明显差异.结论:(1)HA,GS和AD治疗均能使膝关节OA患者关节液内的MMP-3水平、MMP-3/TIMP-1比值降低.(2)HA对关节液内的TIMP-1水平无明显影响,但同时应用CS可使关节液内的TIMP-1水平升高.HA和GS可通过不同的机制发挥治疗OA的作用.HA联合GS治疗可能获得更好的疗效.(3)在中、重度膝关节OA患者中,与相应的HA'组、GS HA'组比较,治疗4周后AD组TIMP-1升高最明显,AD可能获得更好的疗效.(4)对MMP-3和TIMP-1的影响,可能是HA,GS和AD改善OA病情的重要机制.     

仙灵骨葆胶囊对骨关节炎患者血清OPG、RANKL表达的影响

目的 观察仙灵骨葆胶囊对骨关节炎患者血清护骨素(OPG)与核因子κB受体活化因子配体(RANKL)表达的影响。方法 将我院骨科诊治的膝关节骨关节炎患者114例,根据随机数字表法分为观察组与对照组各57例。对照组给予常规西药治疗,观察组在对照组的治疗基础上给予仙灵骨葆胶囊治疗,两组均治疗观察8周,记录血清OPG、RANKL表达水平的变化。结果 治疗后,观察组的总有效率显著高于对照组(P<0.05);两组膝关节功能(Lysholm)评分显著高于治疗前(P<0.05),且观察组显著高于对照组(P<0.05);两组血C反应蛋白(CRP)、血沉(ESR)值均显著低于治疗前(P<0.05),且观察组显著低于对照组(P<0.05);两组血清OPG值显著高于治疗前(P<0.05),RANKL值低于治疗前(P<0.05)且观察组与对照组对比差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 仙灵骨葆胶囊能调节骨关节炎患者的血清OPG/RANKL分泌平衡,抑制CRP、ESR的释放从而促进改善患者的膝关节功能,提高治疗效果。     

MMP-1、13 mRNA和DDR2表达与关节软骨退变的关系

目的探讨关节软骨基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase,MMPs）-1、13mRNA及盘状结构域受体（discoidin domain receptor,DDR2）三者与关节软骨退变的关系。方法对58例关节软骨标本应用反转录-多聚酶链反应法（RT-PCR）测定MMP-1、13mRNA的表达,免疫组化法显色DDR2表达,进行图像分析研究。结果在轻度退变关节软骨中MMP-1、13呈低表达,在中重度退变软骨中MMP-1、13表达显著增高,在重度退变软骨中MMP-1,13有相对的下降,DDR2表达也呈现出与MMP-1、13相同的表达特点。结论MMP-1、13的过表达导致软骨Ⅱ型胶原的降解是软骨退变的重要原因,Ⅱ型胶原降解片段诱导DDR2表达增高进一步介导MMP-1、13的表达形成一个放大效应而加速了关节软骨退变。     

关节镜清理术联合艾瑞昔布对膝骨性关节炎的 疗效及对MMP-2、MMP-13 水平的影响

目的 分析关节镜清理治疗膝骨性关节炎（KOA）术后联合艾瑞昔布的疗效及对基质金属蛋白酶2 （MMP-2）、基质金属蛋白酶13（MMP-13）水平的影响。方法 选取2014 年12 月-2016 年12 月遵义市第 一人民医院收治的65 例KOA 患者,根据术后用药不同将其分为对照组和观察组。两组均采用关节镜下有限 清理术治疗;对照组术后服用安慰剂治疗,观察组术后服用艾瑞昔布治疗。观察两组治疗前后关节功能改善 情况、生活质量评分情况、关节液中MMP-2、MMP-13、基质金属蛋白酶抑制剂１（TIMP-1）水平和血 清中一氧化氮（NO）、白细胞介素1β（IL-1β）及白细胞介素1（IL-1）水平变化情况。结果 两组治疗后 疼痛评分、日常活动评分、关节僵硬评分及综合评分均较治疗前下降,观察组治疗后疼痛评分、日常活动评分、 关节僵硬评分及综合评分均低于对照组（P <0.05）;两组治疗后关节液中MMP-2、MMP-13 及TIMP-1 水 平均较治疗前下降,观察组治疗后关节液中MMP-2、MMP-13 及TIMP-1 水平均低于对照组（P <0.05）。 两组治疗后血清NO 和IL-1 水平均较治疗前下降,而IL-1β 水平较治疗前上升（P <0.05）;观察组治疗后 血清NO 和IL-1 水平均低于对照组,而IL-1β 水平高于对照组（P <0.05）;两组治疗后生活质量评分较 治疗前改善,观察组治疗后生活质量评分优于对照组（P <0.05）。结论 关节镜清理术后联合艾瑞昔布治疗 KOA 可有效改善患者关节功能,降低患者关节液中MMP-2、MMP-13 水平,提高患者生活质量。     

塞来昔布对离体人膝骨关节炎细胞凋亡及EGFR/MAPK信号通路的影响

目的 探究塞来昔布对离体人膝骨关节炎细胞凋亡及表皮生长因子受体/丝裂原激活蛋白激酶(EGFR/MAPK)通路的影响。方法 体外分离及培养膝关节软骨细胞,并以甲苯胺蓝染色鉴定软骨细胞。将细胞分为空白对照组(人正常膝骨关节软骨细胞不做特殊处理)、模型组(人膝骨关节炎软骨细胞不做特殊处理)及塞来昔布低、高剂量组(人膝骨关节炎软骨细胞中分别加入含终浓度为50μmol/L和200μmol/L塞来昔布溶液的培养液)。采用CCK-8法、AnnexinV/PITC双染法分别检测各组细胞增殖、凋亡能力,Western blotting检测细胞增殖、凋亡及EGFR/MAPK通路蛋白的表达。结果 甲苯胺蓝染色结果显示,人正常膝骨关节软骨细胞、人膝骨关节炎软骨细胞内见蓝紫色异染颗粒,细胞核呈深蓝色,细胞质呈浅蓝色;与人膝骨关节炎软骨细胞形态比较,人正常膝骨关节软骨细胞体积较大,形态较规则,蓝紫色异染颗粒较多。与空白对照组比较,模型组,塞来昔布低、高剂量组细胞存活率降低(P <0.05),凋亡率升高(P <0.05);与模型组比较,塞来昔布低、高剂量组细胞存活率升高(P <0.05),凋亡率降...     

低强度脉冲超声对人骨性关节炎软骨细胞的影响

目的 探讨低强度脉冲超声(low-intensity pulsed ultrasound,LIPUS)对体外原代培养的人骨性关节炎(osteoarthritis,OA)软骨细胞凋亡和细胞外基质(extracellular matrix,ECM)的影响.方法 取人膝关节置换术后废弃软骨分离培养软骨细胞,经甲苯胺蓝染色与Ⅱ型胶原细胞免疫化学染色鉴定,分别用流式细胞仪、qPCR技术及Western blot技术检测不同超声强度(0、30、60、90 mW/cm2)条件下软骨细胞的凋亡率和Ⅱ型胶原(COL2α1)、蛋白聚糖(aggrecan)、基质金属酶13(matrix metalloproteases 13,MMP13)在mRNA及蛋白水平的表达差异.结果 流式细胞学检测显示,30、60、90 mW/cm2组的细胞凋亡率[(7.75±0.79)％、(8.52±0.91)％、(11.38±0.85)％]均较对照组低[(18.13±0.83)％,P＜0.05];30、60、90 mW/cm2组细胞的COL2α1和蛋白聚糖在mRNA及蛋白水平均高于对照组(P＜0.05),MMP13 mRNA及蛋白表达水平低于对照组(P＜0.05),但各处理组之间不呈强度依赖性.结论 LIPUS能够抑制体外单层培养的OA软骨细胞的凋亡,促进软骨ECM的合成,抑制软骨ECM的分解,可用于OA的治疗并延缓其发展.     

自噬在骨关节炎软骨细胞退变中的表达变化

目的：探讨自噬在骨关节炎(OA)软骨细胞中的表达及意义。方法收集临床 OA 及正常骨关节软骨标本各6例,分为 OA 组和对照组。免疫组化法检测自噬相关蛋白微管相关蛋白轻链3(LC3)和 Beclin-1在软骨组织中表达情况。分离关节软骨细胞并在低氧环境下培养,采用瞬时转染绿色荧光蛋白 LC3(GFP-LC3)在激光共聚焦显微镜下观察各组软骨细胞自噬变化,并用 Western blot 法检测软骨细胞中 LC3蛋白表达情况。结果 OA 组软骨组织中 LC3蛋白和Beclin-1蛋白的表达显著高于对照组(P <0．05);在 OA 组发现大量自噬颗粒形成,OA 组 GFP-LC3细胞阳性率显著高于对照组;OA 组软骨细胞中 LC3蛋白从 LC3-Ⅰ向 LC3-Ⅱ转换表达显著高于对照组。结论自噬在 OA 软骨细胞退变的过程中起着重要作用,为 OA 发病机制的研究提供新的方向。