肠衣中醋酸甲羟孕酮残留ELISA检测方法的应用

[目的]为醋酸甲羟孕酮残留检测提供一种快速、灵敏的分析方法。[方法]利用MPA-BSA免疫新西兰大耳白兔获得抗醋酸甲羟孕酮的多克隆抗体。建立了MPA的ciELsIA方法，并对肠衣样品进行了样品添加回收试验。[结果]MPA浓度在0.4-50ng/ml范围内具有良好的线性关系，线性方程为y=6.29-1.7χ，r^2=0．9995，IC50为3.7ng／ml，向样品中分别添加1、2、5ng／g 3个浓度水平的MPA标准品，回收率为85％-110％之间，变异系数为7．1％～9．9％，最低检测限0．8ng／g。药物交叉反应性试验符合要求。[结论]该ELSIA方法快速、灵敏、方便，满足了醋酸甲羟孕酮残留检测的要求。     

海水和贝类中软骨藻酸的酶联免疫吸附分析方法研究

目的建立间接竞争酶联免疫吸附分析(ELISA)方法测定海水样品和海洋贝类中赤潮毒素记忆缺失性贝毒主要成分软骨藻酸(DA)。方法采用碳二亚胺法,将半抗原DA分别与载体蛋白卵清蛋白(OVA)和牛血清白蛋白(BSA)偶联,得到包被抗原和免疫抗原。以DA-BSA做为免疫抗原,免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗体,建立间接竞争ELISA方法分析检测海水样品和海洋贝类中的软骨藻酸。结果最低检出限为10.0ng/ml(对于贝相当于4μg/g);海水样品回收率为83.2%～124.7%,批内变异系数在4.7%～5.9%之间;贝类样品回收率为85.9%～99.9%,批内变异系数2.4%～7.1%之间。结论建立的ELISA方法检测海洋贝类中DA可以满足国际规定的安全限值。     

醋酸甲羟孕酮胶囊的制备工艺研究

目的 研究不同载体制备醋酸甲羟孕酮固体分散体,以提高醋酸甲羟孕酮溶出度,并对制成的胶囊进行评价.方法 选用聚乙烯吡咯烷酮(PVP k30)和聚乙二醇(PEG 6000)为载体,按照5种比例制备醋酸甲羟孕酮固体分散体,选择最佳处方制成胶囊并考察溶出度.结果 以PVP为载体按照1∶1比例制备的醋酸甲羟孕酮胶囊,45min的平均溶出度为(77.9±1.52)%,高于50%的国家标准.     

乐果单克隆抗体制备的初步研究

目的:制备特异性抗乐果单克隆抗体(McAb)。方法:采用生产乐果的中间体硫磷酯与1,4-二氨基丁烷反应合成乐果半抗原,利用碳二亚胺法,将半抗原与牛血清白蛋白(BSA)及卵清蛋白(OVA)偶联,分别制备免疫原和包被原。将免疫的BALB/c小鼠脾细胞与Sp2/0细胞融合,通过杂交瘤技术,制备特异分泌抗乐果McAb的杂交瘤细胞,并通过有限稀释法克隆化3次。用间接ELISA检测该McAb的效价和亲和性,用间接竞争ELISA检测与其他结构类似物的交叉反应率。结果:通过偶联,获得免疫原和包被原,半抗原与BSA和OVA的偶联比分别为13:1和11:1。通过杂交瘤技术,获得1株特异分泌抗乐果McAb的杂交瘤细胞,其培养上清与腹水效价分别为1:32和1:1024,McAb亲和常数为1.4×104L/mol,与氧化乐果的交叉反应率为10.6%,与其他所测结构类似的农药交叉反应率均小于0.5%。结论:通过杂交瘤技术,获得1株特异分泌抗乐果McAb的杂交瘤细胞,但McAb效价、亲和力都较低,与制备试剂盒的要求尚有较大的差距。     

羧基化半抗原直接包被酶联免疫吸附实验法测定水中残留阿特拉津

目的探讨新型羧基化半抗原直接包被酶联免疫吸附实验(ELISA)法测定水中残留阿特拉津的可行性。方法使用烷基化试剂3-氨基丙基三乙氧基甲硅烷(APTES)在聚苯乙烯表面构建活性的伯胺基,羧基化阿特拉津经活化后进攻伯胺基形成稳定的酰胺键从而完成羧基化半抗原直接偶联。羧基化半抗原直接包被ELISA法测定水中阿特拉津残留。结果该方法检出限为0.68 ng/mL。该抗体与西玛津交叉反应率为24%,其他类似物交叉反应率均小于0.1%,特异性较高。在实际样本分析中具有较高的准确度(添加回收率94.0%~112.0%)和稳定性(相对标准偏差2.72%~3.53%)。结论该方法用于检测水中残留阿特拉津,方法简便,结果可靠。     

米非司酮及醋酸甲羟孕酮片治疗异常子宫出血对患者子宫内膜厚度与FSH、E2、LH、P水平的影响

目的：观察米非司酮及醋酸甲羟孕酮片对异常子宫出血患者子宫内膜厚度、生殖激素的影响。方法：选取84例符合研究条件的异常子宫出血患者，采用Excel表格录入、编码后，分为对照组、观察组进行对比探究，对照组使用醋酸甲羟孕酮片治疗，观察组使用醋酸甲羟孕酮片与米非司酮治疗；治疗后评估临床疗效。结果：观察组总有效率(95.24%)高于对照组(80.95%)(P<0.05);观察组子宫内膜厚度小于对照组(P<0.05);观察组FSH、E2、LH、P水平均低于对照组(P<0.05)。结论：米非司酮与醋酸甲羟孕酮片治疗异常子宫出血有较好的效果，可有效抑制患者子宫内膜增生，调节其生殖激素水平，从而改善其临床症状。     

超快速液相色谱-串联质谱联用法测定牛奶中8种孕激素残留研究

目的:建立牛奶中21а-羟基孕酮、17а-羟基孕酮、炔孕酮、甲羟孕酮、醋酸甲地孕酮、醋酸氯地孕酮、醋酸甲羟孕酮和孕酮等8种孕激素残留的超快速液相色谱-串联质谱检测方法。方法:样品经甲醇提取后,用Waters OasisHLB小柱进行净化,在Shim-pack XR-ODSⅡ(100 mm×2.0 mm i.d.,2.2μm)快速柱上,以内含0.1%(V/V)甲酸和5 mmol/L乙酸铵的乙腈/水溶液进行梯度洗脱分离,采用电喷雾(ESI)电离正离子多反应监测模式(MRM)测定。结果:各待测物在0.5μg/kg～50.0μg/kg范围内具有良好的线性,相关系数0.999,回收率在73.0%～97.5%范围,相对标准偏差(RSDs)在3.8%～8.6%之间,最低定量检出限在0.1μg/kg～0.5μg/kg范围。结论:建立的方法简便、快速、干扰少、特异性强,适合于牛奶中痕量孕激素残留的检测。     

毒死蜱单克隆抗体的制备及ELISA检测方法研究

为了探讨建立毒死蜱残留检测方法，研究人员以毒死蜱原药与3-巯基丙酸为起始原料，合成半抗原并对其进行结构鉴定。利用该半抗原与牛血清蛋白（BSA）和卵清蛋白（OVA）偶联制备毒死蜱人工免疫抗原和包被抗原，再取已免疫的经过筛选的Balb／c小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2／0融合，用间接ELISA和间接竞争ELISA方法对2株细胞进行鉴定，并测定其与其它农药的交叉反应率。     

食品中3种雌激素的分离和检测

目的建立快速有效的方法分离己烯雌酚、己酸羟孕酮、醋酸甲羟孕酮。方法以ZORBAXSB-C18柱(4.6mm×250mm)分离3种组分,柱填充颗粒直径为5μm,乙腈∶水=8∶2作为流动相。结果3种组分分离良好,在一定范围内呈良好的线性关系,日间相对标准偏差为2.75%~9.22%,检出限为:己烯雌酚0.014μg/ml,己酸羟孕酮0.006μg/ml,醋酸甲羟孕酮0.032μg/ml。结论该方法灵敏度、精密度好,结合有效的样品前处理,该方法有望用于食品中这3种雌激素的同时检测。     

对硫磷完全抗原的合成鉴定及其免疫效果

目的 合成免疫原性较强的人工抗原,为制备对硫磷单克隆抗体和建立免疫快速检测食品中农药残留方法奠定基础.方法 选用2种方法合成羧基化对硫磷:一种以对硫磷为原料,改造硝基一端;另一种以三氯硫磷为原料,改造磷硫键一端.EDC法偶联牛血清白蛋白(BSA)制备免疫原(PA-1-BSA和PA-2-BSA),并分别免疫Balb/c小鼠.间接ELISA测定抗血清效价,竞争ELISA测定检测灵敏度,比较免疫效果.结果 SDS-PAGE电泳表明,2种完全抗原均合成成功;质谱法鉴定免疫原的偶联比分别为:N(PA-1/BSA)=7.2,N(PA-2/BSA)=15.4;小鼠抗血清经间接ELISA检测表明,PA-2-BSA组效价明显高于PA-1-BSA组;间接竞争ELISA检测表明,PA-2-BSA组半数抑制浓度(IC50)为1μg/ml,明显优于PA-1-BSA组(IC50为＞100 μg/ml).结论 成功合成2种对硫磷完全抗原,免疫Balb/c小鼠PA-2-BSA组免疫应答效果好于PA-1-BSA组、