同型半胱氨酸对大鼠心肌微血管内皮细胞线粒体功能的影响及通心络的保护作用

目的探讨通心络(TXL)对同型半胱氨酸(Hcy)诱导大鼠心肌微血管内皮细胞线粒体功能损伤的保护作用及机制。方法用Hcy建立大鼠心肌微血管内皮细胞损伤模型,分为对照组、Hcy组、TXL-L组、TXL-M组、TXL-H组。分别检测各组细胞线粒体活性、线粒体膜电位(MMP)和细胞内活性氧(ROS)水平。结果与对照组相比,模型组细胞线粒体活性和MMP降低,细胞内ROS水平升高(P<0.05,P<0.01);与模型组相比,TXL各浓度组均能不同程度地改善上述指标变化(P<0.05,P<0.01)。结论 TXL能够改善Hcy诱导的大鼠心肌微血管内皮细胞线粒体功能障碍,其作用机制可能与降低细胞内ROS水平有关。     

通心络胶囊对同型半胱氨酸诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用

目的 探讨通心络对同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用及机制.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),分为对照组、同型半胱氨酸组、通心络组和阿托伐他汀组,处理48 h后,采用MTT法观察内皮细胞的增殖情况;以荧光定量逆转录聚合酶链反应方法比较各组间超氧化物歧化酶(SOD)mRNA表达水平;检测细胞培养液的SOD活性和丙二醛含量.结果 Hcy组细胞活力较对照组明显降低(P＜0.05),通心络组和阿托伐他汀组细胞活力较Hcy组均明显改善(P＜0.05).Hcy组SOD mRNA表达水平显著低于对照组 (P＜0.05);通心络和阿托伐他汀组SOD mRNA表达水平均显著高于Hcy组(P＜0.05).Hcy组SOD活性较对照组显著下降(P＜0.05),丙二醛水平较对照组显著增加(P＜0.05).通心络组和阿托伐他汀组SOD活性均较Hcy组明显增加(P＜0.05),而丙二醛水平显著减少(P＜0.05).结论 通心络对同型半胱氨酸诱导的血管内皮细胞损伤有保护作用,其机制可能与其抗氧化作用有关.     

Ghrelin对同型半胱氨酸诱导大鼠心肌微血管内皮细胞损伤和炎性反应的保护作用

目的探讨Ghrelin对同型半胱氨酸(Hcy)诱导大鼠心肌微血管内皮细胞(CMECs)损伤和炎性反应的保护作用及作用机制。方法取雄性SD大鼠心肌细胞培养鉴定后,分别以不同浓度的Hcy、不同浓度Ghrelin孵育24 h,采用MTT法检测细胞活力。另选细胞随机分为对照组、Hcy组(0.25 mmol/L)、Ghrelin组(100 ng/L)和混合组,Hoechst染色计算细胞凋亡率,NO试剂盒检测NO的分泌活性,ELISA检测白细胞介素6(IL-6)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)的分泌,免疫印迹法检测NF-κB蛋白的表达。结果不同浓度Hcy细胞活性较不同浓度Ghrelin明显降低(P0.05,P0.01)。与对照组比较,Hcy组NO的分泌活性显著降低,细胞凋亡率显著上升,IL-6和ICAM-1的分泌显著增加,NF-κB的表达显著增加,差异有统计学意义(P0.05,P0.01)。与Hcy组比较,混合组可以明显抑制上述指标(P0.05)。结论 Hcy可诱发大鼠CMECs的损伤和炎性反应,而Ghrelin预处理对Hcy诱导的损伤及炎性反应有明显的抑制作用,其保护作用机制可能与抑制NF-κB信号通路有关。     

通心络干预的心肌微血管内皮细胞条件培养液对大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的:探讨受损的心肌微血管内皮细胞对大鼠心肌细胞凋亡的影响及通心络的干预作用。方法:制备3种心肌微血管内皮细胞条件培养液:正常心肌微血管内皮细胞(RCMECs)条件培养液,同型半胱氨酸(Hcy)诱导损伤的RCMECs条件培养液和通心络干预的RCMECs条件培养液。将大鼠胚胎H9c2心肌细胞分为4组:(1)正常对照组:弃去原培养基,换为无血清细胞培养基(DMEM);(2)N-CM组:弃去原培养基,换为正常RCMECs条件培养液;(3)H-CM组:弃去原培养基,换为Hcy诱导损伤的RCMECs条件培养液;(4)T-CM组:弃去原培养基,换为通心络干预的RCMECs条件培养液。JC-1试剂检测细胞线粒体膜电位(MMP);流式细胞仪检测细胞活性氧簇(ROS)水平;活细胞成像系统动态观察各组心肌细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测细胞色素-C(Cyt-C)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、B细胞白血病淋巴瘤-2相关x蛋白(Bax)和B细胞白血病/淋巴瘤2(Bcl-2)蛋白表达。结果:与正常对照组的心肌细胞比较,N-CM组心肌细胞MMP、ROS、Cyt-C蛋白表达及凋亡无明显变化(P0.05);与N-CM组比较,H-CM组心肌细胞MMP降低,ROS生成增加,凋亡增加,Cyt-C、Caspase-3和Bax蛋白表达上调(P均0.01),Bcl-2蛋白表达下调(P0.01);与H-CM组比较,T-CM组细胞MMP升高,ROS生成减少,凋亡减少,Cyt-C、Caspase-3和Bax蛋白表达下调(P0.05,P0.01),Bcl-2蛋白表达上调(P0.01)。结论:损伤的心肌微血管内皮细胞条件培养液可诱导心肌细胞凋亡,通心络可抑制该过程。     

温胆汤干预同型半胱氨酸致内皮细胞损伤的机制研究

目的观察温胆汤干预同型半胱氨酸(Hcy)致人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤的作用机制。方法选取SPF级雄性健康SD大鼠,采用体外培养HUVEC,分别设为空白对照组、模型组、温胆汤低剂量组、温胆汤高剂量组及维生素E组。MTT法检测HUVEC增殖情况,比色法检测细胞上清中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)、一氧化氮(NO)水平,ELISA法检测细胞上清中高敏C反应蛋白(hs-CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白介素-6(IL-6)含量,Western Bloting法检测细胞中P38MAPK、P-P38MAPK、ERK1/2、p-ERK1/2、核转录因子-κB(NF-κB)、p-NF-κB、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和p-eNOS表达水平。结果经Hcy造模后,温胆汤可有效增强HUVEC存活能力,促进其增殖,与模型组比较差异有统计学意义(P0.05或P0.01);与模型组比较,温胆汤不同浓度含药血清可明显减少细胞MDA、ROS、hs-CRP、TNF-α及IL-6的分泌(P0.05或P0.01),显著增加SOD、NO含量(P0.05或P0.01);同时温胆汤能明显抑制p-P38、p-ERK1/2、p-NF-κB表达,促进p-eNOS的表达(P0.05或P0.01),且呈浓度依赖性。结论温胆汤可通过缓解Hcy诱导的氧化应激,下调P38MAPK/NF-κB信号传导,从而缓解内皮细胞炎症损伤。     

叶酸对同型半胱氨酸损伤内皮细胞的保护作用及可能机制

为探索叶酸治疗高同型半胱氨酸血症的可能机制 ,将培养兔主动脉内皮细胞加入兔天然低密度脂蛋白后分为 6组 :对照组、叶酸组、四氢喋呤组、同型半胱氨酸组、叶酸同型半胱氨酸组和四氢喋呤同型半胱氨酸组。以不同时间内脂质过氧化程度、一氧化氮生成量及一氧化氮合酶的活性为检测指标。结果发现 ,叶酸同型半胱氨酸组和四氢喋呤同型半胱氨酸组相似 ,皆显示出对同型半胱氨酸损伤内皮细胞各项作用的拮抗效应 ,脂质过氧化程度降低、一氧化氮的生成量明显增加 (P <0 .0 1,与同型半胱氨酸组相比 ) ,一氧化氮合酶活性增高 (++)。此结果提示叶酸具有和四氢喋呤同样的效应 ,可能通过对一氧化氮系统的保护作用拮抗同型半胱氨酸和低密度脂蛋白对内皮细胞的协同损伤作用。     

褪黑素减轻同型半胱氨酸诱导的冠状动脉内皮细胞损伤及机制探讨

目的研究褪黑素(MT)减轻同型半胱氨酸(Hcy)诱导冠状动脉内皮细胞损伤的作用,并探讨其机制是否与激活蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路有关。方法培养人冠状动脉内皮细胞(HCAEC)并分组,对照组用不含药物的DMEM处理,Hcy组用含有1 mmol/L Hcy的DMEM处理,MT组用含有1 mmol/L Hcy及500μmol/L MT的DMEM处理,MT+LY组用含有1 mmol/L Hcy、500μmol/L MT及10μmol/L LY294002(Akt抑制剂)的DMEM处理。检测细胞活力、细胞凋亡、细胞周期及p-Akt、p-mTOR的含量。结果 Hcy组的细胞活力、S期及G2/M期比例、细胞中Bcl-2、CyclinD1、p-Akt、p-mTOR的含量低于对照组,细胞凋亡率、G0/G1期比例、细胞中Bax、cleaved Caspase-3的含量高于对照组;MT组的细胞活力、S期及G2/M期比例、细胞中Bcl-2、CyclinD1、p-Akt、p-mTOR的含量高于Hcy组,细胞凋亡率、G0/G1期比例、细胞中Bax、cleaved Caspase-3的含量低于Hcy组;MT+LY组的细胞活力、S期及G2/M期比例、细胞中Bcl-2、CyclinD1、p-Akt、p-mTOR的含量低于MT组,细胞凋亡率、G0/G1期比例、细胞中Bax、cleaved Caspase-3的含量高于MT组。结论 MT能够减轻Hcy诱导的HCAEC损伤,调控Akt/mTOR通路是MT减轻HCAEC损伤的相关机制之一。     

Ghrelin对大鼠心肌微血管内皮细胞的作用

目的:探讨ghrelin对大鼠心肌微血管内皮细胞(cardiac microvascular endothelial cells,CMECs)增殖、迁移能力和分泌NO的影响。方法:以酶消化法获得SD大鼠的CMECs,采用Dil-ac-LDL吞噬试验鉴定CMECs。将新一代CMECs分5组分别干预24 h:即(A)空白对照组、(B)1×10-9mol/L ghrelin组、(C)1×10-8mol/L ghrelin组、(D)1×10-7mol/L ghrelin组和(E)ghrelin+拮抗剂LY294002组(1×10-7mol/L ghrelin和20μmol/L LY294002)。用MTT比色法检测ghrelin对CMECs增殖的影响;以transwell法检测ghrelin对CMECs迁移的影响。用硝酸还原法检测CMECs分泌NO的量。结果:Dil-ac-LDL吞噬试验表明,90%以上的CMECs表达Dil-ac-LDL。与对照组相比,10-8~10-7mol/L的ghrelin可明显促进CMECs增殖和迁移,以及NO分泌(P0.05);LY294002则能够明显抑制ghrelin对CMECs的促增殖和迁移作用,以及抑制ghrelin刺激CMECs分泌NO的作用(P0.05)。结论:一定浓度条件下,ghrelin能够促进心肌微血管内皮细胞(CMEC)的增殖、迁移和NO分泌,这可能与激活AKT/PI3K信号转导通路有关。     

猪急性心肌梗死再灌注后微血管内皮细胞损伤及通心络的保护作用

目的评价猪急性心肌梗死（AM I）再灌注后微血管内皮细胞结构和功能损伤,以及中药通心络的保护作用和机制。方法 30只中华小型猪随机分成假手术组、模型组、小剂量、中剂量和大剂量通心络治疗组,每组6只。建立AM I再灌注模型,观察不同区域心肌组织内细胞黏附分子和内皮细胞间连接蛋白的含量和变化。结果与正常区比较,模型组再灌注区和无再流区P-选择素（P-selectin）、细胞间黏附分子-1（ICAM-1）、血管细胞黏附分子-1蛋白及mRNA水平升高,再灌注区内皮钙黏素（VE-cadherin）、无再流区VE-cadherin和β连环蛋白含量降低。与模型组比较,中剂量组再灌注区和无再流区P-selectin和ICAM-1蛋白降低;大剂量组再灌注区P-selectin、ICAM-1蛋白和mRNA含量降低,无再流区P-selectin蛋白和mRNA及ICAM-1蛋白含量降低。大剂量组再灌注区和无再流区VE-cadherin表达升高。结论中药通心络通过抑制细胞黏附分子的表达,减少中性粒细胞浸润和炎症反应,保护AM I再灌注过程内皮细胞屏障功能完整性。     

同型半胱氨酸诱导内皮细胞凋亡及舒降之的拮抗机制

目的:探讨同型半胱氨酸(Hcy)是否通过caspase途径诱导内皮细胞凋亡,以及辛伐他汀是否可以通过调节内源性凋亡抑制蛋白c-IAP发挥其拮抗效应。方法:Hcy、辛伐他汀或两者联合处理人脐静脉内皮细胞(HUVEC)24h后,用An-nexinV染色加流式细胞技术及末端脱氧核苷酸转移酶原位标记技术了解细胞凋亡状态;RT-PCR和蛋白质印迹技术检测caspase3、c-IAP1和c-IAP2的mRNA和蛋白质水平。结果:0.5mmol/L和3mmol/L的Hcy均可导致HUVEC凋亡,Hcy浓度高时凋亡细胞数较多,并伴有caspase3表达和活化增强,以及c-IAP1和c-IAP2的mRNA和蛋白质水平降低,辛伐他汀可以上调c-IAP1和c-IAP2的表达。结论:Hcy诱导HUVEC凋亡,此种作用可能涉及caspase3相关途径。辛伐他汀可促进c-IAP系统的表达,从而部分拮抗Hcy的作用。     

同型半胱氨酸诱导内皮细胞凋亡及舒降之的拮抗机制

目的：探讨同型半胱氨酸（Hcy）是否通过caspase途径诱导内皮细胞凋亡,以及辛伐他汀是否可以通过调节内源性凋亡抑制蛋白c—IAP发挥其拮抗效应。方法：Hcy、辛伐他汀或两者联合处理人脐静脉内皮细胞（HUVEC）24h后,用An—nexinV染色加流式细胞技术及末端脱氧核苷酸转移酶原位标记技术了解细胞凋亡状态;RT—PCR和蛋白质印迹技术检测caspase3、c—IAP1和c—IAP2的mRNA和蛋白质水平。结果：0．5mmol／L和3mmol／L的Hcy均可导致HUVEC凋亡,Hcy浓度高时凋亡细胞数较多,并伴有caspase3表达和活化增强,以及c—IAP1和c—IAP2的mRNA和蛋白质水平降低,辛伐他汀可以上调c—IAP1和c—IAP2的表达。结论：Hcy诱导HUVEC凋亡,此种作用可能涉及caspase3相关途径。辛伐他汀可促进C—IAP系统的表达,从而部分桔抗Hcy的作用。     

同型半胱氨酸对血管内皮细胞的氧化应激损伤及对IL-8分泌的影响

;目的:通过观察病理浓度下的同型半胱氨酸HCY对培养的内皮细胞（EC）损伤及其氧化应激的影响。同时检测IL-8的表达,探讨HCY在动脉粥样硬化（AS）中的作用。方法:体外培养人脐静脉血管EC ECV-304。测定氧化应激损伤指标,分正常对照组和HCY组（浓度分别为50、100μmol/L、1.0、2.5、5.0 mmol/L组）。测细胞因子IL-8的分泌表达,分正常对照组和HCY组（浓度分别为50、200μmol/L组）,孵育0.5、8、24 h后,测IL-8表达。结果:高浓度HCY对EC损伤明显,IDH值升高,活性氧和MDA水平增高,而SOD,CAT活性下降,NO的生成减少。IL-8的表达量增加,且分泌高峰提前出现。结论:病理水平HCY可以增强氧化应激损伤反应,刺激EC分泌IL-8。     

维生素E对醛固酮诱导的大鼠心肌重构及氧化应激的干预作用

目的:观察外源性醛固酮(aldosteronre,Ald)灌注对大鼠心肌重构和氧化应激水平的影响,以及抗氧化剂维生素E(VitE)的干预作用。方法:大鼠随机分为:①对照组,②Ald组,③Ald+VitE组和④Ald+螺内酯(spironolactone,Spi)组。用黄嘌呤氧化法测定超氧化物歧化酶的活性,用巴比妥酸比色法测定丙二醛的含量,Masson三色法检测心肌胶原,细胞凋亡原位检测法检测心肌细胞凋亡。结果:与Ald组比较,Ald+VitE组心肌胶原、凋亡指数、丙二醛明显减少,超氧化物歧化酶明显增加(P<0.05)。Ald+VitE组与Ald+Spi组上述指标差异无统计学意义。结论:VitE能够降低Ald诱导的大鼠心肌氧化应激水平,显著改善心肌纤维化和心肌细胞凋亡。     

葛根素对同型半胱氨酸损伤内皮细胞的影响

目的探讨葛根素对同型半胱氨酸损伤血管内皮细胞的保护作用。方法建立同型半胱氨酸（homocysteine，Hey）诱导的人脐静脉内皮细胞株（ECV304细胞）损伤模型，通过四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测不同浓度鹞根素对ECV304细胞增殖的影响。结果HCY明显抑制ECV304细胞增殖，葛根素浓度为10-500μ/ml时，细胞活力较模捌组有明显改善；其中当葛根素浓度为100μg／ml时细胞活力最好（P〈0．001）；但与正常组比较仍有显著性差异（P〈0．001）。当葛根索浓度为20mg／ml时，细胞活力较模型组低。结论葛根索在一定浓度范围对内皮细胞有保护作用。     

Mito-KATP对缺氧复氧大鼠心肌微血管内皮细胞凋亡的影响及作用机制

目的探讨线粒体ATP敏感性钾通道(mito-KATP)开放影响缺氧复氧大鼠心肌微血管内皮细胞(MMECs)凋亡的作用机制。方法培养大鼠心肌微血管内皮细胞,随机分为四组:对照组(N组)、模型组(H/R组)、开放剂组(DZ组)、阻断剂组(5-HD组)。DZ组加入100μmol/L二氮嗪预处理2 h,5-HD组在加入100μmol/L二氮嗪前,先用100μmol/L 5-羟葵酸预处理2 h,然后上述两组和H/R组同样进行缺氧2 h复氧2 h。Hoechst染色方法观察凋亡细胞形态,Annexin V-FITC/PI双标记法测定各组细胞凋亡率、RT-PCR法检测各组NF-κB、FKN和p53 mRNA转录水平。结果与N组比较,H/R组可见大量细胞坏死、脱落,细胞凋亡率升高(P<0.01),NF-κB、FKN和p53 mRNA表达上调(P<0.01);与H/R组比较,DZ组可见部分细胞坏死脱落,细胞凋亡率降低(P<0.01),NF-κB、FKN和p53 mRNA表达下调(P<0.01);5-HD组与H/R组比较无显著差异。结论 mito-KATP开放可抑制缺氧复氧所致MMECs凋亡,其机制可能与抑制NF-κB、FKN及p53 mRNA表达有关。     

Diplacone对同型半胱氨酸致血管内皮细胞损伤的保护作用

目的采用同型半胱氨酸(Hcy)孵育体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC),建立血管内皮细胞炎性损伤模型,后用Diplacone加以干预,观察Diplacone对HUVEC的影响,探讨Diplacone对血管内皮细胞可能的保护作用。方法先用不同浓度的Hcy预处理HUVEC,选出Hcy的最适损伤浓度(2 mmol/L)和时间(12 h),在HUVEC培养基中加入不同浓度Diplacone预处理2 h后加入2 mmol/L Hcy作用12 h,通过MTT法检测细胞活性变化,Hoechst33342核染色检测细胞核损伤程度,Western blot检测与细胞损伤有关的血管细胞黏附分子1(VCAM-1)和P-选择素的表达水平,以此衡量Diplacone对Hcy诱导的HUVEC损伤的保护作用。结果与对照组相比,2 mmol/L Hcy组细胞活性显著降低(P0.01),10μmol/L以内Diplacone具有明显的剂量依赖性抑制2 mmol/L Hcy诱导的HUVEC活性损伤并抑制Hcy所致的VCAM-1和P-选择素的表达升高(P0.01)。结论 Diplacone对Hcy所致的HUVEC内皮损伤具有保护作用。     

甲硫氨酸诱发高同型半胱氨酸血症对内皮细胞的损伤作用

目的　观察甲硫氨酸诱发高同型半胱氨酸血症对内皮细胞的损伤作用。方法　将 18只新西兰白兔 ,随机分为甲硫氨酸组 (9只 )和对照组 (9只 )。分别喂予添加 3%甲硫氨酸的饲料和普通颗粒饲料 ,第 16周末 ,取血和留取主动脉进行指标测定。结果　甲硫氨酸组血清甲硫氨酸和同型半胱氨酸浓度显著高于对照组 (P <0 .0 1) ,血浆内皮素和血管性血友病因子浓度显著高于对照组 (P <0 .0 1) ,而血浆一氧化氮含量和动脉一氧化氮合酶活性显著低于对照组 (P <0 .0 1) ,主动脉尚未剥脱的和明显损伤的内皮细胞血管性血友病因子表达均明显少于对照组。结论　短期喂食甲硫氨酸诱发高同型半胱氨酸血症 ,即使尚未引起明显的内膜增厚和脂质沉着 ,对血管内皮细胞的功能和结构也有显著的损伤作用。     

同型半胱氨酸诱导内皮细胞凋亡的研究进展

近年的研究发现，血浆同型半胱氨酸(homocysteine，HCY)水平升高是心肌梗死、脑梗死等心脑血管疾病以及外周阻塞性血管疾病的一个独立危险因素。动物实验发现，HCY可以通过损伤血管内皮细胞，启动粥样斑块和血栓形成。在粥样斑块内存在明显的内皮细胞凋亡。体外内皮细胞培养也显示HCY能诱导其凋亡，提示HCY可能通过内皮细胞凋亡而促进动脉粥样硬化。目前关于HCY引起内皮细胞凋亡的机制尚不明确，作者就HCY的代谢、HCY与内皮细胞凋亡的关系以及细胞凋亡的产生机制综述如下。     

从脉络学说探讨高同型半胱氨酸血症的病机特点及通心络的干预作用

<正>据《中国心血管病报告2014》公布数据显示,我国心血管病现患人数至少2.9亿,心肌梗死至少250万人,脑卒中至少700万人。同型半胱氨酸(Hcy)水平升高与心脑血管疾病、糖尿病、慢性肾病等疾病密切相关,中医并无高Hcy血症(HHcy)病名,根据其症候中医多归于"心痛"、"胸痹"、"真心痛"、"厥证"、"眩晕"、"中风"等范畴~([1])。中医中药对HHcy的防治已经取得了较好疗效,但对于HHcy发病机制及中医药干预机制