病毒性心肌病小鼠心肌线粒体基因表达变化

目的观察实验性病毒性心肌病小鼠心肌线粒体基因表达变化情况,探讨线粒体基因表达变化在病毒性心肌病中的发病作用。方法用柯萨奇病毒B3m反复增量感染Balb/c小鼠,建立心肌病动物模型,用包容35 852条基因的cDNA微矩阵芯片分析心脏组织特异的mRNA表达,筛选出明显差异表达的线粒体相关基因。采用原位末端脱氧核糖核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)观察心肌细胞凋亡情况。结果共有31个心肌病小鼠心肌线粒体能量代谢相关基因、心肌细胞线粒体凋亡及相关调节基因明显差异表达。心肌病小鼠心肌细胞凋亡的数目明显高于对照组(t=8.85,P<0.01)。结论心肌线粒体功能受损伴有心肌细胞凋亡发生是病毒性心肌病的重要发病机制。     

病毒性心肌炎心肌线粒体结构和功能变化

新近研究发现 ,病毒性心肌炎心肌细胞存在能量转移和利用障碍。但是否同时存在能量生成障碍 ,国内外研究甚少。本实验动态观察小鼠急性病毒性心肌炎心肌线粒体结构和酶活性变化 ,探讨病毒性心肌炎心肌是否存在能量生成障碍。一、材料与方法1.动物分组与心肌炎模型制作 :6～ 8周龄近交系雄性Ｂａｌｂ/ｃ小鼠 40只 ,体重 18～ 2 0ｇ。随机分为柯萨奇病毒Ｂ3(ＣＶＢ3)组、感染组和对照组。感染组每只小鼠腹腔接种含ＣＶＢ3的ＭＥＭＥａｇｌｅ液 0 1ｍｌ (ＴＣＩＤ5 0 10 7) ,对照组每只小鼠腹腔接种不含ＣＶＢ3的ＭＥＭＥａｇｌｅ液 0 1ｍｌ…     

缺血后适应心肌线粒体能量代谢研究

目的研究缺血后适应心肌线粒体能量代谢特点。方法以Langendofff离体心脏灌注系统构建缺血后适应大鼠模型,随机分为对照组．再灌注组和后适应组,每组16只。平衡20min后,对照组灌注60min;再灌注组停灌30min,再灌注30min;后适应组停灌30min之后,循环6次再灌注10s,停灌10s,再灌注28min。记录心率和冠状动脉流量。冉灌注末取心肌．用高效液相色谱法测定高能磷酸化合物三磷腺苷、二磷腺苷和一磷腺苷含量;用差速离心法提取心肌线粒体,用氧电极法测定线粒体3态呼吸、4态呼吸和线粒体呼吸控制率。结果与再灌注组比较,后适应组明显提高再灌注末的心率和冠状动脉流量,明显提高心肌内二磷腺苷和一磷腺苷含量,三磷腺苷在各组差异无统计学意义。线粒体3态呼吸和线粒体呼吸控制率改善。结论心肌线粒体能量代谢改善,是缺血后适应心肌保护的可能机制之一。     

钼对缺硒大鼠心肌线粒体功能的影响

本文以克山病病区粮喂养大白鼠造成缺硒动物模型，以病区粮加钼作为处理因素，对大鼠心肌线粒体ＳＤＨ，ＣＣＯ活力及氧化磷酸化效率（Ｐ／Ｏ比值）做了测定。结果显示，钼对上述测定指标均有不同程度的改善，大剂量钼（４０ｍｇ／ｋｇ饲料）的作用优于小剂量钼（２．０ｍｇ／ｋｇ饲料），且与对照组相比有显著的统计学意义。此外，小剂量钼也能明显提高心肌线粒体ＳＤＨ活力。实验结果提示，改善心肌线粒体呼吸链功能及氧化磷酸化效     

生脉对鼠病毒性心肌病心肌线粒体能量代谢的保护作用

目的：观察生脉注射液对实验性病毒性心肌病小鼠心肌线粒体能量代谢的影响,探讨线粒体能量代谢变化在病毒性心肌病发病中的作用。方法：取Balb／C小鼠,用柯萨奇病毒B3m反复增量感染之,建立心肌病动物模型,生脉干预组小鼠于实验的第60d开始,给予生脉注射液灌胃。存活小鼠：心肌病组（30只）、生脉干预组（36只）。另设正常对照组（13只,给予生理盐水腹腔注射）。104d处死全部小鼠。分别检测3组小鼠心功能及以荧光分光光度计比色法检测其心肌线粒体细胞色素C氧化酶（CCO）活力。结果：病毒性心肌病组小鼠心输出量（CO）[（1.37±0．06）ml／min：（2．13±0．09）ml／min,]、线粒体氧化磷酸化标志CCO活性[（3．06±0．76）k／min·mg：（4．53±1．19）k／min·mg],较正常对照组明显下降（P均〈0．01）;生脉注射组小鼠CO[（1．58±0．07）ml／min：（1.37±0．06）ml／min],CCO活性[（3．98±0．96）k／min·mg：（3．06±0．76）k／min·mg]较心肌病组明显提高（P均〈0．01）。结论：心肌线粒体能量代谢障碍是病毒性心肌病的重要病理生理基础,生脉注射液具有保护线粒体能量代谢作用。     

细胞色素C氧化酶与神经疾病研究现状

神经疾病的发病机制及其防治研究一直是生物医学领域的重要课题之一.近年来研究报道显示细胞色素C氧化酶(COX)与许多神经疾病密切相关[1,2].COX是线粒体呼吸链氧化磷酸化过程的限速酶,直接参与线粒体氧的利用和能量产生.COX是一种内源性代谢标志物,可以作为疾病发病机制及防治研究的理想靶标.但是,COX亚基的表达调控、COX的组装、COX的作用机制等方面尚未完全明了,涉及影响因素较多.本文就近年来COX及其与神经疾病的相关研究进行简要综述.     

冠心病患者线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅱ基因片段的重排

采用玻璃粉微量吸附法获取DNA直接作为PCR反应的模板,利用巢式PCR技术,检测冠心病患者血细胞内编码细胞色素C氧化酶亚基II的线粒体DNA扩增片段多态性,探讨线粒体DNA的片段缺失与动脉粥样硬化发生发展的关系。研究发现在全部冠心病患者编码细胞色素C氧化酶亚基II的基因中出现了大约100bp的缺失片段,其中1例冠心病患者中还出现了大约450bp核基因组和600bp的线粒体DNA扩增片段,而在正常对照老人中没有出现片状的重排现象,表明冠心病患者中存在该基因片段的缺失和模板量减少的现象,该基因可能参与了冠状动脉弱样硬化的形成与发展,编码呼吸链复合物一些亚基线粒体DNA片段的重排可能是动脉粥样硬化进行性发展的恶化因素。     

病毒性心肌炎小鼠心肌线粒体结构和功能变化

目的:探讨病毒性心肌炎(VMC)小鼠心肌线粒体结构和功能变化。方法:雄性Balb/c小鼠随机分为柯萨奇B3病毒(CVB3)感染组和对照组。分别采用电镜和形态计量学方法观察心肌线粒体形态、数量和膜磷脂定位,酶细胞化学法分析线粒体细胞色素氧化酶(CCO)和琥珀酸脱氢酶(SDH)活性,反相高效液相色谱法测定心肌组织腺苷酸(ATP、ADP和AMP)含量。结果:CVB2感染组小鼠心肌线粒体大量破坏,膜磷脂严重缺失、定位改变,CCO和SDH活性降低,腺苷酸(ATP、ADP和AMP)含量下降。结论:VMC心肌线粒体结构严重破坏、功能明显下降,心肌细胞存在产能障碍。     

Urocortin对缺血大鼠心肌线粒体凋亡通路的影响

目的:研究Urocortin(UCN)对缺血大鼠心肌线粒体凋亡通路的影响,探讨其心肌保护的可能机制。方法:将24只Wistar大鼠随机分为3组,每组8只,即对照组(CON)、缺血/再灌注(I/R)组及UCN组。CON组:大鼠麻醉后,直接开胸取左心室肌作缺血前对照。I/R组:建立离体心脏Langendorff-Neely模型,灌注K-H缓冲液30min后,于主动脉根部灌注4℃的St.Thomas-2心脏停搏液,低温下使心脏停跳30min,复灌K-H缓冲液90min后,取左心室肌备检。UCN组:低温下使心脏停跳30min后,复灌含UCN的、浓度为1×10-8mol/L的K-H缓冲液90min,取左心室肌备检。用蛋白免疫印迹(Westernblot)法检测各组心肌细胞线粒体凋亡通路的标志性蛋白细胞色素C(CytoC)从线粒体的释放。用免疫组化染色法检测各组心肌细胞中Bcl-2和Caspase-3蛋白的表达。用原位末端转移酶标记法(TUNEL)检测心肌细胞的凋亡。结果:Westernblot检测显示,CON组、I/R组和UCN组胞浆中CytoC的量分别为(0.56±0.05)、(1.29±0.02)和(0.88±0.07),I/R组和UCN组胞浆中CytoC的含量明显高于CON组(P0.05);UCN组低于I/R组(P0.05)。免疫组化染色结果显示,CON组、I/R组和UCN组Bcl-2蛋白的表达量,分别为(0.077±0.05)、(0.12±0.06)、(0.2±0.05),I/R组和UCN组高于CON组(P0.05),UCN组高于I/R组(P0.05)。CON组、I/R组和UCN组Caspase-3蛋白的表达量,分别为(0.15±0.22)、(0.36±0.15)和(0.24±0.20)。I/R组和UCN组高于CON组(P0.05),UCN组低于I/R组(P0.05)。各组心肌细胞的凋亡指数,分别为(2.29±0.67)、(12.81±0.62)和(6.77±1.12),I/R组和UCN组高于CON组(P0.05),UCN组低于I/R组(P0.05)。结论:UCN能够抑制细胞凋亡,其机制可能与抑制线粒体释放CytoC和随后Caspase-3的激活,上调Bcl-2蛋白的表达,抑制线粒体通路的细胞凋亡有关。     

线粒体脱氧核糖核酸缺失与病毒性心肌疾病患者心功能损伤的关系

目的探讨不同心功能状态病毒性心肌疾病患者外周淋巴细胞线粒体脱氧核糖核酸(mtI)NA)缺失率,为进一步明确mtDNA损伤在病毒性心肌疾病发病中的作用提供分子依据方法将83例病毒性心肌疾病患者分为病毒性心肌炎组(VMC组,n=50)和扩张型心肌病组(DCM组,n=33),23例健康献血者为对照组.用定量多聚酶链反应(PCR)法检测患者外周淋巴细胞mtDNA4977碱基对(mtDNA4977)和mtDNA7436碱基对(mtDNA7436)缺失率,并分析mtDNA缺失程度与心脏扩大及心功能状态的关系.结果VMC组和DCM组外周淋巴细胞mtDNA缺失率显著高于对照组(P<0.001);mtDNA缺失率的高低与心功能损害呈一致性改变,NYHA心功能I级与IV级者mtDNA缺失率分别比对照组高12.4倍和110.3倍;mtDNA缺失率与心功能分级、心胸比率及心腔内径呈正相关,与左心室射血分数(LVEF)呈负相关;mtDNA4977和mtDNA7436缺失率与LVEF的相关系数分别为-0.681和(0.675(P均<0.05).结论mtDNA缺失突变与病毒性心肌疾病患者心功能的损伤密切相关,可能在该病发生与发展中起一定作用.     

肉毒碱对酒精性心肌病心肌代谢和重构的影响及机制研究

目的 观察肉毒碱对酒精性心肌病(ACM)发病过程中代谢紊乱及心脏重构的防治机制及作用.方法 将实验动物分为3组:酒精(A)组、酒精/药物(B)组和对照(C)组.检测血清游离脂肪酸(FFA)、肉毒碱含量,测定心肌组织过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)α和PPARγ、类维甲酸受体(RXR)a、肉毒碱棕榈酰转移酶Ⅰ(CPT-Ⅰ)、中链脂酰辅酶A脱氢酶(MCAD)的mRNA和蛋白表达.结果 (1)与C组比较,A组和B组FFA含量升高,肉毒碱含量下降,PPARα、RXRα、CPT-Ⅰ和MCAD的mRNA和蛋白表达量随ACM进展逐渐减少,A组比B组更为显著(P<0.05).(2)在2和4个月时,A、B和c组PPA脚mRNA和蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05).6个月后B组PPARγ表达量增加,A组表达降低,和C组比较,差异均具有统计学意义(A比C,P<0.01;B比C,P<0.05).结论 ACM进展中发生心肌能量代谢紊乱和心脏重构,肉毒碱可能通过上调PPARα、RXRα、CPT-Ⅰ和MCAD改善心肌代谢障碍,通过上调PPARγ预防心脏重构.     

The influence of chronic potassium deficiency on energy production, calcium metabolism and phospholipid composition of isolated heart mitochondria.

Rabbits were maintained for an average of 28 days either on a normal (controls) or a K⁺-deficient diet. In the low potassium group, myocardial contractility was significantly decreased revealing the cardiomyopathy. The K⁺ content of the serum as well as of the myocardial tissue was significantly decreased while the Na⁺ content in serum was higher than in the control animals. Ca²⁺ and Mg²⁺-concentrations remained unchanged. In mitochondria isolated from K⁺-depleted hearts, the state-4-respiration and the rate of Ca²⁺-uptake in the presence of ATP were increased (P < 0.001 or 0.01). Passive Ca²⁺-binding to isolated cardiac mitochondria was significantly higher as compared with controls. These data suggest that mitochondria are able to store and take up more Ca²⁺ in K⁺-deficiency. The mitochondrial phospholipid pattern shows a depression of the phosphatidylcholine content so that the phosphatidylethanolamine portion is relatively increased. A positive correlation was found between the phosphatidylethanolamine content of cardiac mitochondria and the amount of passively bound Ca²⁺. Comparing the fatty acid composition of mitochondrial phospholipids, the linoleic acid content of the cardiolipin fraction was increased in chronic K⁺-deficiency when compared with control animals. The absolute amount of linoleic acid was positively correlated to the mitochondrial state-4-respirations as well as to the ATP-dependent calcium uptake both from K⁺-depleted and normal animals.     

病毒性心脏病细胞凋亡与纤维化的研究

目的:观察心肌细胞凋亡与纤维化在小鼠CVB3慢性病毒性心肌炎(VMC)转化为扩张型心肌病 (DCM)病理机制中的作用。方法:4周龄、雄性Balb/c小鼠反复感染CVB3(Nancy株),建立慢性VMC与DCM 模型,分别于病毒感染后1、3、6、9个月处死小鼠,进行心肌苏木精 伊红、VG染色,检测细胞凋亡及凋亡指数、心 肌组织caspase3活性与血清胶原前肽(PⅠNP、PⅠCP、PⅢNP)。结果:病毒感染后1、3个月心肌病理符合慢性 VMC病理特征,6、9个月后符合DCM病理特征;TUNEL检测发现,病毒感染后1、3个月细胞凋亡发生在病变 部位与周围,6、9个月细胞凋亡则呈现散在性分布;细胞凋亡指数与心肌组织caspase3活性则随病程的迁延而 呈增高趋势;VG染色发现病毒感染后1、3个月病灶内及周围组织纤维化变化,而6、9个月则呈现出弥漫性纤维 组织增生,心肌胶原容积较正常对照组明显增加(P<0.01);血清PⅠCP与PⅢNP较正常对照组显著增加(P <0.01),但PⅠNP则变化不明显(P>0.05)。结论:细胞凋亡与心肌纤维化是小鼠CVB3病毒性心脏病由 VMC向DCM转化的重要病理机制。     

心脏肌钙蛋白T对扩张性心肌病患者的预测价值

目的探讨心脏肌钙蛋白T(cTnT)对扩张性心肌病(DCM)的预测价值。方法用酶联免疫法测定60例DCM患者的血清cTnT水平并将患者分为cTnT升高组和cTnT正常组;观察其两组恶性心律失常,心源性死亡和因心衰再入院的发生率。结果在60例DCM患者中,cTnT升高26例(43.3%),cTnT升高组恶性心律失常,因心衰再入院的发生率显著高于cTnT正常组(P<0.01)。cTnT升高对因心衰再入院的阳性预测值为30.7%,阴性预测值为96%。结论cTnT对扩张性心肌病的预后相关。     

Value of radionuclide assessment with thallium 201 scintigraphy in carnitine deficiency cardiomyopathy

The case of a 30 month-old boy who presented with isolated severedilated cardiomyopathy is reported. The diagnosis of systemiccarnitine deficiency was confirmed by low serum and tissue carnitinelevels. During oral L-carnitine therapy, dramatic improvementof the cardiac function was assessed by radionuclide methods.Myocardial thallium 201 uptake was closely correlated with cardiacfunction studied by angiosintigraphy. These methods are simple,easily reproducible, non-ivasive and involve little radiation.In a case of cardiomyopathy, we suggest an immediate trial oforal carnitine treatment; the efficacy of the therapy can beconfirmed by isotopic tests with thallium 201 scintigraphy.     

心脏再同步治疗缺血性与非缺血性心肌病的临床应用

目的报道142例心脏再同步治疗缺血性与非缺血性心肌病临床应用。方法 142例心肌病慢性心力衰竭患者心功能Ⅲ-Ⅳ级(NYHA分级),男性91例,女性51例,平均年龄59．8岁,左心室内径平均72．32mm,平均左心室射血分数(LVEF)为0．29。患者均伴有室内阻滞,平均QRS波时限为(146．7±21．4)ms。142例患者中,扩张性心肌病98例,缺血性心肌病44例。分别观察双心室起搏前后LVEF变化。结果双心室同步起搏后,患者心功能得到明确改善,142例患者平均LVEF从术前的0．29±0．08增加至0．36±0．07,LVEF值平均提高0．07(P<0．05)。左心室充盈时间延长,二尖瓣反流量减少。扩张性心肌病患者平均LVEF从术前的0．28提高到术后的0．37。缺血性心肌病患者平均LVEF从术前的0．30提高到术后的0．36。均有显著改善。结论无论扩张性心肌病患者还是缺血性心肌病患者心脏再同步治疗后心功能均有显著提高。     

依达拉奉对血管性痴呆大鼠海马线粒体COX活性及基因表达的影响

目的 探讨依达拉奉对血管性痴呆(VD)大鼠海马组织的细胞色素C氧化酶(COX)活性及基因表达的影响.方法 采用双侧颈总动脉永久结扎法制备慢性前脑缺血大鼠模型,分依达拉奉治疗组(皮下注射,每日1次,3 mg/kg体重),甲磺酸阿米三嗪(都可喜,灌胃,每日1次,20 mg/kg体重)组和模型组,另取正常大鼠为正常对照组.自手术7 d起给药,共20 d后,各组分别取1及2个月为时间点,处死取脑,测定大鼠海马组织COX活性及基因表达并进行基因突变分析.结果 提取各组大鼠海马组织线粒体后,COX活性检测结果显示:术后1、2个月依达拉奉治疗组COX活性明显高于相应时间点模型组(P＜0.05),并有高于都可喜组趋势.依达拉奉治疗组COX表达量高于模型组(P＜0.05),与都可喜组无差异.依达拉奉组COX基因新出现3处基因突变,比正常组少3个突变位点,与模型组比新出现3处基因突变,少3处突变位点.COX基因依达拉奉组没有模型组的突变位点,也没有对照组突变位点,都可喜组突变频率较高既有正常对照组的突变位点,也有模型组的突变位点.结论 依达拉奉可以使VD大鼠海马组织COX活性升高,COX基因突变率减少,提示依达拉奉可以减轻自由基对mtDNA的氧化损伤,保护VD大鼠的神经功能.     

心肌病暨慢型克山病患者心电图QT离散度的观察

目的了解ＱＴ间期离散度（ＱＴｄ）对心肌病及慢型克山病患者心功不全的临床应用价值。方法收集住院患者病例９５例,分成三组。结果心肌病组、慢型克山病组ＱＴｄ测值明显大于对照组。结论心肌病及慢型克山病心功不全患者ＱＴｄ延长,对猝死有预测作用     

Role of mtDNA lesions in anthracycline cardiotoxicity

Doxorubicin (adriamycin) is an effective drug in the treatment of many malignancies. Its prolonged use is, however, limited by an irreversible, dose-dependent and progressive cardiomyopathy, which may become evident even years after completion of therapy. Data from rats and humans show that oxidative phosphorylation is impaired rapidly after acute doxorubicin-exposure. Such respiratory chain dysfunction is known to enhance the production of reactive oxygen species and may lead to quantitative and qualitative injury of mitochondrial DNA (mtDNA) and its encoded respiratory chain subunits. MtDNA depletion, mtDNA mutations and respiratory defects then accumulate with time also in the absence of continued anthracycline exposure. Chronic cardiotoxicity then manifests, when the bioenergetic capacity of the organelles is severely impaired. The mitochondrial damage in late-onset doxorubicin cardiomyopathy is heart specific and not found in skeletal muscle. DOXO-EMCH, a 6-maleimidocaproyl hydrazone derivative of doxorubicin has evolved from the search for less cardiotoxic anthracyclines. At equieffective antitumor doses, DOXO-EMCH has a substantially lower heart toxicity than free doxorubicin.