布地奈德对哮喘大鼠信号转导子和转录激活子6的表达

目的研究布地奈德（BUD）对支气管哮喘大鼠支气管信号转导子和转录激活子6（STAT6）基因和蛋白表达的调控作用。方法30只清洁级幼年雄性SD大鼠随机分为对照组（A组）、哮喘组（B组）和BUD组。对支气管肺泡灌洗液（BALF）进行细胞总数、嗜酸性粒细胞（EOS）计数和分类计数；应用双抗体夹心酶联免疫吸附试验法测定BALF中IL-4、IL-12浓度；采用免疫组化法和原位杂交法分别检测STAT6蛋白和STAT6 mRNA表达的变化。结果（1）B组BALF中细胞总数、EOS绝对值和EOS占细胞总数的百分比（EOS％）均显著高于A组（P〈0．01），BUD组BALF中上述各项指标较B组均显著降低（P〈0．01）；（2）BALF中IL-4的浓度B组显著高于A组（P〈0．01），BUD组较B组显著降低（P〈0．01），而IL-12的浓度B组显著低于A组（P〈0．01），BUD组较B组显著升高（P〈0．01）；（3）B组支气管上皮细胞STAT6蛋白和STAT6 mRNA阳性表达较A组明显增强（均为P〈0．01）。BUD组较B组明显减弱（均为P〈0．01）；（4）支气管上皮细胞STAT6蛋白、STAT6 mRNA分别与BALF中的IL-4浓度呈显著正相关，与BALF中EOS绝对值呈显著正相关；而与IL-12浓度呈显著负相关。结论哮喘大鼠支气管STAT6及其mRNA较强表达，上皮细胞是其主要表达细胞；BUD有抑制气道炎症的作用，下调STAT6及其基因表达，使IL-4合成减少可能为其重要作用机制。     

AG490在人膀胱癌细胞株Pumc-91中STAT3的抑制作用

目的 研究不同孵育时间以及不同浓度的STAT3特异性抑制剂AG490作用于人移形上皮膀胱癌细胞株(pumc-91)中STAT3信号通路蛋白表达的条件优化.方法 分别在0、24、36、48、60h收集细胞并提取细胞蛋白,应用Western Blot对各组中STAT3的蛋白表达水平进行半定量分析;加入100μmol/L AG490作用于pumc-91细胞,分别用0、50、100、200μmol/L的AG490处理pumc-91细胞48h后,应用Western Blot检测各组中STAT3的蛋白表达水平.结果 STAT3蛋白的表达随AG490作用时间延长而逐步降低,在作用时间为48h时,差异有统计学意义(P＜0.05).STAT3蛋白的表达明显随AG490浓度的升高而逐步下降,在浓度为200μmol/L时差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 AG490通过抑制STAT3蛋白的表达,成功抑制了STAT3信号通路的活性,而且其抑制作用具有时间和剂量的依赖性,AG490在作用浓度为200μmol/L和作用时间为48h的条件下,有效的抑制了STAT3蛋白在pumc-91细胞系中的表达.     

STAT3通过上调GLUT2的表达促进转化的肝卵圆细胞WB-F344的Warburg效应

目的:探讨信号转导与转录活化因子3(STAT3)对恶性转化的肝卵圆细胞WB-F344的作用及其机制。方法:用N-甲基-N’-亚硝基胍(MNNG)和过氧化氢(H2O2)制备WB-F344肝卵圆细胞恶性转化模型,通过流式细胞术检测非整倍体细胞数量、Western blot检测甲胎蛋白(AFP)表达水平和软琼脂集落形成实验测定克隆形成率评价细胞的恶性转化,用葡萄糖氧化酶法检测细胞葡萄糖水平,用比色法检测细胞乳酸水平,用Western blot实验检测STAT3、p-STAT3和葡萄糖转运蛋白2(GLUT2)的蛋白水平,并通过WST-1法、活细胞计数法、流式细胞术测定细胞周期的S期细胞比例和增殖指数,以及Western blot检测增殖细胞核抗原(PCNA)表达水平来评价细胞增殖能力。结果:与对照组比较,转化的肝卵圆细胞克隆形成率增加(P0.05),非整倍体细胞增多(P0.01),AFP表达增强(P0.05);葡萄糖消耗增多(P0.05),乳酸产生增多(P0.01);GLUT2表达上调(P0.01),STAT3的活化增强(P0.01);细胞活力增强(P0.01),S期细胞比例增多(P0.01),细胞增殖指数增加(P0.01),PCNA表达上调(P0.01)。与模型组比较,STAT3的抑制剂stattic明显抑制恶性转化的肝卵圆细胞的克隆形成(P0.01),促使非整倍体细胞显著减少(P0.01)和AFP表达降低(P0.05);减少葡萄糖消耗(P0.05)和乳酸的产生(P0.01);降低GLUT2(P0.01)的表达水平;抑制恶性转化的肝卵圆细胞活力(P0.05),降低S期细胞比例(P0.01)、细胞增殖指数(P0.01)和PCNA表达水平(P0.05)。结论:STAT3可能通过上调GLUT2表达而加快葡萄糖摄取、增强Warburg效应并促进细胞增殖,从而促进肝卵圆细胞的恶性转化。     

IL-6和AG490对Burkitt淋巴瘤细胞生长的影响

 目的: 观察IL-6和AG490对Raji细胞生长的影响,探讨信号转导及转录激活因子3(STAT3)及survivin在Burkitt淋巴瘤发生发展中的作用,为寻找淋巴瘤生物治疗的新靶标提供实验依据。方法: 培养Raji细胞,分别加入STAT3的激动剂IL-6和抑制剂AG490,用real-time PCR和Western blot检测STAT3、survivin的表达情况及STAT3的磷酸化,MTT法检查细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期变化。结果: 培养细胞中加入IL-6或AG490后,细胞生长受明显影响并呈现药物浓度依赖关系(P<0.05);与相应的对照组比较,IL-6组Raji细胞中STAT3、survivin mRNA的表达明显升高,AG490组Raij细胞中STAT3、survivin的mRNA表达明显降低。不同浓度的IL-6组之间、不同浓度的AG490组之间,STAT3和survivin mRNA的表达亦有显著差异(P<0.05),且2种基因mRNA表达都呈现出药物浓度依赖关系。p-STAT3、STAT3和survivin的蛋白水平在IL-6作用下表达增高,AG490作用下表达降低;细胞凋亡率在IL-6作用下逐渐降低,在AG490作用下逐渐升高,且都呈现出药物浓度依赖关系;经AG490处理后,G₁期Raji细胞明显增加,S期细胞无明显改变,G₁/S比值增加,而在IL-6组中,S期细胞明显降低。结论: IL-6和AG490对Raji细胞生长有明显影响,STAT3及其下游靶基因survivin的表达改变可能是IL-6及AG490影响Raji细胞生长的重要分子机制。     

哮喘大鼠模型信号转导子和转录激活子6在气道上皮细胞表达增强

目的探讨哮喘大鼠肺组织中信号转导子和转录激活子6(STAT6)的活化规律及其意义。方法将SD大鼠随机分为对照组和哮喘组,后者根据末次激发后处死时相不同分成0、3、8、24、72、120和144 h组。采用透射电镜、细胞计数、免疫组化和图像分析等,分别观察肺组织超微结构、支气管肺泡灌洗液(BALF)中嗜酸性粒细胞(EOS)数量及STAT6蛋白表达。结果①哮喘组肺组织EOS炎性浸润较对照组明显增加;②哮喘组STAT6蛋白主要在气道上皮细胞表达;③3 h时STAT6即开始明显升高,24 h达到峰值,其后有所下降;④STAT6蛋白表达的变化与BALF中EOS绝对值及EOS%的动态变化均显著正相关(P<0.01)。结论哮喘大鼠气道上皮细胞存在STAT6的持续活化及过度表达,并与EOS的生成密切相关,提示STAT6的活化在哮喘气道炎症调控中起重要作用。     

信号转导子和转录激活子6及其mRNA在哮喘大鼠气道炎症中的作用

目的：探讨信号转导子和转录激活子6(STAT6)及其mRNA在哮喘大鼠气道炎症中的作用。 方法： 20只二级雄性SD大鼠随机分为2组, 对照组和哮喘组。以卵清白蛋白(OVA) 致敏激发法复制大鼠哮喘模型，每只大鼠左肺留取肺组织，右肺进行支气管肺泡灌洗并留取支气管肺泡灌洗液(BALF)。对BALF进行细胞总数、嗜酸性粒细胞(EOS)计数和分类计数；应用双抗体夹心酶联免疫吸附试验（Sandwich ELISA）法测定BALF和血清中IL-4浓度；采用免疫组化法和原位杂交法测定STAT6蛋白和STAT6 mRNA的表达情况。 结果： (1) BALF和血清中白细胞介素4(IL-4)的浓度哮喘组均显著高于对照组(均P<0.01)；(2)免疫组化和原位杂交显示，哮喘组支气管STAT6蛋白和STAT6 mRNA的表达均显著高于对照组(均P<0.01)，其主要表达细胞是上皮细胞；(3)支气管上皮细胞STAT6蛋白及其mRNA含量分别与BALF中的IL-4浓度、EOS绝对值呈非常显著正相关。 结论： 哮喘大鼠STAT6蛋白和mRNA高表达，上皮细胞是其主要表达细胞，并与IL-4浓度、EOS募集密切相关。     

靶向沉默IL-6对乳腺癌细胞侵袭和迁移能力的影响

目的:观察白细胞介素6(IL-6)与人乳腺癌MCF-7细胞生长、侵袭和迁移的关系及其作用机制。方法:合成IL-6小干扰RNA(si RNA),并转染至MCF-7细胞中。实验分为空白对照组、阴性对照组和IL-6 si RNA组。通过MTT实验观察沉默IL-6基因表达对细胞活力的影响,Transwell小室法检测细胞侵袭和迁移能力的变化,采用q PCR和Western blot法检测转染后IL-6表达水平的变化,同时采用Western blot法观察上皮-间充质转化(EMT)相关蛋白、信号转导及转录激活因子3(STAT3)、磷酸化STAT3(p-STAT3)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)的蛋白水平。结果:与对照组相比,转染IL-6 si RNA的MCF-7细胞中IL-6的表达量显著下降(P 0. 05)。沉默IL-6表达显著抑制MCF-7细胞的活力(P 0. 05),并降低其侵袭和迁移能力(P 0. 05),显著抑制N-cadherin和vimentin的表达(P 0. 05),细胞中STAT3无明显变化,p-STAT3、MMP-2和MMP-9的蛋白水平显著降低(P 0. 05)。结论:沉默IL-6表达可能通过抑制EMT,并降低STAT3的磷酸化水平进而抑制MMP-2和MMP-9的分泌,从而减弱乳腺癌MCF-7细胞的活力,并降低其侵袭和迁移能力。     

信号转导和转录激活因子6基因多态性与湖北汉族人变应性哮喘的相关性研究

目的　探讨信号转导和转录激活因子 (STAT) 6基因 3′非翻译区G2 96 4A位点多态性和第一外显子GT串联重复序列遗传多态性与湖北汉族人变应性哮喘易感性的关系。方法　用聚合酶链反应 限制性片段长度多态性 (PCR RFLP)技术检测STAT6基因G2 96 4A位点多态性 ;用聚合酶链反应 短串联重复多态性 (PCR STR)技术对STAT6基因第一外显子微卫星进行分型 ,并将PCR产物克隆及测序鉴定 ;采用病例 对照法研究了 1 35例变应性哮喘患者和 1 0 9例对照。结果　 ( 1 )湖北地区汉族人群STAT6基因G2 96 4A位点基因型以GA型最为常见 ;哮喘组与对照组STAT6基因G2 96 4A位点的等位基因频率和基因型频率GG、GA、AA之间差异无统计学意义 (P >0 .0 5)。 ( 2 )STAT6基因第一外显子微卫星多态性共检出GT串联重复次数为 1 3、1 4、1 5、1 6的 4种等位基因 ;第一外显子微卫星的多态性检测出 1 3/1 4基因型在哮喘患者组和正常对照组相比差异具有统计学意义(P =0 .0 0 1 4 )。 ( 3)STAT6基因第一外显子GT二核苷酸串联重复序列多态性中 1 3 GT重复等位基因与 2 96 4A变异体之间存在连锁不平衡 (P =0 .0 0 0 0 2 1 8)。结论　STAT6基因 3′非翻译区G2 96 4A位点多态性与湖北汉族人哮喘易感性无明显相关性 ;第一外显子GT二核苷酸串联重     

清胰汤对L-精氨酸诱发的重症急性胰腺炎小鼠胰腺p-STAT3表达的影响

目的: 观察L-精氨酸(L-Arg)诱发的重症急性胰腺炎小鼠胰腺组织p-STAT3表达的变化,以及清胰汤对p-STAT3表达的影响,从而探讨STAT3在急性胰腺炎中的作用和清胰汤治疗急性胰腺炎的机制。方法: 健康雄性成年昆明种小鼠30只,随机分为3组(n=10):对照组、模型组和清胰汤组。除对照组外,其余各组给予腹腔注射20 % L-精氨酸(3 g/kg,间隔1 h再注射1次);清胰汤组在第2 次腹腔注射20 %L-Arg 30 min 后给予清胰汤浓缩液灌胃(10 mL/kg),之后每天灌胃2次。在造模后72 h麻醉处死动物检测血清淀粉酶活性;取胰腺组织计算胰腺湿重比,HE染色观察胰腺病理学改变;取肺组织匀浆检测髓过氧化物酶(MPO)的活性,HE染色观察肺病理学改变; Western blotting及real-time PCR分别检测胰腺组织p-STAT3蛋白及单核细胞趋化蛋白-1(MCP－1)mRNA的表达变化。结果: L-Arg诱发急性胰腺炎72 h后,血清淀粉酶活性明显升高、胰腺湿重比增加、肺组织MPO显著增加,与对照组比较差异显著(P<0.05);而清胰汤组血清淀粉酶的活性、胰腺湿重比、MPO水平明显降低,与模型组相比差异显著(P<0.01);模型组72 h胰腺及肺可见明显病理损伤,胰腺组织p-STAT3蛋白及MCP-1 mRNA的表达明显增强;清胰汤治疗组胰腺及肺病理损伤减轻,胰腺组织p-STAT3蛋白及MCP-1 mRNA的表达减少。结论: L-Arg诱发的重症急性胰腺炎小鼠胰腺组织STAT3蛋白表达明显增加,STAT3活化可能参与了L-Arg诱发的急性胰腺炎进展;抑制胰腺STAT3活化是清胰汤治疗急性胰腺炎的作用机制之一。     

Effects of the Tumor Microenvironment on the Efficacy of Tumor Immunotherapy

Cancer immunotherapy utilizes vaccines targeting tumor antigens or tumor endothelium to prevent or regress tumors. Many cancer vaccines are designed to induce antigen-specific effector T cells that migrate to the tumor site. In an optimal situation, the effector T cells penetrate the tumor, release their effector molecules, induce tumor cell death and tumor regression. However, the tumor microenvironment is frequently immunosuppressive and contributes to a state of immune ignorance, impacting on the vaccine's ability to break tolerance to tumor antigen/s. This review discusses the factors in the tumor microenvironment that can affect the efficacy of cancer vaccines. In particular, the review focuses on pathways leading to effector T cell penetration of tumors or the inhibition of this process.     

Effects of the Tumor Microenvironment on the Efficacy of Tumor Immunotherapy

Cancer immunotherapy utilizes vaccines targeting tumor antigens or tumor endothelium to prevent or regress tumors. Many cancer vaccines are designed to induce antigen-specific effector T cells that migrate to the tumor site. In an optimal situation, the effector T cells penetrate the tumor, release their effector molecules, induce tumor cell death and tumor regression. However, the tumor microenvironment is frequently immunosuppressive and contributes to a state of immune ignorance, impacting on the vaccine's ability to break tolerance to tumor antigen/s. This review discusses the factors in the tumor microenvironment that can affect the efficacy of cancer vaccines. In particular, the review focuses on pathways leading to effector T cell penetration of tumors or the inhibition of this process.