NKT细胞的研究进展

NKT细胞是一类具有NK细胞受体和T细胞受体且显示NK细胞和T细胞两方面性质的T细胞亚群。NKT细胞于1987年由Fowlker等首先在小鼠中发现，到20世纪90年代后期才在人类中发现，由于其表型和功能与传统T、B、NK细胞的不同，立即受到学者们高度重视。NKT细胞表达保守的限制性的TCR谱，其αβTCR结构单一。人NKT细胞由恒定的Vtr24 Jα18TCRα链和Vβ11TCRβ链组成，鼠NKT细胞由恒定的Vα14 Jα18TCRα链和多克隆的Vβ8.2、Vβ7和VB2TCRβ链组成。NKT细胞同时共表达NK细胞特有标志CD161（NK1．1抗原，鼠；NKR-P1抗原，人）。对NKT细胞的研究表明，简单把它理解成T淋巴细胞同时表达NK细胞受体是不准确的。许多传统的T淋巴细胞在活化后可上调NK细胞受体（包括CD161），而对于Vα24^＋NKT细胞则无这种表现。对人类淋巴细胞的研究发现，很大比例的T淋巴细胞都表达CD161，Vα24^＋Vβ11^＋细胞只是其中一个少数的亚群。     

恒定自然杀伤T细胞在过敏性哮喘中的调节机制

恒定自然杀伤T(invariant nature killer T,iNKT)细胞是T淋巴细胞中独特的亚群,也是经典的自然杀伤T(NKT)细胞,既表达T细胞的表面标志,又表达自然杀伤(NK)细胞的表面标志CD161(NK1.1)分子和NK细胞受体P1C。活化iNKT的经典抗原是糖脂类抗原α-半乳糖神经酰     

NKT细胞及其功能

近年来发现存在一类与传统的αβT细胞(CD4~+CD8~+)不同的T细胞,其αβTCR结构单一,既有T细胞抗原受体又有NK受体且显示T细胞与NK细胞两方面性质,因而称为NKT细胞。NKT细胞通过识别由非经典的MHCI类分子——CD1d分子递呈的糖脂类抗原(a-半乳糖酰基鞘氨醇,α-Gal-Cer)或寄生虫的糖磷脂酰肌醇(GPI),在Th1和Th2的细胞因子的产生及穿孔素介导的细胞毒作用中发挥了重要的作用。     

NKT细胞及其功能

近年来发现存在一类与传统的αβT细胞（CD4^ CD8^ )不同的T细胞，其αβTCR结构单一，既有T细胞抗原受体又有NK受体且显示T细胞与NK细胞两方面性质，因而称为NKT细胞。NKT细胞通过识别由非经典的MHCI类分子－CD1d分子递呈的糖脂类抗原（α－半乳糖酰基鞘氨醇，α－Gal-Cer)或寄生虫的糖磷脂酰肌醇（GPI），在Th1和Th2的细胞因子的产生及穿孔素介导的细胞毒作用中发挥了重要的作用。     

脐血与外周血NKT细胞的体外扩增及其表型比较

为了建立体外有效扩增脐血与外周血天然杀伤T细胞(NKT细胞)的方法并研究其表型的差异,分别采用单加IL-2及同时加IL-2和α-半乳糖神经酰胺(α-Galcer)的方法,从人脐血单个核细胞(UCB-MNC)和人外周血单个核细胞(PB-MNC)中扩增NKT细胞;用流式细胞检测技术测定NKT细胞(TCR Vα24+TCR Vβ11+)的比例及其它表型特征。结果显示:UCB-MNC在第7天时,其TCR Vαβ+NKT细胞的扩增量占淋巴细胞的(24.48±4·19)%,是原来的(8.74±4.37)×102倍(P<0.01),而且大多不表达NK1.1(CD161);TCR Vβ11+较TCRVα24+高表达;第14天时,PB-MNC中的TCR Vαβ+NKT细胞扩增量占淋巴细胞的(11.1±3.61)%,是原来的(3·72±2·01)×102倍(P<0.01),且NK1.1高表达,TCR Vβ11+与TCR Vα24+表达率基本一致。结论:α-Galcer对NKT细胞有特异的扩增功能,且脐血NKT的扩增效率较外周血高。以表型划分,脐血中的NKT细胞多为NK1.1-,而外周血多为NK1.1+,是一种新的NKT细胞亚型。     

NKT细胞亚群研究进展及其在移植免疫中的作用

正自然杀伤T细胞(NKT细胞)是一类共表达NK细胞受体及恒定T细胞受体(TCR)的特殊细胞亚群~([1]),既不同于T、B淋巴细胞,亦区别于自然杀伤(NK)细胞,该TCR与高度偏向的Vs链(主要为Vβ8.2)相关,由Vα14和Jα281基因节段所编码~([2])。TCRVα24片段通常和Vβ11片段相结合,NKT细胞活化后能迅速分泌大量白细胞介素4(IL-4)等细胞因子促进     

自然杀伤T淋巴细胞对黑色素瘤细胞的免疫调节及杀伤功能实验研究

目的探讨自然杀伤T淋巴细胞(NKT细胞)在细胞免疫调节及杀伤功能中的作用。方法建立混合淋巴细胞培养(MLC)体系,B16F10-luc-G5细胞作为靶细胞,以总淋巴细胞为效应细胞。(1)调节效应实验以NKT细胞或CD4~+CD25~+T淋巴细胞为调节细胞,分为3组:NKT组、CD4~+CD25~+T组、靶细胞空白对照组;另设有1640空白对照组(RPMI1640溶液)。(2)杀伤效应实验以NKT或自然杀伤(NK)细胞为效应细胞,分为3组:NKT组、NK组、靶细胞空白对照组。混合培养24、48、72h后,通过活体成像系统检测该培养系统的靶细胞生物发光,以监测NKT细胞的调节及杀伤效应。结果 (1)调节效应实验:NKT组及CD4~+CD25~+T组测定光子数分别与两空白对照组比较,以及NKT组内培养24h与72h时测得光子数比较,差异均有统计学意义(P0.05)。(2)杀伤效应实验:NKT组及NK组与靶细胞空白对照组所测光子数比较,差异均有统计学意义(P0.05);且培养24、72h时NKT组与NK组光子数比较,差异均有统计学意义(P0.05)。结论 NKT细胞具有抑制总淋巴细胞对靶细胞的杀伤效应,且抑制效应具有时间性,其调节作用较CD4~+CD25~+T淋巴细胞强。NKT细胞具有对靶细胞的杀伤效应,但较NK细胞弱。     

乙型肝炎病毒相关性肝硬化患者外周血NK和NKT细胞功能特点及意义

目的探讨乙型肝炎病毒相关性肝硬化(HBV-LC)患者外周血自然杀伤细胞(NK)和自然杀伤T细胞(NKT)功能相关分子表达特点及意义。方法收集代偿期HBV-LC患者(HBV-CLC)、失代偿期HBV-LC患者(HBV-DLC)和同期体检健康者(HC)各25例作为研究对象。流式细胞术检测各组外周血NK和NKT细胞比例、数量变化,活化标志物(CD69、HLA-DR)、激活性受体(NKG2D、NKp30、NKp46)和抑制性受体(NKG2A、CD158a、CD158b)以及细胞毒分子[穿孔素、颗粒酶A/B、肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)、IFN-γ]表达。结果与HC和HBV-CLC患者比较,HBV-DLC患者外周血NK细胞比例和数量均显著降低(P0.01),但高表达HLA-DR(P0.01);与HC患者比较,HBV-DLC患者外周血NKT细胞比例、数量均显著降低(P0.05),但高表达CD69和HLA-DR(P0.05);此外,相比于HC,HBV-CLC患者外周血NKT细胞比例降低(P0.05),但数量和活化标志物的表达差异并无统计学意义(P0.05)。各组间抑制性受体和大部分激活性受体(NKG2A、CD158a、CD158b和NKp30、NKp46)的表达差异无统计学意义(P0.05);相比于HC,HBV-LC患者外周血NK细胞NKG2D表达显著降低而NKT细胞毒分子(穿孔素、颗粒酶A、TRAIL、IFN-γ)表达显著升高(P0.05),HBV-DLC患者外周血NK细胞部分细胞毒分子(穿孔素、TRAIL)表达升高(P0.05);相比于HBV-CLC患者,HBV-DLC患者外周血NK细胞穿孔素表达减少(P0.05),NKT细胞虽NKG2D表达升高但数量和IFN-γ表达均降低(P0.05)。此外,相比于HC和HBV-CLC患者,HBV-DLC患者外周血NK细胞杀伤能力受到显著抑制(P0.01)。结论 HBV-LC患者尤其HBV-DLC患者外周血NK和NKT细胞功能特点发生显著改变,或许能为HBV-LC患者免疫防治提供新的视角和理论基础。     

多发性硬化患者T细胞克隆中CD3CD56双阳性细胞的分析

目的多发性硬化(MS)是一种器官特异的自身免疫病,病变侵犯中枢神经系统.MS不仅有T,B细胞介导,而且与脑淋巴瘤的发生有密切关系.方法本文用T细胞克隆技术,细胞表型分析技术和细胞毒活性分析经MBP抗原肽治疗的MS患者外周血的T,B淋巴细胞(另文发表).结果经MBP抗原肽诱导的T细胞克隆中有相当一部分T细胞系不仅高表达CD3CD56双阳性标志(NKT细胞),50.7%±4.9%,对照为6.0%和3.0%,而其他神经系统疾病分别是11.0%和20.0%,且这种双阳性细胞群不同于NK细胞能特异杀伤神经胶质瘤(59.7%±4.9%)而NK细胞仅为17.3%±4.5%,具有统计学差异.结论用MBP抗原肽诱导的T细胞克隆可用作疫苗治疗MS患者,而这种高表达CD3CD56双阳性标志(NKT细胞)对神经胶质瘤细胞较NK细胞潜在的更强的杀伤活性.至于其抗瘤机制正在研究之中.     

双表达外源性4-1BBL/RANTES的K562细胞活化外周血淋巴细胞的研究

目的探讨K562细胞表达外源性蛋白4-1BBL/RANTES后,对T细胞、NK细胞有无活化作用,为进一步构建人工抗原提呈细胞提供前提。方法采用分子克隆技术,分别将4-1BBL和RANTES基因插入双表达载体pVITRO-2,命名为pV4-1BBL-RANTES。经测序鉴定后,利用脂质体介导的转染及潮霉素筛选,获得稳定双表达4-1BBL、RANTES分子的K562细胞(K562/4-1BBL/RANTES)。经流式细胞仪(FACS)分选后,K562/4-1BBL/RANTES细胞用丝裂霉素C处理,与外周血淋巴细胞孵育24,FACS检测淋巴细胞表面活化性受体CD69的表达;对NK细胞同时检测了活化性受体NKG2D的表达情况。结果受K562/4-1BBL/RANTES细胞刺激后,CD3+T细胞、CD4+T细胞、γδT细胞和NK细胞的活化性受体CD69的表达与未受刺激前相比,均有明显上调;但与单纯K562细胞刺激组相比,无显著差异。另外,CD8+T细胞CD69的表达及NK细胞NKG2D的表达无明显变化。结论将4-1BBL和RANTES共表达于K562细胞,不具备活化淋巴细胞的效应。     

自然杀伤T细胞的研究进展

自然杀伤T细胞(NKT)是具有NK受体和T细胞受体且显示NK细胞和T细胞两方面性质的一类功能独特的免疫细胞群。因其可产生大量特异性的细胞因子，NKT细胞在先天性和获得性免疫中发挥着重要的免疫调节和免疫稳定作用。本文就近年来有关NKT细胞的特性、鉴别、体外扩增、功能等方面的研究现状及存在的问题作一综述。     

分娩发动前后体内NK细胞、NKT细胞表型分析

目的研究分娩发动前后蜕膜及外周血中NK细胞、NKT细胞表面NKG2A和NKG2D受体的表达情况,探讨其在产程发动中的作用。方法选取正常孕足月孕妇分为分娩发动经阴道分娩组（以下简称分娩组20例）和分娩未发动行选择性剖宫产术组（以下简称剖宫产组20例）,分离蜕膜及外周血中单个核细胞后采用流式细胞学技术分别检测CD56＋细胞、NK细胞、NKT细胞表面NKG2A和NKG2D受体的表达情况。结果外周血单个核细胞中分娩组CD56＋NKG2A＋细胞构成下降、CD56＋NKG2D＋细胞构成增加,NK细胞、NKT细胞表面NKG2D表达上升。蜕膜单个核细胞中分娩组CD56＋NKG2A＋和CD56＋NKG2D＋细胞构成及NK细胞表面NKG2A和NKG2D表达均下降,NKT细胞表面NKG2A和NKG2D表达无显著差异。结论临产前体内NK细胞、NKT细胞表面NKG2A和NKG2D受体表达的变化可能在在产程的发动中起着重要作用。     

自然杀伤性T细胞在肿瘤免疫治疗中的作用及机制

自然杀伤性T细胞(NKT cells)是一群细胞表面既有天然杀伤(NK)细胞受体,又有T细胞受体(TCR)的特殊T细胞亚群。经活化后的NKT细胞既可以作为效应细胞直接发挥杀伤肿瘤作用,也能激活多种免疫效应细胞间接实现抗肿瘤作用。研究表明,NKT细胞在机体抗肿瘤、免疫调控以及获得性免疫应答方面都具有重要的临床意义。     

原发免疫性血小板减少症(ITP)患者外周IL-37的水平变化及其与T亚群、NK细胞的相关性研究

目的:分析ITP患者外周血IL-37表达水平变化及其与T亚群、NK细胞数的相关性,探讨其参与疾病发病的可能机制。方法:选取初诊组ITP患者45例,完全缓解组ITP患者32例及正常对照组22例。采用酶联免疫吸附试验法(ELISA)测定3组外周血血清中IL-37水平,应用实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)测定3组外周单个核细胞内IL-37、IL-18、IL-17 mRNA相对表达水平,采用流式细胞术(FCM)检测3组IL-18Rα~+CD4~+T细胞比例,2组Tim-3~+NK细胞比例。结果:初诊组ITP患者血清IL-37水平高于缓解组患者及正常对照组(P 0. 01);初诊组IL-37 mRNA表达水平高于缓解组及正常对照组(P 0. 01),缓解组IL-37 mRNA表达水平高于正常对照组(P0. 05)。初诊组IL-18、IL-17 mRNA表达水平均明显高于缓解组及正常对照组(P 0. 01)。流式细胞术检测表明,初诊组的IL-18Rα~+CD4~+T细胞比例比缓解组和对照组增高,且差异具有统计学意义。初诊组的Tim-3~+NK细胞比例比对照组低,且差异具有统计学意义(P 0. 01);在ITP患者中,血清IL-37水平和IL-18Rα~+CD4~+T细胞比例均与血小板数量呈负相关(r=-0. 58; r=-0. 48),与CD4~+T细胞数、NK细胞数呈负相关(r=-0. 29; r=-0. 28),与CD8~+T细胞量呈正相关(r=0. 329)。结论:IL-37及其受体可能在ITP患者的CD4~+T细胞和NK细胞发挥免疫调节作用,IL-37可以成为免疫性血小板患者的治疗靶标。     

自然杀伤T细胞抗肿瘤免疫的研究进展

自然杀伤T（naturalkillerTcells，NKT）细胞是一种具有特定标志的T细胞亚群，既表达T细胞表面标志，如CD3、TCRag（人类表达Va24vBll，小鼠表达Val4Jal8），又表达NK细胞的表面标志。NKT细胞只能识别由CDld分子递呈的特异性糖脂类分子，     

人外周血Vα24 NKT细胞和CD3+CD56+CIK 细胞生物学特性的比较研究

目的进一步认识Vα24 NKT细胞和CIK细胞在生物学特性的差异。方法从人外周血单个核细胞扩增NKT细胞和CIK细胞;经免疫磁珠纯化获得高纯度的TCRVα24 NKT细胞和CD3 CD56 CIK细胞。运用流式细胞术测定纯化后的NKT细胞和CIK细胞的表型、细胞因子和细胞坏死相关因子的表达情况,并用DIOC18染色及流式细胞术测定纯化后的NKT细胞和CIK细胞的细胞杀伤活性。结果经纯化TCRVα24 Vβ11 NKT细胞和CD3 CD56 CIK细胞的纯度均达到>90%;纯化后的Vα24 NKT细胞多数为CD4 和DN NKT细胞,高表达TCRVα24、Vβ11、CD3、CD161,低表达CD56;而纯化后的CIK细胞则以CD8 T细胞为主,高表达CD3、CD56,低表达CD161,几乎不表达TCRVα24和Vβ11。在抗原刺激下,CD3 CD56 CIK细胞的IFN-γ、TNF-α、Perforin、FasL、TRAIL表达水平均高于NKT细胞,但CD3 CD56 CIK细胞几乎不分泌IL-4,而NKT细胞则分泌高水平的IL-4;CD3 CD56 CIK细胞对肿瘤细胞株K562、U937、Jurkat的杀伤率均远远高于NKT细胞。结论TCRVα24 NKT细胞和CD3 CD56 CIK细胞是两类完全不同的细胞群,在抗肿瘤免疫和免疫调节中可能起着不同的作用。     

NKT细胞在严重创伤和脓毒症后免疫抑制中的作用机制

NKT细胞是一类特殊的T淋巴细胞亚群,同时表达NK细胞和T淋巴细胞标记,它能限制性识别CD1d分子递呈的糖脂抗原、活化后迅速分泌大量细胞因子从而调节机体的免疫应答.本文简要综述了NKT细胞的分类、特征及其在严重创伤和脓毒症中的免疫调节作用.     

云南地区NK/T细胞淋巴瘤中Ig/TCR基因重排、EB病毒及免疫表型的检测

目的对云南地区NK/T细胞淋巴瘤的Ig/TCR基因重排、免疫表型以及EB病毒感染情况进行检测,为鉴别诊断NK/T细胞淋巴瘤提供依据。方法收集云南地区50例NK/T细胞淋巴瘤患者的肿瘤组织标本,免疫组化法检测LCA、CD79α、CD20、CD56、CD3、CD45RO、CD8、TIA-1、CD5抗体的表达;原位杂交法检测EB病毒编码的小分子RNA(EBER1/EBER2); BIOMED-2引物系统PCR扩增检测Ig/TCR基因的重排情况。结果 50例NK/T细胞淋巴瘤LCA、CD3、CD45RO、TIA-1、CD56、CD8和CD5阳性率分别为100%、76%、96%、98%、84%、28%和82%,CD79α和CD20均(-);原位杂交EBER阳性率为84%;基因重排检测Ig均为(-),TCR单克隆重排阳性率为16%。结论云南地区NK/T细胞淋巴瘤中存在少部分T细胞的单克隆性增生(16%);NK/T细胞淋巴瘤中大部分病例CD56为(+);EBER在鼻型NK/T细胞淋巴瘤的肿瘤细胞中呈高表达,提示可能为NK细胞来源。部分TCR基因单克隆重排阳性病例应为鼻NK样T细胞淋巴瘤。通过组织形态学、基因重排、免疫表型、EB病毒检测联合可以为NK/T细胞淋巴瘤的诊断提供可靠的依据。     

自然杀伤T细胞的研究进展

自然杀伤T细胞(NKT)是具有NK爱体和T细胞受体且显示NK细胞和T细胞两方面性质的一类功能独特的免疫细胞群。因其可产生大量特异性的细胞因子,NKT细胞在先天性和获得性免疫中发挥着重要的免疫调节和免疫稳定作用。本文就近年来有关NKT细胞的特性、鉴别、体外扩增、功能等方面的研究现状及存在的问题作一综述。     

特发性血小板减少性紫癜患者外周血T细胞的杀伤细胞免疫球蛋白样受体表达研究

杀伤细胞免疫球蛋白样受体(killer Ig-like receptors,KIR)是近年发现的细胞表面糖蛋白受体,除表达于NK细胞外还表达于部分T细胞,主要为CD8~+ 细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic lymphocyte,CTL)~[1].