胃癌组织中COX-2 VEGF-C表达与淋巴管生成的相关性研究

目的探讨COX-2、VEGF-C在胃癌组织中的表达与微淋巴管密度（MLVD）的相关性及其临床意义。方法应用免疫组织化学MaxVision法检Ncox-2、VEGF．C、D2-40在64例胃癌组织中的表达情况并行MLVD计数。结果全组COX-2阳性率为71．9％（46／64）,VEGF-C阳性率为53．1％（34／64）。MLVD的平均数目为（12．4±7．4）个／200倍视野。COX-2、VEGF-C及MLVD在胃癌组织中的表达号性别及年龄无关（P〉0．05）;COX-2、VEGF．C及MLVD在有淋巴结转移、TNM分期较高（Ⅲ＋Ⅳ期）者中的表达水平明显高于无淋巴结转移、TNM分期较低（Ⅰ＋Ⅱ期）者,差异均有统计学意义（P〈0．05）。COX-2和VEGF-C在胃癌组织中的表达具有相关性（P〈0．05）。MLVD在COX-2、VEGF．C阳性组的表达水平较阴性组高,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论胃癌组织中存在COX-2和VEGF-C的过度表达,COX-2及VEGF-C与胃癌病理分期和淋巴管生成具有相关性。     

环氧合酶-2对胃癌淋巴管形成的影响

目的探讨环氧合酶-2（COX．2）对胃癌淋巴管形成及预后的关系。方法2004年2月-2004年10月临床资料完整的手术切除的并经病理证实的胃癌患者63例,采用免疫组化方法检测63例胃癌组织中COX-2、VEGF-C、受体VEGFR-3的表达及微淋巴管密度（MLD）。逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测人胃癌细胞SGC-7901分别加入不同浓度的COX-2抑制剂尼美舒利与加入外源性前列腺素E2（PGE2）后VEGF-CmRNA及蛋白的变化。结果63例胃癌石蜡标本中COX-2、VEGF-C阳性表达率为77．6％、72．9％。COX-2与VEGF-C、淋巴管密度、淋巴结转移呈正相关（P〈0．01）。COX-2与胃癌生存率呈负相关,COX-2表达阴性组5年生存率显著高于其表达阳性组（P〈0．05）。尼美舒利以剂量依赖性方式下调VEGF—CmRNA表达,而PC肥以剂量依赖性方式上调VEGF．CmRNA表达。结论COX-2可能通过上调VEGF-C的表达,促进胃癌的淋巴管形成和淋巴结转移,并影响胃癌患者的预后。     

survivin基因RNA干涉对宫颈癌裸鼠移植瘤生长及凋亡和顺铂化疗敏感性的影响

目的观察survivin基因RNAi对宫颈癌裸鼠移植瘤生长、凋亡和化疗敏感性的影响。方法随机选择雌性BALB/C-nu/nu裸小鼠24只,细胞接种法建立4组人宫颈癌裸鼠皮下移植瘤模型,每天观察裸鼠一般状况及肿瘤生长情况,通过绘制肿瘤生长曲线并计算肿瘤生长抑制率,观察survivin基因RNAi对人宫颈癌裸鼠皮下移植瘤生长的影响;通过免疫组化SP法检测各组移植瘤组织中survivin蛋白表达情况,TUNEL染色观察survivin基因RNAi对人宫颈癌裸鼠皮下移植瘤凋亡的影响;当肿瘤体积达0.2cm3时给予顺铂化疗以观察survivin基因RNAi对人宫颈癌裸鼠皮下移植瘤化疗敏感性的影响。结果成功建立4组人宫颈癌裸鼠皮下移植瘤模型,接种HeLa-s2组裸鼠肿瘤体积在每个检测点均明显小于接种HeLa组;观察结束时,接种HeLa-s2组裸鼠瘤重明显小于接种HeLa组,分别为：（0.369±0.043）g和（1.150±0.136）g（P〈0.05）;接种HeLa-s2组裸鼠肿瘤生长抑制率为67.9%。免疫组化结果显示：接种HeLa-s2组裸鼠survivin蛋白表达显著下降;TUNEL染色结果显示：接种HeLa-s2组裸鼠细胞凋亡明显增多,凋亡指数（AI）值达（22.73±1.37）%。顺铂化疗后不同检测点接种HeLa-s2组裸鼠肿瘤体积明显小于接种HeLa组,肿瘤生长明显受抑;观察结束后,接种HeLa-s2组裸鼠瘤重明显小于接种HeLa组,分别为：（0.323±0.058）g和（1.347±0.173）g（P〈0.05）;接种HeLa-s2组裸鼠肿瘤细胞凋亡明显增多,与接种HeLa组AI比较,接种HeLa-S2组AI明显升高,分别为：（37.38±1.01）%和（5.19±0.61）%（P〈0.05）。结论 survivin基因RNAi可通过下调移植瘤组织survivin蛋白表达抑制移植瘤生长并促进其凋亡,并通过增加顺铂化疗诱导的细胞凋亡,增强顺铂化疗对移植瘤的生长抑制,进而提高移植瘤对顺铂化疗的敏感性。     

进展期胃癌淋巴结转移同血管内皮生长因子-C和血管内皮生长因子-D的关系

目的：探讨进展期胃癌组织中血管内皮生长因子-C（VEGF-C）、血管内皮生长因子-D（VEGF-D）蛋白表达与淋巴结转移之间的关系。方法：采用免疫组化法和免疫印记法检测进展期胃癌组织中VEGF-C、VEGF-D的表达,分析其与临床病理、淋巴结转移的关系。结果：胃癌组织中VEGF-C及VEGFR-D蛋白阳性表达率分别为72.1%（62/86）、60.5%（52/86）,显著高于在正常胃黏膜中的表达[18.8%（6/32）和9.4%（3/32）],P〈0.05;VEGF-C（90.6%）、VEGF-D（77.4%）表达量同肿瘤的分化程度和TNM分期相关（P〈0.05）。进展期胃癌组织中,淋巴结转移阳性组VEGF-C（90.6%）、VEGF-D（77.4%）表达率均显著高于阴性组（42.4%和33.3%）,P〈0.05;结论：VEGF-C、VEGF-D与诱导进展期胃癌淋巴管生成和促进肿瘤细胞淋巴道转移有相关性。     

胃癌组织中VEGF-C、VEGFR-3及D240的表达

目的 探讨胃癌中淋巴管生成、分布的特点及其与转移的关系.方法 采用血管内皮生长因子-C(VEGF-C)及其受体-3(VEGFR-3)和淋巴管特异性标记物D240对48例正常胃黏膜和53例胃癌组织行免疫组化染色,检测微淋巴管密度(MLD),并结合胃癌临床病理参数进行分析.结果 胃癌边缘区MID为27.67 ±18.3,正常胃组织MID为9.90±3.95,二者差异极显著(P<0.01).胃癌中心淋巴管增生与正常组织差异不显著.D240在胃癌组织中表达明显增高,胃癌边缘区MLD与淋巴结转移密切相关.结论 VEGF-C和VEGFR-3是促使胃癌细胞淋巴结转移的重要因素.可以将胃癌边缘区MLD测定作为判断胃癌淋巴管转移的依据.     

LMWH对裸鼠胃癌原位模型生长、转移及趋化因子SDF-1表达的影响

【目的】探讨低分子肝素（LMWH）对裸鼠胃癌原位模型生长、转移及趋化因子SDF-1表达的影响。【方法】应用原位移植方法建立裸鼠胃癌原位模型,术后7d将裸鼠随机分为3组：对照组（生理盐水）、化疗组（5-氟尿嘧啶）、LMWH组（低分子肝素钙）,分别每周注药2次,共5周,第6周处死动物,观察裸鼠胃癌原住模型肿瘤转移及生长情况。采用RT—PCR技术检测胃肿瘤组织SDF-1mRNA表达水平。【结果】化疗组、LMWH组肿瘤体积较对照组明显缩小,差异有统计学意义（P〈0．05）;LMWH组胃癌原位模型肿瘤转移率（20％）低于对照组（70％）,差异有统计学意义（P〈0．05）,而与化疗组之间差异无统计学意义（P〉o．05）;LMWH组SDF-1mRNA表达均较对照组和化疗组低,差异有统计学意义（P〈0．05）。【结论】LM—wH可抑制裸鼠胃癌原位模型的肿瘤生长及远处转移,其部分机制可能与降低肿瘤sDF_1的表达有关。     

靶向骨桥蛋白基因的RNA干扰对裸鼠肝癌影响的实验研究

目的检测骨桥蛋白（OPN）的核糖核酸（RNA）干扰技术对裸鼠肝癌的影响作用，探讨RNA干扰对肝癌基因治疗中的有效性和相关机制。方法体外化学合成骨桥蛋白序列特异性的短发夹RNA（shRNA）质粒载体，并导入肝癌细胞HepG2裸鼠皮下移植瘤，尾静脉注射OPN shRNA表达载体，观察其对肝癌生长的影响作用；酶联免疫吸附（ELISA）方法检测OPN在肿瘤组织中的蛋白浓度。结果全身系统性给予OPN shRNA后，空载体组、阴性shRNA组及OPN shRNA转染组肿瘤体积分别为235±5mm^3、222±24mm^3（P=0．2）、98±24mm^3（P〈0．05）；瘤组织中OPN浓度在空载体组、阴性shRNA组及OPN shRNA转染组分别为498±8pg／mg、382±98pg／mg和122±56pg／mg（P〈0．05）。结论OPN的RNA干扰明显抑制了肿瘤的生长，有望通过RNA干扰技术实现肝癌的基因治疗。     

血管内皮生长因子-C与D2-40在膀胱移行细胞癌的表达及临床意义

目的 检测膀胱移行细胞癌(BTCC)组织中血管内皮生长因子-C(VEGF-C)与D2-40阳性表达的淋巴管密度(LVD),探讨BTCC中淋巴管生成与淋巴结转移的相互关系.方法 采用免疫组织化学方法检查45例BTCC和10例正常膀胱组织中VEGF-C与D2-40标记的淋巴管密度表达情况.结果 VEGF-C在45例BTCC中阳性表达35例,正常膀胱组织中无表达,淋巴结转移阳性组VEGF-C和LVD明显高于淋巴转移阴性组(P<0.05)和正常膀胱黏膜组织组(P<0.05).结论 VEGF-C促进淋巴管新生,淋巴管新生可能进一步促进肿瘤淋巴结转移.     

抑制Smac基因表达对胰腺癌裸鼠移植瘤生长影响的研究

[目的]探讨Smac基因对人胰腺癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用.[方法]于裸鼠腋下接种200 μL 107/mL的PANC-1细胞悬液,建立人胰腺癌裸鼠移植瘤模型,将其分为三组：注射PBS液（A组）、转染空载体（B组）、转染Smac基因（C组）,比较三组移植瘤的大小、移植瘤细胞的凋亡率,移植瘤中Smac蛋白表达和微血管密度（MVD）.[结果]与A、B组比较,C组裸鼠移植瘤体积、质量和MVD显著减小;移植瘤细胞的凋亡指数和Smac蛋白的表达率均明显增高,其差异均有统计学意义（P〈0.05）.[结论]脂质体转染Smac基因能抑制人胰腺癌裸鼠移植瘤的生长,可能与该基因诱导胰腺癌细胞凋亡和抑制肿瘤血管形成有关.     

胃癌中细丝蛋白A和微淋巴管密度的关系及意义

目的研究胃癌组织中细丝蛋白A(filamin A,FLNa)和微淋巴管密度(lymphatic microvessel density,LMVD)间的相关性。方法选取河北大学附属医院2016年6—12月收治的51例胃癌患者的手术切除组织标本,使用D2-40特异性染色标记组织中的微淋巴管,应用免疫组化法检测胃癌组织及正常胃组织中FLNa蛋白和D2-40的表达情况,分析FLNa蛋白和LMVD之间关系、对患者临床参数的影响。结果FLNa蛋白在胃癌组织中的阳性表达率低于正常胃组织;癌组织中FLNa蛋白阳性表达组的LMVD值低于阴性表达组;但癌组织中的LMVD高于正常组织。FLNa蛋白表达程度及LMVD与癌灶的胃壁受侵深浅、胃周淋巴结转移数量密切相关。结论FLNa的表达水平和微淋巴管密度与胃癌的形成发展密切相关,其机制可能为FLNa通过抑制胃肿瘤组织中微淋巴管生长,最终阻遏肿瘤细胞经淋巴管扩散。     

胃肠道肿瘤中EphrinB2和淋巴管密度的表达及临床意义

目的 探讨胃肠道肿瘤中EphrinB2的表达与淋巴管密度、淋巴结转移及临床病理参数的关系.方法 采用免疫组织化学、蛋白质印迹两种方法检测EphrinB2在45例胃腺癌、57例大肠腺癌和正常胃大肠黏膜组织（各15例）中的表达.检测D2-40标记的淋巴管并计数淋巴管密度（LVD）.结果 （1）EphrinB2阳性反应主要定位于肿瘤细胞胞质内;D2-40标记的LVD为棕黄色管腔样结构,阳性反应主要位于淋巴内皮的胞膜上.（2）免疫组织化学：EphrinB2在肿瘤组织中阳性表达率明显高于正常组织的阳性表达率（胃82.2％vs.26.7％,大肠75.4％vs.33.3％,P均＜0.05）;肿瘤组织LVD显著高于正常组织（P均＜0.05）.蛋白质印迹：胃和大肠肿瘤组织的表达分别为2.30±0.86和1.89±0.89,高于正常组织的表达0.90±0.41和0.87±0.56（P均＜0.05）.（3） EphrinB2的表达与肿瘤分化程度、淋巴结转移及临床分期有密切关系（P＜0.05）,而与年龄、性别、肿瘤大小无明显相关性（P＞0.05）.肿瘤组织中LVD与肿瘤分化程度、淋巴结转移、远处转移及临床分期相关（P＜0.05）,Spearman秩相关分析发现EphrinB2的表达与LVD呈正相关性.结论 EphrinB2在肿瘤中高表达,与胃肠道肿瘤的转移和进展密切相关,并与LVD呈正相关性,Eph-rinB2可能诱导LVD的形成参与淋巴结转移的调控.     

环氧化酶-2与血管内皮生长因子-C在鼻咽癌中表达及其与淋巴结转移的相关性

目的 探讨环氧化酶-2(COX-2)、血管内皮生长因子(VEGF-C)在鼻咽癌组织中的表达及其与淋巴管生成及淋巴结转移的关系.方法 采用免疫组化学SP法检测2004年1月至2010年1月收治的66例鼻咽癌患者和20例正常鼻咽黏膜组织中COX-2、VEGF-C及淋巴管特异性标记物D2-40[在高倍镜(×200)下观察]的表达,通过记数淋巴管密度(LVD)并结合临床病理特征分析.结果 鼻咽癌组织COX-2(78.79%)、VEGF-C(72.73%)表达阳性率均明显高于正常组COX-2(10.00%)、VEGF-C(5.00%)表达阳性率;有淋巴结转移组COX-2(95.00%)、VEGF-C(87.50%)表达及D2-40阳性LVD(17.540±2.512)明显高于无淋巴结转移组COX-2(53.84%)、VEGF-C(50.00%)的表达及LVD(8.751±1.076)(P<0.01);VEGF-C与COX-2表达(r=0.721,P<0.01)、LVD(r=0.788,P<0.01)呈正相关,COX-2表达与LVD呈正相关(r=0.613,P<0.01).结论 VEGF-C及COX-2在鼻咽癌组织中呈高水平表达,其表达与肿瘤LVD及肿瘤淋巴结转移有重要关系.     

CpG ODN1826体内增强人肺癌细胞株A549对放射治疗的敏感性

目的 观察CpG ODN对荷瘤鼠肺癌皮下种植瘤生长和血管生成的作用.方法 建立荷瘤鼠皮下种植瘤模型,随机分为4个治疗组:单纯给药组[CpG ODN1826(1 μg/μl)]、照射给药组[CpG ODN1826(1 μg/μl)+β射线(RT:8 Gy)]、对照照射组[生理盐水(NS:100 μl/只)+β射线(RT:8 Gy)]、对照组[生理盐水(NS:100 μl/只)].接种肺癌细胞后7 d开始瘤内注射药物并照射5 d,计算抑瘤率.免疫组化法检测肿瘤组织血管内皮生长因子-C(VEGF-C)、neuropilin-1(NRP-1)的表达,RT-PCR法测定瘤组织中VEGF-C mRNA、NRP-1 mRNA的表达.结果 在抑瘤率方面,CpG ODN1826+RT组抑瘤率为(69.80±26.54)%,显著高于CpG ODN1826组(21.5±14.96)%、NS+RT组(15.10±49.45)%和NS组,差异有统计学意义(P<0.01).四组荷瘤鼠肿瘤组织中VEGF-C的阳性表达率分别为10%(1/10)、50%(5/10)、80%(8/10)、100%(10/10);NRP-1的阳性表达率分别为10%(1/10)、40%(4/10)、90%(9/10)、100%(10/10).在NRP-1和VEGF-C阳性表达率方面,CpG ODN1826+RT组和CpG ODN1826组的阳性表达率显著低于NS+RT组和NS组(P<0.01),CpG ODN1826+RT组明显低于CpG ODN1826组(P<0.01).VEGF-C mRNA相对表达水平分别为18.34±3.19、29.62±3.14、51.13±2.81、53.46±5.67;NRP-1 mRNA相对表达水平分别为23.57±5.73、34.72±5.13、59.95±4.76、62.49±6.34,CpG ODN1826+RT组和CpG ODN1826组较NS+RT组和NS组显著下降(P<0.01),CpG ODN1826+RT组明显低于CpG ODN1826组(P<0.01).结论 CpG ODN1826可显著抑制荷瘤鼠种植瘤的生长,其作用机制可能与抑制VEGF-C和NRP-1的表达、抑制血管生成有关.     

VEGF-C和VEGFR-3在大肠癌中的表达及意义

目的探讨血管内皮生长因子-C(VEGF-C)和血管内皮生长因子受体-3(VEGFR-3)在大肠癌中的表达,分析表达结果与肿瘤淋巴结转移及临床分期的关系。方法采用免疫组化SP法检测65例大肠癌及20例正常大肠黏膜中的VEGF-C和VEGFR-3的表达。结果65例大肠癌组织中VEGF-C和VEGFR-3阳性表达率分别为41.5%(27/65)和27.7%(18/65),正常黏膜表达率分别为15%(3/20)和0(0/20),肿瘤与正常黏膜比较,差异有统计学意义(P0.05和P0.01)。VEGF-C和VEGFR-3阳性表达率在有、无淋巴结转移组之间差异有统计学意义(P0.01和P0.05);两者的表达随临床分期升高而增多,其中VEGF-C的表达在不同临床分期组间差异有统计学意义(P0.05);微淋巴管计数在VEGF-C表达阳性组和阴性组之间的差异有统计学意义(P0.01)。结论VEGF-C和VEGFR-3在大肠癌中的表达与肿瘤淋巴结转移及临床分期的关系密切。     

胃癌患者外周血hTERT mRNA转录水平及临床意义

目的研究胃癌患者外周血中hTERT mRNA的表达，探讨其作为胃癌肿瘤细胞标志物的可行性。方法应用实时荧光定量RT—PCR技术检测96例原发性胃癌、50例胃溃疡和60例健康献血员血清中hTERT mRNA表达水平，并对阳性PCR产物进行克隆、测序。结果胃癌组hTERT mRNA表达水平（12．78±0．97）copies／ml，显著高于良性胃溃疡组（0．93±0．23）copies／ml和健康对照组（0．29±0．17）copies／ml。多变量分析表明，hTERT表达水平与患者性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤生长方式、肿瘤分化程度、淋巴管侵犯、静脉侵犯均无显著相关性（P〉0．05），而与浸润深度、淋巴结转移、远处转移、pTNM分期及CEA有显著相关性（P〈0．05）。结论qRT—PCR具有快速、敏感和特异的特点。定量分析外周血hTERT mRNA转录水平可作为胃癌的肿瘤细胞标志物之一，用于早期诊断。     

胃癌患者纤维蛋白原含量与临床分期及淋巴结转移的关系

[目的]通过检测胃癌患者血浆纤维蛋白原（FIB）含量，探讨其与临床分期及淋巴结转移的关系。[方法]选取经病理确诊为胃癌的患者116例（胃癌组）及同期收治的胃良性病变25例（对照组），采用全自动凝血分析仪测定两组的FIB浓度；化学发光仪测定癌胚抗原（CEA）、癌抗原19—9（CA19—9）、癌抗原72—4（CA72—4）、癌抗原12—5（CA12—5）水平，并进行对比分析。[结果]FIB水平胃癌组较良性病变组高，差异有统计学意义（P〈0．01）；淋巴转移组较未转移组高差异有统计学意义（P〈0．01）。FIB水平与CA12—5、CA72—4水平具有相关性（P=0．014、P=0．031）。[结论]FIB与胃癌临床分期及淋巴结转移密切相关，其含量在术前可以作为预测是否发生淋巴结转移的一个指标。     

结肠癌血管内皮生长因子-C及血管内皮细胞生长因子受体-3的表达与淋巴结转移的关系

目的探讨血管内皮生长因子-C(VEGF-C)及血管内皮细胞生长因子受体-3(VEGFR-3)的表达与结肠癌淋巴结转移的关系。方法收集经病理证实的结肠癌手术标本45例(研究组,淋巴结转移23例,未转移22例)和同期良性结肠黏膜息肉标本20例(对照组)。均采用免疫组织化学SP法检测结肠癌组织及良性结肠黏膜息肉组织中VEGF-C及VEGFR-3的表达水平,分析VEGF-C、VEGFR-3表达与淋巴结转移的关系。结果研究组VEGF-C阳性率及VEGFR-3表达均高于对照组(均P<0.01)。淋巴结转移组的VEGF-C阳性率及VEGFR-3阳性表达(LVD)均明显高于淋巴结未转移组[(91.3%比40.9%),(21.07±5.14比10.56±5.01),均P<0.01]。结论结肠癌存在VEGF-C及VEGFR-3的高表达,可能与促进淋巴结转移有关。     

T-钙黏蛋白对B16F10黑素瘤细胞周期调节的研究

目的探讨T-钙黏蛋白对B16F10黑素瘤细胞周期的影响。方法应用脂质体LipofectamineTM2000将构建的pEGFP-N1-T-钙黏蛋白以及pEGFP-N1空载体转染至B16F10细胞,OPTI-MEM培养基体外培养6 h后RPMI-1640继续培养24 h,应用碘化丙啶标记,流式细胞仪检测T-钙黏蛋白对B16F10黑素瘤细胞周期的影响。结果转染T-钙黏蛋白组G0/G1期和G2/M期细胞比率分别为(60.917±1.897)%、(8.513±0.651)%,明显高于未转染组的(53.563±1.856)%、(2.627±0.434)%和pEGFP-N1空载体组的(53.880±2.164)%、(2.770±0.466)%,差异有显著性(P<0.05);转染T-钙黏蛋白组S期细胞比率为(30.570±1.368)%,低于未转染组的(43.810±2.003)%及pEGFP-N1空载体组的(43.350±2.629)%,差异有统计学意义(P<0.05)。未转染组与转染pEGFP-N1空载体组各期差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 T-钙黏蛋白使B16F10细胞G0/G1期和G2/M期比率增高,S期比率降低。     

PPARγ基因静默抑制裸鼠肝癌肺转移

目的探讨过氧化物酶体增殖物活化受体γ（Peroxisome proliferator-activated receptor gamma,PPAR-γ）基因静默对肝癌裸鼠模型肺转移的影响。方法构建PPARγ短发夹状RNA表达质粒并转染HCCLM3细胞（pshPPARγ组）,以空质粒转染为对照组。观察两组皮下种植瘤生长曲线及体积,肺转移灶数量及分级。结果pshPPARγ组种植瘤体积为（1．86±0．65）cm^3,肺转移灶数量为（37．2±0．7）个／肺,分级为1—2级;对照组体积为（4．86±1．15）cm^3,肺转移灶数量为（107．8±6．1）个／肺,分级多为3—4级,两组种植瘤体积和转移灶数量、分级的差异有统计学意义（P〈0．05）。结论PPARγ基因静默可降低肝癌种植瘤肺转移数量。