APP17肽调节胰岛素受体底物1在糖尿病小鼠脑内分布及对脑海马区神经元退行性变的作用

背景：胰岛素在脑内通过胰岛素受体底物发挥作用，APP17肽有神经营养功能，可能通过影响胰岛素受体底物改善胰岛素缺乏引起的糖尿病脑病。 目的：制备小鼠糖尿病模型，观察APP17肽对糖尿病小鼠胰岛素受体底物1的影响。 设计：随机对照动物实验。 单位：首都医科大学基础医学院病理学教研室，宣武医院脑老化研究室。 材料：实验于2003-09／10在首都医科大学基础医学院病理学教研室及宣武医院脑老化研究室完成，选择雄性昆明小鼠18只，随机分为正常对照组、糖尿病组和APP17肽治疗组3组，每组6只。 方法：①糖尿病组和APP17肽治疗组小鼠按200mg／kg剂量腹腔注射链脲佐菌素，3d后测尾部非禁食血糖，大于15mmol／L者被认为糖尿病模型建立。②APP17肽治疗组于糖尿病造模2周后皮下注射APP17肽，每次0．35μg/只，1次／d，共注射2周。正常对照组大鼠不干预。③给链脲佐菌素4周后，处死动物取脑组织进行胰岛素受体底物1免疫组化染色。 主要观察指标：各组小鼠脑胰岛素受体底物1阳性细胞形态及分布。 结果：18只小鼠全部进入结果分析。①糖尿病组胰岛素受体底物1阳性反应细胞广泛分布于皮质、海马、丘脑、下丘脑等部位，而正常对照组及APP17肽治疗组仅在皮质、海马见有阳性反应细胞，且着色淡。②糖尿病组、正常对照组及APP17肽治疗组脑海马胰岛素受体底物1免疫组化阳性反应细胞数分别为（28．7&;#177;1．5），（9．2&;#177;1．5），（10．1&;#177;1．4）个／10倍物镜，糖尿病组高于其他两组（P〈0．001）。 结论：糖尿病小鼠脑内多个区域的神经元存在较多的胰岛素受体底物1阳性细胞，APP17肽能使胰岛素受体底物1阳性反应细胞出现的部位和数量正常化，从而改善糖尿病小鼠海马神经元的退行性变。     

APP17肽改善糖尿病小鼠脑组织Tau蛋白过度磷酸化

背景：Tau蛋白的过度磷酸化是痴呆的一个因素，国外学者研究发现APP17肽对其可能产生影响. 目的：观察注射APP17肽后糖尿病小鼠Tau蛋白Ser202／Thr205磷酸化的变化。 设计：随机对照实验。 单位：首都医科大学病理学教研室，首都医科大学宣武医院脑老化研究室． 材料：实验在首都医科大学病理学教研室、北京市宣武医院脑老化研究室完成。选用8周龄雄性昆明小鼠18只，体质量28-32g，随机分为3组：对照组，糖尿病组，APPl7肽治疗组，每组6只小鼠。方法：用链脲佐菌素选择性地破坏胰岛β-细胞，诱发小鼠糖尿病模型，并皮下注射APP17肽给予治疗。4周后取脑组织进行AT-8（抗ser202／Thr205特异单抗）免疫组化染色。 主要观察指标：①形态学观察。②AT-8分布。⑧免疫组化染色定量分析. 结果：糖尿病组AT-8阳性反应细胞广泛分布于压后颗粒皮层、海马、丘脑、下丘脑等部位，而对照组及APP17肽治疗组仅在压后颗粒皮层、海；马可见阳性反应细胞，且着色淡。 结论：糖尿病脑内多个区域的神经元可能存在较多的AT-8阳性细胞，而APP17肽可能使AT-8阳性反应细胞出现的部位和数量正常化。     

APP17肽改善糖尿病小鼠脑组织Tau蛋白过度磷酸化

背景:Tau蛋白的过度磷酸化是痴呆的一个因素,国外学者研究发现APP17肽对其可能产生影响。目的:观察注射APP17肽后糖尿病小鼠Tau蛋白Ser202/Thr205磷酸化的变化。设计:随机对照实验。单位:首都医科大学病理学教研室,首都医科大学宣武医院脑老化研究室。材料:实验在首都医科大学病理学教研室、北京市宣武医院脑老化研究室完成。选用8周龄雄性昆明小鼠18只,体质量28～32g,随机分为3组:对照组,糖尿病组,APP17肽治疗组,每组6只小鼠。方法:用链脲佐菌素选择性地破坏胰岛β-细胞,诱发小鼠糖尿病模型,并皮下注射APP17肽给予治疗。4周后取脑组织进行AT-8(抗Ser202/Thr205特异单抗)免疫组化染色。主要观察指标:①形态学观察。②AT-8分布。③免疫组化染色定量分析。结果:糖尿病组AT-8阳性反应细胞广泛分布于压后颗粒皮层、海马、丘脑、下丘脑等部位,而对照组及APP17肽治疗组仅在压后颗粒皮层、海马可见阳性反应细胞,且着色淡。结论:糖尿病脑内多个区域的神经元可能存在较多的AT-8阳性细胞,而APP17肽可能使AT-8阳性反应细胞出现的部位和数量正常化。     

黄连解毒汤对APP/PS1双转基因AD小鼠海马区病理形态学及脑内β-APP基因mRNA的影响

目的:探讨黄连解毒汤(HLJDD)对APP/PS1双转基因阿尔茨海默病(AD)模型小鼠海马CA1区的病理形态学及脑内β-淀粉样前体蛋白(β-APP)基因mRNA的影响。方法:选用3月龄的APP/PS1双转基因AD小鼠模型50只,随机分为对照组、安理申组、HLJDD大剂量组、HLJDD中剂量组、HLJDD小剂量组各10只,分别给予安理申或不同剂量HLJDD灌胃治疗6个月,对照组不予治疗,记录并比较各组死亡率;分别于6月龄和10月龄时采用HE染色观察各组海马CA1区神经细胞形态,采用改良甲醇刚果红染色观察各组老年斑形成情况;于末次灌胃治疗后,通过实时荧光定量PCR检测各组脑内β-APPmRNA水平。结果:各组小鼠死亡率差异无统计学意义;10月龄HLJDD各剂量组海马CA1区神经损伤情况较对照组明显减轻,老年斑数量少于对照组(P0.05);HLJDD各剂量组β-APPmRNA水平低于对照组(P0.05),其中以中剂量组水平降低最明显(P0.01)。结论:HLJDD能保护海马神经细胞。     

APP17肽对D-半乳糖脑老化小鼠海马神经元凋亡的影响

目的研究APP17肽对D-半乳糖脑病小鼠海马神经元凋亡的影响,为进一步探讨APP17肽对脑老化的临床治疗意义提供理论依据。方法雄性昆明小鼠66只,按随机数字表法分为3组:正常对照组(C组)、D-半乳糖对照组(D组)、APP17肽治疗组(P组),每组动物22只。用D-半乳糖制备脑老化模型,并皮下注射APP17肽对D-半乳糖脑老化小鼠进行治疗,3个月后取脑组织做Bcl-2,Bax,CREB,Akt,AIF免疫组织化学染色。结果D-半乳糖脑病小鼠海马内Bax,AIF阳性反应神经元细胞数目多,细胞计数与C组及P组有显著性差异;胞质与突起深染,而正常小鼠及APP17肽保护的D-半乳糖小鼠海马阳性细胞数目少,染色淡;D-半乳糖小鼠海马内Bcl-2,CREB(cAMP反应结合蛋白),AKt阳性细胞数目少,染色淡,细胞计数与C组及P组有显著性差异;而正常小鼠及APP17肽保护的D-半乳糖小鼠海马阳性反应神经元细胞数目多,胞质与突起深染。结论促进凋亡的Bax,AIF(凋亡诱导因子)在D-半乳糖小鼠海马表达增加;与凋亡呈负相关的Bcl-2,CREB,Akt在D-半乳糖小鼠海马表达降低APP17肽能影响D-半乳糖脑病小鼠脑内Bcl-2,Bax,CREB,Akt,AIF的表达,使之接近正常。     

胰岛素样生长因子-1受体在糖尿病小鼠脑内的分布

目的：观察糖尿病小鼠脑内胰岛素样生长因子-1受体(IGF-1R)的分布及APPl7肽对其分布的影响，为多肽对糖尿病脑病和AD的治疗提供理论依据。方法：雄性昆明小鼠体质量28—32g，鼠龄8周，共18只。随机分为3组，正常对照组(C组)、糖尿病对照组(DM组)和APPl7肽治疗组(APPl7peptide+DM组)。用链脲佐菌素诱发小鼠糖尿病模型，并皮下注射APPl7肽(B-淀粉样肽前体蛋白319—335)给予治疗。4周后取脑组织进行IGF-1R免疫组化染色。结果：糖尿病组IGF-1R阳性反应细胞广泛分布于皮质、海马、丘脑、下丘脑等部位，而正常对照组及APPl7肽治疗组仅在皮质、海马可见阳性反应细胞，DM组与C组、APPl7peplide+DM组海马阳性反应细胞数分别为(22．3&;#177;1．7)，(14．5&;#177;1．4)，(15．2&;#177;1．1)个／10倍物镜。后两组与DM组比较差异有显著性意义(F=0．1，0．2，p&;lt;0．001)。C组与DM+APPl7ueutide组小鼠海马IGF-1R免疫组化红、绿、蓝像素值分别为86&;#177;8，101&;#177;6，130&;#177;5(F=3．3，0．6，0．5，P&;lt;0．01)和84&;#177;6，102&;#177;6，132&;#177;6(F=1．2，6．0，7．0，P&;lt;0．01)，且着色淡。结论：糖尿病小鼠脑内多个区域存在较多的IGF-lR阳性神经元，而APPl7肽能使IGF-IR阳性反应细胞出现的部位和数量正常化。     

老年痴呆发病机制的研究:APP17肽对β-淀粉样肽导致神经元毒性作用的影响

背景老年斑是老年性痴呆(Alzheimer's Disease,AD)的主要病理特征之一,以β-淀粉样肽(β-Amyloid,Aβ)沉积为核心,Aβ的神经元毒性定位于Aβ25-35.Aβ前体蛋白(β-amyloid protein precursor,APP)中319-335肽段即APP17肽(APP17-mer peptide),具有神经营养和神经保护作用.目的通过观察APP17肽对Aβ引起神经毒性作用的影响,进一步证实此肽的神经营养作用,并为阐明AD的发病机制和临床治疗提供理论依据.设计标准对照实验研究.地点和材料本研究的地点为首都医科大学宣武医院神经生化研究室.SY5Y细胞株由瑞典卡罗琳斯卡研究所赠送,APP17肽和Aβ25-35由本室用固相法合成,高效液相纯化.方法固相法合成APP17肽、Aβ25-35,高效液相纯化,以人神经母细胞瘤株SY5Y为细胞模型,分为正常对照组、Aβ25-35 10μmol/L损伤组和Aβ25-35 10μmol/L加APP17肽10 μmol/L保护组.以细胞计数、噻唑蓝代谢率、乳酸脱氢酶漏出率、细胞轴突长度、胞体面积和细胞内游离钙离子(Ca2+)浓度为观察指标.结果与正常对照组相比,Aβ25-35损伤组轴突长度(35.74±16.25)和胞体面积(495.92±87.68)均缩小,细胞计数接种后第6天[(8.39±1.31)×107 L-1]减少,噻唑蓝代谢率降低,乳酸脱氢酶漏出率升高,细胞内游离钙离子浓度升高,而加入APP17肽保护后,可使上述指标恢复或接近正常. 结论APP17肽具有神经营养和神经保护作用,可减轻Aβ引起的神经元损伤.     

淀粉样β蛋白前体蛋白17肽对神经保护的作用及其机制

目的：探讨淀粉样β蛋白前体蛋白17肽对神经保护的作用机制,为阿尔茨海默病的治疗提供理论依据.资料来源：应用计算机检索Medline 1987/2003关于淀粉样b蛋白前体蛋白研究的文章,检索词为“amyloid precursor protein,Alzheimer＇sdisease”等,限定文章语言种类为英文;同时检索中国期刊网1999/2004期间的相关文献,检索词为“淀粉样β蛋白前体蛋白,阿尔茨海默病”,限定文章语言种类为中文.并手工查阅相关书籍.资料选择：对资料进行初审,选择与淀粉样β蛋白前体蛋白和阿尔茨海默病相关的研究论著,排除重复的同一研究.资料提炼：共收集到29篇相关文献,其中中文文献12篇,英文文献17篇.资料综合：淀粉样β蛋白前体蛋白17肽无论体内实验还是体外实验均显示对神经细胞的保护作用,它通过上调其他神经营养因子的表达,促进神经细胞存活信号通路相关蛋白的表达,抑制神经细胞凋亡因子的表达,影响神经细胞蛋白质代谢,从而改善模型动物神经系统超微结构的损害,提高模型动物学习记忆能力,达到神经保护的作用.结论：促进神经营养因子的表达是淀粉样β蛋白前体蛋白17肽神经元保护作用的有效机制之一;淀粉样β蛋白前体蛋白17肽对神经细胞存活信号通路的各个步骤均有影响,可以促进细胞存活是淀粉样β蛋白前体蛋白17肽神经元保护作用的另一有效机制.     

环指蛋白6对胰岛素受体底物1泛素化作用的研究

目的：构建环指蛋白6（RNF6）真核表达载体,并探讨其对胰岛素受体底物1（IRS-1）的泛素化作用。方法以人cDNA为模板,PCR 扩增 RNF6全长编码基因,并将其克隆至载体质粒 pcDNA3．1-CHA 中,将重组质粒转染肝癌细胞株 HepG2,利用实时荧光定量 PCR（RT-PCR）、免疫印迹（Western blot）检测细胞内 IRS-1 mRNA 水平及其蛋白表达水平。结果携带RNF6目的基因的质粒转染 HepG2细胞48 h 后 IRS-1的 mRNA 表达水平降低,为对照组的69％,显著低于对照组,差异有统计学意义（P ＜0．01）。结论RNF6引起 IRS-1的表达下调,这一泛素化过程可能导致胰岛素信号转导障碍。     

胰岛素样生长因子-1受体在糖尿病小鼠脑内的分布

目的:观察糖尿病小鼠脑内胰岛素样生长因子-1受体(IGF-1R)的分布及APP17肽对其分布的影响,为多肽对糖尿病脑病和AD的治疗提供理论依据。方法:雄性昆明小鼠体质量28～32g,鼠龄8周,共18只。随机分为3组,正常对照组(C组)、糖尿病对照组(DM组)和APP17肽治疗组(APP17peptide+DM组)。用链脲佐菌素诱发小鼠糖尿病模型,并皮下注射APP17肽(β-淀粉样肽前体蛋白319～335)给予治疗。4周后取脑组织进行IGF-1R免疫组化染色。结果:糖尿病组IGF-1R阳性反应细胞广泛分布于皮质、海马、丘脑、下丘脑等部位,而正常对照组及APP17肽治疗组仅在皮质、海马可见阳性反应细胞,DM组与C组、APP17peptide+DM组海马阳性反应细胞数分别为(22.3±1.7),(14.5±1.4),(15.2±1.1)个/10倍物镜。后两组与DM组比较差异有显著性意义(F=0.1,0.2,P<0.001)。C组与DM+APP17peptide组小鼠海马IGF-1R免疫组化红、绿、蓝像素值分别为86±8,101±6,130±5(F=3.3,0.6,0.5,P<0.01)和84±6,102±6,132±6(F=1.2,6.0,7.0,P<0.01),且着色淡。结论:糖尿病小鼠脑内多个区域存在较多的IGF-1R阳性神经元,而APP17肽能使IGF-1R阳性反应细胞出现的部位和数量正常化。     

P-glycoprotein efflux and other factors limit brain amyloid beta reduction by beta-site amyloid precursor protein-cleaving enzyme 1 inhibitors in mice

Alzheimer's disease (AD) is a progressive neurodegenerative disease. Amyloid beta (Abeta) peptides are hypothesized to cause the initiation and progression of AD based on pathologic data from AD patients, genetic analysis of mutations that cause early onset forms of AD, and preclinical studies. Based on this hypothesis, beta-site amyloid precursor protein (APP)-cleaving enzyme 1 (BACE1) inhibitors are an attractive therapeutic approach for AD because cleavage of the APP by BACE1 is required to form Abeta. In this study, three potent BACE1 inhibitors are characterized. All three inhibitors decrease Abeta formation in cultured cells with IC(50) values less than 10 nM. Analysis of APP C-terminal fragments by immunoblotting and Abeta peptides by mass spectrometry showed that these inhibitors decreased Abeta by inhibiting BACE1. An assay for Abeta1-40 in mice was developed and used to show that these BACE1 inhibitors decreased plasma Abeta1-40, but not brain Abeta1-40, in wild-type mice. Because these BACE1 inhibitors were substrates for P-glycoprotein (P-gp), a member of the ATP-binding cassette superfamily of efflux transporters, these inhibitors were administered to P-gp knockout (KO) mice. These studies showed that all three BACE1 inhibitors decreased brain Abeta1-40 in P-gp KO mice, demonstrating that P-gp is a major limitation for development of BACE1 inhibitors to test the amyloid hypothesis. A comparison of plasma Abeta1-40 and brain Abeta1-40 dose responses for these three compounds revealed differences in relative ED(50) values, indicating that factors other than P-gp can also contribute to poor brain activity by BACE1 inhibitors.     

Upregulation of insulin receptor substrate-2 in pancreatic beta cells prevents diabetes

The insulin receptor substrate-2 (Irs2) branch of the insulin/IGF signaling system coordinates peripheral insulin action and pancreatic beta cell function, so mice lacking Irs2 display similarities to humans with type 2 diabetes. Here we show that beta cell-specific expression of Irs2 at a low or a high level delivered a graded physiologic response that promoted beta cell growth, survival, and insulin secretion that prevented diabetes in Irs2-/- mice, obese mice, and streptozotocin-treated mice; and that upon transplantation, the transgenic islets cured diabetes more effectively than WT islets. Thus, pharmacological approaches that promote Irs2 expression in beta cells, especially specific cAMP agonists, could be rational treatments for beta cell failure and diabetes.     

Molecular genetics of Alzheimer's disease and the amyloid beta peptide precursor gene

Alzheimer's disease is a neurodegenerative disorder characterized by global cognitive decline. An autopsy of the Alzheimer patient's brain reveals two major neuropathological lesions: neurofibrillary tangles, and amyloid deposits in the form of senile plaques and cerebrovascular accumulations. While tangles appear to be a universal hallmark of dying neurons in several neurodegenerative diseases, amyloid plaques occur in only three conditions including Alzheimer's disease, Down syndrome, and to a limited extent, normal aging. The frequency of senile plaques appears to correlate well with the degree of dementia in the Alzheimer's patient. It remains unclear, however, whether amyloid formation represents one of the final stages of a long neuropathological process in the brain, or initially participates in promoting neuronal dysfunction. To address this question, we have isolated the gene encoding the precursor of the principle component of the plaque, the amyloid beta peptide. We have mapped this gene to chromosome 21, the same chromosome in which we have detected linkage between anonymous DNA markers and the familial form of Alzheimer's disease. Employing direct genetic linkage analysis, we have shown that the amyloid gene and the familial Alzheimer's disease gene represent two separate and distinct genetic loci. Here we present further information on the location of the familial Alzheimer's disease gene on chromosome 21. We also discuss the recent discovery of an alternate form of the amyloid beta peptide precursor gene which encodes a serine protease inhibitor in the Kunitz family. The presence of a protease inhibitor domain within the amyloid beta peptide precursor, itself, has profound implications for its possible role in the process of amyloid formation.(ABSTRACT TRUNCATED AT 250 WORDS)     

喹硫平对阿尔茨海默小鼠淀粉样β蛋白42表达的影响及机制研究

目的探索喹硫平对阿尔茨海默小鼠淀粉样β蛋白42(Aβ42)的表达的影响及其机制。方法C57BL/6小鼠20只作为对照组,APP/PS1小鼠40只分为APP/PS1组、APP/PS1+喹硫平组,各20只。APP/PS1+喹硫平组小鼠通过腹腔给予喹硫平溶液2.5 mg/(kg·d),连续给药2个月,对照组和APP/PS1组小鼠每天腹腔给予等量双蒸水。通过新事物识别实验检测三组小鼠的记忆功能;通过Western blot检测三组小鼠海马脑区Aβ42蛋白、核因子-κB(NF-κB)p65蛋白的表达水平;通过酶联免疫吸附(ELISA)检测海马脑区白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达水平,免疫荧光染色计算小胶质细胞数量。结果与对照组比较,APP/PS1小鼠对新事物的探索时间显著降低(P<0.05),小胶质细胞明显激活,小胶质细胞的数量显著增加(P<0.05),IL-10和TNF-α的表达水平均显著增加(P<0.05),Aβ42、NF-κB p65蛋白表达水平显著增加(P<0.05);与APP/PS1组比较,APP/PS1+喹硫平组小鼠的探索时间显著延长(P<0.05),小胶质细胞数量显著减少(P<0.05),IL-10和TNF-α表达水平均显著降低(P<0.05),Aβ42、NF-κB p65蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论喹硫平能降低Aβ42蛋白的产生,促进AD小鼠的记忆功能恢复,其发生机制可能与小胶质细胞激活和NF-κB信号通路活化相关。     

Hypertension, hypertriglyceridemia, and impaired endothelium-dependent vascular relaxation in mice lacking insulin receptor substrate-1.

Insulin resistance is often associated with atherosclerotic diseases in subjects with obesity and impaired glucose tolerance. This study examined the effects of insulin resistance on coronary risk factors in IRS-1 deficient mice, a nonobese animal model of insulin resistance. Blood pressure and plasma triglyceride levels were significantly higher in IRS-1 deficient mice than in normal mice. Impaired endothelium-dependent vascular relaxation was also observed in IRS-1 deficient mice. Furthermore, lipoprotein lipase activity was lower than in normal mice, suggesting impaired lipolysis to be involved in the increase in plasma triglyceride levels under insulin-resistant conditions. Thus, insulin resistance plays an important role in the clustering of coronary risk factors which may accelerate the progression of atherosclerosis in subjects with insulin resistance.     

APP17肽和救脑益智胶囊水提液对D-半乳糖脑老化小鼠海马蛋白磷酸酯酶1表达的影响

背景：D-半乳糖衰老模型具有与人类自然衰老相类似的生化改变，蛋白磷酸酯酶1在D-半乳糖脑老化小鼠表达降低是否与脑老化过程有关还有待于进一步研究。 目的：探讨APPl7肽及救脑益智胶囊水提液对D-半乳糖脑老化小鼠海马蛋白磷酸酯酶1表达的影响。 设计：随机对照观察。 单位：首都医科大学基础医学院病理学教研室和宣武医院脑老化研究室。 材料：实验于2003—07／2004—07在首都医科大学文验动物中心完成，选用雄性昆明小鼠40只。购自中国医学科学院药物研究所。 方法：将昆明小鼠随机分为5组：正常对照组、D-半乳糖对照组、APP17肽治疗组、中药小剂量治疗组、中药大剂量治疗组，每组动物8只。脑老化小鼠模型D-半乳糖组，APP17肽治疗组，中药小剂量治疗组，中药大剂量治疗组4组每日皮下注射半乳精50mg／kg体质量，同时在APP17肽治疗组皮下注射APPl7肽，每次每只小鼠注射含APP17肽0．35μg的生理盐水0．1mL，1次／d，连续注射3个月。中药冶疗组分别给予0．3g/kg和1．0g/kg的救脑益智水提液（由北京朝阳门医院和山西曲沃传统医学研究所研制，其主要成分有：党参、白术、龟甲、穿山甲等）灌胃，1次／d。两个对照组每天注射和灌注等量的生理盐水，3个月后取脑组织做蛋白磷酸酯酶1免疫组织化学染色。 主要观察指标：免疫组织化学染色检测各组动物海马蛋白磷酸酯酶1的表达。 结果：40只小鼠均进入结果分析，无脱失值。D-半乳糖小鼠和大剂量救脑益智胶囊水提液治疗组小鼠海马蛋白磷酸酯酶1阳性细胞数目少，染色淡；正常小鼠、APP17肽保护和救脑益智胶囊水提液小剂量治疗的D-半乳糖小鼠海马阳性反应神经冗数目多，胞浆与突起深染。 结论：抑制凋亡的蛋白磷酸酯酶1在D-半乳糖小鼠海马表达降低。APP17肽和小剂量救脑益智胶囊水提液治疗能影响D-半乳糖脑病小鼠脑内蛋白磷酸酯酶1的表达，使之接近正常。而大剂量救脑益智胶囊水提液治疗无此作用．其量效关系特点还需要进一步考察验证。     

APP17肽和救脑益智胶囊水提液对D-半乳糖脑老化小鼠海马蛋白磷酸酯酶1表达的影响

背景:D-半乳糖衰老模型具有与人类自然衰老相类似的生化改变,蛋白磷酸酯酶1在D-半乳糖脑老化小鼠表达降低是否与脑老化过程有关还有待于进一步研究。目的:探讨APP17肽及救脑益智胶囊水提液对D-半乳糖脑老化小鼠海马蛋白磷酸酯酶1表达的影响。设计:随机对照观察。单位:首都医科大学基础医学院病理学教研室和宣武医院脑老化研究室。材料:实验于2003-07/2004-07在首都医科大学实验动物中心完成,选用雄性昆明小鼠40只。购自中国医学科学院药物研究所。方法:将昆明小鼠随机分为5组:正常对照组、D-半乳糖对照组、APP17肽治疗组、中药小剂量治疗组、中药大剂量治疗组,每组动物8只。脑老化小鼠模型D-半乳糖组,APP17肽治疗组,中药小剂量治疗组,中药大剂量治疗组4组每日皮下注射半乳糖50mg/kg体质量,同时在APP17肽治疗组皮下注射APP17肽,每次每只小鼠注射含APP17肽0.35μg的生理盐水0.1mL,1次/d,连续注射3个月。中药治疗组分别给予0.3g/kg和1.0g/kg的救脑益智水提液(由北京朝阳门医院和山西曲沃传统医学研究所研制,其主要成分有:党参、白术、龟甲、穿山甲等)灌胃,1次/d。两个对照组每天注射和灌注等量的生理盐水,3个月后取脑组织做蛋白磷酸酯酶1免疫组织化学染色。主要观察指标:免疫组织化学染色检测各组动物海马蛋白磷酸酯酶1的表达。结果:40只小鼠均进入结果分析,无脱失值。D-半乳糖小鼠和大剂量救脑益智胶囊水提液治疗组小鼠海马蛋白磷酸酯酶1阳性细胞数目少,染色淡;正常小鼠、APP17肽保护和救脑益智胶囊水提液小剂量治疗的D-半乳糖小鼠海马阳性反应神经元数目多,胞浆与突起深染。结论:抑制凋亡的蛋白磷酸酯酶1在D-半乳糖小鼠海马表达降低。APP17肽和小剂量救脑益智胶囊水提液治疗能影响D-半乳糖脑病小鼠脑内蛋白磷酸酯酶1的表达,使之接近正常。而大剂量救脑益智胶囊水提液治疗无此作用,其量效关系特点还需要进一步考察验证。