三维试验法检测鲍曼不动杆菌产超广谱β-内酰胺酶和AmpC酶

为了解我院鲍曼不动杆菌对β-内酰胺类抗生素耐药原因,我们采用三维试验法对临床分离的菌株进行超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)和AmpC酶检测。     

鲍曼不动杆菌产AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶检测和耐药性分析

目的 分析医院感染菌鲍曼不动杆菌(ABA)临床分离株头孢菌素酶(AmpC酶)、超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的产生及其耐药特点.方法 应用纸片扩散法(K-B法)进行药物敏感试验,用三维试验法检测不动杆菌属产生的AmpC酶和ESBLs.结果 69株鲍曼不动杆菌,产ESBLs 18株(26.1%),产AmpC酶17株(24.6%),同时产AmpC酶和ESBLs 4株(5.8%);产AmpC酶菌株对各种抗菌药物的耐药比产ESBLs菌株多.结论 鲍曼不动杆菌产AmpC酶和ESBLs的比例较高,临床应加强与微生物室的联系,科学用药,才能有效控制感染.     

产超广谱β内酰胺酶和高产AmpC酶革兰阴性杆菌耐药性检测

目的了解铜陵地区产ESBLs和高产AmpC酶革兰阴性杆菌的耐药性.方法2003年10月至2004年9月铜陵地区临床分离的革兰阴性杆菌270株,用Kirby-Bauer法进行药敏试验,根据NCCLS 2002年判断标准分析结果.结果270株革兰阴性杆菌中检出产ESBLs或（和）高产AmpC酶68株,检出率25.2%,其中单产ESBLs 49株,以肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌中检出率最高,分别为31.6%和31.0%：单产AmpC酶3株,均为阴沟肠杆菌,同时产AmpC酶和ESBLs16株,其中鲍曼不动杆菌8株.产酶株对头孢菌素耐药率明显高于非产酶株,产ESBLs菌株对替卡西林-克拉维酸、头孢哌酮-舒巴坦等含酶抑制剂的抗菌药物耐药率在50%以上,对亚胺培南敏感性好.结论ESBLs和高产AmpC酶是导致革兰阴性杆菌耐药的主要两类酶,产酶株对多种抗菌药物耐药,仅对亚胺培南敏感.     

80株鲍曼不动杆菌产超广谱β-内酰胺酶检测及耐药性分析

目的 了解常宁地区鲍曼不动杆菌感染现状及产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的情况.方法 采用国产天地人半自动微生物鉴定系统对鲍曼不动杆菌进行鉴定,采用K-B琼脂纸片扩散法检测鲍曼不动杆菌对20种抗菌药物的药敏情况,采用标准纸片扩散法确证试验检测ESBLs,并进行耐药性分析.结果 80株鲍曼不动杆菌中,痰及支气管分泌物最多,占77.50%;对所检测的20种抗生素耐药率大部分在50%以上,亚胺培南和美洛培南的耐药率较低,均为37.50%;检测出产ESBLs鲍曼不动杆菌31株,占全部菌株的38.75%;ESBLs阳性鲍曼不动杆菌对大部分抗生素的耐药率均显著高于ESBLs阴性菌株,差异有统计学意义(P<0.05).结论 常宁地区鲍曼不动杆菌对临床常用抗生素耐药严重,ESBLs阳性鲍曼不动杆菌的耐药情况更为严重,这可能与本地区大量及不合理使用抗生素有关.通过药敏试验及ESBLs检测可防止院内感染的区域性流行和指导临床合理应用抗生素.     

三维试验法检测肠杆菌属细菌中超广谱β内酰胺酶和AmpC酶

目的 :了解肠杆菌属细菌中超广谱 β内酰胺酶 (ESBLs)和AmpC酶的发生率及其对耐药性的影响。 方法 :以聚合酶链反应 (PCR)方法检测肠杆菌属细菌中ESBLs和AmpC酶基因为金标准 ,评价三维试验法检测ESBLs和AmpC酶的灵敏度和特异性 ;用K B(Kirby bauer)法测定肠杆菌属细菌对 13种抗菌药物的敏感性。 结果 :在 2 0 0 2年 6月— 2 0 0 3年 5月我院临床分离的 73株肠杆菌属细菌中 ,4株 (5 .5 % )单产AmpC酶 ,15株 (2 0 .5 % )单产ESBLs,38株 (5 2 .1% )产ESBLs +AmpC酶 ,16株 (2 1.9% )为不产酶菌株。肠杆菌属细菌AmpC酶的检出率为 5 7.5 % (4 2 / 73) ;而ESBLs的检出率则为 72 .6 % (5 3/ 73)。与PCR方法相比 ,三维试验法检测ESBLs的灵敏度和特异度分别为 92 .6 % (5 0 / 5 4 )、10 0 .0 % (19/ 19) ;三维试验法检测AmpC酶的灵敏度和特异度分别为 76 .2 % (32 / 4 2 )、87.1% (2 7/ 34) ,两者与PCR方法的符合率分别为 94 .5 % (6 9/ 73)和 80 .8% (5 9/73) ,两种方法所获得的结果经统计学方法进行处理 ,χ2 值分别为 2 .2 5和 1.78(P值均 >0 .0 5 )。药敏试验结果显示非ESBLs产生株对大多数抗菌药物敏感 ,但产酶株耐药程度均较高 ;产ESBLs+AmpC菌株对多种抗菌药物的耐药率均较单产ESBLs菌株高。结论 :必须重视     

下呼吸道感染细菌产AmpC酶和超广谱β内酰胺酶的检测

目的：了解临床下呼吸道感染标本常见革兰阴性杆菌分离株中AmpC酶和超广谱β内酰胺酶(ESBLs)的检出情况。方法：通过酶提取物三维试验检测单产AmpC酶、同时产AmpC酶和ESBLs菌株；采用美国国家临床实验室标准委员会(NC—CLS)表型筛选和确认试验检测单产ESBLs菌株。结果：从临床下呼吸道标本分离对第一、二代及一种以上第三代头孢菌素耐药的226株常见革兰阴性杆菌，包括阴沟肠杆菌、弗劳地枸橼酸杆菌、肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌、鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌中，分别检出单产AmpC酶、同时产AmpC酶和ESBLs及单产ESBLs细菌34株、15株、109株，总检出率分别为15．0％、6．6％、48．2％。AmpC酶检出率在阴沟肠杆菌中最高，为57．9％；ESBLs检出率以肺炎克雷伯菌最高，其次为大肠埃希菌，分别为78．5％、77．8％。结论：下呼吸道产AmpC酶和ESBLs细胞感染常见，前以阴沟肠杆菌为主，后多见于肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌。     

鲍曼不动杆菌AmpC酶和AmpC耐药基因检测分析

目的检测临床分离的45株鲍曼不动杆菌的AmpC酶和AmpC耐药基因,并探讨产AmpC酶菌株的耐药情况。方法采用超声破碎法提取45株细菌的β-内酰胺酶粗提物,进行三维试验,提取45株细菌的总DNA,聚合酶链反应(PCR)扩增AmpC结构基因和ACT-1、CMY-G1、CMY-G2、DHA、FOX耐药基因,最低抑菌浓度药物敏感试验分析菌株的耐药性。结果 45株鲍曼不动杆菌中三维试验和PCR检测AmpC基因同时阳性的有11株,确认产AmpC酶菌株为11株。三维试验方法和PCR基因检测方法比较对AmpC酶的检出率差异无统计学意义(χ2=3.500,P>0.05)。ACT-1的检出率为4.4%,未检出FOX、DHA、CMY-G1、CMY-G2。产AmpC酶菌株的药物敏感度最高是丁胺卡那霉素(90.9%),其次是亚胺培南(54.5%),产AmpC酶菌株耐药率高,对氨苄西林、氨曲南、头孢曲松、头孢替坦、头孢唑啉、呋喃妥因、头孢他啶达到100.0%,产AmpC酶菌株对抗菌药物的耐药性显著高于不产AmpC酶菌株。结论三维试验方法和PCR基因检测方法对AmpC酶的检出率无明显差别,但仍存在假阳性与假阴性。产AmpC酶菌株耐药情况严重,提示临床应慎重用药。     

济南地区革兰阴性杆菌产AmpC酶和超广谱β内酰胺酶的现状及药敏检测

目的：了解济南地区耐第三代头泡菌素的革兰阴性杆菌中AmpC酶和超广谱β内酰胺酶(ESBLs)的状况，并对18种抗菌药物作药敏试验，比较产酶菌与非产酶菌对18种抗菌药物的耐药率。为临床治疗产酶菌引起的感染提供理论依据。方法：应用头泡西丁三维试验检测AnpC酶。应用美国国家临床实验室标准委员会(NCCLS)推荐的纸片扩散确证法检测ES-BLs。以K—B琼脂扩散法做药敏试验。对AmpC阳性进行质粒接合试验。结果：在受检的250株革兰阴性杆菌中，53株(21．2％)产AmpC酶，98株(39．2％)产ESBLs，6株(2．4％)同时高产AmpC ESBLs酶。53株AmpC酶阳性菌中，6株临床分离菌的耐药质粒接合转移成功。产酶菌对头孢吡肟、亚胺培南和阿米卡星耐药率低。在7种喹诺酮类抗菌药物中，左氧氟沙星及加替沙星的耐药率较其他喹诺酮类低。结论：济南地区革兰阴性杆菌耐药性的产生，是由于细菌产生AnpC酶和ES-BLs引起的，以ESBLs为主。AmpC酶既可以染色体介导也可以质粒介导，以染色体介导为主。治疗产2种β内酰胺酶的细菌引起的感染亚胺培南为首选，头孢吡肟、左氧氟沙星、加替沙星和阿米卡星可作为选用药物之一。     

超广谱β-内酰胺酶在多重耐药鲍曼不动杆菌中的作用

目的探讨超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)在多重耐药鲍曼不动杆菌中的作用。方法收集该院2014年临床分离的158株鲍曼不动杆菌,采用纸片扩散法(K-B)测定其对临床常用20种抗菌药物的敏感性。采用PCR对其中100株多重耐药进行ESBLs基因扩增,通过序列分析明确基因型。结果鲍曼不动杆菌对多黏菌素B均敏感,对米诺环素、亚胺培南、头孢哌酮-舒巴坦和丁胺卡那霉素的耐药率分别为3.9%、45.8%、48.1%和39.1%,其余抗菌药物耐药率均大于50%。多重耐药菌株中,32株SHV-12型基因阳性,54株PER-1型基因阳性,16株TEM-1型基因阳性,有2株同时携带这3种基因,6株同时携带SHV-12和PER-1型基因。结论鲍曼不动杆菌耐药情况较严重,多重耐药与携带SHV-12、PER-1和TEM-1型基因相关。     

AmpC酶及超广谱β内酰胺酶在126株革兰阴性杆菌中的分布

目的：研究临床分离的革兰阴性杆菌不同菌株产AmpC酶及超广谱β内酰胺酶(ESBLs)的分布。方法：AmpC酶的检测是通过冻融法获得酶粗提物,然后作三维试验,以狭缝与抑菌圈交界处是否出现扩大的长菌区域来判断试验的结果。ESBLs的检测是采用纸片确证试验。结果：126株对第三代头孢菌素耐药或中介的革兰阴性杆菌中产AmpC酶株有58株(占46％),产ESBLs株有28株(占22．6％)。结论：ESBLs及AmpC酶已成为介导革兰阴性杆菌耐药的两大主要因素。     

改良三维试验同时检测阴沟肠杆菌中的AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶

目的研究瑞安市人民医院临床标本分离出的的阴沟肠杆菌产AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）情况,以指导临床用药。方法收集瑞安市人民医院2006年1～12月临床标本分离到的96株阴沟肠杆菌,用纸片扩散法对14种抗菌药物进行了药敏试验,用改良三维试验进行持续高产AmpC酶和ESBLs的双重检测。结果96株阴沟肠杆菌中11株（11．5％）高产AmpC酶;2株（2．1％）既持续高产AmpC酶又产ESBLs;40株（41．6％）只产ESBLs;其余43株（44．8％）未发现持续高产AmpC酶或ESBLs。结论使用改良的酶提取物三维试验可同时检测高产AmpC酶和ESBLs菌株,应根据阴沟肠杆菌产生不同的ESBLs来选择性用药。     

不动杆菌超广谱β-内酰胺酶特性研究

[目的]了解不动杆菌临床株所产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的一些特性。[方法]采用超声破碎法制备ESBLs粗提液，紫外分光光度法测定酶的底物特异性和抑制剂的抑酶作用，等电聚焦电泳法测定等电点。[结果]三株不动杆菌所产的ESBLS酶作用优先底物是青霉素类抗生素，对亚胺培南无水解作用，WA74株所产的酶对头孢菌素的相对水解率较低（〈50％）。棒酸、舒巴坦、他唑巴坦对WA31、WA52菌株所产的ESBLs有较强的抑制作用，对WA74 ESBLs抑制作用较弱，EDTA不能抑制3种酶的水解活性。3种β-内酰胺酶pI分别为7．3、8．4、6．1。[结论]鲍曼不动杆菌WA31、WA52产生的ESBLs属于A类Bush 2be群可能为TEM型，溶血不动杆菌WA74产生的ESBLs属于D类Bush 2d群。     

介绍一种同时存在AmpC酶和超广谱β内酰胺酶的检测方法

目的：研究自血培养分离的阴沟肠杆菌的耐药特点，以指导临床用药。方法：收集1997-2000年期间我院住院患血液中分离到的10株阴沟肠杆菌，用纸片扩散法对13种抗菌药物进行了检测，用改良的酶提取物三维试验方法进行持续高产AmpC酶和超广谱β内酰胺酶（ESBLs）的双重检测。结果：10株阴沟肠杆菌中1株持续高产AmpC酶，1株既有持续主产AmpC酶，又产ESBLs；3株只产ESBLs，其余5株未发现持续高产AmpC酶和ESBLs。2株持续高产AmpC酶和3株产ESBLs均对第三代头孢菌素和β内酰胺酶抑制剂的复方制剂等多种抗菌药显示高度耐药。结论：使用改良的酶提取物三维试验可同时检测高产AmpC酶（包括染色体型和质粒型）和ESBLs的菌株。根据阴沟杆菌产生不同的β内酰胺酶选择性用药，治疗高产AmpC酶多耐药菌，使用第三代头孢菌素和酶抑制复方制剂通常导致临床治疗失败，应选用第四代头孢菌素或碳青霉烯类，或两与氨基糖苷类或氟喹诺酮类联合治疗。碳青霉烯类抗生素是惟一对AmpC酶和ESBLs均稳定的β内酰胺类抗生素，可用于治疗产ESBLs菌引起的重症感染。     

广州地区鲍曼不动杆菌产β内酰胺酶基因型调查

目的调查广州地区临床分离的鲍曼不动杆菌耐药性及其主要β内酰胺酶分布。方法用K-B纸片扩散法测定临床分离的211株鲍曼不动杆菌对13种抗菌药物的敏感性,采用PCR对85株耐药株进行β内酰胺酶基因扩增,通过序列分析明确基因型。结果鲍曼不动杆菌对美罗培南、亚胺培南、头孢哌酮-舒巴坦和替卡西林-克拉维酸的耐药率分别为0、0.9%、31.4%和31.1%,其余抗菌药物耐药率在39.3%~80.1%;85株耐药菌株中,57株扩增到ampC基因、12株SHV-12型基因阳性,14株PER-1型基因阳性,7株CTX-M-14型基因阳性,8株TEM-1型基因阳性;同时携带2种基因有11株,携带3种基因有10株。结论鲍曼不动杆菌耐药与携带ampC基因、SHV-12、PER-1、CTX-M-14和TEM-1型等基因密切相关。     

肺炎克雷伯菌超广谱β内酰胺酶及AmpC酶分析研究

目的：研究目前我国肺炎克雷伯菌中超广谱β内酰胺酶(ESBLs)及质粒介导AmpC酶产生情况。方法：以美国国家临床实验室标准委员会(NCCLS)推荐纸片扩散法确证试验检测肺炎克雷伯菌产ESBLs情况。以三维试验检测其产质粒介导AmpC酶情况。等电聚焦电泳测定所产粗酶的等电点。聚合酶链反应(PCR)检测β内酰胺酶亚型。DNA序列测定判断质粒介导AmpC酶的种类。结果：检出产ESBLs肺炎克雷伯菌37株，检出率17．5％(37／212)。三维试验检测出产质粒介导AmpC酶肺炎克雷伯菌2株，检出率0．9％(2／212)，此2株菌均同时产ESBLs。在所产ESBLs中，CTX—M型占83．8％(31／37)，其中CTX-M-1组占54．1％(20／37)，Toho-2组占29．7％(11／37)，CTX-M-1组：Toho-2组为1．8：1；SHV型占24．3％(9／37)。DNA测序结果，1株肺炎克雷伯菌所产质粒介导AmpC酶为DHA-1。结论：①肺炎克雷伯菌中ESBLs以CTX-M型为主。②在肺炎克雷伯菌中发现1株质粒介导AmpC酶为DHA-1。     

EDTA纸片增效试验检测鲍曼不动杆菌金属β-内酰胺酶

目的探讨金属β-内酰胺酶(MBL)检测方法,为临床合理选择抗菌药物提供确切的依据。方法收集104株耐亚胺培南鲍曼不动杆菌(CRAB),以乙二胺四乙酸(EDTA)纸片增效法检测MBL表型,并与聚合酶链反应(PCR)检测MBL基因结果进行比较。结果应用PCR方法,在104株受试菌中检出MBL基因阳性菌21株;EDTA纸片增效法检测出24株阳性菌株,对比PCR实验结果,该方法的敏感度95.2%,特异度95.1%。结论 EDTA纸片增效法检测鲍曼不动杆菌的MBL方法简便、结果可靠、成本低廉,适合于基层医院临床微生物学实验室对产MBL鲍曼不动杆菌的初步鉴定。     

鲍曼不动杆菌的β—内酰胺酶与耐药表型分析

分析鲍曼不动杆菌的β－内酰胺酶与对β－内酰胺类抗生素耐药表型的关系。用青霉素及头孢唑啉做底物，分别检测从各种临床样品分离到的８４株鲍曼不动杆菌的青霉素酶和头孢菌素酶；并用Ｋ－Ｂ法，微量肉汤稀释法进行了７种β－内酰胺类抗生素及两种加酶抑制剂的三代头孢药敏试验，其中产酶株对７种抗生素基本耐药，不产酶株对头孢他啶 ，哌拉西林较敏感；８４株对头孢哌酮／舍巴坦均敏感，舒巴坦对酶的抑制作用远优于棒酸，用头孢他     

鲍曼不动杆菌产AmpC酶的检测及耐药性分析

目的了解临床分离鲍曼不动杆菌的感染分布及耐药特点,以指导临床合理用药。方法采用K-B纸片扩散法对鲍曼不动杆菌产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）及多种抗生素的耐药性进行检测;用酶提取物三维试验法检测AmpC酶;用聚合酶链反应（PcR）法对鲍曼不动杆菌染色体DNA的ampC基因进行扩增。结果鲍曼不动杆菌临床分布以ICU病房最多,其次是呼吸内科。分离标本痰最多,其次是血液和尿液。239株鲍曼不动杆菌有16产株ESBLs;有44株细菌在AmpC酶三维试验中呈阳性;细菌DNA的PCR扩增,有65株菌为阳性,产酶菌对头孢菌素类高度耐药,但对亚胺培南较敏感。结论不动杆菌产AmpC酶检出率高于ESBLs,产AmpC酶是鲍曼不动杆菌多重耐药的主要原因,应加强对AmpC酶的检测及其感染者的治疗。     

三维试验检测革兰阴性杆菌ESBLs及AmpC酶

目的了解革兰阴性杆菌中产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）、染色体头孢菌素酶（AmpC）的分布及分离率。方法准确鉴定菌株,采用底物为头孢噻肟的三维试验,测定菌株中ESBLs及AmpC酶。结果临床分离175株革兰阴性杆菌中产ESBLs 49株,阳性率28.0%,包括阴沟肠杆菌、大肠埃希菌、克雷伯菌属、鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌和弗劳地枸橼酸菌。产AmpC酶22株,阳性率12.6%,包括阴沟肠杆菌、鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌、产酸克雷伯菌。其中阴沟肠杆菌产ESBLs及AmpC酶分离率均居首位（分别为55.6%、33.3%）。3株铜绿假单胞菌同时产AmpC酶和ESBLs。结论我院产ESBLs菌以阴沟肠杆菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌为主。产AmpC酶以阴沟肠杆菌、鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌为主。超超广谱β-内酰胺酶（SSBLs）菌株在医院有流行。