榄香烯对人晶状体上皮细胞增生及细胞周期的影响

目的探讨中药单体榄香烯（Ele）对人晶状体上皮细胞株（HLE-B3）增生及细胞周期的影响。方法利用重组人碱性成纤维细胞生长因子（rhbFGF）诱导HLE-B3增生,将80mg/L的Ele作用在处于增生状态下的HLE-B324h后,四甲基偶氮唑蓝法（MTT）检测Ele对HLE-B3增生的抑制作用;苏木精-伊红染色观察Ele作用后HLE-B3细胞形态的改变;流式细胞术（FCM）检测Ele对HLE-B3细胞周期的影响。结果MTT检测显示：rhbFGF组HLE-B3吸光度值（0.5990±0.0531）较正常组（0.4091±0.0422）显著升高,Ele组HLE-B3吸光度值（0.4500±0.0614）较rhbFGF组显著降低,抑制率达24.90%（P〈0.01）。苏木精-伊红染色后光学显微镜下观察到rhbFGF组较正常组细胞数量增多,细胞形态清晰,胞浆丰富,胞核清晰,交织呈网状结构;Ele组细胞数量明显减少,胞浆减少,轮廓不清,交织的网状结构减少,甚至有的细胞变圆,细胞核凝集,见核固缩现象,胞浆嗜酸性染色。FCM检测细胞周期变化时发现：G1期的细胞在rhbFGF组（42.062%±1.270%）较正常组（46.422%±3.765%）减少（P〈0.05）,Ele组（60.665%±2.069%）较rhbFGF组明显增加（P〈0.01）;S期的细胞在rhbFGF组（51.647%±1.123%）较正常组（31.842%±2.798%）明显增加（P〈0.01）,Ele组（30.222%±3.429%）较rhbFGF组明显减少（P〈0.01）;G2期的细胞在rhbFGF组（6.288%±0.966%）较正常组（21.735%±3.806%）明显减少（P〈0.01）,Ele组（9.112%±1.659%）较rhbFGF组明显增加（P〈0.01）。结论Ele能通过改变HLE-B3细胞形态及细胞周期的进程而有效抑制rhbFGF诱导的HLE-B3增生,有望成为防治后发性白内障的理想药物。     

RGDRGD肽对人晶状体上皮细胞黏附与增生作用的影响

背景RGD肽是一类含有精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸的小分子多肽,其在抑制肿瘤细胞黏附、转移和肿瘤新生血管的生成中起重要作用。研究证实RGD肽能够抑制晶状体上皮细胞（LECs）的黏附和增生,RGDRGD肽串联起来作用增强。目的研究RGDRGD肽对体外培养的人LECs黏附与增生的影响,并与RGD肽的作用进行比较。方法将在体外分离培养的LECs中分别加入250、500、1000mg／L的RGDRGD肽和RGD肽作为实验组,仅加入细胞培养液作为对照组。将LECs以2×10。／ml密度接种到含有纤维连接蛋白（FN）和I型胶原蛋白预孵化的96孔培养板中,培养1h后用MTT比色法检测RGDRGD肽与RGD肽对细胞黏附率的影响。将LECs接种于培养板,分别加入250、500、1000、2000mg／L的RGDRGD肽和RGD肽培养24、48、72h,检测RGDRGD肽和RGD肽对LECs增生的影响。结果RGDRGD肽对人LECs黏附率的抑制呈明显的剂量依赖性,随着其质量浓度的增加,对细胞黏附的抑制作用越强,500mg／L的RGDRGD肽比RGD肽抑制人LECs黏附的作用更强（P〈0．01）。RGDRGD肽对人LECs增生的抑制呈明显的时间剂量依赖性,1000mg／L的RGDRGD肽作用48h比RGD肽对人LECs增生的抑制作用更强（P〈0．01）。结论RGDRGD肽抑制LECs黏附与增生的作用强于RGD肽,为进一步临床应用提供了理论依据。     

苦参碱对体外培养的兔晶状体上皮细胞的影响

目的探讨苦参碱（matrine,Mat）对体外培养的兔晶状体上皮细胞（rabbit lens epithelial cell,RLEC）的影响。方法MTT测定0.5g·L^-1、1.0g·L^-1、1.5g·L^-1的Mat分别作用RLEC12h、24h、36h、48h、72h后细胞增生的情况,流式细胞术检测不同浓度的Mat分别作用RLEC6h、12h、24h、48h、72h后增生细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）的表达。结果MTT法结果表明,经0.5g·L^-1Mat处理RLEC12h、24h、36h、48h、72h后,细胞增生抑制率分别为11.64%、20.47%、35.42%、45.82%、52.04%;经1.0g·L^-1Mat处理后分别为27.37%、41.01%、49.99%、63.26%、70.80%;而经1.5g·L-1Mat处理后分别为46.98%、64.36%、73.09%、81.64%、89.32%.随着作用时间的延长和浓度的增加,Mat对rhEGF诱导的RLEC增生的抑制率逐渐增大,呈明显的剂量-效应关系和时间-效应关系。流式细胞术检测表明,Mat能明显抑制体外培养的RLEC内PCNA蛋白表达,也呈明显的时间-效应关系和剂量-效应关系。结论Mat能有效抑制体外培养的RLEC增生和RLEC内PCNA的表达。     

姜黄素对人晶状体上皮细胞增生的抑制作用

目的探讨姜黄素(curcumin,CUR)对人晶状体上皮细胞株SRA01/04(human lens epithelial cell line SRA01/04,HLECSRA01/04)增生的抑制作用及其剂量-效应与时间-效应的关系。方法MTT比色法分别测定不同浓度的CUR作用于HLEC不同时间后的细胞生长抑制率;不同浓度的CUR作用于HLEC24h后,流式细胞术检测HLEC的细胞凋亡率;DAPI免疫荧光染色观察HLEC的形态学改变;免疫组织化学检测HLEC的caspase-3蛋白表达情况。结果MTT比色法实验结果显示,随药物浓度增加和作用时间延长,HLEC生长抑制率增加(P<0.05)。CUR作用于HLEC24h后,流式细胞术检测表明,细胞凋亡率随药物浓度增加而明显增加(P<0.05);DAPI免疫荧光染色可见细胞核固缩、溶解碎裂、产生凋亡小体,而对照组细胞形态规则,细胞核呈现均匀的荧光染色;免疫组织化学可见,用药组caspase-3蛋白的表达随CUR浓度增加而增强(P<0.05)。结论CUR对HLEC有抑制增生和诱导凋亡作用,且呈明显的剂量-效应与时间-效应关系,可望成为后发性白内障的防治药物。     

苦参碱体外对兔晶状体上皮细胞细胞周期的影响

目的:研究苦参碱(matrine,Mat)体外对兔晶状体上皮细胞细胞周期的影响。方法:将0.5,1.0和1.5g/L的苦参碱作用于体外培养的兔晶状体上皮细胞,通过流式细胞仪检测其细胞周期各时相的百分比。结果:不同浓度梯度的苦参碱作用体外培养的兔晶状体上皮细胞72h后,与对照组及各浓度的Mat组之间相互比较,随着苦参碱浓度增高,G0-G1期细胞数量明显增加(P<0.05),S期细胞明显减少(P<0.05),呈明显的剂量-效应关系。结论:苦参碱能明显抑制体外培养的兔晶状体上皮细胞的增殖活性和细胞有丝分裂。     

5-Fu纳米毫微粒的制备及体外对晶状体上皮细胞增生的抑制作用

目的制备5氟尿嘧啶(5fluorouracil,5Fu)聚乳酸纳米毫微粒并观察其表征及体外对兔晶状体上皮细胞的抑制作用。方法采用复乳法制备5Fu聚乳酸纳米毫微粒,观察毫微粒的大小、表面形态和结构,毫微粒载药率和体外药物释放曲线。取传3代晶状体上皮细胞进行对比试验,设5Fu纳米毫微粒、5Fu原药、空载纳米毫微粒组、空白对照组。设0.5～62.5mg·L-14个剂量组,作用24h、72h、120h、168h后光镜下观察细胞性状,MTT法检测抑制作用。结果(1)制备的5Fu纳米毫微粒平均粒径(191.000±0.202)nm;载药率为8.1%;首日药物突释率为38.3%,缓释时间20d;(2)5Fu纳米毫微粒和5Fu原药对兔晶状体上皮细胞均有抑制作用,并随时间和剂量的增加而增加。空载聚乳酸纳米毫微粒对细胞无抑制作用;(3)作用初期各剂量组5Fu纳米毫微粒的抑制作用低于或等于原药,随时间延长分别在不同时间点超过原药,差异有显著性。结论5Fu聚乳酸纳米毫微粒性状稳定,可长期释放药物,有效抑制兔晶状体上皮细胞的增生,随时间延长作用明显高于原药,可以作为靶向缓释药物载体。     

细胞外基质蛋白促晶状体上皮细胞粘附的作用

目的探讨纤粘连蛋白、层粘连蛋白、Ⅰ型胶原３种细胞外基质蛋白促牛晶状体上皮细胞（ＬＥＣ）的粘附作用，从细胞生物学方面阐述后囊膜混浊（ＰＣＯ）发生的病理学机制。方法应用３Ｈ—ＴＤＲ掺入法研究纤粘连蛋白、层粘连蛋白、Ｉ型胶原和鸡卵白蛋白对体外培养的牛ＬＥＣ的粘附作用。结果牛ＬＥＣ能够粘附到包被有不同浓度的纤粘连蛋白、层粘连蛋白、Ⅰ型胶原培养板表面上，呈现出浓度和时间效应特点；但牛ＬＥＣ不能够粘附到包被有不同浓度的鸡卵白蛋白培养板表面上。结论纤粘连蛋白、层粘连蛋白、Ⅰ型胶原能够介导ＬＥＣ粘附到后囊膜上，在ＰＣＯ发生过程中它们可起到重要的促进作用。     

人晶状体上皮细胞在不同材料人工晶状体表面黏附特性的比较研究

晶状体后囊膜混浊(posterior capsular opacification,PCO)是白内障摘除术后影响患者远期视力的常见并发症。其发生机制为术后晶体前囊膜下残留的晶体上皮细胞向后囊膜多行、增殖，分泌大量细胞外基质成分，致使晶状体后囊膜混虫、纤维化。我们休外培养人晶状体上皮细胞（human lens epithelial cells,HLES)，比较其在聚甲基丙烯酸     

免疫载药毫微粒对晶状体上皮细胞的体外抑制作用

目的制备免疫载药毫微粒HILE6-PLA(5-Fu)-NP,体外评价其表征、免疫学特性及对晶状体上皮细胞(LECs)增殖的抑制作用。方法将抗人LECs膜单克隆抗体HILE6与5-Fu聚乳酸毫微粒采用碳二亚胺法相连接制备免疫毫微粒。扫描电镜观察微粒形态;间接免疫荧光法评价其免疫特异性;建立LECs、角膜基质细胞培养模型,体外检测不同质量浓度免疫微粒和单纯载药微粒对细胞作用2h后的杀伤作用。结果免疫毫微粒保持对LECs的免疫特异性,对LECs具有很强的杀伤作用,明显高于同质量浓度毫微粒,62·5μg/ml作用2h抑制率可达到92·3%,撤药后观察时间延长到7d时的抑制作用高于或不低于3d时的效果。使用药物质量浓度<12·5μg/ml对角膜细胞相对较安全。结论该免疫毫微粒可有选择性的,长时间杀伤LECs,预防后囊混浊。     

核心蛋白多糖对兔晶状体上皮细胞增生的抑制作用

背景 研究发现,白内障囊外摘出术后组织修复反应可诱导房水中活性转化生长因子β(TGF-β)的增加,残留的晶状体上皮细胞(LECs)移行、分化,细胞外基质沉积,引起上皮-间质转化,导致后囊膜混浊(PCO)的发生.寻求有效的抑制LECs增生的药物对于临床上防治PCO的发生具有重要意义. 目的 探讨核心蛋白多糖( decorin)对兔LECs增生的抑制作用及其剂量-效应与时间-效应的关系. 方法 兔LECs细胞株进行培养和传代,将处于指数生长期的细胞以8×106个/L密度接种于96孔板,将0.1、1.0、10.0 mg/Ldecorin分别加入培养基中培养24、48、72 h,加入体积分数0.1％ DMSO培养的细胞为阳性对照组,常规培养基培养的细胞为空白对照组.MTT比色法分别测定不同质量浓度的decorin作用于LECs不同时间后的细胞生长抑制率;采用流式细胞技术测定各组细胞的细胞周期,用ELISA法检测各组培养液上清中TGF-β的水平,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法测定TGF-βmRNA在LECs中的表达,免疫细胞化学法观察α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达.结果 ELISA检测结果表明,各组培养基上清液中TGF-β表达量的差异有统计学意义(F=39.24,P=0.03),不同质量浓度组TGF-β水平均明显低于空白对照组,差异有统计学意义(P＜0.01),1.0 mg/L、10.0 mg/L decorin组TGF-β水平均明显低于0.1 mg/L decorin组(P＜0.05).MTT比色法结果显示,≥1.0 mg/L decorin组LECs增生的抑制率明显高于空白对照组,各质量浓度decorin组药物作用48 h和72 h后LECs增生的抑制率明显高于24 h的值,药物作用72 h后LECs增生的抑制率明显高于48 h的值,差异均有统计学意义(P＜0.05),各质量浓度decorin组G0/G1期LECs所占比例均较空白对照组明显增加,差异均有统计学意义(P＜0.05).RT-PCR检测显示,TGF-β mRNA的表达随着decorin质量浓度的升高而降低.免疫组织化学染色表明,10.0 mg/L decorin组α-SMA在LECs中的表达明显弱于空白对照组. 结论 Decorin可以抑制LECs的增生,也可以诱导LECs凋亡,其效应呈明显的剂量和时间依赖性,有望成为最具潜力的防治PCO的药物之一.     

Mechanisms of inhibition of elemene on human lens epithelial cell proliferation in vitro

AIM: To study the effects of elemene (Ele) on proliferation and cell cycle of human lens epithelial cells B3 (HLE-B3) and the mechanisms of its signal transduction. METHODS: Recombinant human basic fibroblast growth factor (rhbFGF) was used to induce proliferation of HLE-B3 cells, which were incubated with 80mg/L Ele for 24 hours. The inhibitory effects of Ele on the proliferation of HLE-B3 cells were evaluated by MTT method. The effect of Ele on HLE-B3 cell cycle was analyzed by flow cytometry(FCM). The expressions of protein kinase A (PKA) and protein kinase G (PKG) of HLE-B3 were also analyzed by FCM. RESULTS: Ele altered the cell cycle of HLE-B3 and effectively inhibited HLE-B3 cell proliferation induced by rhbFGF. Ele up-regulated PKA and down-regulated the expression of PKG in HLE-B3 cell. CONCLUSION: Ele inhibits HLE-B3 proliferation, making it an attractive potential agent in regimens to treat after- cataracts.     

晶状体上皮细胞培养及Ⅳ型胶原表达

目的体外培养小牛晶状体上皮细胞，免疫组织化学SABC法检测1V型胶原表达。方法小牛晶状体前囊组织块培养，晶状体上皮细胞原代和传代培养。传代2次后免疫组织化学法检测细胞内1V型胶原表达。结果原代培养2-3周后细胞成单层后传代培养，传代细胞易贴壁，9～10d后可再传代，免疫组织化学检测发现细胞质内有大量Ⅳ型胶原表达，形成细胞的骨架成分。结论晶状体上皮细胞在增生时有大量Ⅳ型胶原表达，其与晶状体后囊混浊有关。     

叶黄素对牛晶状体上皮细胞增殖及迁移的影响

目的观察叶黄素（lutein）对体外培养的牛晶状体上皮细胞（bovine lens epithelial ceHs，BLECs）增殖和移行的影响．为药物防治后发性白内障（after-cataract）提供新的选择。方法首先进行BLECs原代培养和传代培养。取第2～3代BLECs。分别采用MTT法、划线法．研究不同浓度及作用时间的叶黄素对体外培养的BLECs增殖及移行的影响。结果①与对照组相比．当浓度〉μmol／L时，叶黄素能够明显抑制BLECs的增殖．差异有显著性（P〈0．01）。相同作用时间不同浓度组之间抑制作用比较，随药物浓度的增加，抑制作用加强，各浓度组之间差异有显著性（P〈0．01）。而相同药物浓度组随着作用时间的延长，抑制作用加强，各时间点差异亦有显著性（P〈0．01）。②浓度为1μmol和2μmol／L的叶黄素能明显抑制BLECs的的移行，与对照组相比，差异有显著性（P〈0．01）。两组间愈合率比较，差异亦有显著性（P〈0．01）。结论①在浓度≥1μmol时，叶黄素能有效抑制BLECs的增殖。②浓度为1μmol／L和2μmol的叶黄素能抑制BLECs的移行，其强度呈一定时间依赖性。③叶黄素可能成为药物治疗后发性白内障的新选择。     

Differential protein expression in lens epithelial whole-mounts and lens epithelial cell cultures

PURPOSE: Lens fibergenesis is a problem in several types of cataract and in the posterior capsular opacification following cataract surgery. To correct improper fiber differentiation or to prevent unwanted growth on the posterior capsule following cataract surgery requires a thorough understanding of normal and abnormal fiber formation. To this end, studies were initiated to characterize fiber differentiation in the bovine lens and in lens epithelial cell cultures. METHODS: Indirect immunofluorescence and immunoblot analysis were employed to study the expression of vimentin, beta-crystallin, gamma-crystallin, filensin, aquaporin 0 and the Na, K-ATPase catalytic subunit isoforms (alpha1, alpha2, alpha3) in bovine lens epithelium whole-mounts as well as lens epithelial cell cultures propagated in medium containing 10% bovine serum or in medium supplemented with bovine serum concentrations < or =4%. RESULTS: Three distinct cell types were observed in the bovine lens epithelium. The cells of the central zone were identified by a polarized distribution of two distinct Na, K-ATPase catalytic subunit isoforms, alpha1 to the apical (fiber side) and alpha3 to the basal (aqueous humor side) membranes. Lateral to the polarized central zone, was the germinative zone of cells, best characterized by perinuclear vimentin basket-like structures and the loss of polarized Na, K-ATPase catalytic subunit isoforms. Lateral to the germinative zone were the cells of the transition zone (meridinal rows) where expression of the lens specific proteins beta-crystallin, gamma-crystallin, filensin and aquaporin 0 as well as the lens fiber-, adipocyte- and brain glia-specific Na, K-ATPase catalytic subunit, alpha2 are expressed. The cultured cells propagated in medium supplemented with 10% serum bore no resemblance to any of the cells of the bovine lens epithelium whole-mounts. The cells propagated in the medium supplemented with the lower bovine serum levels resembled the differentiating fibers of the transition zone of the bovine lens epithelium whole-mounts as well as superficial cortical fibers. CONCLUSIONS: Since the low-serum lens epithelial cell cultures bear a remarkable resemblance to early differentiating fibers, they are reasonable models for the study of early fiber differentiation or prevention of differentiation. The culture conditions employed do not yield the polarized cells of the central zone. Nor has the function of these polarized cells in lens fluid, nutrient and ion homeostasis been determined.     

地塞米松对人晶状体上皮细胞中波形蛋白表达的影响

目的 探讨地塞米松(dexamethasone,Dex)对人晶状体上皮细胞系(human lens epithelial cells,HLEC)中波形蛋白表达的影响以及波形蛋白表达变化在糖皮质激素性白内障形成中的作用.方法 对HLEC进行传代培养,应用DMEM和DMEM+1μmol·L-1Dex作用于HLEC 7 d,采用实时PCR和Western-blot从基因水平和蛋白水平检测波形蛋白的表达变化,采用免疫荧光染色法检测波形蛋白在细胞中的分布及表达变化.结果 实时PCR结果显示,Dex组较对照组波形蛋白mRNA表达减少,组间差异有统计学意义(P＜0.05).Western-blot检测结果显示,Dex组较对照组波形蛋白含量减少,组间差异有统计学意义(P＜0.05),提示Dex可降低波形蛋白的表达.免疫荧光染色结果显示Dex组较对照组波形蛋白表达减少,与Western-blot检测结果一致.结论 Dex可诱导HLEC中波形蛋白表达减少,从而引起HLEC异常的增殖和分化,最终导致糖皮质激素性白内障的形成.     

去整合素对人眼晶状体上皮细胞的粘附移行作用

目的研究去整合素对体外培养的人眼晶状体上皮细胞生长的抑制作用。方法对先天性白内障患者术中环行撕前囊膜,进行原代培养并传代,取第2代细胞用于实验。抗粘附实验:将悬浮的细胞与不同浓度的去整合素(5μg·L-1、10μg·L-1、20μg·L-1、40μg·L-1、80μg·L-1)在37℃、50mL·L-1CO2条件下一起孵育30min。然后接种于涂有鼠尾胶原的96孔培养板。8h后,用HBSS轻洗各孔2次,MTT法测定粘附细胞的吸光度。抗移行实验:对融合的细胞进行划线,80μg·L-1的去整合素进行干预,24h、48h、72h后,细胞计数法观察裸露区内细胞的移行数量。结果不同浓度的去整合素(20μg·L-1、40μg·L-1、80μg·L-1)对晶状体上皮细胞的粘附均具有抑制作用且呈剂量依赖性。与对照组相比,24h、48h、72h内80μg·L-1的去整合素可显著抑制晶状体上皮细胞的移行。结论去整合素抑制体外培养的人眼晶状体上皮细胞的粘附及移行。     

锌对半乳糖诱导的人晶状体上皮细胞凋亡的影响

目的：研究锌对半乳糖诱导的人晶状体上皮细胞(human lens epithelial cells,HLEC)凋亡的影响。

方法：将培养的SRA01/04细胞系分为六组,对照组、半乳糖处理组、补锌组、补锌联合半乳糖处理组、缺锌组、缺锌联合半乳糖处理组。采用MTT法检测半乳糖对HLEC存活率的影响,荧光显微镜和流式细胞仪分别检测各实验分组细胞核形态和细胞凋亡率水平的变化。

结果：不同浓度半乳糖(0、25、50、75、100、125mmol/L)处理HLEC细胞后,细胞存活率分别为(100.0±5.4)%、(97.5±3.2)%、(91.3±5.3)%、(93.4±0.6)%、(86.6±1.4)%和(83.5±0.4)%,与未处理细胞相比,半乳糖浓度为100、125mmol/L时,细胞存活率显著下降,差异有统计学意义(P<0.05)。荧光显微镜结果显示对照组和补锌组的细胞核呈现均一的染色,半乳糖处理组、补锌联合半乳糖处理组、缺锌组和缺锌联合半乳糖处理组中一些细胞的细胞核收缩,表现出典型的细胞凋亡形态。各组的细胞凋亡率分别为(1.5±0.1)%、(7.1±0.2)%、(1.4±0.1)%、(4.4±0.2)%、(5.5±0.2)%和(15.8±0.3)%。与对照组相比,半乳糖处理组、补锌联合半乳糖处理组、缺锌组和缺锌联合半乳糖处理组的细胞凋亡率显著增加,差异有统计学意义(P < 0.05)。与半乳糖处理组相比,补锌联合半乳糖处理组的细胞凋亡率显著下降,差异有统计学意义(P<0.05),缺锌联合半乳糖处理组的细胞凋亡率则显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。

结论：补锌可以保护人晶状体上皮细胞抵抗由半乳糖引起的细胞凋亡,可能对白内障的形成有抑制作用。     

曲尼司特对培养兔晶状体上皮细胞的作用

目的 观察曲尼司特(Tranilast)对培养兔晶状体上皮细胞增殖的作用及其对细胞周期的影响。方法 将传代的兔晶状体上皮细胞用含不同曲尼司特浓度的培养液培养，每天计数，绘制细胞生长曲线，收集细胞做流式细胞仪检查。空白培养液培养的细胞做阴性对照，含0．004％丝裂霉素C(MMC)培养液培养的细胞为阳性对照。结果 用180μmol／L的培养液培养细胞时细胞增殖明显受到抑制，随药物浓度增加，细胞增殖受抑制越明显，细胞生长曲线越低平，细胞形态变化不大。经流式细胞术进行细胞周期分析，随药物浓度增加G0／G1期细胞数增多(67．47％～79％)，而S期细胞数减少(21．19％～4．32％)。阳性对照组细胞于48h全部死亡。结论 曲尼司特具有抑制晶状体上皮细胞增殖的效果，且呈浓度依赖性。曲尼司特将细胞抑制在G1期的限制点内。