创伤后应激障碍样情感行为异常大鼠脑组织ATP酶活性的动态变化(英文)

目的:探讨创伤后应激障碍(posttraumaticstressdisorder,PTSD)样精神与行为异常的病理生理基础,为其治疗途径提供新思路。方法:将72只雄性Wistar大鼠随机分组为海马阈下电刺激组(SE,n=32)、海马电极埋植对照组(CE,n=32)和正常对照组(NC,n=8),利用频率25Hz、波宽1ms、串长10s、串隔7min、强度100μA的恒流、单脉冲电流,反复惊厥阈下电刺激海马,并定量检测了实验动物海马组织匀浆及线粒体Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活性改变。结果:电刺激停止后12h阈下刺激大鼠海马细胞线粒体Na+-K+-ATP酶活性即明显下降为(0.56±0.15)mmol/(kg·s),(F=4.348,P<0.01),48h为(0.61±0.17)mmol/(kg·s),(P<0.05)仍显著低于NC组(0.84±0.22)mmol/(kg·s);24h线粒体Ca2+-ATP酶活性亦明显降低为(0.53±0.14)mmol/(kg·s),(F=4.999,<0.05,72h为(0.60±0.16)mmol/(kg·s)仍显著低于NC组(0.83±0.22)mmol/(kg·s)。结论:海马组织,特别是海马细胞线粒体钠钾泵与钙泵功能受损,在实验动物长时程PTSD样情感行为异常发生发展中可能有重要意义。++2+     

创伤后应激障碍样情感行为异常大鼠脑组织ATP酶活性的动态变化

目的探讨创伤后应激障碍( posttraumatic stress disorder,PTSD)样精神与行为异常的病理生理基础,为其治疗途径提供新思路. 方法将 72只雄性 Wistar大鼠随机分组为海马阈下电刺激组( SE, n=32)、海马电极埋植对照组( CE, n=32)和正常对照组( NC, n=8),利用频率 25 Hz、波宽 1 ms、串长 10 s、串隔 7 min、强度 100 μ A的恒流、单脉冲电流,反复惊厥阈下电刺激海马,并定量检测了实验动物海马组织匀浆及线粒体 Na+-K+-ATP酶、 Ca2+-ATP酶活性改变. 结果电刺激停止后 12 h阈下刺激大鼠海马细胞线粒体 Na+-K+-ATP酶活性即明显下降为 (0.56± 0.15) mmol/( kg· s) ,(F=4.348, P< 0.01), 48 h为 (0.61± 0.17) mmol/(kg· s),(P< 0.05)仍显著低于 NC组 (0.84± 0.22) mmol/(kg· s); 24 h线粒体 Ca2+ ATP酶活性亦明显降低为 (0.53± 0.14 ) mmol/(kg· s),(F=4.999,< 0.05, 72 h为 (0.60± 0.16) mmol/(kg· s)仍显著低于 NC组 (0.83± 0.22) mmol/(kg· s). 结论海马组织,特别是海马细胞线粒体钠钾泵与钙泵功能受损 ,在实验动物长时程 PTSD样情感行为异常发生发展中可能有重要意义.     

创伤后应激障碍样情感行为异常大鼠脑组织ATP酶活性的动态变化

目的：探讨创伤后应激障碍(posttraumatic stress disorder，PTSD)样精神与行为异常的病理生理基础，为其治疗途径提供新思路。方法：将72只雄性Wistar大鼠随机分组为海马阚下电刺激组(SE，n=32)、海马电极埋植对照组(CE，n=32)和正常对照组(NC，n=8)，利用频率25Hz、波宽1ms、串长10s、串隔7min、强度100μA的恒流、单脉冲电流，反复惊厥阈下电刺激海马，并定量检测了实验动物海马组织匀浆及线粒体Na^+-K^+-ATP酶、Ca^2+-ATP酶活性改变。结果：电刺激停止后12h阈下刺激大鼠海马细胞线粒体Na^+-K^+-ATP酶活性即明显下降为(0．564&;#177;0．15)mmol／(kg&;#183;s)，(F=4．348，P&;lt;0．01)，48h为(0．61&;#177;0．17)mmol／(kg&;#183;s)，(P&;lt;0．05)仍显著低于NC组(0．844&;#177;0．22)mmol／(kg&;#183;s)；24h线粒体Ca^2+-ATP酶活性亦明显降低为(0．534&;#177;0．14)mmol／(kg&;#183;s)，(F=4．999，&;lt;0．05，72h为(0．60&;#177;0．16)mmol／(kg&;#183;s)仍显著低于NC组(0．83&;#177;0．22)mmol／(kg&;#183;s)。结论：海马组织，特别是海马细胞线粒体钠钾泵与钙泵功能受损，在实验动物长时程PTSD样情感行为异常发生发展中可能有重要意义。     

创伤后应激障碍样行为异常大鼠海马钙依赖性反应紊乱

目的 探讨情感行为异常大鼠海马钙离子及其相关的钙依赖性反应，进一步认识创伤后应激障碍(IWSD)样行为异常的神经生物学基础。方法 将240只雄性Wistar大鼠随机分组为海马阈下电刺激组(SE，n=96)、海马电极埋植对照组(CE，n=96)和正常对照组(NC，n=48)，采用频率25Hz、波宽lms、串长l0s、串隔7min、强度100μA的恒流、单脉冲电流，反复刺激大鼠海马以建立PTSD样行为异常动物模型；采用神经生化、流式细胞仪、荧光标记术及Western blotting等方法，定量观测了实验大鼠海马Na^+-K^+-ATP酶与Ca^2+-ATP酶活性，细胞内游离钙离子含量与钙调素(CaM)相对活性平均通道荧光，以及海马组织总CaM表达的动态变化规律。结果 电刺激停止后12h阈下刺激大鼠海马细胞线粒体Na^2+-K^+-ATP酶活性即明显下降[(0．56&;#177;0．17)mmol／(kg&;#183;s)，F=4．438，P&;lt;0．05]，48h仍显著低于NC组[(0．6l&;#177;0．17)mmol／(kg&;#183;s)，P=0．026]；24h线粒体Ca^2+-ATP酶活性亦明显降低[(0．53&;#177;0．14)mmol／(k&;#183;s)，F=4．999,P&;lt;0．05]，72h仍显著低于NC组[(0．6l&;#177;0．17)mmol／(k&;#183;s)，P=0．027]。海马细胞内游离钙离子含量于电刺激停止后12～48h明显高于两对照组(F=16．355，P&;lt;0．01)，72h仍显著高于NC组[(290&;#177;70)nmol／L，P=0．03]，游离CaM平均通道荧光则同步降低(F=l0．655，P&;lt;0．05)，而海马组织总CaM表达则于电刺激停止后48h内明显增多(F=16．247，P&;lt;0．05)。结论 海马细胞游离钙离子浓度持续增高、Ca^+／CaM含量明显增加及线粒体钠钾泵与钙泵功能受损，可能是实验动物PTSD样情感行为异常的重要病理生理基础之一。     

捕食应激对大鼠海马一氧化氮及神经型一氧化氮合酶的影响

目的探讨一氧化氮(NO)在创伤后应激障碍(PTSD)样行为异常大鼠的变化规律,以进一步揭示PTSD的神经生物学机制。方法将144只Wistar大鼠随机分组为捕食应激组(n=72)及正常对照组(n=72),在大鼠捕食应激PTSD动物模型基础上,动态检测大鼠海马、额叶皮层组织匀浆NO、一氧化氮合酶(NOS)含量及神经元型NOS(nNOS)表达。结果应激大鼠海马NO含量于捕食应激后即刻明显高于对照组犤(2.8±0.8)μmol/g,F=23.112,P=0.000犦,12h达高峰(3.9±1.1)μmol/g,与对照组比较,F=56.616,P=0.000;与同组其他时相比较,F=14.917,P<0.05,24h时仍明显增多犤(2.6±0.7)μmol/g,F=23.094,P=0.000犦;海马nNOS表达亦同步增高(应激后即刻,12及24h,F=14.228,21.772,18.500,P<0.01),而海马总NOS活性仅在应激后12h内增高犤应激后即刻及12hNOS分别为(9.8±2.5)mmol/(s·kg),F=32.812,P=0.000及(10.2±2.7)mmol/(s·kg),F=31.395,P=0.000犦。结论严重心理/生理应激所致海马nNOS持续性高表达与NO释放明显增多,在实验大鼠持续性PTSD样行为异常中可能有重要作用。     

加速度致大鼠脑缺血急性期血浆一氧化氮、一氧化氮合酶和白细胞介素6的含量变化

目的:观察实施加速度作用后造成大鼠脑缺血,在急性期血浆中的一氧化氮、一氧化氮合酶(NOS)和白细胞介素-6(IL-6)的含量变化,探讨加速度对机体引起的继发性脑损伤程度及机制。方法:30只雄性健康wistar大鼠,随机分为3组,分别施加+1Gz(正加速度)、高+Gz和正、负加速度(±Gz)的交替作用,并把被施加+1Gz加速度的大鼠作为对照组。于加速度作用后即刻麻醉,腹主动脉采血。分别测定各组大鼠血浆中一氧化氮、NOS和IL-6的含量。结果:一氧化氮含量:±Gz交替组犤(60.4±6.6)μmol/L犦与高+Gz组犤(50.3±2.2)μmol/L犦比较,t=16.5250;高+Gz组与对照组犤(35.9±3.3)μmol/L〗比较,t=27.9397;±Gz交替组与对照组比较,t=50.0324,P均<0.01。NOS活性:±Gz交替组犤(890±73)μmol/(s·L)犦与高+Gz组犤(791±60)μmol/(s·L)犦比较,t=3.3147;高+Gz组与对照组犤(332±27)μmol/(s·L)犦比较,t=23.4389;±Gz组与对照组比较,t=25.9615,P均<0.01。IL-6含量:±Gz交替组犤(132±18)ng/L犦与高+Gz组犤(106±15)ng/L犦比较,t=19.6748;高+Gz组与对照组犤(71±10)ng/L比较,t=24.9296;±Gz组与对照组比较,t=48.1645,P均<0.01。结论:正、负加速度交替和单纯高正加速度作用均可使血浆中的一氧化氮、NOS和IL-6的含量增加明显,且正、负加速度     

肾上腺髓质素对大鼠高血压的影响

目的:观察皮下注射肾上腺髓质素(adrenomedullin,ADM)对大鼠高血压的影响。方法:一氧化氮合酶抑制剂左旋硝基精氨酸诱导大鼠高血压,大鼠皮下注射脂质体携带的ADM治疗后,测定血浆亚硝酸盐含量和离体胸主动脉组织一氧化氮合酶的活性。结果:大鼠皮下每天注射左旋硝基精氨酸连续4周,血压明显升高,并且显著抑制大鼠胸主动脉一氧化氮合酶的活性犤对照组为(1.70±0.13)nmol/(g·min),空白脂质体组为(1.10±0.34)nmol/(g·min),低剂量ADM组为(1.23±0.36)nmol/(g·min),高剂量ADM组为(1.50±0.32)nmol/(g·min),n=6,P<0.05犦和减少血浆中亚硝酸盐的含量犤对照组为(21.60±2.30)mmol/L,单纯脂质体组为(9.65±2.11)mmol/L,低剂量ADM组为(13.35±3.20)mmol/L,高剂量ADM组为(18.45±4.00)mmol/L,n=6,P<0.001犦。皮下注射ADM浓度依赖性地减轻了左旋硝基精氨酸导致的高血压的程度;提高大鼠胸主动脉一氧化氮合酶的活性和增加血浆中亚硝酸盐的含量(P<0.05)。结论:ADM通过一氧化氮合酶/一氧化氮途径降低血压。     

间歇低氧对线粒体钙转运及能量代谢的影响

目的:研究间歇低氧对线粒体钙转运及能量代谢的影响,探讨低氧适应的机制。方法:SD雄性大鼠分为常氧组、急性低氧组和间歇低氧组,每组10只。采用荧光分光光度法和生物发光技术分别测定心肌、肝脏和骨骼肌线粒游离体Ca2+浓度和心肌线粒体ATP含量,并用分光光度法测定线粒体ATP酶活性。结果:急性低氧应激后线粒体游离Ca2+浓度犤心肌、肝脏、骨骼肌分别为(323±44,334±46,284±45)μmol/g蛋白〗、ATP含量犤(185±55)μg/g犦和ATP酶活性犤(0.001±0.0003)～(0.0014±0.0002)mol/(kg·s)犦下降(P<0.05),血乳酸犤(5.2±1.4)mmol/L犦明显上升(P<0.05～0.01);经过间歇低氧适应后以上指标呈上升趋势,血乳酸上升程度减低。结论:间歇性低氧适应能提高线粒体钙离子转运功能,并使能量代谢得到改善。     

仙人掌粉对糖尿病大鼠血糖的影响

目的:观察仙人掌粉对糖尿病大鼠血糖及胰岛素敏感性指数的影响,以探讨其对糖尿病的作用机制。方法:选取健康雄性Wistar大鼠50只,造模成功32只,随机将其分为4组(每组8只):模型组,仙人掌粉低、中、高剂量犤2.5,5.0,10.0g/(kg·d)犦组。测定各组大鼠血糖值,24h尿量,空腹胰岛素测定,胰岛素敏感性指数(insulinsensitivityindex,ISI)。另选健康大鼠32只,禁食3h后测血糖,随机分为4组,每组8只。设对照组,仙人掌粉低、中、高剂量犤2.5,5.0,10.0g/(kg·d)犦组。各组仙人掌粉剂量同上,喂饲4周后,再次测空腹血糖值。结果:经治疗后仙人掌粉高、中剂量组糖尿病大鼠血糖值分别为(6.69±4.42),(15.77±5.66)mmol/L,与模型组的同期血糖犤(24.4±5.35)mmol/L犦比较,差异有显著性意义(t=7.218,P<0.01;t=3.314,P<0.05);且治疗后仙人掌粉高剂量组糖尿病大鼠的ISI(-1.12±0.53)与模型组同期(-1.77±0.24)比较,差异也有显著性意义(t=3.160,P<0.05)。仙人掌粉高剂量组治疗后糖尿病大鼠尿量明显少于治疗前(t=30.316,P<0.01)。同时各剂量组均无降低正常大鼠血糖值的作用。结论:仙人掌粉能有效降低糖尿病大鼠的血糖、尿量,提高其ISI。     

活血复肾胶囊对慢性肾功能衰竭大鼠脂质代谢紊乱的影响

目的:探讨活血复肾胶囊对慢性肾功能衰竭(chronicrenalfailure,CRF)过程中脂质代谢紊乱的影响。方法:采用腺嘌呤制作大鼠(雄性SD大鼠,山西医科大学动物实验中心提供)慢性肾衰竭模型,按体质量随机分为4组:正常对照组10只、CRF组10只(死亡4只)、活血复肾胶囊组及血脂康组各10只(各死亡2只)。除了正常组外,每只大鼠每日灌服腺嘌呤400mg/(kg·d),灌服药物时间为30d。正常对照组及CRF对照组,每日灌服蒸馏水2mL;活血复肾胶囊组及血脂康组每日分别灌服药物为1.6g/(kg·d),均持续治疗为4周。分别观察血清三酰甘油、胆固醇及载脂蛋白A、载脂蛋白B的水平。结果:CRF组血肌酐犤(59.15±9.03)μmol/L犦与血尿素氮犤(18.25±3.50)mmol/L犦明显升高,与正常对照组比较,差异均有显著性意义(P<0.05)。CRF组血脂水平明显高于正常对照组犤三酰甘油:(4.40±1.50)和(1.65±0.48)mmol/L;胆固醇:(4.60±1.20)和(2.29±0.26)mmol/L;载脂蛋白A:(1.17±0.20)和(0.79±0.13)mmol/L;载脂蛋白B:(0.49±0.20)和(0.31±0.04)mmol/L犦,差异均有显著性意义(P<0.05)。活血复肾组血脂水平明显降低犤三酰甘油:(2.50±0.68)mmol/L;胆固醇:(3.06±1.40)mmol/L〗犦犤;载脂蛋白A:(1.10±0.12)mmol/L;载脂蛋白B(0.40±0.03)mmol/L犦,与正常对照组比     

细胞膜泵活性在急性肾衰竭致多器官损伤中的机制

目的 观察急性肾衰竭(ARF)致多器官损伤家兔肾、心肌、胰腺细胞膜泵活性的变化,探讨ARF致多器官损伤的作用机制. 方法 将42只家兔按随机数字表法分为对照组、HgCl2组和甘油组,后两组再分为12、24、48 h 3个亚组,每组6只.以皮下注射1% HgCl2(1.3 ml/kg)或肌肉注射50%甘油(10 ml/kg)分别复制ARF模型.各组分别于不同时间点留取肾、心肌、胰腺组织并制备组织匀浆,采用定磷法检测上清液中的ATP酶活性. 结果 与对照组比较,两个ARF模型组肾组织匀浆Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性均随ARF病情程度加重而逐渐降低,于48 h达最低水平[HgCl2组分别为(0.84±0.16)、(0.52±0.17)、(0.45±0.09) μmol·mg-1·h-1,甘油组分别为(0.85±0.22)、(0.49±0.21)、(0.54±0.17) μmol·mg-1·h-1];心肌和胰腺组织匀浆Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶、Mg2+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性也逐渐降低,48 h时达最低[心肌HgCl2组分别为(0.56±0.11)、(0.51±0.19)、(0.55±0.19)、(0.37±0.19) μmol·mg-1·h-1,甘油组分别为(0.52±0.19)、(0.62±0.10)、(0.61±0.16)、(0.54±0.10) μmol·mg-1·h-1;胰腺HgCl2组分别为(0.81±0.12)、(0.71±0.15)、(0.73±0.18)、(0.62±0.16) μmol·mg-1·h-1,甘油组分别为(0.72±0.13)、(0.57±0.18)、(0.66±0.14)、(0.59±0.23) μmol·mg-1·h-1],与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01). 结论 ARF致心肌、胰腺损伤的机制与组织细胞膜泵活性降低有关.     

兔心肌挫伤后心功能障碍及心肌细胞内Ca2+和线粒体ATP酶的变化

背景心肌挫伤后心功能障碍除与心脏因受暴力直接损害导致心肌收缩性降低外,是否还与心肌细胞内 Ca2+和线粒体 ATP酶的变化有关目前尚不得而知. 目的探讨心肌细胞内游离钙( [Ca2+ ]i)和心肌 ATP酶变化在心肌挫伤后心功能障碍发生机制中的意义. 设计随机对照的实验研究. 地点、材料和干预实验在解放军第三军医大学野战外科研究所完成.选取四川健康家兔 36只,雌雄不限,分在伤前,伤后 2, 4, 8, 12, 24 h组,每组 6只.经右颈总动脉插管至左心室.采用 BIM Ⅱ型生物撞击机致成心肌挫伤模型. 主要观察指标心肌挫伤前,伤后 2, 4, 8, 12, 24 h测定家兔左室收缩 /舒张功能、心肌细胞内 [Ca2+ ]i含量和心肌匀浆组织及线粒体 ATP酶活力. 结果左心室收缩 /舒张功能受到损害,代表左心室收缩功能的左室收缩末压( left ventricular end-systolic pressure, LVESP)、左室内压最大上升速率( the maximal rate of left intraventricular pressure changes, + dp/dtmax)、等容收缩压( isovolemec ventricular pressure, IP)、实测心肌最大收缩速度( the maximal physiological velocity, Vpm)在伤后 4～ 12 h内恢复至伤前水平( P >0.05);代表左心室舒张功能的舒张期左室内压下降时间常数 T、左室舒张末压( left ventricular end-diastolic pressure, LVEDP)、左室内压最大下降速率( the maximal rate of left intraventricular pressure changes, - dp/dtmax)在伤后 24 h与伤前比较,差异有显著性意义( P< 0.05和 P< 0.01).伤前心肌细胞内 [Ca2+ ]i平均通道荧光为 (2.26± 0.16),伤后 2 h开始升高为 (2.63± 0.47)( P >0.05),伤后 8 h达最高峰为 (3.56± 0.33)( P< 0.01),此后开始下降,但伤后 24 h仍然显著高于伤前( P< 0.05).伤后 2 h心肌匀浆组织 ATPase活性均有不同程度的下降,其中伤后 4 h Ca2+-ATPase活性下降明显( P< 0.05),伤后 8 h Ca2+-ATPase 和 Na+-K+-ATPase活性降至最低(分别 P< 0.05和 P< 0.01),伤后 12 h上升与伤前无差别( P >0.05);伤后 Mg2+-ATPase活性较伤前也有所下降,但与伤前比较无明显差别( P >0.05).伤后 4 h心肌细胞线粒体 ATPase活性均明显下降( P< 0.05),此后上升,至伤后 24 与伤前无明显差别( P >0.05).相关分析表明 LVEDP和- dp/dtmax与心肌细胞内游离钙含量变化呈明显正相关(γ =0.792, 0.753, P< 0.01和 P< 0.05),与心肌组织 Na+-K+-ATPase活力改变呈明显负相关(γ =- 0.674,- 0.691, P< 0.05),与心肌组织 Ca2+-ATPase活力改变呈明显负相关(γ =- 0.613,- 0.642, P< 0.05),与心肌细胞线粒体 Na+-K+-ATPase活力改变呈明显负相关(γ =- 0.622,- 0.616, P< 0.05). 结论心肌挫伤后心脏功能降低,心肌细胞内 [Ca2+ ]i含量升高和 ATP酶活性下降可能是其原因之一.     

碱性成纤维细胞生长因子对大鼠局灶性脑缺血再灌注后脑细胞内游离钙变化的影响

背景:碱性成纤维细胞生长因子可促进体外培养的神经元存活及突起生长,拮抗兴奋性氨基酸毒性,对中枢神经系统功能恢复起重要作用,能否通过影响脑细胞内游离钙离子浓度对缺血脑组织起保护作用.目的:从细胞水平探讨碱性成纤维细胞生长因子对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤时神经细胞内游离Ca2+浓度变化的影响.设计:完全随机对照实验.单位:郑州大学第二附属医院神经内科.材料:实验于2003-08/12在郑州大学第二附属医院神经内科实验室完成.24只SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组和碱性成纤维细胞生长因子治疗组,每组8只.方法:缺血再灌注组及碱性成纤维细胞生长因子治疗组采用线栓法建立大脑中动脉闭塞模型;假手术组除不插线外,余同其他两组.碱性成纤维细胞生长因子治疗组于缺血后即刻腹腔注射10μg/kg碱性成纤维细胞生长因子,其余两组腹腔注射等量生理盐水.各组大鼠于缺血再灌注24 h检测脑细胞游离钙浓度.主要观察指标:各组大鼠缺血再灌注24 h脑细胞游离钙浓度.结果:24只大鼠全部进入结果分析.缺血再灌注组明显高于假手术组[(673.46±18.44),(224.71±10.58)nmol/L,(F=1 329.06,P＜0.01)],碱性成纤维细胞生长因子治疗组明显低于缺血再灌注组[(378.37±21.08),(673.46±18.44)nmol/L(F=1 329.06,P＜0.01)].结论:碱性成纤维细胞生长因子能明显抑制大鼠缺血再灌注后脑组织内游离钙水平,起到稳定细胞膜,防止细胞内钙超载的作用.     

急性有机磷农药中毒大鼠骨骼肌组织ATP酶活性的变化及硫酸镁对其影响

目的探讨急性有机磷农药中毒大鼠骨骼肌组织ATP酶活性变化及硫酸镁对其影响。方法30只健康大鼠随机分成3组,每组10只,分别为正常对照组(A组);氧化乐果染毒组(B组);硫酸镁预处理后再染毒组(C组)。测定3组大鼠骨骼肌组织Na+K+ATP酶和Ca2+ATP酶活性,并进行组间比较。结果与A组相比,B组Na+K+ATP酶,Ca2+ATP酶活性均明显降低(P<0.01)。与B组相比,C组Na+K+ATP酶和Ca2+ATP酶活性均有不同程度地恢复,Ca2+ATP酶活性恢复(P<0.01)较Na+K+ATP酶活性恢复(P<0.05)明显。结论急性有机磷农药中毒后,骨骼肌组织Na+K+ATP酶,Ca2+ATP酶活性均明显受抑制。硫酸镁预处理能减轻ATP酶活性的受抑制程度,尤其是对Ca2+ATP酶。     

磁性三氧化二铁纳米粒子对小鼠腹腔巨噬细胞的氧化损伤作用

背景:已有报道表明纳米级的Fe2O3产生的细胞毒性与细胞的脂质过氧化存在一定的联系。氧化铁纳米粒子是否对巨噬细胞产生毒性,其毒性机制与氧化作用有何关联?目的:观察不同浓度Fe2O3纳米粒子对巨噬细胞的氧化损伤作用。设计:观察对比实验。单位:东南大学公共卫生学院。材料:RAW264.7细胞为小鼠腹腔巨噬细胞,购自中国科学院上海细胞所。Fe2O3纳米粒子(30nm)悬浮液由东南大学生物医学工程系制备提供。实验前先进行预处理:将Fe2O3纳米粒子悬浮液置60℃水浴中10h,然后37℃水浴过夜。如此反复3次,灭菌处理。小瓶分装,4℃保存。DMEM高糖培养液(美国Gibco公司);胰蛋白酶(美国Difco公司,进口分装);新生牛血清(杭州四季青公司);过氧化氢、羟自由基、超氧阴离子自由基、乳酸脱氢酶、超微量ATP酶和考马斯亮蓝蛋白含量测定试剂盒(南京建成生物技术公司)。方法:实验于2006-03/07在东南大学公共卫生学院劳动卫生与环境卫生学系实验室完成。RAW264.7细胞用DMEM培养基于37℃、体积分数为0.05的CO2培养箱中进行培养。每日用倒置显微镜观察细胞生长情况,取生长状态良好的对数生长期细胞进行试验。①细胞中氧自由基的检测:将密度为1.5×105L-1的巨噬细胞接种于24孔培养板,每孔1mL,37℃、体积分数为0.05的CO2培养箱中培养24h后,以质量浓度为1.0700、0.5350和0.2675g/L的Fe2O3纳米粒子(30nm)悬浮液染毒细胞为纳米粒子干预组,并设生理盐水为溶剂对照组,24h后终止培养,染毒结束后,低温条件下用玻璃匀浆器破碎细胞,按试剂盒说明,分别测定细胞中过氧化氢、羟自由基、超氧阴离子自由基。②培养液中乳酸脱氢酶活性及膜ATP酶活性的测定:纳米粒子干预组及对照组干预方法同上,染毒结束后,检测培养液中乳酸脱氢酶活性及膜ATP酶活性,乳酸脱氢酶活性的检测采用南京建成生物工程研究所提供的试剂盒,严格按照说明书进行操作。膜ATP酶活性的检测采用低温条件下用玻璃匀浆器破碎细胞,按试剂盒说明检测膜Na -K -ATP酶和Ca2 -Mg2 -ATP酶活性。主要观察指标:①不同质量浓度Fe2O3纳米粒子对细胞过氧化氢、羟自由基和超氧阴离子的影响。②乳酸脱氢酶活性、膜Na -K -ATP酶和Ca2 -Mg2 -ATP酶活性检测结果。结果:①Fe2O30.2675,0.5350,1.0700g/L纳米粒子干预组羟自由基水平高于溶剂对照组[(0.605±0.066),(0.410±0.080),(0.764±0.051),(0.285±0.057)mkat/g,P<0.05],超氧阴离子自由基高于溶剂对照组[(9.935±1.159),(8.912±0.131),(13.479±0.752),(5.635±0.475)μkat/g,P<0.05],Fe2O31.0700g/L过氧化氢水平高于溶剂对照组[(14.695±2.815),(2.397±0.399)mmol/L,P<0.05]②Fe2O3纳米粒子在实验浓度范围内,能够引起培养液中乳酸脱氢酶活性显著升高(P<0.05)。Fe2O3纳米粒子对细胞膜Na -K -ATP酶和Ca2 -Mg2 -ATP酶活性均产生影响,且随着Fe2O3纳米粒子染毒剂量增加,Na -K -ATP酶和Ca2 -Mg2 -ATP酶活性逐渐降低,与对照组比较,差异均具有显著性(P<0.05)。结论:Fe2O3纳米粒子剂量增加导致细胞内过氧化氢、羟自由基、超氧阴离子自由基增多,从而使细胞膜通透性增加,膜Na -K -ATP酶和Ca2 -Mg2 -ATP酶活性受到抑制。     

药物防护电磁脉冲所致海马神经元损伤的可能性

背景:电磁脉冲照射可引起实验大鼠学习记忆能力下降,并可造成离体海马神经元的胞内钙超载,进而发生坏死和凋亡,物理屏蔽可减轻电磁辐射对实验动物的损伤,但缺乏在细胞模型上进行的药物防护研究。目的:观察药物防护电磁脉冲致离体海马神经元损伤的可能性。设计:随机对照动物实验。单位:承德医学院基础部。材料:实验于2004-01/2005-01分别在军事医学科学院和承德医学院完成。实验动物选用Wistar乳鼠若干只。方法:断头取脑分离海马组织,进行海马神经元原代培养与鉴定,原代培养的海马神经元经MK801(N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂)和尼非地平(L型钙离子通道阻断剂)预处理后进行电磁脉冲照射。电磁脉冲照射条件为6×104V/m,脉冲上升时间20ns,脉宽30μs,频率2.5脉冲/min,作用2min。将培养在特殊培养皿的细胞分为正常对照组、电磁脉冲照射组、MK80120μmol/L组和MK80120μmol/L 尼非地平1μmol/L组。采用MTT法对细胞活力进行测定;FACS法检测细胞凋亡率;Fluo-3-AM荧光探针负载、激光共聚焦显微镜扫描测定神经元胞内游离钙离子浓度[Ca2 ]i。主要观察指标:各组细胞内钙超载、细胞活力、细胞调亡的情况比较。结果:①电磁脉冲组在照射后即刻的[Ca2 ]i荧光强度显著高于正常对照组,差异有显著性意义([107.34±26.14),(54.93±16.08),P<0.05];MK80120μmol/L组比电磁脉冲照射组的[Ca2 ]i荧光强度有所下降(81.29±19.96,P<0.05),而MK80120μmol/L 尼非地平1μmol/L组的[Ca2 ]i荧光强度呈进一步下降趋势(69.82±25.54,P<0.05)。但两个给药组的[Ca2 ]i荧光强度仍高于正常对照(P<0.05)。②MK80120μmol/L组和MK80120μmol/L 尼非地平1μmol/L组反映细胞增殖活力的吸光度值分别为0.25±0.06和0.27±0.07,明显高于电磁脉冲照射组(0.17±0.08,P<0.05),但仍低于正常对照组(0.33±0.08,P<0.05)。③电磁脉冲照射组在照后即刻的细胞凋亡率显著高于正常对照组,差异有显著性意义([68.63±9.04)%,(20.14±4.34)%,P<0.01];MK80120μmol/L组比电磁脉冲照射组的细胞凋亡率有所下降(62.12±11.08)%,MK80120μmol/L 尼非地平1μmol/L组的细胞凋亡率呈进一步下降趋势([53.69±13.60)%,P<0.05)],但两个给药组的细胞凋亡率仍高于正常对照组(P<0.01)。结论:MK801和尼非地平预处理可部分阻断电磁脉冲所致的海马神经元损伤;细胞内钙超载在电磁脉冲损伤机制中发挥重要作用。     

腺苷对海马神经元内钙离子振荡的作用研究

目的 在细胞水平研究腺苷对原代培养的SD大鼠海马神经元内钙离子振荡的具体影响,并探讨其可能的作用机制,从而为腺苷的抗癫痫作用提供实验依据.方法 本实验以SD大鼠新生48 h内的乳鼠作为取材对象,以胰酶消化加巴氏管机械吹打的方法,经条件培养基纯化建立原代培养海马神经元的研究模型.选取7～9 d的细胞,应用激光扫描共聚焦显微镜结合Fluo-3/AM标记技术,利用细胞外灌流方式给予腺苷的方法,检测腺苷干预前后钙离子振荡的相关指标.结果 原代培养的SD大鼠乳鼠的海马神经元在7～9 d发育基本成熟后可以观察到神经元内自发同步的钙离子振荡.给予腺苷后,发现Ade能抑制成熟海马神经元自发同步钙离子振荡的频率和幅度:频率从加药前的(0.020±0.003)Hz减少到(0.005±0.001)Hz,幅度从加药前的1.87±0.17下降到1.10±0.07,且这种抑制作用对于腺苷的浓度水平有一定的要求性.用高钾作为去极化刺激模拟癫痫状电活动时,钙离子震荡的频率加快,幅度增大,而腺苷对高钾诱发钙离子振荡的频率和幅度表现出了显著抑制作用.结论 在体外培养海马神经元的研究中发现,腺苷对海马神经元内钙离子振荡具有显著的抑制作用,这可能是腺苷作为内源性物质发挥抗癫痫作用的机制之一.     

休克肠淋巴液对大鼠红细胞膜泵活性及氧自由基的影响

目的 观察休克肠淋巴液引流对失血性休克大鼠、休克肠淋巴液回输对正常大鼠红细胞膜泵活性及氧自由基的影响.方法 雄性Wistar大鼠24只,按随机数字表法分为假休克组、休克组、休克肠淋巴液引流组、休克肠淋巴液回输组,每组6只.休克组与引流组于麻醉和手术后复制失血性休克模型,引流组于休克1 h引流肠淋巴液;假休克组仅麻醉与手术;回输组于麻醉和手术后将引流的休克肠淋巴液回输.各组于休克3 h或相应时间点取腹主动脉血制备红细胞膜悬液,检测红细胞膜泵活性与自由基指标.结果 与假休克组比较,休克组红细胞膜Na+-K+-ATP酶(μmol·mg-1·h-1)、Ca2+-ATP酶(μmol·mg-1·h-1)、超氧化物歧化酶(SOD)活性(NU/mg)均显著降低(Na+-K+-ATP酶:0.039±0.011比0.068±0.010;Ca2+-ATP酶:0.035±0.016比0.087±0.015; SOD活性:0.785±0.289比1.202±0.328,P＜0.05或P＜0.01),丙二醛(MDA)含量(nmol/mg)显著升高(1.914±0.225比0.913±0.138,P＜0.01);与休克组比较,引流组红细胞膜Na+-K+-ATP酶活性(0.056±0.009)、Ca2+-ATP酶活性(0.079±0.025)、SOD活性(1.220+0.380)均显著升高,MDA含量(1.214±0.127)显著下降(P＜0.05或P＜0.01).与假休克组比较,回输组红细胞膜Na+-K+-ATP酶活性(0.050+0.013)、Ca2+-ATP酶活性(0.056±0.023)显著降低(均P＜0.05),SOD活性(0.862±0.288)有所降低(P＞0.05),MDA含量(1.456±0.270)显著升高(P＜0.01).结论 休克肠淋巴液回流是引起红细胞膜泵活性降低、加重红细胞膜自由基损伤的关键因素.