鼠白细胞介素-12双亚基共表达质粒的构建及在体内外的表达

目的：构建双亚基共表达鼠白细胞介素－12（mIL-12）真核表达质粒，并观察其在体内外的表达。方法：将mIL-12p35和p40全长编码cDNA构建在pcDNA3.1载体上，然后把p35表达单元（CMV－p35－BGHPA）插入pcDNA3.1/p40载体，使两个目的基因均受各自的启动子CMV控制，构建成mIL-12双亚基共表达质粒pCmIL-12，并进行体内外表达。结果：pCmIL-12在体外转染COS－7细胞后，经ELISA证实有mIL-12表达，其表达上清能在体外明显增强小鼠NK细胞活性。小鼠皮内注射pCmIL-12亦能增强小鼠NK细胞活性。结论：所构建的质粒在体内外均能表达有生物学活性的mIL-12。     

微囊化转mIL-12基因CHO细胞皮下移植及联合5-FU对荷瘤小鼠的治疗作用

目的：观察微囊化CHO/pcDNA3.1/mIL-12细胞皮下移植及联合5-FU对荷瘤小鼠的治疗作用。方法：将微囊化的CHO/pcDNA3.1/mIL-12细胞移植到荷瘤小鼠的皮下,观察肿瘤的生长速度、荷瘤小鼠的生存期,20d后,检测小鼠血清Th1和Th2类细胞因子IFN-γ、IL-2、IL-12和IL-4、IL-10的水平及NK细胞和CTL细胞的活性。结果：经微囊化CHO/pcDNA3.1/mIL-12细胞皮下移植干预治疗后,小鼠血清Th1细胞因子水平明显升高,NK细胞和CTL细胞的活性明显增强,而Th2类细胞因子则明显降低;小鼠肿瘤的生长速度明显减慢,生存期明显延长;同时可部分改善化疗引起的免疫抑制作用。结论：微囊化的CHO/pcDNA3.1/mIL-12细胞皮下移植可以明显改善荷瘤小鼠的细胞免疫功能,部分减轻化疗引起的免疫抑制作用 ,对减慢肿瘤的生长速度和延长荷瘤小鼠的生存期均有明显的效果。     

miR⁃16/15a-/-小鼠NK细胞功能及其对结肠癌移植瘤敏感度分析

目的：观察miR?16是否通过调节NKG2D表达而影响自然杀伤（natural killer,NK）细胞的生物学功能及其抗肿瘤活性。方法：miR?16/15a-/-小鼠和对照小鼠经皮下注射MC38细胞制备结肠癌移植瘤模型,观察两组小鼠皮下实体瘤生长情况;比较普通小鼠生理或荷瘤状态下NK1.1+NKG2D+细胞和NK1.1+NKG2D?细胞内miR?16的表达;分析生理及荷瘤状态下miR?16/15a-/-小鼠NK细胞NKG2D表达、γ干扰素（interferon?γ,IFN?γ）分泌及细胞毒性作用。结果：与同品系小鼠比较,miR?16/15a-/-小鼠中MC38结肠癌移植瘤的生长受到显著抑制,生理状态小鼠NK1.1+NKG2D+细胞miR?16的表达明显低于NK1.1+NKG2D?细胞,而在荷瘤小鼠来源的两组细胞中无明显差异;与野生型小鼠相比,生理及荷瘤状态下的miR?16/15a-/-小鼠NK1.1+NKG2D+细胞的比例及NK细胞活性无明显变化。结论：miR?16/15a敲除抑制MC38结肠癌移植瘤生长,而miR?16/15a敲除小鼠体内NK细胞的比例及功能及荷瘤状态下NK细胞活性并无明显变化,提示miR?16/15a缺失并非通过NK细胞抑制MC38结肠癌移植瘤生长。     

树突状细胞联合重组腺病毒Ad-Mig基因治疗小鼠淋巴瘤的实验研究

目的 观察树突状细胞(DC)和腺病毒介导的小鼠Mig基因对小鼠淋巴瘤的抗肿瘤效果.方法 利用EG7细胞皮下注射C57BL/6小鼠建立小鼠淋巴瘤模型,单独或联合应用DC和携带Mig基因的重组腺病毒(Ad-Mig)直接进行瘤内注射治疗,观察小鼠皮下肿瘤生长情况.采用HE染色观察肿瘤组织的变化.用乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测CTL和NK的杀伤活性.结果 DC能显著抑制荷瘤小鼠皮下肿瘤的生长.使肿瘤组织中炎细胞数量增多而肿瘤细胞数量明显减少,能显著增强荷瘤小鼠脾细胞NK和CTL杀伤活性.与单独应用DC相比,DC与Ad-Mig联合应用可明显提高抗肿瘤效果.结论 DC对小鼠淋巴瘤有显著治疗效果.且与Ad-Mig基因联合应用能进一步提高抗肿瘤效果.     

脂质体包裹水泡口炎病毒基质蛋白对小鼠淋巴瘤的治疗作用及机制研究

目的 探讨采用阳离子脂质体包裹水泡口炎病毒(VSV)基质蛋白(M蛋白)基因重组质粒制备的脂质体质粒DNA复合物(Lip-MP)在实验动物体内的抗淋巴瘤效应及其机制.方法 建立C57BL/6小鼠EL4淋巴瘤模型,将60只荷瘤小鼠随机分为5组:脂质体-pcDNA3.1-MP复合物(Lip-MP)组、脂质体-pcDNA3.1...     

阳离子脂质体介导细胞因子基因对小鼠肝癌抑制的作用

目的观察阳离子脂质体介导细胞因子ＴＮＦ－ａ及ＩＬ－２基因对小鼠肝癌的抑制作用。方法构建含细胞因子ＴＮＦ－ａ及ＩＬ－２的质粒载体,用阳离子脂质体ＬｉｐｏｆeｃｔＡＭＩＮＥ或ＤＯＳＰＥＲ介导的含细胞因子ＴＮＦ－ａ及ＩＬ－２的质粒ＤＮＡ分别体外转染小鼠肝癌细胞株ＭＭ４５Ｔ．Ｌｉ,并在荷瘤小鼠体内分别直接注射上述阳离子脂质体－ＤＮＡ复合物,观察瘤体大小及小鼠生存期。结果两种阳离子脂质体介导的细胞因子转染后都具有生物学活性,转染效率为１０％左右,瘤内注射后均能延长荷瘤小鼠的生存期。ＤＯＳＰＥＲ介导细胞因子的治疗效果较佳。结论ＬｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥ或ＤＯＳＰＥＲ介导细胞因子ＴＮＦ－ａ及ＩＬ－２基因均具有抑制小鼠肝癌生长、延长荷瘤小鼠生存期的作用,ＤＯＳＰＥＲ的效果较好。     

高压氧对S-180肉瘤小鼠抗肿瘤免疫功能的影响

实验中检测了各组荷瘤小鼠体内抗肿瘤免疫功能,同时,观察了小鼠荷瘤的体积,溃破率及动物死亡率,结果显示:与对照组相比,高压氧(HBO)组荷瘤小鼠体内 NK、LAK 及巨噬细胞(M_φ)活性显著升高,并可诱导产生较强的 CTL 活性(P<0.01);实验动物肿瘤体积明显缩小,荷瘤组织溃破率明显增高(P<0.01);且实验组小鼠的存活时间显著延长(P<0.05)。提示:高压氧暴露可以提高 S-180肉瘤小鼠体内 NK、LAK、和CTL 细胞的杀伤活性,增强巨噬细胞的杀伤效率,从而抑制荷瘤的生长。     

半枝莲提取物对H22荷瘤小鼠免疫功能的影响及其抑瘤作用

目的 探讨中药半枝莲提取物(ESB)的抗肝癌作用及对荷瘤小鼠免疫功能的影响.方法 将接种H22肝癌细胞的小鼠分为模型组、ESB高、中、低剂量组(12、6、3 g/kg)、5-氟尿嘧啶组(5-Fu组),另设正常对照组,连续给药10d.观察小鼠瘤重、体质量、胸腺指数和脾指数;并检测各组淋巴细胞增殖活性、NK细胞活性及脾细胞IL-2分泌量.结果 ESB中、高剂量可明显抑制荷瘤小鼠移植瘤的生长,抑瘤率分别为28.68%、36.98%.而且能明显增加小鼠胸腺指数和脾指数(P<0.01),而5-Fu组胸腺指数和脾指数明显降低.模型组荷瘤小鼠脾淋巴细胞增殖活性、NK细胞活性及分泌IL-2能力均明显低于正常对照组(P<0.05).与模型组比较,5-Fu组荷瘤小鼠的NK细胞活性和脾细胞IL-2分泌量进一步降低(P<0.05).而ESB高剂量组三者均得到明显改善.ESB中剂量治疗使荷瘤小鼠的NK细胞活性增强,与模型组比较差异显著(P<0.05).结论 ESB可明显抑制H22移植瘤的生长,改善荷瘤小鼠的免疫功能.     

血管抑素基因治疗Lewis肺癌移植瘤小鼠的实验研究

目的:观察血管抑素基因对Lewis肺癌小鼠移植瘤生长、转移的抑制作用。方法:建立C57BL/6j小鼠肺癌模型,30只荷瘤鼠按照随机数字表法分为生理盐水空白对照组、阳离子脂质体对照组、血管抑素基因(PAng)治疗组,每组10只。以阳离子脂质体为介导,将血管抑素基因的重组质粒直接注入移植瘤内,每周3次,共5周,每周测瘤体大小1次,第7周末处死所有小鼠,观察瘤体大小变化、肺表面转移灶数、小鼠生存期等。结果:治疗组小鼠移植瘤生长速度减慢,瘤体缩小,肺内转移少,与对照组比较差异有统计学意义(P0.05),小鼠活动能力、饮食、对外界刺激的反应能力均无明显改变,生存期明显长于对照组(P0.05)。结论:阳离子脂质体介导血管抑素基因可有效地抑制Lewis肺癌移植瘤的生长、转移。     

抗癌方有效部位群对荷瘤小鼠免疫功能的影响

目的 观察抗癌方有效部位群对荷瘤小鼠免疫功能的影响.方法 通过S180荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能试验、S180荷瘤小鼠溶血素试验、小鼠肝癌瘤株NK细胞活性试验,观察抗癌方对S180荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能、S180荷瘤小鼠溶血素、C57小鼠肝癌瘤株NK细胞活性的影响.结果 抗癌方能够增强荷瘤小鼠网状内皮系统的吞噬功能,促进荷瘤小鼠溶血素抗体生成,增强小鼠脾脏NK细胞活性.结论 抗癌方可显著提高荷瘤小鼠免疫功能,增强NK细胞活性是其可能机制之一.     

Activation of systemic immune effectors and induction of cytokine production by direct intratumoral injection of IL-2 DNA liposome

ourpreviousstudiesreportedaprotocolwhichreliedonthedirecttransmissionoflL-2geneintoB16F1Otumorsinvivotogeneticallymodifythetumorsastheygrewinsitu.WhenIL-2DNAliposomewasdirectlyinjectedintothetumormassintratumorallyinthemurinemodels,adra-maticinhibitionoftumorgrowthwasobserved-Thesurvivaltimeofthetumor-bearingmicewereprolongedsignificantly.Byanalyzingthefunctionofthetumorcellsand'tumorinfiltratinglympho-cytes(TIL),G418-resistanttumorcellscouldbeseparatedfromthetumormassandhighlevelofIL-2c…     

用脂质体包裹重组survivin腺病毒治疗肿瘤的实验研究

目的 本实验拟用脂质体包裹重组survivin腺病毒治疗肿瘤,观察其抗肿瘤效应。方法 在BALB／c小鼠建立CT26结肠癌模型,将小鼠随机分成用脂质体包裹重组survivin腺病毒组、重组survivin腺病毒组、用脂质体包裹空病毒组、脂质体组、PBS对照组5组,观察肿瘤的生长以及小鼠的存活情况和不良反应,并做细胞毒T淋巴细胞（CTL）分析。HE染色观察肿瘤组织及肿大淋巴结的病理改变。结果 ①用脂质体包裹重组survivin腺病毒对小鼠有免疫保护和治疗作用,小鼠肿瘤生长受到明显抑制,肿瘤大小和存活率与其它组比较,差异均有统计学意义（P〈0．05）。②肿瘤病理切片显示用脂质体包裹重组survivin腺病毒组肿瘤组织内有较多的淋巴细胞浸润,有大量的坏死灶。③CTL分析显示用脂质体包裹重组survivin腺病毒组免疫小鼠的T细胞具有较高的CT26细胞杀伤活性,并具有特异性及不依赖NK细胞活性。结论 用脂质体包裹重组survivin腺病毒对CT26移植瘤有治疗作用。     

肌肉介导心钠素基因转移对肾性高血压大鼠的作用

目的：观察肌肉介导心钠素（ａｔｒｉａｌｎａｔｒｉｕｒｅｔｉｃｆａｃｔｏｒ,ＡＮＦ）基因转移对肾性高血压大鼠的治疗作用。方法：利用基因克隆技术克隆和构建了高表达效率的人ＡＮＦｃＤＮＡ基因真核表达质粒,应用肌肉缝线法将质粒转移到大鼠骨骼肌中。结果：ＡＮＦ基因可以在骨骼肌中表达,并可释放入血,明显降低肾性高血压大鼠的血压,并产生利钠利尿效应,其作用可维持４～６周。结论：应用基因缝线进行肌肉介导的基因转移,可在肌肉内有效表达效应蛋白质,且可释放入血,产生药物治疗效果。     

免疫载药脂质体治疗小鼠泡球蚴

目的：观察载阿苯达唑（ABZ）的抗泡球蚴抗体的免疫脂质体对小鼠继发性泡球蚴病的疗效。方法：观察游离的、脂质体运载与免疫脂质体运载的ABZ（12．5、25和50mg／kg）对小鼠腹腔泡球蚴增殖的抑制。结果：免疫脂质体治疗抑制率高于脂质体，后者又高于游离ABZ，高剂量时3组抑制率分别为87．8％、65．2％和17.7％，组间比较差异显著（P＜0.01）；肝和腹腔泡球蚴摄取免疫脂质体的量比单纯脂质体高2．4倍（P＜0．01）。结论：免疫脂质体作载体可明显提高ABZ对泡球蚴病的疗效。     

新城疫病毒HN基因真核表达质粒的构建及其抗肿瘤作用的初步研究

构建新城疫病毒血凝素神经氨酸酶基因真核表达质粒,并初步探索其在抗肿瘤治疗中的机制及应用价值。方法：用ＲＴ－ＰＣＲ从ＮＤＶ中克隆ＨＮ ｃＤＮＡ,并构建ＨＮ的真核表达载体,转染ＣＯＳ－７细胞表达,注射至小鼠Ｂ１６黑素瘤模型,检测其抗肿瘤作用。结果成功地克隆了ＮＤＶ ＨＮ ｃＤＮＡ,所构建的ｐｃＤＮＡ３－ＨＮ有良好的表达,动物实验显示,ｐｃＤＮＡ３－ＨＮ有增强荷瘤小鼠ＣＴＬ,ＮＫ杀伤活性的作用。结论ＮＤ     

Anti-tumor effects of pNEgr-mIL-12 recombinant plasmid induced by X-irradiation and its mechanisms

Objective To study the effect of gene radiotherapy combining injection of recombinant plasmid pNEgr-mIL-12 with local X-irradiation on cancer growth and to elucidate the mechanisms of tumor inhibition. Methods Alkaline lysis was used to extract the plasmid and polyethylene glycol 8000 (PEG 8000) was applied for further purification of plasmids. Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was used to detect the expression of IL-12 protein. C57BL/6J mice were subcutaneously inoculated with B16 melanoma cells and the plasmid was injected directly into the tumor. Gene-radiotherapy combining pNEgr-mIL-12 recombinant plasmid with X-irradiation was given three times to C57BL/6J mice bearing B16 melanoma. Changes in immunologic parameters of tumor-bearing mice were detected with relevant immunologic assays. Results Results showed a significant decrease in tumor growth rate (P<0.05-0.001) after 3 times of gene-radiotherapy with IL-12 and X-irradiation. Immunologic studies showed a significant increase in CTL and NK cytolytic activity (P<0.05-0.001) and an up-regulated secretion of IFN-γ and TNF-α (P<0.01-0.001). Moreover, the expression of mIL-12 in B16 melanoma cells of the treated tumor-bearing mice was found to be higher than that of control. Conclusion pNEgr-mIL-12 plasmid combined with X-irradiation can increase tumor control and the mechanism of increased tumor inhibition is related to the enhancement of anticancer immunity in tumor-bearing mice.     

白细胞介素12基因修饰的Lewis肺癌瘤苗的抗肿瘤免疫作用

目的：研究白细胞介素12（IL-12）基因修饰的Lewis肺癌瘤苗的抗肿瘤免疫作用。方法：用含IL-12基因的腺病毒载体,在体外以不同感染系数感染Lewis肺癌细胞,并分别接种于C57BL/6小鼠皮下,观察其致瘤性的变化;并用Lewis肺癌细胞及B16黑色素瘤细胞再 次攻击免疫后的C57BL/6小鼠,观察肿瘤发生情况。 结果：以各种感染系数AdCMVIL-12制备的瘤苗,接种于小鼠皮下后,无肿瘤生长,完全消除了Lewis肺癌细胞的致瘤性;瘤苗注射6 d后,用Lewis肺癌细胞再次攻击,仍无肿瘤生长,抑瘤率达100%;用B16黑色素瘤细胞攻击,10~12 d均有肿瘤生长,说明此瘤苗具有肿瘤特异性。结论：AdCMVIL-12能消除Lewis肺癌细胞的致瘤性,并能诱导显著的抗肿瘤免疫反应,对肿 瘤的复发及转移有较好疗效。     

IL—12提高DNA疫苗诱导小鼠抗HBV皮下移植瘤的免疫研究

目的 观察ＩＬ－２真核表达载体（ｐＷＲＧ３１６９）对ＨＢＶ－ＳＤＮＡ疫苗（ｐＣＲ３．１－Ｓ）诱导Ｂａｌｂ／ｃ小鼠（Ｈ－２＾ｄ）的特异性细胞免疫应答及其对稳定表达ＨＢｓＡｇ的小鼠肥大细胞瘤Ｐ８１５细胞（Ｐ８１５－ＨＢＶ－Ｓ）成瘤性的影响。方法肌肉注射ＤＮＡ疫苗,背部皮下接种Ｐ８１５－ＨＢＶ－Ｓ细胞,观察成瘤情况,４ｈ＾５１Ｃｒ释放法检测小鼠脾细胞ＣＴＬ活性。结果 对照组、ｐＣＲ３．１－Ｓ及共同免疫