基底前脑神经元移植后NOS神经元膨化的变化

目的 研究基底前脑神经元移植到海马后ＮＯＳ阳怀神经元膨体的变化，阐明脑组织移植后部分可塑性变化的规律。方法 雄性ＳＤ大鼠３０只，每组６只动物在移植前一周行左侧穹窿－海马伞切断术。将胚胎１４－１６天基底前脑隔及斜角带区的细胞悬液移植人损伤侧海马，分别在移植后第７天、第１４天、第３０天和第６０天取脑行ＮＡＤＰＨ－黄递酶组织化学染色。结果 移植后第７天ＮＯＳ阳性神经元突起上有较多的神经膨体，其大小不等，     

脑创伤与缺血后大鼠脑内NOS阳性细胞变化和神经元损害的形态学观察

脑创伤与缺血后大鼠脑内ＮＯＳ阳性细胞变化和神经元损害的形态学观察李红丽蔡文琴（第三军医大学组胚教研室）本实验应用ＮＡＤＰＨ－ｄ组织化学技术结合尼氏染色观察了大鼠皮层针刺损伤及全脑缺血／再灌注术后皮层、海马及下丘脑室旁核等敏感区域神经元受损与ＮＯＳ阳性...     

BDNF、NGF对AD模型鼠脑移植区一氧化氮合酶阳性神经元发育生长的影响

用使君子酸（ＱＡ）损毁ＳＤ 大鼠左侧Ｍ ｅｙｎｅｒｔ基底大细胞核,制成老年性痴呆症（ＡＤ）模型。将同种鼠胚基底前脑制成的细胞悬液不加神经营养因子和分别加入脑源性神经营养因子（ＢＤＮＦ）、神经生长因子（ＮＧＦ）及ＢＤＮＦ＋ ＮＧＦ者植入ＡＤ 模型鼠额、顶叶皮质,隔日通过脑室灌注人工脑脊液和相应神经营养因子共７ 次。移植后４ 个月,取脑切片作Ｎｉｓｓｌ染色、ＮＡＤＰＨ ｄ和ＮＡＤＰＨ ｄ＋ ＡＣｈＥ 组化染色,计数移植区中ＮＯＳ阳性神经元数及其纤维在１６９００ μｍ ２ 网格中的交点数,并用ＭＩＡＳ ３００ 计算机图像分析系统对移植区中ＮＯＳ阳性神经元的细胞面积进行处理。结果显示：给予神经营养因子的动物,移植区中的ＮＯＳ阳性神经元数、ＮＯＳ阳性纤维交点数和ＮＯＳ阳性神经元的细胞面积等形态学指标均较不给予神经营养因子的对照组为佳,而在应用神经营养因子的各组中又以ＢＤＮＦ＋ ＮＧＦ组为优,提示ＢＤＮＦ、ＮＧＦ能促进移植区中ＮＯＳ阳性神经元的发育生长,ＢＤＮＦ与ＮＧＦ联合使用可发挥协同作用。本文对ＢＤＮＦ和ＮＧＦ促进移植区中ＮＯＳ阳性神经元发育生长的机制进行了探讨。     

BDNF,NGF对AD模型鼠脑移植区一氧化氮合酶阳性神经元发育生 …

用使君子酸（ＱＡ）损毁ＳＤ大鼠左侧Ｍｅｙｎｅｒｔ基底大细胞核,制成老年性痴呆症（ＡＤ）模型,将同种鼠胚基底前脑制成的细胞悬液不加神经营养因子和分别加入脑源性神经营养因子（ＢＤＮＦ）神经生长因子（ＮＧＦ）及ＢＤＮＦ＋ＮＧＦ者植入ＡＤ模型鼠额,顶叶皮质,隔日通过脑室灌注入工脑脊液和相应神经营养因子共７次,移植后４个月,取脑切片作Ｎｉｓｓｌ染色,ＮＡＤＰＨ－ｄ和ＮＡＤＰＨ－ｄ＋ＡＣｈＥ组化染色,计数移植     

睫状神经营养因子对严重烫伤大鼠纹状体及海马 NOS 阳性神经元的影响

目的：观察大鼠严重烫伤后纹状体和海马ＮＯＳ阳性神经元数目和阳性反应面积的变化及睫状神经营养因子（ＣＮＴＦ）对其的影响。方法：应用ＮＡＤＰＨ－ｄ酶组织化学的方法。结果：大鼠体表烫伤后３天,纹状体ＮＯＳ阳性神经元数目明显增加,梁色呈强阳性,阳性反应面积增加。海马ＮＯＳ阳性神经元数变化不明显,仅见阳性反应面积增加,睫状神经营养因子可降低纹状体的ＮＯＳ阳性神经元数目、阳性反应面积,ＮＯＳ阳性神经元着色较淡     

听源性惊厥易感性大鼠上丘一氧化氮合酶阳性神经成分的分布

用还原性烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸黄递酶，简称黄递酶（ＮＡＤＰＨ－ｄ）组织化学的方法，在光镜下对ＮＡＤＰＨ－ｄ反应阳性细胞进行计数和计算机图像分析测定反应产物的光密度（ＯＤ）值，观察一氧化氮合酶（ＮＯＳ）阳性神经元及纤维在惊厥鼠上丘分布的情况。实验动物为听源性惊厥易感性大鼠，简称惊厥鼠（Ｐ７７ＰＭＣ）和正常Ｗｉｓｔａｒ大鼠，简称正常鼠。实验结果如下：（１）在大鼠上丘第Ⅱ层ＮＯＳ阳性神经元呈密集均匀分     

SOMAN诱发惊厥后c—fos在大鼠杏仁核簇一氧化氮神经元中的表达

运用ＦＯＳ免疫组化结合ＮＡＤＰＨ－ｄ组化双重标记技术，研究了ｓｏｍａｎ诱发惊厥大鼠杏仁核内ｃ－ｆｏｓ高表达神经地与ＮＡＤＰＨ－ｄ阳性神经元之间的关系。结果显示；在ｓｏｍａｎ诱发惊后的１．５和４８ｈ，杏仁核族凤ｃ－ｆｏｓ呈现持纽过度表达。ＦＯＳ免疫阳性神经元的分布具有显著的亚核定位特征。     

一氧化氮合酶（NOS）在成年猫脊髓的分布

采用ＮＡＤＰＨｄ 酶组化方法,观察一氧化氮合酶（ＮＯＳ）阳性产物在猫脊髓的分布。结果显示：ＮＯＳ的阳性反应物主要分布于脊髓Ⅱ板层的神经膨体及少数神经元内。其它部位除中央管附近及腹角见个别ＮＯＳ阳性神经元及纤维外,几乎未见ＮＯＳ阳性染色。表明在本实验条件下所显示的脊髓Ⅱ板层的神经膨体及少数神经元内的ＮＯＳ阳性产物可能主要与三种类型ＮＯＳ（神经活性ＮＯＳ,诱导性ＮＯＳ,内皮源性ＮＯＳ）中的神经活性ＮＯＳ关系密切。本文结果还提示Ⅱ板层神经膨体和神经元内的ＮＯＳ可能与Ⅱ板层的某些生理功能有关。     

大鼠大脑内血管的氮能神经支配

目的：观察大鼠大脑内氮能神经元及血管的氮能神经支配。阐述一氧化氮在脑内血管中的作用。方法：大鼠经灌流固定后用恒冷切片机漂浮切片。还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶（ＮＡＤＰＨ－ｄ）染色。结果：氮能神经元依形态分为双极和多极。见纤细的树突与血管紧密相连及串珠样血管周围神经丛。结论：大脑ＮＡＤＰＨ－ｄ阳性神经元纤细的树突与脑内血管密切相关。提示一氧化氮 控脑血管张力和血液循环方面有重要作用。     

BDNF、NGF对AD模型鼠脑移植区胚胆碱能神经元发育生长的调控

目的探讨脑源性神经营养因子（ＢＤＮＦ）、神经生长因子（ＮＧＦ）对ＡＤ模型鼠脑植入胚基底前脑后行为改善和移植区胚胆碱能神经元发育生长的影响。方法用使君子酸损毁ＳＤ大鼠基底大细胞核制成ＡＤ模型,分成ＢＤＮＦ、ＮＧＦ、ＢＤＮＦ＋ＮＧＦ及单纯移植对照４组。在额、顶叶皮质植入同种胚基底前脑细胞悬液,前３组含相应神经营养因子,移植后每２ｄ向侧脑室灌注相应神经营养因子共７次。移植后１、２．５和４个月时行避暗回避试验和跳台试验,最后脑切片经ＡＣｈＥ组织化学、ＣｈＡＴ和ＬＮＧＦＲ免疫组织化学等染色,对移植区中的神经元及纤维作定量分析和图像处理。结果移植后应用神经营养因子的动物较对照组行为改善明显迅速,ＢＤＮＦ＋ＮＧＦ组行为改善又较ＢＤＮＦ组或ＮＧＦ组明显。形态学证实,应用神经营养因子动物移植区中ＡＣｈＥ阳性神经元数、１６９００μｍ２网格中ＡＣｈＥ阳性纤维交点数及ＡＣｈＥ阳性神经元面积均优于对照组,ＢＤＮＦ＋ＮＧＦ组的结果又好于ＢＤＮＦ组或ＮＧＦ组。结论ＢＤＮＦ与ＮＧＦ一样能促进植入胚基底前脑的ＡＤ模型鼠行为改善和移植区胚胆碱能神经元的发育生长,ＢＤＮＦ和ＮＧＦ联合使用比单独使用一种因子更为有效。     

基底前脑神经元移植到海马后ChAT、NGFR和NOS的表达变化

为了比较基底前脑神经元移植至海马后胆碱乙酰转移酶、神经生长因子受体和一氧化氮合酶神经元的变化规律。选用雄性 SD大鼠 35只 ,在单侧穹隆海马伞损伤后一周 ,将胚胎基底前脑神经元植入损伤侧海马。在移植术后存活 5 d,7d,14 d,30d,6 0 d,90 d,和 180 d共分为 7个时间组灌注取材 ,进行 Ch AT和 NGFR的免疫组织化学反应及 NOS反应 ,观察其神经元的变化。结果证明 ,Ch AT神经元在移植后 30 d方出现阳性反应 ;NGFR神经元在移植后 7d可见淡染的胞体 ,随后逐渐增强 ;NOS神经元在移植后 7d时呈明显的阳性反应 ,而且数量多。三种神经元直到 180 d时均尚呈阳性反应。提示移植物内 NOS神经元出现早且数量多 ,NGFR神经元出现的也较早 ,Ch AT神经元出现最晚。这三种物质在细胞内出现的时间和数量差异与它们在细胞内发挥的功能有关     

基底前脑神经元移植后NOS神经元膨体的变化

目的 研究基底前脑神经元移植到海马后NOS阳性神经元膨体的变化,阐明脑组织移植后部分可塑性变化的规律.方法 雄性SD大鼠30只,每组6只动物在移植前一周行左侧穹窿-海马伞切断术.将胚胎14-16天基底前脑隔及斜角带区的细胞悬液移植入损伤倒海马,分别在移植后第7天、第14天、第30天和第60天取脑行NADPH-黄递酶组织化学染色.结果 移植后第7天NOS阳性神经元突起上有较多的神经膨体,其大小不等,间距不等.第14天和第30天这些膨体逐渐变得有大小和间距的规律性,60天时已无膨体.结论 一氧化氮合成酸在神经元移植后的纤维结构重塑方面发挥了一定的作用.     

去卵巢后大鼠基底前脑NOS阳性神经元的变化及雌激素的作用

目的　研究基底前脑NOS阳性神经元在大鼠去卵巢之后的时程变化 ,为雌激素类药物替代防治绝经后老年性痴呆提供理论依据。方法　将 6 9只 3月龄雌性大鼠随机分为假手术组、去卵巢对照组及雌激素替代治疗组 ,各 2 3只 ,分别在术后 3d、1周、2周、4周、8周处死 ,脑切片用NADPH d组化方法染色 ,观察并和计数基底前脑各区NOS阳性神经元 ,并进行统计分析。结果　各组大鼠基底前脑各区NOS阳性神经元数目在去卵巢后先上升 ,2周时达到高峰 ,以后假手术组及雌激素替代组NOS阳性神经元数目逐渐下降 ,8周时达正常水平。去卵巢对照组斜角带核水平支及垂直支NOS阳性神经元数目却保持较高水平 ,在 8周时与假手术组及雌激素替代治疗组之间差异有显著性 (P <0 0 1)。结论　去卵巢后基底前脑NOS阳性神经元表达增加 ,而雌激素替代治疗对其有保护作用。     

Behaviour-dependent changes in acetylcholine release in normal and graft-reinnervated hippocampus: evidence for host regulation of grafted cholinergic neurons.

Grafted neurons obtained from the fetal basal forebrain can provide a functional cholinergic reinnervation of the hippocampal formation in rats with a lesion of the intrinsic septal cholinergic afferents. In the present experiments graft-derived acetylcholine release in the hippocampus was studied by microdialysis in awake rats during different types of behaviours which are known to activate the innate septohippocampal cholinergic system and during different activity periods of the day-night cycle. Two types of basal forebrain grafts were studied: cell suspensions implanted into the hippocampus in rats with an aspirative lesion of the fimbria-fornix, and grafts of solid tissue implanted as a tissue bridge into the fimbria-fornix lesion cavity. Increased acetylcholine overflow was seen in both groups with grafts during sensory stimulation (by handling). The strongest response (50% increase in acetylcholine release) was seen in rats with solid basal forebrain grafts (equivalent to two-thirds of that seen in intact rats). Immobilization stress and motor activity (swimming) also resulted in increased, but more variable, acetylcholine release (+ 30%; about one-third of the normal response). None of these effects was seen in the control rats with fimbria-fornix lesion only. The two-fold difference in hippocampal acetylcholine release in normal animals between day and night was absent in both types of grafted rats. An acute knife-cut, transecting the connections between the solid basal forebrain graft and the host hippocampus, caused an immediate 75% reduction in acetylcholine release (similar to the effect of an acute fimbria-fornix transection in the normal rats) and the response to swimming was no longer evident. The results show that grafted cholinergic neurons can be functionally integrated into the host brain, allowing the grafted neurons to be activated in the correct behavioural contexts, although the changes in acetylcholine overflow were overall smaller and more variable than normal. The ability of the host to influence cholinergic graft activity, most probably mediated via activation of afferent host-graft connections, may contribute to the efficacy of basal forebrain grafts in the amelioration of behavioural impairments in animals with lesions of the forebrain cholinergic system.     

新生ROSA β geo26小鼠海马神经干细胞移植入成年大鼠脑内的存活与分化

目的评价转染报告基因LacZ的ROSA β geo26小鼠能否作为神经干细胞(NSCs)移植的细胞来源。方法应用X-Gal结合免疫组化双标染色研究该品系小鼠NSCs植入成年大鼠纹状体内β-gal的表达。结果移植2周后在大鼠纹状体内可见表达β-gal阳性细胞,部分移植细胞向嘴侧迁移至宿主基底前脑,并分化为成熟神经元,但未观察到表达β-gal的星形胶质细胞。结论LacZ的ROSA β geo26小鼠海马的NSCs移植后能稳定表达β-gal,可作为神经干细胞移植的细胞来源。     

Rat fetal brain tissue grafts survive and innervate host brain following five day pregraft tissue storage

Freshly dissected fetal basal forebrain tissue rich in cholinergic neurons was either dissociated into a cell suspension and injected into the cholinergically denervated hippocampus of adult rats, or stored in a preservative medium at 4 degrees C. Five days later the stored tissue was dissociated into a cell suspension and injected in the denervated hippocampus in another group of animals. Six weeks later the grafts were evaluated with acetylcholinesterase histochemistry for the assessment of graft survival, graft tissue volume and extent of reinnervation of the denervated hippocampus. All grafts in both the freshly dissociated and the 'stored' group survived. The stored grafts were on the average 1/5 in volume but had an appropriate and extensive laminated reinnervation pattern within the denervated hippocampus. This method of storing cells for extended periods prior to grafting allows for experimental manipulation of fetal tissue as well as long distance transportation prior to intracerebral grafting.     

缺损运动神经元的大鼠脊髓内胚胎脊髓移植物的存活与生长

ＳＤ大鼠于出生２４ｈ内行左侧坐骨神经钳压术，造成左侧腰段脊髓前角运动神经元缺损。５￣１２周后，作为脊髓移植的受体鼠。供体为胚龄１３￣１４ｄ的ＳＤ大鼠胚胎，取其脊髓腹侧组织块作为移植物，植入受体鼠左侧腰段脊髓的背外侧部。将受体鼠右侧带神经的Ｍｕ长伸肌移放到脊椎旁，神经的断端插入胚胎移植物处。术后动物存活６￣８周，行组织学（包括电镜）、ＡＣｈＥ组织化学、ＣｈＡＴ免疫组织化学和ＨＲＰ逆行追踪等观察。结果     

成人基底前脑巢蛋白免疫阳性神经细胞的细胞化学观察

目的 探讨巢蛋白(nestin)免疫阳性细胞在人基底前脑内的分布规律及化学特性。方法 采用nestin331B、10C2、Rat 401抗体显示人基底前脑的nestin免疫阳性细胞，并应用NSE、p75NGFR、ChAT、GFAP抗体分别对nestin免疫阳性细胞进行了双标免疫细胞化学研究，同时还应用NADPH-d进行组织化学染色。结果 在成人基底前脑有一个连续的nestin免疫阳性细胞带，胞体较大，呈卵圆形或梭形，有1～3个突起，分布于隔核、斜角带核、Meynert核、无名质及杏仁核群。双标染色显示，nestin阳性细胞被NSE抗体标记，并与ChAT、NGFR、NOS阳性神经元间杂分布，多数不呈交叉反应。约28％nestin免疫阳性细胞为ChAT阳性神经元，15％为NGFR阳性神经元，6％为NOS阳性神经元。此外，透明隔及隔区靠近软膜处有少量nestin免疫阳性细胞，其形态与星形胶质细胞相似，不与GFAP有交叉免疫阳性反应。结论 成人基底前脑存在一个有别于ChAT、NGFR、NOS神经元的nestin免疫阳性神经元簇，其生物学意义值得进一步研究。