汉滩病毒结构蛋白与该病毒感染诱导表达的多种热休克蛋白的研究

目的研究汉滩病毒(HTNV)感染乳鼠诱导其脑组织表达热休克蛋白(HSPs)及其与病毒结构蛋白的相互关系。方法选出生2～3d的昆明乳鼠实验性感染HTNV,取感染后8d的乳鼠脑组织制成组织匀浆液,用双特异性抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)及免疫共沉淀方法分析病毒核衣壳蛋白(HTNVNP)和囊膜糖蛋白G2(HTNVG2)与94000葡萄糖调节蛋白(GRP94)、HSP70、HSP27三种HSPs的关系。结果HTNV感染乳鼠诱导其脑组织表达GRP94、HSP70;HTNVNP同时与GRP94、HSP70、HSP27相互作用,呈复合物形式存在;HTNVG2也与HTNVNP和HSP27存在相互作用,形成HTNVG2NPHSP27非共价复合物。结论HTNV感染可诱导表达多种HSPs,这些HSPs同时与病毒结构蛋白发生相互作用形成非共价复合物,表明在病毒感染和病毒结构蛋白的合成、转运等过程中有多种HSPs伴侣分子的参与,其相互作用机制有待进一步研究。     

小鼠巨细胞病毒感染诱导热休克蛋白70表达的体外实验研究

目的 研究小鼠胚肺组织感染小鼠巨细胞病毒(murine cylomegalovirus,MCMV)后其细胞热休克蛋白70(HSP70)的表达情况,为临床病毒感染性疾病的诊断开辟新途径。方法 体外培养小鼠胚肺细胞,加入MCMV(感染组)后4、8、12、16、24、48、72、96小时分别收获细胞;用免疫组织化学方法检测HSP70表达情况并与对照组(不感染病毒)比较。结果 感染组各时相HSP70表达明显增强,其中96小时表达最强,8小时次之,24小时最弱;随HSP70表达增强细胞变性程度加重。结论 MCMV可诱导小鼠胚肺细胞HSP70的高表达;HSP70表达强度与细胞病变程度呈正相关。     

大鼠肝脏增龄性变化和热休克蛋白70表达差异

目的 观察不同年龄大鼠肝脏的增龄性变化以及热休克蛋白70(HSP70)在肝组织中的表达,探讨HSP70在肝脏老化中的作用. 方法 雄性SD大鼠按月龄分为21 d组、3月龄组、12月龄组和18月龄组,每组各6只.进行常规血清学测试,光镜下观察肝组织结构,Real-time PCR法检测HSP70在各组大鼠肝组织中的表达. 结果 随着鼠龄增长,4组大鼠肝质量/体质量比值明显降低,分别为0.073、0.050、0.025和0.019(P=0.000);21 d组和3月龄组与12月龄组和18月龄组比较,血清白蛋白水平减低[分别为(35.0±2.7)g/L和(39.8±3.5)g/L比(27.3±9.3)g/L和(20.6±1.7)g/L,t=12.233,P=0.000];碱性磷酸酶(ALP)水平升高[分别为(68.8±23.3)U/L和(71.6±19.2)U/L比(185.9±41.5)U/L和(418.6±140.6)U/L,t=35.354,P=0.000].光镜下可见12月龄和18月龄大鼠的肝细胞排列紊乱,细胞内脂肪空泡明显增多.18月龄组大鼠肝细胞HSP70mRNA表达相对量(0.218),低于12月龄组(0.220)和3月龄组(0.230) (P=0.000). 结论 HSP70可能参与了肝细胞老化的进程,可以作为预测肝脏老化的检测指标之一.     

脑缺血大鼠脑组织热休克蛋白70的表达

目的　研究脑缺血时大鼠脑组织热休克蛋白 70 (HSP70 )的表达及不同脑缺血时间对HSP70表达的影响。方法　选取雄性SD大鼠 4 0只 (体重约 2 0 0g)随机分为 4组 ,每组 10只。其中一组为正常对照组 ,一组为脑缺血 2min组 ,一组为脑缺血 6min组和脑缺血 12min。实验后取大鼠脑组织匀浆并用WesternBlot法测HSP70的表达。结果　脑缺血组脑组织HSP70的表达明显增高 ,其中脑缺血 6min和 12min组与对照组相比有显著性差异 (P <0 0 5) ;脑缺血 12min与6min相比亦有显著性差异 (P <0 0 5)。结论　HSP70在脑缺血时的脑组织存在高表达 ,脑缺血时间越长 ,HSP70的表达越高。     

热休克蛋白70在肝细胞癌中的表达及作用

热休克蛋白(HSP)70在肝细胞癌(HCC)组织中呈不同程度的表达,其表达及调节机制尚不清楚,能否为HCC的早期诊断、治疗及预后提供帮助成为学者们研究的热点。从HSP70来源及家族、在HCC中的异常表达、与HCC各种治疗方法及其预后相关性等方面进行了综述,旨在为HCC的临床诊断及治疗提供帮助。     

汉滩病毒诱导乳鼠组织热休克蛋白表达及其与病毒抗原蛋白的相关性

目的 探讨汉滩病毒（HV）感染诱导乳鼠组织热休克蛋白（HSPs)表达及热休克蛋白与病毒蛋白的相互关系。方法 出生后2-3d的昆明乳鼠，每只脑内接种100个半数致死量的HV0.03ml,8d后乳鼠发病死亡，取其脑组织一部分固定，石蜡包埋切片，用免疫组织化学法结合共聚焦显微镜检测组织中病毒抗原及HSP70的表达，一部分组织缺匀浆液，用ELISA，免疫共沉淀方法分析病毒抗原和HSP70的表达及关系。结果 HV感染诱导了乳鼠脑组织神经细胞高表达热休克蛋白（HSP）70。细胞内病毒抗原与HSP70有共定位关系；免疫共沉淀结果显示用HSP70mAb可以共沉淀感染乳鼠脑组织匀浆中的汉滩病毒核心抗原（HV-NP），用HV-NPmAb1A8可沉淀感染乳鼠脑组织匀浆中的HSP70，对照实验阴性，所用两种蛋白抗体间无交叉反应，因而HSP70与HV-NP结合形成复合物。结果是特异的，结论 HV感染诱导HSP70的表达，后者与HV-NP结合形成HSP70-病毒抗原肽复合物。该复合物可能在病毒感染和复制过程中发挥作用。     

缺氧诱导热休克蛋白70-2表达的分子机制

目的 观察缺氧对HepG32细胞中热休克蛋白(HSP)70-2(基因名为HSPA2)表达的影响,探讨缺氧条件下缺氧诱导因子(HIF)-1在转录水平调控HSP70-2表达的具体机制. 方法 以物理缺氧法和化学缺氧诱导剂(DFO或CoC12)诱导法分别模拟肿瘤缺氧环境,Western blot检测HIF-1α和HSP70-2蛋白表达的变化,荧光素酶报告基因分析技术检测缺氧对HSPA2基因的激活作用.HIF-1α抑制剂(YC-1)或HIF-1α小干扰RNA(siRNA)处理后检测缺氧HepG2细胞中HSP70-2的表达变化.构建一系列截短和突变的HSPA2基因启动子荧光素酶报告基因质粒,将其与HIF-1α siRNA共转染HepG2细胞,荧光素酶分析技术检测HSPA2启动子活性的变化,寻找HIF-1在HSPA2启动子上的结合位点.各组间比较用方差分析,两组间比较用t检验. 结果 缺氧培养6 h后,HepG2细胞中HIF-1α和HSP70-2表达增加,其表达量随着缺氧培养时间的延长而逐渐增加(F=77.369,P<0.01;F=108.854,P<0.01).各组分别加终浓度为0、50、100 μmol/L的化学缺氧诱导剂DFO或终浓度为0、100、200 μmol/L的CoCl2,培养24 h后检测,随着DFO浓度增加,HIF-1α和HSP70-2蛋白表达逐渐增加(F=443.174,P<0.01;F=589.238,P<0.01);随着COCl2浓度增加,HIF-1 α和HSP70-2蛋白表达也逐渐增加(F=637.724,P<0.01;F=692.918,P<0.01).与常氧培养相比,缺氧培养后HSPA2启动子活性增加7.09倍(t=43.551,P<0.01).随着YC-1浓度升高,HIF-1α表达受到明显抑制(F=883.614,P<0.01),HSP70-2表达水平也相应下降(F=218.112,P<0.01).转染HIF-1α siRNA后HIF-1α表达受到明显抑制(F=577.130,P<0.01),HSP70-2表达水平也相应下降(F=465.598,P<0.01).构建系列截短的HSPA2启动子报告基因载体转染HepG2细胞后检测,转染HSPA2(-1114/+62)-LUC和HSPA2(-653/+62)-LUC细胞的相对荧光素酶活性无明显改变,但转染HSPA2(-385/+62)-LUC细胞的相对荧光素酶活性较前明显降低(t=13.717,P<0.01).分别构建突变缺氧反应元件(HRE)1和HRE2的HSPA2启动子报告基因载体,转染HepG2细胞后检测,突变HRE1后HSPA2启动子活性显著降低(t=10.954,P<0.01),但是突变HRE2后HSPA2启动子活性无明显改变.结论 缺氧显著上调HepG2细胞中HSP70-2的表达,其机制可能是HIF-1与HSPA2启动子上HRE1结合后激活该基因的转录.     

热休克蛋白70 mRNA表达上调对兔心房快速起搏电重构的影响

目的：探讨热应激诱导心肌热休克蛋白70（HSP70）mRNA表达上调后,对兔快速心房起搏电重构的影响。方法：将24只新西兰大白兔随机分成热应激＋起搏组（n=8）、起搏组（n=8）和假手术组（n=8）。热应激造模：将新西兰大白兔麻醉后,放入恒温箱中加热,肛温达41℃后持续15 min,再放入室温恢复24 h。起搏：以600次/min行右心房起搏,测量0 h、2 h、4 h、6 h的右房有效不应期（AERP200、AERP150）,AERP频率适应性,心房颤动（AF）诱发率。起搏组对未造模的兔起搏。假手术组只测量不起搏。用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测各组心肌HSP70 mRNA含量。结果：（1）快速心房起搏后,起搏组AERP200和AERP150立即缩短,起搏2h接近最小值[AERP200（79.38±6.23）ms,AERP150（71.25±6.94）ms],较起搏前[AERP200（100.00±6.55）ms,AERP150（89.38±6.78）ms]显著缩短（P〈0.01）;热应激＋起搏组起搏前后AERP无显著变化;（2）0 h时,起搏组右心房处（AERP200-AERP150）/50 ms为（0.21±0.10）ms,起搏2 h、4 h、6 h后分别为（0.16±0.07）、（0.14±0.05）、（0.13±0.05）ms,较起搏前非常显著缩短（P〈0.001）;（3）快速心房起搏前,予以程序性刺激和猝发刺激,各组AF诱发率均为0,起搏后2 h、4 h、6 h AF诱发率：起搏组分别为50.0%、75.0%、87.5%;热应激＋起搏组分别为25.0%、25.0%、37.5%;较起搏组显著减少（P〈0.05）;（4）热应激＋起搏组心脏各部位HSP70 mRNA表达较起搏组和假手术组明显增高（P〈0.05）,起搏组和假手术组间无显著差异。结论：心脏热休克蛋白70 mRNA表达上调后可抑制右心房快速起搏引起的心房电重构。     

脂脉宁对香烟提取物诱导血管内皮细胞-304的NF-KB及热休克蛋白-70表达影响

目的：观察含脂脉宁血清对香烟提取物（CSE）诱导血管内皮细胞（VEC）～304的核转录因子-xB（NF—xB）及热休克蛋白-70（HSP-70）表达的影响。方法：将VEc-304细胞分为4组：CSE组、实验1组（脂脉宁大剂量）、实验2组（脂脉宁小剂量）及空白对照组。采用免疫组化方法,观察各组VEC-304细胞NF—KB及HSP-70的表达。结果：CSE组细胞NF—KB[（288±25）：（185±14）]、HsP-70[（370±28）：（258±20）]的表达均较空白对照组明显升高[P〈O．05～O．01],而脂脉宁两组NF—KB[1组（193±17）,2组（211±14）]、HSP-70[1组（262±21）,2组（282±23）]表达明显低于CSE组[P〈O．05～0．01],且1组作用更明显（P〈0．05）。细胞DAB显色：CSE组细胞NF—xB蛋白、HsP-70蛋白显色呈棕黄或棕褐色,明显较空白对照组色深;实验1组和2组显色虽较空白对照组为深,但明显较CSE组色浅。结论：香烟提取物可诱导血管内皮细胞核转录因子-kB、热休克蛋白～70表达．脂脉宁则可使其表达下调。     

人结肠癌中热休克蛋白70、90α和90βmRNA的表达及其意义

背景：热休克蛋白（HSP）高表达可增强肿瘤细胞的抗凋亡能力，使细胞生长抑制效应减弱，细胞死亡减少。HSP70和HSP90是HSP家族中拮抗细胞凋亡的两种主要蛋白，可能在肿瘤的发生、发展中发挥重要作用。目的：探讨人结肠癌中Hsp70、Hsp90α和Hsp90βmRNA的表达及其意义。方法：取31例结肠癌手术标本的癌组织、癌旁组织和正常组织．应用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测Hsp70、Hsp90α和Hsp90β基因转录水平的表达。以单因素方差分析了解各结肠组织中基因表达水平的差异，以相关分析研究癌组织和正常组织中各基因表达的相关性。结果：结肠癌组织中Hsp70、Hsp90α和Hsp90βmRNA的表达水平均显著高于癌旁组织和正常组织。正常组织中Hsp70、Hsp90α和Hsp90βmRNA的表达两两之间均存在相关性，而癌组织中仅Hsp70与Hsp90αmRNA的表达之间存在相关性。结论：Hsp70、Hsp90α和Hsp90β在人结肠癌的发生、发展过程中起有一定作用。     

热休克蛋白-2基因多态性与肝细胞癌的相关性

肝细胞癌(HCC)是我国的常见恶性消化道肿瘤之一,全球发病率逐年升高,其发生和发展与遗传、免疫和环境等因素相关.热休克蛋白(HSP)70是生物细胞受到高温、感染、炎症和缺血等应激刺激时产生的一组在进化上高度保守的蛋白质,具有广泛的生物学功能,与HCC的发病关系密切.     

超速起搏预适应的延迟保护与热休克蛋白27的表达

目的：观察超速心室起搏（VOP）预适应延迟保护阶段热休克蛋白27（HSP27）的表达水平。方法：新西兰兔24只,随机分为3组,缺血再灌注（I/R）空白对照组,起搏组,起搏＋放线菌素D组。制作I/R和超速起搏预适应的动物模型,检测肌酸激酶（CK）和肌酸激酶-同工酶（CK-MB）水平的变化,动态描记再灌注时心电图,以免疫组织化染色法检测HSP27抗原表达水平。结果：I/R后起搏组心肌酶的水平均明显低于I/R空白对照组和起搏＋放线菌素D组（P〈0.01）;I/R空白对照组在再灌注过程中共有5只（62.5%）发生心律失常,起搏＋放线菌素D组有4只（50.0%）,而起搏组无心律失常发生。起搏组心律失常发生率明显低于I/R空白对照组和起搏＋放线菌素D组（P〈0.05）。起搏组HSP27阳性表达＋＋者（37.5%）明显高于I/R空白对照组和起搏＋放线菌素D组（0,12.5%,P〈0.05）。结论：心室超速起搏预适应有心脏保护作用,其机制可能与热休克蛋白27表达增加密切相关。     

葛根素对大鼠心肌缺血再灌注后热休克蛋白70表达的影响

目的探讨葛根素对大鼠心肌缺血再灌注后热休克蛋白70(HSP70)表达的影响。方法结扎大鼠左冠状动脉前降支建立心肌缺血/再灌注模型,运用免疫组化法观察心肌细胞HSP70表达情况及血清髓过氧化物酶(MPO)活性。结果与对照组相比,葛根素组于心肌缺血/再灌注后0.5、4、8h时间点显著上调HSP70表达(P<0.01),抑制血清MPO活性(P<0.01)。结论葛根素可明显减轻心肌缺血再灌注损伤,其心肌保护机制可能是通过上调HSP70的表达、降低血清MPO的活性来实现的。     

普罗布可对兔动脉粥样硬化模型中斑块稳定性及热休克蛋白60表达的影响

目的观察动脉粥样硬化(AS)兔模型中热休克蛋白60(HSP60)的表达及其与斑块稳定性之间的关系和普罗布可对HSP60表达的影响。方法20只新西兰大白兔随机分正常对照组(n=6)、高脂饮食组(n=8)、普罗布可组(n=6)。对照组予以普食喂养,高脂饮食组和普罗布可组予高脂喂养。4周后高脂饮食组和普罗布可组行髂动脉内膜球囊损伤术。术后普罗布可组每只兔子加用普罗布可1000mg/d口服,10周末处死动物。采用HE染色观察动脉病理形态学变化,免疫组化染色检测动脉中HSP60的表达,酶联免疫吸附法测血清中的C反应蛋白(CRP)、白细胞介素(IL)-6、氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)、HSP60的水平。结果高脂饮食组动脉可见典型的动脉粥样硬化斑块,普罗布可组无典型斑块形成,内膜增厚较为明显;与高脂饮食组相比较,普罗布可组血清CRP、IL-6、ox-LDL、HSP60水平降低;普罗布可组内膜和中膜HSP60的表达较高脂饮食组明显减少。血清HSP60水平与CRP、IL-6、ox-LDL水平正相关。结论HSP60在兔AS模型中的表达水平明显增加,与斑块的不稳定性有关,普罗布可可抑制兔AS模型血清和斑块中HSP60的表达。     

Sleep deprivation increase the expression of inducible heat shock protein 70 in rat gastric mucosa

AIM: To investigate if sleep deprivation is able to increase the expression of inducible heat shock protein 70 in gastric mucosa and its possible role in mucosal defense. METHODS: Rats for sleep disruption were placed inside a computerized rotating drum, gastric mucosa was taken from rats with 1, 3 and 7d sleep deprivation. RT-PCR, immunohistochemistry and Western blotting were used to determine the expression of heat shock protein 70. Ethanol (500mL.L(-1), i.g.) was used to induce gastric mucosa damage. RESULTS: RT-PCR, Western blotting and immunostaining confirmed that the sleep deprivation as a stress resulted in significantly greater expression of inducible heat shock protein 70 in gastric mucosa of rats. After the 500mL.L(-1) ethanol challenge, the ulcer area found in the rats with 7d sleep deprivation (19.15 +/- 4.2)mm(2) was significantly lower (P<0.01) than the corresponding control (53.7 +/- 8.1) mm(2). CONCLUSION: Sleep deprivation as a stress, in addition to lowering the gastric mucosal barrier, is able to stimulate the expression of inducible heat shock protein 70 in gastric mucosa of rats, the heat shock protein 70 may play an important role in gastric mucosal protection.