大鼠睾丸乳酸脱氢酶同工酶－C_4的分离纯化研究

采用加热、硫酸铵分段盐析和ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－５０柱层析，从大鼠睾丸中分离纯化了ＬＤＨ－Ｃ４。比活性提高７８４倍，活性回收率为１２．３％，纯化的ＬＤＨ－Ｃ４经聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）鉴定均为一条酶带，位于ＬＤＨ３和ＬＤＨ４之间。     

乳酸脱氢酶-C_4在大鼠不同成熟期生精细胞中的定位

用ABC免疫组织化学法观察乳酸脱氢酶C_4(LDH-C_4)在性成熟后的Wistar大鼠生精上皮细胞中的定位。结果表明:LDH-C_4定位于粗线期初级精母细胞以后的各级生精细胞中,精原细胞中缺如。显微分光光度分析表明,随着精子的发生,LDH-C_4的相对含量逐渐增加,精母细胞中为0.55±0.09,精子细胞中为0.86±0.13,精子中为0.94±0.04,三者之间有显著性差异(P<0.01)。ABC免疫电镜显示LDH-C_4在大鼠精子的细胞质、线粒体及部分细胞膜上均有分布。免疫荧光显示LDH-G_4在精子表面主要定位于尾部的主段和末段,少量分布于精子头冠部。作者对LDH-C_4细胞定位的生理意义作了讨论。     

乳酸脱氢酶同工酶C_4与男性不育的关系

用自制的抗人乳酸脱氢酶同工酶C_4(LDH-C_4)单克隆抗体(McAb),以免疫荧光、BA-ELISA及聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)等方法,测定了110例正常及各种不育症患者精子及精浆中LDH-C_4的含量。结果表明:不明原因性不育症、少精症及无精症患者精液中LDH-C_4的含量明显低于正常对照组,与正常组比较P值均<0.001,有极显著性差异;免疫荧光还发现不育症组伴有各种畸形精子。LDH-C_4含量的明显降低可能与男性不育有关。     

精子特异性乳酸脱氢酶LDH-C4研究进展

自从1963年Goldberg等在多种哺乳动物、鸟类睾丸组织和精子中发现精子特异性乳酸脱氢酶C4（LDH—C4）以来。国内外对其分布的特异性及其与性成熟、生育过程的密切关系作了深入研究。近20年来。LDH—C4一直作为避孕疫苗的重要候选对象之一。受到国内外学者的关注。现就将近年来有关LDH—C4研究进展简要综述如下。     

内皮素抗血清对大鼠心肌梗塞的治疗作用

为探讨内皮素在心肌梗塞中的发病学意义,本实验在结扎大鼠前降支冠脉48 h的心肌梗塞模型上,观察内皮素抗血清对心肌梗塞大鼠的治疗作用。结果表明,心肌梗塞大鼠血浆内皮素含量显著升高。用特异的内皮素抗血清(ET-Ab)治疗心肌梗塞大鼠,可明显减小梗塞范围,降低其血浆脂质过氧化产物水平。提示,内皮素是心肌梗塞发病的重要体液因素之一。     

大鼠精子特异的LDH-C_4的提纯及其免疫性质分析

采用硫酸铵盐析、N~6-(6氨己基)-5′-AMP-Sepharose亲和层析和DEAE-Cellulose离子交换层析,从大鼠睾丸中纯化了LDH-C_4。比活性为16.3 IU/mg,纯化1087倍,产率32.5％。纯化的LDH-C_4经聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)鉴定为一条酶带。将纯化的LDH-C_4免疫兔制备了效价为1:64的抗血清。BA-ELISA检测抗血清与大鼠心脏、肌肉和人、小鼠睾丸提取液之间的交叉反应,结果表明抗血清与大鼠心脏、肌肉提取液间存在微弱的交叉反应,而双向免疫扩散未形成沉淀线;抗血清与小鼠睾丸提取液之间存在很强的交叉反应,但与人睾丸提取液之间的交叉反应却很弱,双向免疫扩散显示它们的抗原决定簇部分相同,提示不同种属的LDH-C_4之间抗原性存在差异。     

风湿热患者血清乳酸脱氢酶及其同工酶谱

对30例风湿热患者血清乳酸脱氢酶(LDH)及其同工酶(LDHi)进行了测定,LDH总活性为500.5±281.6u/dl((?)±s),>550u/dl者占26.7％(8/30);LDH_1谱以LDH_3含量增高为主,LDH_1含量降低,出现LDHi谱以LDH_3含量倒置现象,LDH_3/LDH_1,比值为1.18±0.42((?)±s),与正常对照组(0.73±0.11)相比差异有非常显著性(P<0.001),此比值>0.94(正常对照组上限)为异常指标,其诊断特异性为66.7％。LDH_3/LDH_1比值的大小与LDH总活性及抗“O”的高低无显著性意义(x~2=0.11,P>0.05)。结果表明,测定血清LDH及LDH_1对风湿热的诊断有一定临床意义。     

睾丸LDH－X组化染色方法的探讨

分别选用冰冻切片水浴、睾丸整体水浴和特异性底物等酶孵育方法显示＊丸ＬＤＨ－Ｘ活性。结果表明，冰冻切片水浴和睾丸整体水浴后酶反应产物扩散严重，并可使曲细精管结构受到一定程度的损害。特异性底物方法无上述缺陷、ＬＤＨ－Ｘ定位良好，不失为目前显示睾丸ＬＤＨ－Ｘ活性的较好方法。     

柠檬酸钠对兔心肌乳酸脱氢酶的抑制作用

本文用高速离心法和DEAE-纤维素离子交换层析法从兔心肌分离提取出乳酸脱氢酶1(LDH_1)。分别以乳酸锂和丙酮酸钠为底物,测定了柠檬酸钠对LDH_1的抑制作用,结果发现,柠檬酸钠对LDH_1具有非竞争性抑制作用。结果提示,柠檬酸对糖酵解的最后一步反应可能具有一定的调节意义,并可能是巴斯德效应机理的一部分。     

酶组化显示睾丸LDH－X方法的再探讨

对小鼠睾丸冰冻切片ＬＤＨ－Ｘ的显示方法作了进一步探讨。实验表明，以Ｌ－２－羟基－３－甲基戊酸（ＨＭＶ）为特异性底物，能相当有效地显示睾丸ＬＤＨ－Ｘ的分布，且该底物的配制方法简便易行。在显示ＬＤＨ－Ｘ的孵育液中采用萘酚蓝（ＮＢ）作中间递电子体较吩嗪甲基硫酸酯更具优越性。     

大鼠岛状皮瓣移植后糖原、乳酸脱氢酶变化的定量组织化学观察

用定量组织化学方法对大鼠腹部岛状皮瓣移植后的糖原含量和乳酸脱氢酶(LDH)活性进行了观察。表明:糖原含量及LDH活性在术后1天明显下降,之后逐渐回升,10天正常;提示岛状皮瓣移植术后早期,仍存在一个低血流灌注期,对该期糖代谢物质的观测可能成为估测皮瓣预后的方法之一;改善该期的血供亦可能提高皮瓣的质量。     

1,6-己二醇对乳酸脱氢酶_5的别构抑制作用研究

本文研究了1,6-己二醇对乳酸脱氢酶_5(LDH_5)的抑制作用。结果发现,在以丙酮酸钠为底物时,1,6-己二醇对LDH_5具有非竞争性抑制作用。其抑制后酶活性百分比对抑制剂浓度作图显示出S形曲线,这表明抑制剂与酶结合显示出正协同效应。结果提示LDH_5具有V系统别构酶性质。     

REGULATING FUNCTION OF COENZYMIZATION AND DECOENZYMIZATION OF THE LACTATE DEHYDROGENASE ISOZYMES IN THE MOUSE TISSUES DURING HYPOXIA

Objective. To study the characteristics of changes of LDH enzyme patterns of mice under slight hypoxia.Methods. Mice treated with artificial hypoxia, various tissues were made for the test of LDH enzymatic activity by the specific staining technique. LDH (1 -5) relative percentage enzymatic activity (RPEA) were measured with CS-910 dual-wavelength thin layer chromatography scanner.Results. The RPEA of LDH isozymes of various tissues after slight hypoxia shifted to the isozymes LDH1 and LDH2, whose principal subunits are H subunits, and the RPEA of LDH,(H4), LDH2(H3M) increased, while RPEA of LDH5(M4) in various tissues decreased prominently except the cardiac muscle, and that of LDH4(HM3) decreased as well. After polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE) of the hypoxia treated cardiac muscle specimen was made, activity subbands originated regularly in the isozyme patterns of LDH, with the regularity of LDH1 (0 subband), LDH2 (0-1 subbands), LDH3 (0-2 subbands), LDH4 (1-3 subbands), LDH5 (2-4 subbands).