多重PCR检测金葡菌肠毒素基因型的研究

目的 应用多重聚合酶反应(PCR)，建立检测金黄色葡萄球菌肠毒素(SE)基因方法。方法 用溶菌素和蛋白酶K制备模板DNA，用多重聚合酶链反应扩增的方法，对临床分离的金黄色葡萄球菌130株进行扩增。结果 金黄色葡萄球菌肠毒素血清型A(SEA)阳性的占23．1％(30／130)，血清型B(SEB)阳性的占43．1％(56／130)，血清型C(SEC)阳性的占11．6％(15／130)，血清型D(SED)阳性的占6．12％(7／130)，血清型EA(SEE)阳性的占2．31％(3／130)；femA基因片段在多重PCR中作为内部参照避免了假阴性结果的出现。结论 多重PCR技术检测金黄色葡萄球菌肠毒素基因型，具有敏感、快速、特异的特点，是一种可靠的实验诊断手段。     

广州市食源性金黄色葡萄球菌肠毒素及耐药分析

目的 了解广州地区食品和食物中毒样品中金黄色葡萄球菌产肠毒素和耐药性情况。 方法 按食品安全国家标准和相关文献对2010-2016年广州市疾病预防控制中心微生物实验室从食品和食物中毒样品中分离并保存的118株金黄色葡萄球菌进行了肠毒素和药敏试验。 结果 118株金黄色葡萄球菌有70株产肠毒素,产毒率为59.32%,快餐类食品和食物中毒样品的产毒率偏高。以荧光PCR方法对70株肠毒素阳性的菌株进行肠毒素A-E分型,其中SEA检出率为29.20%、SEB 17.70%、SEC 11.50%、SED 15.93%、SEE 25.67%;携带两种或以上毒力基因的产毒菌株占41.42%。在受检的菌株中,有104株菌不同程度的对一种或多种的抗生素有抗性,占88.14%;青霉素G耐药率高达71.19%;检出耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)5株,占4.24%,mecA耐药基因检测阳性。 结论 广州市食源性金黄色葡萄球菌中产肠毒素菌株较多,且存在耐药株,甚至MRSA,应加强对广州市食品安全风险的监管。     

PCR技术检测金黄色葡萄球菌肠毒素A、B、C、E基因的研究

目的:建立检测金黄色葡萄球菌肠毒素SEA、SEB、SEC、SEE的PCR方法,实现同一台PCR仪、同一PCR反应条件下同时检测SEA、SEB、SEC、SEE,用于金黄色葡萄球菌肠毒素食物中毒的诊断。方法:根据已公布的SEA、SEB、SEC、SEE编码的基因序列,设计4对引物,优化反应条件,建立检测方法,对特异性和敏感性进行分析,并对扩增产物进行测序鉴定。结果:方法特异性分析表明能很好区分各种肠毒素基因型,灵敏度达0.8-1.0×102 CFU/ml。结论:建立了一种在同一台PCR仪、同一PCR条件下同时检测SEA、SEB、SEC、SEE的方法,可用于金黄色葡萄球菌肠毒素食物中毒的诊断和肠毒素的分型检测。     

金黄色葡萄球菌胶乳凝集试验及spa基因序列改变与万古霉素耐药关系探讨

目的研究金黄色葡萄球菌（金葡菌）胶乳凝集试验及spa基因序列改变与万古霉素耐药的关系。方法检测体外诱导对万古霉素耐药金葡菌过程中的金葡菌胶乳凝集试验结果改变情况,并利用单链构象多态性（SSCP）技术及DNA测序分析金葡菌spa基因序列有无改变。结果3株对万古霉素产生中介耐药的金葡菌在诱导过程中胶乳凝集试验发生改变,其中2株金葡菌spa基因序列有改变。结论spa基因碱基序列的改变,可能与金葡菌对万古霉素耐药有一定关联。     

多重PCR技术在检测食源性金黄色葡萄球菌 肠毒素基因中的应用

摘要:目的　金黄色葡萄球菌A、B、C、D和E型肠毒素是引起食源性疾病的主要类型,采用多重PCR技术分析食源性金黄色葡萄球菌分离株肠毒素基因携带状况。方法　以19株食源性金黄色葡萄球菌分离株为研究对象,利用多重PCR技术对核酸酶基因以及肠毒素A、B、C、D和E型基因进行检测。结果　19株菌中均检出金黄色葡萄球菌特异性核酸酶基因,与传统菌落分离培养鉴定结果一致;9株菌含肠毒素SEA基因,1株同时含SEA和SEB基因,没有检测到肠毒素C、D和E基因。结论　在19株食源性金黄色葡萄球菌分离株中,10株携带肠毒素基因,以携带肠毒素A基因为主。     

食品中金黄色葡萄球菌的肠毒素检测及耐药性

目的了解食品中金黄色葡萄球菌对药物的敏感性及产肠毒素的情况,对食物中毒检测提供理论依据和指导临床用药。方法药物敏感性试验采用1997年美国NCCLS药敏试验(纸片法)方法进行,用反向被动乳胶凝集试验检测肠毒素。结果金黄色葡萄球菌除对万古霉素、替考拉宁敏感外,对其余10种存在不同程度的耐药;金黄色葡萄球菌产肠毒素总检出率为38%,其中A型为25%,C型为12.5%,其次为D型为5%,E型为2.5%,B型未检出。结论检测食物中毒及食品样品中的金黄色葡萄球菌时,应考虑肠毒素的检测;临床治疗金黄色葡萄球菌感染,应建立在体外药敏试验的基础上,有针对性地选择抗菌药物。     

Apport du kit Servitex Staphylocoque MRSA® dans le diagnostic rapide des souches de Staphylococcus aureus résistantes à la méticilline

Objective – An efficient initial antibiotic therapy for patients infected by methicillin resistant Staphylococcus aureus (MRSA) improves the health prognostic in term of morbidity and mortality. The authors wanted to assess the Servitex Staphylocoque MRSA test^®: a rapid (30 min) slide latex agglutination test used to determine methicillin resistance by detecting PBP 2a in Staphylococcus aureus.Method – Sixty five Staphylococcus aureus clinical isolates (53 heterogeneous methicillin resistant S. aureus, nine homogeneous methicillin resistant S. aureus, three methicillin susceptible strains), and two control strains (ATCC 25923, CIP 6525) were studied. These strains were tested by various methods: agar diffusion with 5 μg oxacillin disk tested both at 30°C on Mueller-Hinton medium and at 37°C and on Mueller-Hinton plus 4% NaCl; latex test Servitex MRSA^® tested with two inocula (5 and 10 cfu); and dot blot hybridization with the mecA probe.Results – The methods used to detect methicillin resistance were of similar sensitivity except for the latex test Servitex MRSA^® with a 5 cfu inoculum which detected resistance in only 87% of the cases. A 100% accuracy was restored if a 10 cfu inoculum was used for the latex test Servitex MRSA^®.Comments – Standardization of the initial inoculum appears to be necessary for the reliable detection of methicillin resistance by the latex test. In a clinical laboratory, the use of the latex test is thus restricted to very specific cases if results are to be obtained in less than 48 hours.     

葡萄球菌凝固酶试验玻片法结果最佳判读标准的探讨

目的探讨葡萄球菌凝固酶试验玻片法结果的最佳判读标准。方法对临床标本分离的70株葡萄球菌属细菌,以聚合酶链反应（PCR）法检测葡萄球菌凝固酶基因（金标准）,同时以乳胶凝集法快速检测金黄色葡萄球菌(Slidex Staph Plus),试管法、玻片法检测葡萄球菌凝固酶。经VITEK Ⅱ全自动分析仪鉴定细菌到种。结果70株葡萄球菌属细菌中,PCR法检测葡萄球菌凝固酶基因56株为阳性;Slidex Staph Plus与PCR法相对应的56株为阳性;试管法检测与前2种方法相对应的54株为阳性,2株为假阴性;玻片法为强阳性;VITEK Ⅱ全自动分析仪鉴定56株为金黄色葡萄球菌（与PCR法同）。另14株菌经鉴定为溶血性葡萄球菌。玻片法以粗大颗粒状或明显大絮片状凝集为血浆凝固酶试验阳性的判断,其准确度为80.00%,假阳性率为20.00%。结论葡萄球菌凝固酶试验玻片法结果最佳判读标准：以10 s内血浆中呈不可磨散的明显团块状凝集,液面清亮,在无菌生理盐水中不凝集为阳性。     

应用实时荧光PCR技术检测金黄色葡萄球菌肠毒素基因

目的:建立一种简便、特异的荧光PCR检测方法,用于金黄色葡萄球菌肠毒素的检测。方法:按金黄色葡萄球菌SEA～SEE型肠毒素基因序列设计引物,在普通PCR检测体系中,加入SYBR Green I荧光染料,建立荧光PCR检测体系。结果:46株金黄色葡萄球菌中检出22株携带肠毒素基因,阳性率为47.83%。以SEA、SEB检出率较高,分别为31.82%和27.27%;不同来源的分离株携带肠毒素基因的比例不同,同时携带2种及以上毒素基因的菌株占27.27%。结论:荧光PCR检测金黄色葡萄球菌肠毒素的方法具有快速、敏感、特异性高的特点,适用于肠毒素基因的分型与分布的研究,适合基层疾控部门使用。     

两种快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌下呼吸道感染标本的方法评估

目的评价两种快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)下呼吸道感染标本的临床应用价值。方法 167份下呼吸道感染标本同时用直接多重PCR检测法、免疫富集联合多重PCR检测,并以常规细菌培养+PBP2a胶乳凝聚法检测结果为标准,评价两种方法的敏感性、特异性。结果直接多重PCR法检出MRSA4株,总检测率为2.3%;免疫富集联合多重PCR法检出MRSA20株,总检测率为11.9%;细菌培养+PBP2a胶乳凝集法为对照,免疫富集联合多重PCR检测法、直接采用多重PCR检测法的敏感性分别为100.0%、28.6%,特异性分别为96.1%、100.0%。结论免疫富集联合多重PCR法灵敏度高、特异性强、简单快速,适用于直接快速检测下呼吸道感染标本中的MRSA,该方法对及早发现、诊断MRSA感染患者有重要的意义。