间充质干细胞治疗急性骨髓型放射病的实验研究

目的研究骨髓间充质干细胞(MSCs)在治疗急性骨髓型放射病中的作用,并对其机理做初步的探索。方法BALBc雌性小鼠分成MSCs组和照射对照组,MSCs组经5.5Gy60Coγ射线照射,2h内尾静脉输注C57BL6雄性小鼠的MSCs,照射对照组照射后不作处理。观察各组外周血象变化、骨髓细胞凋亡、细胞增殖周期、骨髓病理变化、骨髓造血粒系祖细胞集落(CFUGM)以及基质细胞集落(CFU-F)计数。结果与对照组相比,MSCs组的三系血细胞下降慢,最低值抬高,并且造血恢复更迅速,尤其白细胞、血小板变化更明显。骨髓细胞凋亡率和P53蛋白表达量少于对照组。照后2d,MSCs组G0G1期比值较对照组明显下降(P<0.01),G2M期比值及S期计数较对照组显著升高(P<0.01)。照后4dMSCs组胸骨骨髓增生活跃,对照组增生减低,照后20dMS-Cs组新生造血灶多于对照。CFU-GM、CFUF计数在照后初期、极期、恢复期均高于对照。结论MSCs对急性放射病治疗有良好的治疗作用,其机制可能与MSCs减少细胞凋亡、改善造血微环境、促进干细胞增殖分化有关。     

白藜芦醇促进γ射线照射小鼠造血系统损伤修复的作用

目的观察白藜芦醇对60Coγ射线照射小鼠造血系统损伤修复的影响。方法 ICR小鼠随机分成5组,即正常对照组、照射对照组以及白藜芦醇50、100、200 mg.kg-1照射组,照射前3 d灌服给药,每天1次。除正常对照组外,所有小鼠60Co射线全身5.5 Gy辐照1次,照射后第7天小鼠取骨髓细胞和脾脏,对骨髓单个核细胞和脾集落形成单位进行计数,测定骨髓细胞DNA含量和细胞周期。结果与正常对照组比较,照射对照组小鼠骨髓单个核细胞数和骨髓细胞DNA含量显著降低（P〈0.05）,脾集落形成单位数和S和G2/M期细胞百分率显著增多（P〈0.05）;与照射对照组比较,白藜芦醇100、200 mg.kg-1照射组小鼠照射骨髓单个核细胞数、骨髓细胞DNA含量、脾集落形成单位数和S和G2/M期细胞百分率显著增多（P〈0.05）,白藜芦醇50 mg.kg-1照射组有增多趋势。结论白藜芦醇可以促进60Coγ射线照射小鼠造血系统损伤的恢复,防护效果与给药剂量相关。     

低剂量照射对小鼠骨髓移植造血功能的影响

目的探讨低剂量照射促进小鼠骨髓移植后受体造血功能的重建。方法通过对小鼠体外骨髓细胞进行不同剂量的照射，用^3H-TdR掺入法确定产生最佳刺激增殖效应的照射剂量。在骨髓移植前，对供体小鼠骨髓细胞给予最佳刺激剂量的照射，然后将被照射的骨髓细胞输入受体小鼠内，最后动态监测受体小鼠的外周血细胞和骨髓单个核细胞数量。结果在离体情况下，经6和8cGy低剂量照射的小鼠骨髓细胞增殖能力明显增强。用低剂量照射的骨髓细胞进行骨髓移植后，受体小鼠骨髓单个核细胞数和外周血细胞计数普遍高于相应的对照组。结论低剂量照射可能促进小鼠骨髓移植后受体造血功能的重建。     

四物汤对3种血虚证动物细胞周期的影响

目的系统考察60Coγ-射线、环磷酰胺和综合放血法致血虚证小鼠模型骨髓细胞周期变化的特点。方法采用60Coγ-射线照射、环磷酰胺腹腔注射和综合放血法制作血虚证动物模型,检测对小鼠骨髓细胞周期的影响,同时观察四物汤给药后对其影响。结果射线损伤所致血虚证小鼠骨髓细胞中G2/M期比例先升高后降低,环磷酰胺损伤所致血虚证小鼠骨髓细胞中G2/M和S期细胞先升高后降低;综合放血组小鼠骨髓细胞的S期细胞数先升高后降低;四物汤可以促进射线损伤致血虚证小鼠骨髓细胞G0/1期进入S期的作用。3种模型都先后出现了G2/M期阻滞,以γ-射线照射组出现最早,与照射组不同的是环磷酰胺组与综合放血组在造模后都先后在第3、7天出现了S期细胞峰值。结论3种模型骨髓细胞周期都出现了G2/M期阻滞,但S期的变化存在明显不同,四物汤可以促进射线损伤致血虚证小鼠骨髓细胞G0/1期进入S期的作用。     

“523”药物对受照小鼠造血系统的影响

“５２３”是我所研究的抗放新药，不仅能提高受照小鼠的活存率，对其造血作用也有明显影响。我们研究了“５２３”药物对受８Ｇｙ照射小鼠外周血白细胞的作用，及对内、外源性脾结节和骨髓粒系祖细胞的作用。并对骨髓有核细胞周期作了进一步的研究。结果表明，照前应用“５２３”可使外周血白细胞明显升高，骨髓和髓外造血指标也明显增加．使正常小鼠骨髓有核细胞由Ｇ＿０／Ｇ＿１期向Ｓ期转化，从而使Ｓ期的细胞比例明显增加．提示“５２３”对受照小鼠外周血白细胞的作用可能是其作用于骨髓，使骨髓造血细胞增加所引起，而对骨髓的保护作用则是作用于骨髓有核细胞，使骨髓有核细胞处于Ｓ期的比例增加有关。     

TNF-α对放射所致造血损伤的保护效应

研究ＴＮＦ－α对放射所致造血损伤的保护效应及其机理。方法采用骨髓粒－单系祖细胞体外琼脂培养技术，研究ＴＮＦ－α对致死剂量６０Ｃｏγ射线全身照射小鼠的防护效果；对亚致死剂量照射后小鼠造血重建的作用，采用流式细胞技术，分析ＴＮＦ－α对小鼠骨髓细胞周期分布的影响。结果ＴＮＦ－α照射前给药能提高受致死剂量照射小鼠３０天存活率至４６．６７％，照射后１３～１９天外周血白细胞、第３天骨髓有核细胞、造血干细胞以及第３，５天粒－单系祖细胞均显著高于照射对照组（Ｐ＜０．０１），同时发现ＴＮＦ－α能阻止静止期骨髓细胞进入增殖周期。结论肿瘤坏死因子促进照射后小鼠骨髓造血的恢复，可能是ＴＮＦ－α抗放作用的重要机理之一。     

小鼠骨髓基质细胞移植对急性辐射造血损伤的影响

目的：探讨小鼠骨髓基质细胞（marrow stromal cell,MSC）同种异体移植对接受全身大剂量辐射小鼠造血修复的影响。方法：在体外对小鼠骨髓基质细胞进行培养、扩增,并将第三代细胞通过尾静脉移植到同种接受全身大剂量射线照射的小鼠,测定移植后不同时期小鼠外周血白细胞（WBC）、红细胞（RBC）、血小板（PLT）、血红蛋白（HGB）值,观测各组脾集落形成单位（colony forming unit,CFU-S）,探讨同种异体骨髓基质细胞移植对急性辐射造血损伤修复的影响。结果：经骨髓基质细胞移植的小鼠,其WBC、RBC、PLT、HGB在移植后15-20 d较对照组明显增高（WBC、PLT、HGB：P〈0.01;RBC：P〈0.05）,移植组CFU-S明显高于对照组（P〈0.01）。结论：同种异体小鼠骨髓基质细胞移植,能促进小鼠造血干细胞在脾脏定居,增强造血干细胞形成集落的能力,并能显著提高外周血细胞数量,促进损伤后早期造血功能重建。     

重组人粒－巨噬细胞集落刺激因子对6．5Gy不均匀照射犬造血功能的影响

重组人粒－巨噬细胞集落刺激因子（ｒｈＧＭ－ＣＳＦ）在白血病及肿瘤病人大剂量放化疗白细胞减少性疾病的治疗中显示出了良好的前景。ｒｈＧＭ－ＣＳＦ可明显改善屏蔽全骨盆后６．５Ｇｙ６０Ｃｏｒ线照射犬的临床症状，加速外周血白细胞的恢复，提高白细胞的最低值，缩短白细胞减少的持续时间。可明显增加照射犬骨髓有核细胞数及骨髓细胞数，促进骨髓ＣＦＵ－ＧＭ的增殖，提高骨髓细胞的粒／红比值。可应用于事故性骨髓型急性放射病病人的临床治疗。     

三羟异黄酮对正常和辐射损伤小鼠骨髓造血细胞周期的影响

目的 三羟异黄酮（genistein,GEN）对正常和辐射损伤小鼠骨髓造血细胞（bone marrow hematopoietic cell,BMHC）的细胞周期、增殖能力及bc1-2基因表达的影响,以期阐明其防护放射性造血损伤的分子机制.方法 照射前24h,GEN以160 mg/kg体重剂量给予小鼠灌胃,流式细胞仪观察BMHCs细胞周期及增殖能力变化,RT-PCR及Western blot方法分析BMHCs bcl-2 mRNA和蛋白表达情况.结果 ①GEN可诱导正常小鼠BMHCs细胞周期一过性改变,即给药后1 d,BMHCs增殖抑制,大量细胞阻滞于G0/G1期;给药后2 d,GEN诱导BMHCs由G0/G1期向S期转换,S期细胞明显增多;4d后逐渐恢复正常.②照射前24 h给药,GEN可减少射线导致的BMHCs增殖抑制,使照后阻滞于G0/G1期细胞减少;S期和G2/M期细胞增多,细胞增殖能力较强.同时,GEN预处理组bcl-2 mRNA及蛋白的表达均较高.结论 改变BMHCs细胞周期、降低BMHCs的辐射敏感性、抑制BMHCs凋亡和提高残留BMHCs的增殖分化能力可能是GEN防护放射线造血损伤的分子机制之一.     

重组人粒—巨噬细胞集落刺激因子对6.5Gy不均匀照射犬造血功…

重组人粒－巨噬细胞集落刺激因子（ｒｈＧＭ－ＣＳＦ）在白血病及肿瘤病人大剂量放化疗白细胞减少性疾病的治疗中显示出了良好的前景。ｒｈＧＭ－ＣＳＦ可明显改善屏蔽全骨盆后６．５Ｇｙ＾６０Ｃｏγ线照射犬的临床症状，加速外周血白细胞的恢复，提高白细胞的最低值，缩短白细胞减少的持续时间。可明显增加照射犬骨髓有核细胞数及骨髓细胞数，促进骨髓ＣＦＵ－ＧＭ的增殖，提高骨髓细胞的粒／红比值。可应用于事故性骨髓型急性放射     

rhIL-11和rhG-CSF对中子照射致小鼠骨髓损伤的治疗作用

目的 探讨rhIL-11和rhG-CSF对中子照射致小鼠骨髓损伤的治疗作用。方法 将BALB/c小鼠130只用随机数字表法分为对照组(30只)、照射组(40只)、rhIL-11治疗组(30只)、rhIL-11+rhG-CSF治疗组(30只),用3.0 Gy中子照射,并于照射后给予600 μg·kg^－1·d^－1 的rhIL-11和50 μg·kg^－1·d^－1的rhG-CSF,1次/d,共3 d;用血细胞自动分析仪、HE染色、AgNOR染色、流式细胞术、免疫组织化学染色和图像分析等,检测小鼠外周血细胞、骨髓病理形态变化、有核细胞计数、AgNOR含量、凋亡与坏死率和Bax蛋白含量的变化。结果 照射组和rhIL-11治疗组于照射后6 h～3 d,小鼠外周血白细胞、骨髓有核细胞计数和AgNOR含量进行性下降,Bax蛋白于造血细胞胞质内呈阳性至强阳性表达,含量进行性增加(F=0.003,P＜0.01);照射后6 h,照射组小鼠造血细胞凋亡与坏死率增加,以坏死为显著;照射后3 d,rhIL-11+rhG-CSF治疗组小鼠的骨髓有核细胞计数和AgNOR含量均增加(F=0.037、0.026,P＜0.05),Bax蛋白含量减少(F=0.018,P＜0.05);rhIL-11治疗组各指标较照射组差异无统计学意义。结论 3.0 Gy中子照射可使小鼠骨髓造血功能严重受损,rhIL-11和rhG-CSF对照射后小鼠的造血功能恢复有一定改善作用,联合使用效果优于单独使用。     

细胞因子治疗4.5Gyγ射线照射比格犬造血损伤的机制初探

目的 探讨多种细胞因子配伍应用治疗4.5 Gy γ射线照射比格犬造血系统损伤的作用及可能机制。方法 16只比格犬均给予4.5 Gy ⁶⁰Co γ射线全身照射,随机分为照射对照、综合对症和细胞因子3组。细胞因子组在综合对症支持治疗的基础上应用rhG-CSF、rhIL-11和rhIL-2联合治疗,采用流式细胞术检测外周血中CD34+细胞含量、有核细胞周期及凋亡比例。结果 4.5 Gy γ射线照射犬外周血中CD34+细胞含量在照射后1 d明显下降(照射对照组和综合对症组分别为照前值的61.3%和52.1%),G₀/G₁期有核细胞比例增加(分别为99.27%和99.49%),且凋亡率(分别为26.93%和21.29%)和坏死率(分别为3.27%和4.14%)明显升高(与照前值比较, P<0.05);而经过细胞因子治疗后,外周血中CD34+细胞含量在照射后1 d即明显升高(为照前值的135.6%),G₀/G₁期有核细胞比例(99.71%)进一步增加,其凋亡率(5.66%)和坏死率(1.60%)明显低于照射对照和综合对症组。结论 本研究的细胞因子组合可能通过动员骨髓中CD34+细胞到外周血,使细胞周期阻滞在G₀/G₁期,减少细胞凋亡,从而促进极重度骨髓型急性放射病犬造血功能的恢复。     

白藜芦醇诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡及其机制

目的探讨白藜芦醇诱导人宫颈癌Hela细胞的凋亡作用及其分子机制。方法应用不同浓度的白藜芦醇作用于人宫颈癌Hela细胞,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测药物对细胞的增殖抑制率;流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡、细胞周期分布：免疫组化法检测Survivin及Caspase-3的表达。结果白藜芦醇能明显抑制Hela细胞的增殖,并呈剂量和时间依赖性。经白藜芦醇处理Hela细胞后,FCM分析发现各实验组S期细胞比例增高,G2／M期细胞比例减少,凋亡率明显高于对照组,并呈剂量依赖性（P〈0．01）;各实验组Heal细胞Survivin的表达均低于对照组,而Caspase-3的表达均高于对照组（P〈0．01）。结论白藜芦醇能明显抑制人宫颈癌Hela细胞的增殖,诱导其凋亡,其机制可能与抑制Survivin的表达、上调Caspase-3的表达有关。     

骨髓基质细胞输注对外周血干细胞移植造血恢复的影响

为观察骨髓基质细胞输注对外周血干细胞移植（PBSCT）后造血恢复的影响，经放、化疗预处理的BALB／c小鼠，分别输入动员的外周血干细胞（PBSCT组）、外周血干细胞联合扩增的骨髓基质细胞（实验组），观察受体鼠4周的生存率、骨髓有核细胞（BMNC），粒细胞巨噬细胞集落形成单位（CFU－GM）、成纤维细胞集落形成单位（CFU－F）、外周血白细胞计数等指标。结果显示，实验组的生态率，BMNC、CFU－GM、CFU－F较PBSCT组显著升高（P＜0．005）；白细胞的最低值较PBSCT组高（P＜0．01），白细胞恢复较PBSCT组块（P＜0．01）。提示骨髓基质细胞输注有促进外周血干细胞移植造血恢复的作用。     

天葡圣航片对小鼠辐射损伤的保护作用

目的 观察天葡圣航片对小鼠γ射线辐射损伤的保护作用. 方法 将200只雌性昆明种小鼠随机分为Ⅰ(外周血白细胞计数)、Ⅱ(骨髓有核细胞计数)、Ⅲ(小鼠骨髓细胞微核检测),Ⅳ(血中超氧化物歧化酶活性测定)、Ⅴ(血清溶血素测定)5大组(每组n=40),每大组又随机分为低、中、高剂量药物组和辐射对照组(每小组n=10).低、中、高剂量按0.12 g/kg、0.24 g/kg、0.72 g/kg灌胃给药,1次/d,连续21 d;辐射对照组给等量蒸馏水.各组根据不同指标选择不同的照射剂量,各实验项目剂量组与相应的对照组均以同一剂量γ射线全身照射1次,照射后继续灌胃给药至实验结束.分别对每大组中各药物剂量组间进行相应检测指标的比较. 结果 以3 Gy剂量照射实验后第3天,中、高剂量药物组及第14天中剂量药物组的外周血白细胞计数明显高于辐射对照组(P<0.01或P<0.05);照射后第3天,中、高剂量药物组的骨髓有核细胞数明显高于辐射对照组(P<0.05或P<0.01),高剂量药物组的骨髓细胞微核率明显低于辐射对照组(χ~2=6.301,P<0.05);以6 Gy剂量照射后第7天,高剂量组的血清超氧化物歧化酶活性明显高于辐射对照组(P<0.05),以上差异有统计学意义.以2 Gy剂量照射后第14天,各剂量药物组的血清溶血素水平与辐射对照组比较差异无统计学意义. 结论 天葡圣航片对小鼠γ射线辐射损伤具有明显的保护作用.     

A contribution to the study of damage and regeneration of hemopoiesis during fractionated irradiation and repeated bone marrow transplantation

The experiment was aimed at studying two contradictory actions: damage to hemopoietic organs during application of radiation doses per fraction and regenerative efforts of the organism supported by repeated bone marrow transplantation. The mice received doses of 3 Gy of 60Co-gamma rays total body irradiation at four-day intervals up to a total dose of 18 Gy. After each dose per fraction half of the animals were injected with 10(6) bone marrow cells. At four-day intervals evaluations were made of the blood count, bone marrow and spleen cellularities, and spleen mass. In animals subjected only to irradiation the damage to hemopoietic organs was becoming deeper until the end of observation. In bone marrow recipients the decrease in bone marrow cellularity and the number of leukocytes stopped after day 16, and there was a steep growth of splenic cellularity and mass; the decrease in erythrocyte count stopped on day 20. Obviously a certain recovery of hemopoiesis occurred after the total dose of 12 Gy between days 12 and 16. The lodging of injected hemopoietic stem cells and their proliferation had to be preceded by a regeneration of the hemopoietic microenvironment.     

血小板第4因子造血保护作用的实验研究

目的 :研究血小板第 4因子 (PF4)对环磷酰胺 (CTX)处理小鼠体内造血系统的保护作用。方法 :实验鼠用PF4注射 2次 ,间隔 6h ,第二次注射后 2 0h给予CTX 2 0 0mg·kg- 1 。动态观察小鼠外周血白细胞数以及不同时期外周血T细胞亚群 ,骨髓粒-巨噬系集落形成单位 (CFU -GM)、细胞周期和小鼠脾脏、胸腺的变化。结果 :PF4能增加CTX处理小鼠骨髓CFU -GM的产率 ,加速体内CFU -GM的恢复 ;短时增加CTX处理小鼠骨髓G0 /G1 期细胞 ,减少骨髓细胞的坏死和凋亡 ;增加胸体比和脾体比。但是PF4对小鼠外周血白细胞数和T细胞亚群未见明显影响。结论 :PF4能保护小鼠骨髓及胸腺、脾脏等器官组织免受CTX损伤 ,增加骨髓CFU -GM的形成能力     

旋转磁场对小鼠骨髓型急性放射病治疗效果的研究

目的 研究旋转磁场对小鼠骨髓型急性放射病的治疗效果。方法 132只雄性BALB/c小鼠随机分为正常组(N),单纯磁疗组(M),单纯照射组(R)和照射磁疗组(R+M)4组,N组小鼠不作其他处理,R组和R+M组小鼠接受6.0 Gy剂量的 ⁶⁰Co γ 射线照射,M组及R+M组予以磁场处理30d,每天2次,每次1.5h。观察小鼠30d的存活率和存活期;分别于0、5、9、15、21、30d检测外周血细胞数;测定第9、23、30d骨髓单核细胞数(BMNC)、脾集落形成单位(CFU-S)、脾脏指数(脾体比)、骨髓细胞周期、细胞凋亡,观察股骨骨髓病理切片及检测骨形态发生蛋白(BMP2/4)的表达水平。结果 1N组和M组小鼠无死亡。R+M组与R组比较,磁疗提高了小鼠的存活率和存活期(P<0.01)。2R+M组与R组比较,磁疗提高了R+M组第15天外周血白细胞数及血红蛋白含量、第21天红细胞数、第30天血小板数(P<0.05)。3第9天R+M组CFU-S、BMNC数、细胞G₂+M期比例高于R组,而总凋亡率低于R组(P<0.05)。第23天脾脏指数R+M组高于R组(P<0.05)。4骨髓病理检查显示,磁场可促进照射后骨髓造血组织结构的修复,R组骨髓早期较空虚,而R+M组骨髓细胞较充盈,随着时间的推移,两者均逐渐恢复正常;R+M组的骨髓BMP2/4表达水平亦明显高于R组。结论 旋转磁场对放射损伤小鼠骨髓造血具有明显的保护作用,能减少骨髓细胞的凋亡,其机制可能是促进放射损伤后造血细胞和造血微环境的修复。