胺碘酮对人心房肌细胞钙电流和钙离子浓度影响的研究

目的　采用血管紧张素(Ang)Ⅱ刺激人的心房肌细胞,观察细胞膜钙通道电流及胞内游离钙浓度的变化,了解AngⅡ参与房性心律失常的电生理机制,同时观察胺碘酮的干预作用,为临床应用胺碘酮提供实验依据。方法　急性分离单个人心房肌细胞,采用全细胞膜片钳方法记录L 型钙电流(ICa L),同时应用共聚焦显微镜技术测定细胞内游离钙的浓度。实验分为对照组、AngⅡ组(0.1μmol/L AngⅡ)、胺碘酮组(30 nmol/L胺碘酮)及AngⅡ+胺碘酮组。结果　与对照组相比,0.1μmol/L AngⅡ能使人心房肌细胞膜ICa L峰值电流密度明显增加[(-12.77±1.61) pA/pF比(-5.78±0.81) pA/pF,P<0.05];30 nmol/L胺碘酮对人心房肌细胞膜ICa L无明显影响[(-5.58±0.62) pA/pF];但胺碘酮可拮抗AngⅡ的作用,AngⅡ+胺碘酮组的ICa L峰值电流密度[(-7.16±0.82) pA/pF]与AngⅡ组的差异有显著性(P<0.05)。共聚焦显微技术发现,对照组和胺碘酮组人心房肌细胞内荧光强度和荧光吸光度值较低;加入AngⅡ后即刻,细胞内荧光吸光度值开始增加,15 min后细胞内荧光强度和荧光吸光度值明显增高,与对照组比较,差异有显著性(P<0.05);而AngⅡ+胺碘酮组细胞内荧光吸光度值显著低于AngⅡ组(P<0.05)。结论　AngⅡ使人心房肌细胞膜ICa L峰值电流密度明显增加,同时可引起人心     

AngⅡ对人心房肌细胞膜钾通道电流的影响及替米沙坦的拮抗作用

目的: 观察AngⅡ对人心房肌细胞膜钾电流的作用,揭示其参与房性心律失常的电生理机制,为应用AngⅡ受体拮抗剂治疗房性心律失常提供实验基础.方法: 急性分离单个人心房肌细胞,采用全细胞膜片钳方法记录内向整流钾电流(Ik1)、短暂外向钾电流(Ito).实验分4组:对照组,AngⅡ(0.1 μmol/L)组,替米沙坦(0.01 μmol/L)组,AngⅡ 替米沙坦组.结果: 与对照组相比,0.1 μmol/L AngⅡ使人心房肌细胞膜Ito峰值电流密度明显下降(pA/pF, 6.55±0.52 vs 12.65±1.06,P＜0.01), 在-100mV电压下使IK1 峰值电流密度显著升高 (pA/pF, -9.31±1.02 vs -5.23±0.98, P<0.01).0.01 μmol/L替米沙坦对人心房肌细胞膜Ito IK1无明显影响,但可拮抗AngII的作用;AngⅡ 替米沙坦组的Ito峰值电流密度 (pA/pF,11.74±1.28 )和IK1 峰值电流密度(pA/pF, -6.13±1.15) 与AngⅡ组相比有显著差别(P＜0.01).结论: AngⅡ对人心房肌细胞具有明显的电生理学作用,0.1 μmol/L AngⅡ可促进人心房肌细胞膜IK1并抑制Ito,替米沙坦可拮抗AngⅡ对人心房肌细胞膜钾电流的作用.     

血管紧张素Ⅱ及替米沙坦对大鼠心房肌细胞钾和钙电流的影响

目的研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和替米沙坦对SD大鼠心房肌细胞瞬时外向钾电流(Ito)和L型钙电流(ICa-L)的作用。方法急性酶解法分离SD大鼠心房肌细胞,采用全细胞膜片钳技术,观察AngⅡ、替米沙坦以及AngⅡ联合替米沙坦对大鼠心房肌细胞Ito和ICa-L的影响。结果 AngⅡ(0.1μmol/L)和替米沙坦(0.01μmol/L)以及两药联合均能抑制大鼠心房肌细胞Ito,AngⅡ组、替米沙坦组、联合组干预前后Ito的电流密度值比较差异有统计学意义[(22.48±2.75)vs(15.71±2.06)pA/pF,(24.16±2.36)vs(16.15±1.82)pA/pF,(24.41±2.27)vs(21.35±1.46)pA/pF,P<0.05]。AngⅡ(0.1μmol/L)能显著增强大鼠心房肌细胞ICa-L的峰值电流密度[(-4.51±0.38)vs(-5.16±0.29)pA/pF,P<0.01];替米沙坦(0.01μmol/L)对心房肌细胞ICa-L无明显作用[(-4.35±0.27)vs(-4.29±0.34)pA/pF,P>0.05],但联合组中替米沙坦可拮抗AngⅡ对ICa-L的增强效...     

AngⅡ对大鼠肝脏星状细胞内 [Ca2+]i及其增殖的影响

目的观察不同浓度血管紧张奏Ⅱ(Ang Ⅱ)对大鼠肝脏星状细胞(HSC) [Ca2+]i及其增殖的影响,以探讨HSC和细胞内 [Ca2+]i的相关性. 方法HSC分离培养后,采有MTT法和Fura-2/AM荧光指示剂负载分别测定HSC增殖情况及细胞内 [Ca2+]i. 结果10-9 ～10-5mol/L Ang Ⅱ能显著增加HSC内游离 [Ca2+]i(P＜ 0.01),且呈剂量依赖关系;10-9 ～10-6mol/L Ang Ⅱ均能促进HSC增殖(P＜0.05),但10-5mol/L Ang Ⅱ却对HSC增殖无显著影响(P＞0.05). 结论在一定剂量范围内Ang Ⅱ能够剂量依赖性地促进HSC增殖和增加HSC内游离 [Ca2+]i,二者存在一定相关性.     

心肌梗死后心室肌细胞内钙离子浓度变化及比索洛尔对其的影响

目的　观察心肌梗死 (MI)后应用比索洛尔的保护作用与心室肌细胞内钙离子 ([Ca2 +]i)的关系 .方法　建立兔MI模型 ,采用钙敏感性荧光探针 Fluo- 3为 [Ca2 +]i 指示剂 ,应用激光扫描共聚焦技术测定 MI后急性分离的非梗死区心室肌 [Ca2 +]i 及比索洛尔对其影响 .结果　对细胞负载 Fluo-3/AM后的细胞内游离 Ca2 +图像观察发现 ,MI心室肌细胞荧光强度、密度明显强于 Sham组及 β- B组 (P<0 .0 0 1及 P<0 .0 5 ) .Sham组、MI组及 β- B组心室肌细胞的平均荧光强度分别为 2 93± 72 ,6 70± 131,40 2± 92 .结论　 MI后非梗死心室肌细胞内 Ca2 +超载 ,比索洛尔治疗 3wk可减轻心室肌细胞内 Ca2 +超载 .     

吡那地尔对低氧/复氧乳鼠心肌细胞内游离钙浓度的影响

目的 :研究低氧 /复氧 (H/R)对心肌细胞内Ca2 浓度 ([Ca2 ]i)的影响以及吡那地尔 (Pinacidil)减轻H/R过程中钙超载的作用。　方法 :采用新生SD大鼠进行心肌细胞培养 ,建立心肌细胞H/R模型。实验分 :①正常对照组 ;②H/R组 :细胞低氧 30min/复氧 30min ;③吡那地尔组 :先加入终浓度为 2 5 μmol/L的吡那地尔 ,再行低氧 30min/复氧 30min。以Fluo 3/AM荧光指示剂负载 ,应用激光共聚焦显微镜技术检测心肌细胞 [Ca2 ]i变化。　结果 :对照组心肌细胞 [Ca2 ]i荧光强度和荧光光密度值较低。低氧 30min后复氧即刻 ,[Ca2 ]i荧光光密度值开始增加 ,复氧 30min后 [Ca2 ]i荧光强度和荧光光密度值显著增高 (与对照组相比 ,P <0 .0 1 )。而吡那地尔组细胞内荧光光密度值较H/R组显著降低 (P <0 .0 1 )。　结论 :心肌细胞H/R导致钙超载 ;而吡那地尔有明显减轻心肌细胞H/R时Ca2 超载的作用     

牛磺酸对低氧-复氧乳鼠心肌细胞内游离钙浓度的影响

目的:研究低氧-复氧对心肌细胞内Ca2+浓度([Ca2+]I)的影响,以及牛磺酸减轻模拟心肌缺血-再灌过程中钙超载的作用. 方法: 采用SD大鼠乳鼠进行心肌细胞培养,建立模拟心肌缺血-再灌注模型. 实验分3组:①正常对照组;②模拟缺血-再灌注组:细胞低氧30 min-复氧30 min; ③牛磺酸+缺血-再灌组:先加入终浓度为20 mmol*L-1的牛磺酸,再行低氧30 min-复氧30 min. 以Fluo-3/AM荧光指示剂负载, 应用激光共聚焦显微镜技术检测心肌细胞 [Ca2+]I变化. 结果: 对照组心肌细胞[Ca2+]I荧光强度(650±41) U和荧光光密度较低. 低氧30 min后复氧即刻,[Ca2+]I荧光强度开始增加,复氧30 min后[Ca2+]I荧光强度(2537±187) U和光密度显著增高(P<0.01 vs对照组). 而牛磺酸组细胞内荧光强度和光密度较模拟缺血-再灌组显著降低[(895±50) U vs (2537±187) U, P<0.01]. 结论: 心肌细胞低氧-复氧导致钙超载;而牛磺酸有明显减轻心肌细胞低氧-复氧时Ca2+超载的作用.     

新生大鼠原代心房肌细胞钙超载模型的建立

目的 探讨建立新生大鼠原代心房肌细胞钙超载模型的方法 .方法 用消化法分离新生大鼠心房肌细胞并进行原代培养.纯化后随机分为对照组(C组)、实验组(E1、E2、E3组),依次加入不同浓度(0.5、1.0、2.0 μmol/L)伊屋诺霉素(ionomycin),以钙离子指示剂Fluo-3/AM负载心房肌细胞,激光扫描共聚焦显微镜检测心房肌细胞游离钙离子浓度([Ca2+]i),建立新生大鼠心房肌细胞不同程度钙超载模型.结果 (1)培养至第4天,细胞生长密度可以达到瓶底70%左右;免疫组织化学染色鉴定:90%以上培养细胞α-肌动蛋白抗体染色呈阳性;(2)对照组心房肌细胞活性率为(73.00±2.37)%,与各实验组心房肌细胞活性率比较,差异无统计学意义(P>0.05);(3)经不同浓度ionomycin处理l h后,各实验组心房肌细胞[Ca2+]i明显增高,与对照组比较,差异有统计学意义(431.54±20.97、705.87±28.34、1 305.05±53.69 vs 257.08±18.63,P<0.05),且各实验组间心房肌细胞[Ca2+]i水平随ionomycin浓度的增加而上升,实验组间比较,差异有统计学意义(P<0.05).光镜下形态学观察表明,随ionomycin浓度的增加,荧光强度逐渐加强,呈浓度依赖性.结论 应用钙离子载体ionomycin能够建立可靠的心房肌细胞钙超载模型.     

丙泊酚对人子宫平滑肌细胞Ca2+跨膜内流和肌浆网钙释放功能的影响

目的观察丙泊酚对足月产妇子宫平滑肌细胞Ca2+跨膜内流和肌浆网Ca2+释放功能的影响,探讨其抑制子宫平滑肌收缩功能的可能机制。方法取正常孕足月待产的子宫平滑肌组织,胶原酶消化法培养子宫平滑肌细胞。①40个孔板中活性良好的子宫平滑肌细胞随机等分为4组(n=10):对照组(C组)、低浓度丙泊酚组(P1组)、中浓度丙泊酚组(P2组)、高浓度丙泊酚组(P3组),用Fluo-3AM钙荧光指示剂染色后,分别给予Hank液、10μmol/L丙泊酚(终浓度)、50μmol/L丙泊酚、250μmol/L丙泊酚处理20 min,然后加入40 mmol/L氯化钾,每个孔板在激光共聚焦显微镜下随机选定10个子宫平滑肌细胞,利用图形分析软件分析细胞内钙荧光强度,取钙荧光强度峰值的平均值反映子宫平滑肌细胞游离Ca2+浓度([Ca2+]i)。②再以20 mmol/L咖啡因代替氯化钾,其余处理及分组同前。结果①与基础值比较,各组加入丙泊酚后子宫平滑肌细胞[Ca2+]i差异无统计学意义(P>0.05),加入氯化钾后[Ca2+]i均升高(P<0.01);与C组相比,加入氯化钾后P1组子宫平滑肌细胞[Ca2+]i差异无统计学意义(P>0.05),P2组和P3组加入氯化钾后[Ca2+]i明显低于C组(均P<0.01),且P3组[Ca2+]i低于P2组(P<0.05)。②与基础值比较,各组加入丙泊酚后子宫平滑肌细胞[Ca2+]i差异无统计学意义(均P>0.05),加入咖啡因后[Ca2+]i升高(P<0.01);加入咖啡因后各组子宫平滑肌细胞[Ca2+]i差异无统计学意义(P>0.05)。结论丙泊酚可浓度依赖性地抑制足月产妇子宫平滑肌细胞电压依赖型钙通道开放而减少Ca2+跨膜内流,而对肌浆网Ryanodine型Ca2+释放功能无明显影响。     

替米沙坦对血管紧张素Ⅱ所致血管内皮细胞游离钙离子的抑制作用

目的探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对细胞钙库的应激效应及替米沙坦对此的拮抗作用。方法预防性实验分组:正常对照组、AngⅡ0.1μmol/L组和替米沙坦60、300、1000μg/L预处理组;治疗性实验分组:正常对照组、AngⅡ0.1μmol/L组和AngⅡ+替米沙坦60、300、1000μg/L组。分别检测各组试验前胞内钙离子浓度,记为0 h。体外培养的人大动脉血管内皮细胞预防性给予替米沙坦60、300、1000μg/L培育30 min后,加入AngⅡ0.1μmol/L;或AngⅡ0.1μmol/L培育30 min后,再加入替米沙坦60、300、1000μg/L,分别于共同作用0.5、2、8和24 h采用激光共聚焦扫描显微镜成像法检测胞浆游离钙离子浓度。结果预防性实验:与正常对照组相比,替米沙坦60、300、1000μg/L作用细胞30 min对胞浆游离钙离子浓度无明显影响,加入AngⅡ0.1μmol/L后,胞浆游离钙离子浓度立即(0 h)显著升高,均显著高于正常对照组(P<0.05),但显著低于AngⅡ组,并且替米沙坦预处理浓度越高抑制作用越强(P<0.05),作用时间对此无影响。治疗性实验:AngⅡ0.1μmol/L先诱导30 min后,再加入替米沙坦60μg/L对升高的胞浆游离钙离子浓度无抑制作用;替米沙坦300μg/L作用2 h或替米沙坦1000μg/L作用0.5 h才显示其抑制作用(P<0.05),但均显著高于同一时间点的正常对照组。替米沙坦的作用时间对此无影响。结论 AngⅡ能诱导内质网钙库向胞浆释放游离钙离子,而替米沙坦能有效拮抗AngⅡ对内质网的应激作用及促使胞浆游离钙离子重新被内质网重吸收。预防性给予替米沙坦的拮抗作用较治疗性给予的拮抗作用显著。     

新型AT_1受体拮抗剂化合物Ib对血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的:研究新型AT1受体拮抗剂化合物Ib对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的抑制作用。方法:采用MTT法和3H-TdR掺入法测定AngⅡ促进VSMCs增殖作用;采用放射性受体配体分析法测定化合物Ib对VSMCs表面AT1受体的作用;用激光共聚焦显微镜观察化合物Ib对AngⅡ诱导的[Ca2+]i升高的拮抗作用。结果:化合物Ib(0.1,0.5,2.5μmol/L)显著抑制AngⅡ诱导的VSMCs增殖作用;化合物Ib剂量相关性的抑制125I-AngⅡ与VSMCs上AT1受体的结合,IC50为0.96nmol/L;化合物Ib(0.1,0.5,2.5μmol/L)对AngⅡ诱导的[Ca2+]i升高有显著的抑制作用。结论:化合物Ib可以抑制AngⅡ诱导的VSMCs增殖作用,其可能的作用机制是通过拮抗AT1受体,进而抑制AngⅡ诱导的[Ca2+]i升高效应。     

依托咪酯对过氧化氢损伤PC12细胞株的保护作用

目的 研究依托咪酯对过氧化氢损伤神经元样嗜铬细胞瘤细胞株(PC12)的游离Ca2+作用.方法 PC12细胞株接种于6孔细胞培养板,随机分为损伤组(I组)和依托咪酯3 μmol/L组(E1组)、6 μmol/L组(E2组)和15 μmol/L组(E3组).分别加入含标记Ca2+ 的荧光染色剂Fluo3 10 μmol/L的培养基,37 ℃孵育30 min,置入激光共聚焦显微镜扫描仪连续扫描,并于开始连续扫描2次后加入100 μmol/L H2O2,动态观察各组细胞内游离Ca2+浓度([Ca2+]i)的变化.结果 I组加入H2O2后,90%的细胞立即有反应,细胞[Ca2+]i荧光密度即开始增高(P<0.05),并在10 s后呈现明显变化(P<0.01), 80 s达到峰值并呈持续稳定状态.依托咪酯各浓度组在加入H2O2后约10%细胞有反应,但其细胞[Ca2+]i荧光密度呈现平稳波动.E1和E2组在50 s后,细胞[Ca2+]i荧光密度开始下降(P<0.05),但不呈继续降低趋势.结论 依托咪酯通过抑制H2O2损伤引起的神经细胞内[Ca2+]i持续增高,而发挥其神经保护作用.     

舒缩血管物质对肺动脉平滑肌细胞膜电位、胞浆及线体Ca2+的作用效应

目的:观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和一氧化氮(NO)对肺动脉平滑肌细胞膜电位、胞浆钙离子浓度([Ca2+]i)和线粒体钙离子浓度([Ca2+] mit)的影响.方法:肺动脉平滑肌细胞(pulmonary arterysmooth muscle cells,PASMCs)分别负载相应的荧光探针:胞浆钙荧光指示剂(Fluo - 4/AM)、细胞膜荧光指示剂(Di -8 - ANEPPS)、细胞线粒体钙荧光指示剂(Rhod -5F),然后给予一定浓度的血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和一氧化氮(NO),在激光共聚焦扫描显微镜下,测定[Ca2+]i荧光、细胞膜电位、[Ca2+] mit荧光.结果:AngⅡ基本不影响细胞膜电位,但可一过性引起[Ca2+]i升高,这种[Ca2+]i的升高可导致[Ca2+]mit小幅升高,进而启动线粒体钙离子的释放和[Ca2+] mit的大幅度降低;NO可迅速减弱PASMCs膜电位荧光强度,使细胞处于明显的超极化状态,同时,[Ca2+]i迅速下降,300s时达到最低,并维持在这一水平,[Ca2+]mit也迅速降低,形成低谷平台后迅速回升,并基本稳定于、稍低于初始值的水平.结论:AngⅡ收缩血管可能与线粒体钙释放和[Ca2+] mit的大幅降低有关;NO舒张血管可能与细胞超极化、[Ca2+]i、[Ca2+] mit降低有关.     

内皮素—1对大鼠心肌细胞正性肌力作用的研究

目的探讨内皮素-1(ET-1)对大鼠心肌细胞正性肌力作用的细胞内机制.方法将离子敏感性荧光指示剂indo-1和SNARF-1载入大鼠心室肌细胞内,荧光显微镜法同时测定细胞内Ca2+浓度([Ca2+]i)、pH(pHi)和细胞长度.结果在17例大鼠心肌细胞中,只有8例对灌注ET-1表现出明显的细胞缩短反应,即正性肌力作用,占47%,另9例对灌注ET-1没有反应.ET-1100nmol/L可使细胞缩短的幅度增加至给药前的(202.85±28.13)%,P＜0.01;[Ca2+]i瞬间变化的幅度增加至给药前的(132.06±10.93)%,P＜0.05;pHi与对照组相比轻度增加.结论ET-1可直接作用于大鼠心室肌细胞引起正性肌力作用,其作用机制是增加了[Ca2+]i瞬间变化,而不是明显增加了PHi.     

风湿性心脏病心房纤颤和非心房纤颤患者心房肌细胞内钙离子浓度变化

目的　观察风湿性心脏病 (RHD)心房纤颤 (AF)患者心房肌细胞内是否存在 Ca2 + 超载 .方法　急性分离 RHD伴 AF和非 AF患者的心房肌细胞 ,用 Fluo- 3作为钙指示剂 ,用共聚焦显微镜测定细胞内 Ca2 +浓度 .结果　 AF组心房肌细胞内 Ca2 +浓度明显高于非 AF组心房肌细胞内 Ca2 +浓度(5 17± 98) nmol· L- 1 vs(2 6 2± 6 5 ) nmol· L- 1 ,两组间差异显著 (P<0 .0 1) .结论　 RHD伴 AF患者心房肌细胞内存在Ca2 +超载     

钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ抑制剂对新生大鼠心房肌细胞钙超载的干预作用

目的 观察钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(calcium/calmodulin-dependent protein kinaseⅡ, CaMK Ⅱ)抑制剂KN93对新生大鼠心房肌细胞钙负荷的影响,并对细胞CaMK Ⅱ的表达变化进行检测. 方法 新生大鼠心房肌细胞原代培养96 h,应用钙离子导入剂ionomycin(1.0 μmol/L)建立心房肌细胞钙超载模型,并在KN93 3种浓度(0.25、0.5、1.0 μmol/L)的干预下,以钙离子指示剂Fluo-3 /AM负载心房肌细胞,激光共聚焦显微镜观察心房肌细胞内游离钙的变化;应用Western blot法检测CaMK Ⅱ表达的变化. 结果 ①细胞培养至第4天,免疫组织化学染色90%以上细胞α-肌动蛋白抗体阳性.②与对照组比较,钙离子导入剂ionomycin明显增加细胞内钙离子荧光值[(660.16±108.47) vs (376.12±57.57),P＜0.01];KN93对细胞内钙离子荧光值无明显影响(P＞0.05).③预先加入3种不同浓度KN93可显著降低ionomycin导致的细胞内钙离子荧光强度的增加幅度(P<0.01),与对照组比较差异也有统计学意义(P＜0.01).④钙超载组细胞CaMK Ⅱ表达较对照组明显增加(P<0.01);而KN93对细胞CaMK Ⅱ表达影响不明显.⑤不同浓度KN93预处理后,钙超载组细胞CaMK Ⅱ的表达显著降低(P<0.01). 结论 CaMK Ⅱ抑制剂KN93可降低ionomycin引发的大鼠心房肌细胞钙负荷,并下调细胞CaMK Ⅱ表达.     

雌三醇对人结肠癌细胞增殖的影响及其机理探讨

目的探讨雌三醇(E3)对人结肠癌细胞增殖的影响及其机理.方法采用钙离子荧光指示剂flour-3/Am,流式细胞仪动态检测E3作用后,人结肠癌细胞内游离钙离子[Ca2+]i水平的变化,同时用MTT比色法测定细胞增殖情况.结果①E3使细胞内[Ca2+]i水平在1分钟内下降,以后维持在一个较低水平(27.88nmol/L),与静息状态细胞内[Ca2+]i水平(94.4nmol/L)相比有显著性差异(P＜0.05).②E3对癌细胞有促增殖作用,其浓度对数值与细胞增殖率呈显著性正相关(r=0.975,P＜o.05),其中1×10-5mmol/L浓度的E3促增殖作用最大.结论E3有促人结肠癌细胞增殖作用,但不引起细胞内[Ca2+]i水平升高.E3的促癌细胞增殖作用未见与经钙离子通道引起的非基因的快速调节作用有关,推测是基因调节作用的结果.     

慢性心房颤动对人心房肌钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ表达的影响

目的探讨慢性心房颤动对人心房肌细胞内游离Ca2 浓度、心房肌组织钙调蛋白(calmodulin,CaM)及钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(calmodulin dependent protein kinaseⅡ,CaMKⅡ)表达的影响。方法用激光共聚焦显微镜技术,对急性分离的慢性风湿性心脏病伴慢性房颤或窦性心律患者的心房肌细胞内游离Ca2 浓度进行测定,同时用West-ern blot法检测心房肌组织CaM及CaMKⅡ表达的变化。结果慢性风湿性心脏病伴慢性房颤患者心房肌细胞内游离Ca2 浓度显著高于窦性心律患者[(276.38±38.12)nmol/Lvs(122.28±45.63)nmol/L,(P<0.05)]。慢性风湿性心脏病伴慢性房颤患者心房肌CaM及CaMKⅡ的表达明显强于窦性心律患者。结论慢性房颤患者心房肌细胞内存在钙超载,Ca2 /CaMKⅡ通路可能是慢性房颤心房肌的信号转导途径之一。     

吡哆胺和替米沙坦对血管紧张素II诱导的大鼠心肌细胞氧化应激的影响

 目的 探讨吡哆胺和替米沙坦对血管紧张素II诱导的大鼠心肌细胞氧化应激的影响。方法 大鼠心肌细胞培养并随机分为正常对照组【C组】,血管紧张素Ⅱ组【10-6mol/L,AngⅡ组】,吡哆胺组【吡哆胺（10 mmol/L）+ AngⅡ（ 10-6mol/L）,P组】,替米沙坦组【替米沙坦（10-6mol/L）+ AngⅡ （10-6mol/L）,T组】,联合治疗组【替米沙坦（10-6mol/L)＋吡哆胺（10 mmol/L）+ AngⅡ（ 10-6mol/L）,TP组】。 流式细胞仪检测细胞上清液中的活性氧簇（ROS）浓度,硫代巴比妥酸法（TBA）测定丙二醛（MDA）浓度,黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物岐化酶（SOD）活力,荧光实时定量PCR方法检测心肌细胞所表达的晚期糖基化终产物受体（RAGE）mRNA表达量。 结果 与AngⅡ组比较,T组、P组及TP组MDA、ROS浓度均显著降低、SOD活力显著升高（P<0.05）;与T组比较,P组、TP组的ROS浓度明显降低、SOD活力明显升高（P<0.05）;与AngⅡ组比较,T组、P组和TP组RAGE mRNA表达量明显降低（P<0.01）;与T组、P组比较,TP组的RAGE mRNA表达进一步降低（P<0.05）。结论 吡哆胺和替米沙坦协同下调大鼠心肌细胞RAGE mRNA的表达,二者均可改善氧化应激,但吡哆胺较替米沙坦强。     

异丙酚对氯化钾和咖啡因诱发豚鼠耳蜗外毛细胞钙离子移动的影响

目的:评价异丙酚对氯化钾和咖啡因诱发豚鼠耳蜗外毛细胞钙离子移动的影响,探讨其对听觉外周感受器(耳蜗)的作用。方法:急性分离豚鼠耳蜗外毛细胞,选择30个活力较高的外毛细胞,随机分为3组(n=10):对照组(C组)、30μmol/L异丙酚组(P1组)和100μmol/L异丙酚组(P2组)。用Fluo-3AM钙荧光指示剂染色后,P1组和P2组分别给予30、100μmol/L异丙酚或咖啡因处理5min,然后加入氯化钾,采用激光共聚焦显微镜测定细胞内荧光强度的峰值,反映细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)的变化。结果:异丙酚可抑制氯化钾诱发的[Ca2+]i增加并与浓度呈正相关,而对咖啡因诱发的[Ca2+]i增加无明显影响。结论:异丙酚可抑制豚鼠耳蜗外毛细胞Ca2+跨膜内流,降低[Ca2+]i,而对内质网功能无明显影响。