CTLA4-Ig腺病毒基因局部转染诱导大鼠肾移植免疫耐受

目的通过CTLA4-Ig腺病毒基因治疗诱导异基因大鼠之间的肾脏移植免疫耐受,并探讨相关机制。方法以CTLA4-Ig基因重组腺病毒为载体,将CTLA4-Ig基因局部转染入SD大鼠肾脏。将SD对Wistar大鼠原位肾移植模型分为三组:组Ⅰ为空白对照组;组Ⅱ为EGFP空载体对照组;组Ⅲ为CTLA4-Ig基因转染组。观察大鼠存活时间及肾功能变化。结果组Ⅰ移植肾存活时间8.17±1.17d;组Ⅱ移植肾存活时间8.00±1.55d;组Ⅲ存活时间31.33±6.77d。组Ⅲ存活时间明显延长。转染组术后血清肌酐较同期对照组为低。结论CTLA4-Ig基因局部转染供肾的基因治疗,可诱导异基因大鼠间的肾脏移植免疫耐受,延长肾脏移植物存活时间。     

腺病毒介导CTLA4-FasL基因转移诱导大鼠心脏移植物长期存活的作用

目的　探讨腺病毒介导细胞毒T淋巴细胞相关抗原 (CTLA4 ) FasL基因转移延长异基因大鼠心脏移植物存活的作用及其相关机制。方法　供体DA大鼠心脏移植给受体LEW大鼠后 ,经门静脉注入 5× 10 9空斑形成单位 /毫升 (pfu/ml)CTLA4 FasL腺病毒 (AdCTLA4 FasL) ;随后 ,通过每天触摸受体大鼠腹壁 ,记录心脏移植物存活时间。受体大鼠尾静脉取血 ,用酶联免疫吸附法(ELISA)测定CTLA4 FasL融合蛋白的体内表达 ;通过过继性转移试验、混合淋巴细胞反应 (MLR)及白细胞介素 (IL) 2逆转实验、细胞毒T细胞 (CTL)活性测定、辅助性T淋巴细胞前体 (HTLp)和细胞毒T淋巴细胞前体 (CTLp)频数测定及辅助性T细胞 (TH) 1/ 2型细胞因子检测 ,探讨耐受机制。结果　经AdCTLA4 FasL处理的受体大鼠 ,异基因心脏移植物平均存活时间达 (71 0± 2 3 7)d(n =6 ) ,而对照的未处理组、绿色荧光蛋白 (EGFP)腺病毒处理组和细胞毒T淋巴细胞相关抗原 4免疫球蛋白 (CTLA4Ig)腺病毒处理组平均存活时间分别为 (5 7± 0 5 )d(n =6 )、(5 2± 0 4 )d(n =6 )和 (4 5 7± 12 4 )d(n =6 ) ,差异具有显著意义 (均P <0 0 5 )。心脏移植物长期存活的受体大鼠对供体抗原的低应答可以被过继转移 ;MLR活性特异性降低 ,且不被外源性IL 2逆转 ;CTL活     

腺病毒介导CTLA-4Ig基因转染对大鼠移植肾存活的影响

目的　探讨CTLA 4Ig基因重组腺病毒 (AdvCTLA 4Ig)有效转染大鼠肾脏的方法并初步观察该基因转染对移植肾存活的影响。方法　AdvCTLA 4Ig对大鼠肾脏分别转染 3h ,包括 :4℃下转染 (A组 )、经肾动脉注射在体转染 (B组 )、阻断肝脏血流以及肾血管以下躯体血流后经肾动脉注射在体转染 (C组 )以及对照 ;以免疫荧光法检测基因转染效率 ;以转染效率最高组肾脏行同种移植 ,未转染组为对照 ,观察移植肾存活时间。结果　A组、B组以及对照组肾脏内未见荧光显示 ,C组肾小管显示阳性荧光 ,肾小球内未见荧光显示 ;各组肾脏光镜下结构正常 ;转染组移植肾存活时间较对照组明显延长 ( 2 6 6± 6 9)dvs ( 8 1± 1 60 )d ,P <0 0 1。结论　高滴度CTLA 4Ig基因重组腺病毒可使在体肾脏中肾小管获得有效转染 ;该基因转染的肾脏移植后存活时间明显延长     

CTLA4Ig腺病毒基因治疗诱导异基因大鼠心脏移植耐受

目的: 通过CTLA4Ig腺病毒基因治疗诱导异基因大鼠之间的心脏移植耐受,并探讨相关机制.方法: 将异基因DA大鼠的心脏移植给受体LEW大鼠,同时经门静脉输注CTLA4Ig腺病毒(1×109～5×109 pfu*ml-1).通过RT-PCR检测CTLA4Ig的体内表达,观察记录心脏移植物的存活时间,通过MLR、IL-2逆转实验,Th1/Th2型细胞因子表达的检测,研究耐受的机制.结果:用LacZ腺病毒载体(AdLacZ)治疗组,不能延长移植物的存活,用CTLA4Ig腺病毒基因治疗组,DA大鼠的心脏移植物明显延长.RT-PCR实验证明,CTLA4Ig基因在受体内不同的组织表达量有所不同,并且随着时间的推移表达下降.Th1和Th2型细胞因子的检测显示,耐受大鼠体内未发现这两类细胞因子的偏移现象.MLR证明耐受大鼠的免疫应答表现为供体特异性,IL-2逆转实验表明,该耐受与克隆失活有关.结论: 在手术中给予CTLA4Ig腺病毒进行基因治疗,可诱导异基因大鼠间的心脏移植耐受,延长心脏移植物存活,该移植耐受表现为供体特异性,其形成与克隆失活有关,未发现Th1/Th2型细胞因子的偏移现象.     

腺病毒介导的CTLA4Ig和OX40Ig基因转移诱导大鼠心脏移植物长期存活的作用

目的探讨腺病毒介导CTLA4Ig和OX40Ig基因转移延长异基因大鼠心脏移植物存活时间的作用及其相关机制。方法将Lewis大鼠随机分为5组对照组、空载病毒AdEGFP处理组、AdCTLA4Ig处理组、AdOX40Ig处理组和AdCTLA4Ig-IRES-OX40Ig处理组。在心脏移植的同时,对照组不予其他处理,其他各组分别经尾静脉注射(1~5)×109pfu/ml AdEGFP、AdCTLA4Ig、AdOX40Ig、AdCTLA4Ig-IRES-OX40Ig进行耐受诱导,每天观察心脏移植物的存活情况,完全停跳的心脏经组织学证实后定为排斥。ELISA法测定目的基因的表达水平。混合淋巴细胞反应、过继转移实验、IL-2逆转实验和RT-PCR检测研究其诱导耐受的机制。结果心脏移植物的平均存活时间AdCTLA4Ig-IRES-OX40Ig处理组(151.5d±42.8d),AdCTLA4Ig处理组(43.2d±11.1d),AdOX40Ig处理组(60.2d±11.4d)与对照组(5.7d±0.5d)和空载病毒AdEGFP处理组(5.2d±0.4d)比较明显延长(P均<0.01),并且AdCTLA4Ig-IRES-OX40Ig处理组在延长移植物存活时间上明显优于AdCTLA4Ig和AdOX40Ig处理组(P均<0.01)。耐受Lewis大鼠脾细胞对供体DA大鼠脾细胞表现为低应答,并且该低应答状态能够被外源性白细胞介素-2(IL-2)部分逆转。过继转移结果说明该低应答状态能够转移给同系正常Lewis大鼠。在耐受大鼠体内发生了Th1/Th2型细胞因子偏移。结论AdCTLA4Ig-IRES-OX40Ig介导的基因转移能够在大鼠体内长期高效表达,并诱导异基因心脏移植物长期存活,其机制可能与T细胞无能、Th1/Th2型细胞因子偏移及其调节性T细胞等有关。     

CTLA4Ig基因表达对鼠皮肤移植免疫抑制作用的研究

目的　探讨静脉注射CTLA4Ig腺病毒后在大鼠体内的表达和对同种异体移植皮肤存活的影响 ,以及该载体应用的安全性 ,为该基因治疗方法在抑制器官移植排斥反应的临床应用奠定基础。方法　供体SD大鼠皮肤移植前 1周 ,用腺病毒作载体将CTLA4Ig导入Wistar大鼠体内 ,用蛋白质斑点印迹实验检测血清中CTLA4Ig的表达 ,用腺病毒荧光抗体检测腺病毒在脏器的分布。同时还观测了各脏器的病理改变及移植物生存时间。结果　CTLA4Ig腺病毒在肝、脾、心、肺、肾均有明显分布 ,但实质细胞均未见严重损伤性改变。CTLA4Ig基因能在血清中的表达高峰时间一般在 7d左右 ,移植皮肤的生存显著长于对照组 (P <0 .0 5 )。结论　从静脉注射导入的CTLA4Ig基因能在大鼠体内表达并对同种移植的排斥反应有明显的抑制作用。     

基因转移CTLA4Ig和CD40LIg在大鼠异种胰岛移植排斥反应中的作用

目的 探讨基因转移细胞毒性T细胞相关抗原4免疫球蛋白（CTLA4-Ig）和T细胞分化群40L免疫球蛋白（CD40L-Ig）在异种胰岛移植排斥反应中的作用及其机理。方法 建立大鼠-小鼠异种胰岛移植模型,用携带CTLA4-Ig和CD40L-Ig基因的重组腺病毒感染移植胰岛细胞,观察糖尿病小鼠胰岛移植后血糖变化、生存情况及移植物病理形态学改变,检测移植物CTLA4-Ig、CD40L-Ig、胰岛素的表达和移植小鼠白细胞介素2（IL-2）、肿瘤坏死因子（TNF-α）的水平变化。结果 （1）糖尿病小鼠移植后2 d血糖降至正常,对照组(A)血糖平均在移植后8 d升高,CTLA4Ig转染组(B)、CD40LIg转染组(C)和联合转染组(D)血糖分别在24、21和68 d升高。（2）对照组、CTLA4Ig转染组、CD40LIg转染组和联合转染组的移植物存活时间分别为(8.2±0.9) d,(28.7±4.0) d,(26.6±3.2) d 和 (73.6±9.8) d,联合转染组较对照组、CTLA4Ig转染组和CD40LIg转染组显著延长（P<0.01）;CTLA4Ig转染组和CD40LIg转染组较对照组显著显著延长（P<0.01）。（3）对照组在移植后1周内,IL-2、TNF-α的水平均急剧上升,较移植前显著升高（P < 0.01）。（4） 各治疗组移植物见成片的胰岛细胞团,未见淋巴细胞浸润,可见胰岛素、CTLA4Ig和CD40LIg的表达。结论 基因转移CTLA4-Ig和CTLA4-Ig均可抑制异种胰岛移植排斥反应,二者联合效果优于单独使用。     

创面局部应用CTLA4Ig重组腺病毒延长异体皮移植存活期的临床应用

目的　观察创面局部应用CTLA4Ig重组腺病毒延长异体皮存活期的临床效果。方法　 12例大面积烧伤切痂创面应用CTLA4Ig重组腺病毒自体微粒皮和异体皮移植。临床观察异体皮存活时间、微粒皮封闭创面情况、用EP Ⅰ型水蒸仪测定创面水分蒸发量及组织学观察。结果　创面应用CTLA4Ig重组腺病毒能显著延长异体皮移植物的成活期 [对照组 ( 16.9± 3 .7)d ,实验组 ( 2 5 .6± 5 .5 )d] ,淋巴细胞浸润较少 ,自体微粒皮移植创面愈合率明显增高 ;实验部位水分蒸发量保持较低水平 ,而对照部位于术后 9d逐渐升高。结论　局部应用CTLA4Ig 重组腺病毒是一种有效延长烧伤创面异基因移植皮肤存活期的方法。     

联合阻断CD28和ICOS对移植胰岛功能影响的实验研究

目的:探讨CTLA-4Ig及可溶性B7RP-1融合蛋白联合阻断CD28和ICOS对移植胰岛功能的影响。方法:在异种胰岛移植模型的基础上48只实验动物随机分成4组,每组12只,供体为SD大鼠,受体为近交系昆明小鼠。联合处理组(A组):分别于移植后0、2、4d和1、3、5d腹腔内注射CTLA-4Ig和可溶性B7RP-1融合蛋白组;可溶性B7RP-1融合蛋白处理组(B组):移植后1、3、5d腹腔内注射可溶性B7RP-1融合蛋白组;CTLA-4Ig处理组(C组):移植后0、2、4d腹腔内注射CTLA-4Ig组;对照组(D组):单纯胰岛移植,不做CTLA-4Ig和可溶性B7RP-1融合蛋白处理组。通过观察大鼠胰岛移植后移植物存活时间和移植胰岛病理改变,并用RT-PCR方法检测IL-2和IL-10在移植组织中的表达情况。结果:联合处理组大鼠移植胰岛存活时间较对照组及CTLA-4Ig处理组和可溶性B7RP-1融合蛋白组明显延长,移植胰岛光镜检查接近正常,IL-2mRNA表达差异有显著性[(42.55±6.34)%VS(112.55±15.34)%,P<0.01],IL-10mRNA表达差异无显著性[(105.35±15.16)%VS(102.23±16.02)%,P>0.05]。结论:应用CTLA-4Ig+可溶性B7RP-1融合蛋白联合阻断CD28和ICOS,可以明显的抑制排斥反应,提高移植物的存活率。     

共刺激阻断剂与雷帕霉素联合应用对移植肾存活的影响

目的:探讨共刺激阻断剂CTLA4Ig与雷帕霉素(Rapamycin,RPM)联合应用对大鼠移植肾存活的影响.方法:肾移植大鼠分为对照组、CTLA4Ig组、RPM组和CTLA4Ig RPM组,观察术后血肌酐和移植肾病理改变、移植肾存活时间.结果:与对照组相比,CTLA4Ig组、RPM组、CTLA4Ig RPM组移植肾存活时间均显著延长(P＜0.01),其中,CTLA4Ig RPM组移植肾存活时间最长(76.5±17.1d),术后15天、30天该组血肌酐浓度最低;术后30天,仍然存活的CTLA4Ig组移植肾显示较多淋巴细胞浸润,CTLA4Ig RPM组移植肾显示很少淋巴细胞浸润.结论:共刺激阻断剂与雷帕霉素联合应用可有效抑制排斥反应,显著延长大鼠移植肾存活时间.     

麻疹的双相移位研究进展

近年新生儿、婴儿、成人麻疹患者逐年增加,临床表现一般仍较典型,成年人麻疹患者全身中毒症状较重。麻疹抗体检测结果阳性是主要的诊断依据。麻疹发病的双相移位的机理可能是,免疫保护力不足,婴儿出生时麻疹抗体力低。孕期母传胎的麻疹抗体减弱,母经乳汁传给婴儿的抗体减弱,成人麻疹抗体水平逐年下降。预防措施是怀孕前给予育龄妇女麻疹疫苗接种,鼓励母乳喂养,麻疹疫苗计划免疫适当提前,在成人追加麻疹疫苗的免疫,加强病毒变异的研究等。     

尿液pH值对红细胞检验影响的探讨

[目的 ]通过尿液 pH值对红细胞检验影响的观察 ,更加科学、准确地诊断血尿和血红蛋白尿。[方法 ]采用干化学分析仪检测和尿液显微镜红细胞计数 ,观察 180例正常人尿标本加入正常人血标本后 ,不同 pH值 ,不同时间内 ,观察红细胞溶解情况。 [结果 ]pH <5 .5以下时 ,随着时间的延长 ,红细胞溶解现象明显。 1h后观察有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;2h后有非常显著性差异 (P <0 .0 1)。[结论 ]pH <5 .5时对红细胞计数影响较大 ,易致红细胞发生溶解现象 ,出现假性血红蛋白尿 ,对血尿和血红蛋白尿很难区分 ,给临床诊断造成不便 ,更易引起漏诊和误诊。     

醋柳黄酮缓释片的药动学初步研究

目的:研究醋柳黄酮缓释片在家犬体内的药动学过程,测定其药动学参数,计算缓释片相对于普通片的生物利用度。方法:将实验动物分为两组,分别用醋柳黄酮缓释片和普通片进行口服给药,用高效液相色谱法测定血浆药物浓度,应用3P97软件求算药动学参数。结果:醋柳黄酮缓释片及普通片的tm ax分别为4.87 h和2.87 h,Cm ax分别为每小时0.46μg.L-1和每小时0.56μg.L-1,缓释片的相对生物利用度为111.7%。结论:醋柳黄酮缓释片与普通片均符合一室模型,缓释片与普通片具有生物等效性,且醋柳黄酮缓释片有明显的缓释效果。     

主动脉窦瘤破裂的外科治疗

报告２０例主动脉窦瘤破裂修复术的结果。１７例男性，３例女性。年龄７～５６岁。痊愈１９例，另一例因急性肾功能衰竭一周后死亡。作者就发病机理，诊断和合并畸形的处理进行了讨论。     

正常增殖期子宫内膜细胞增生状态的定量观察

以＾３氢－胸腺嘧啶核苷放射自显影法及ＨＥ染色，观察并分别测定了１８例正常子宫内膜增殖中期，１５例增殖晚期的腺上皮细胞或间质细胞的标记指数、分裂指数。结果显示：子宫内膜增殖晚期腺上皮细胞或间质细胞之ＬＩ均明显高于增殖中期。同时，增殖晚间质细胞之ＭＩ也明显高于增殖中期，即此两种细胞在增殖晚期中增生明显，其增生状态初步获得了定位定量测定的正常值。     

腰椎间盘突出症再次手术的原因分析

目的解决腰椎间盘突出症手术中神经压迫。方法对1980～1998年再手术资料进行统计分析,讨论分析再手术原因,再次手术前影像学检查,观察病理变化以确定再手术方法。结果对11例随访6个月～1年,优7例(68．4％),良3例(36．8％),差1例(2．8％)。结论初次手术前详细查体和分析X线片,术中用导尿管和神经剥离探查,尽量避免髓核遗留,手术范围不宜太大,尽量减少对软组织和脊柱结构的破坏,避免形成硬膜囊与神经根粘连而致单纯形疤痕。     

扩张兔皮肤超微结构的变化

目的：动态观察扩张兔皮肤超微结构的变化。方法：选用2--3kg新西兰大白兔64只，分为2大组，快速扩张组和常规扩张组，每组32只，每大组再分为4组，为扩张完成后即时、1周、12周、24周组。每组8只，其中4只为实验组，另4只植入扩张器不扩张作为对照组。透射电子显微镜观察各组皮肤超微结构的变化。结果：表皮扩张后经历--由扩张刺激引起的创伤至完全修复的过程。扩张后即时真皮中成纤维细胞大量增生，功能由静止转向活跃，胶原纤维碎裂成片，弹力纤维部分断裂，炎症细胞浸润；扩张后1周常规扩张组基底膜连续性基本恢复。显示成纤维细胞合成功能活跃。扩张后12周、24周，成纤维细胞趋于稳定、形态狭长，部分胶原排列紊乱，部分有似癜痕样改变。结论：扩张刺激可致兔皮肤创伤。扩张后真皮不可完全修复。     

芹黄素对大鼠缺血视网膜功能恢复的作用

目的观察芹黄素对大鼠缺血视网膜功能恢复的作用。方法30只Long-Evans大鼠用动脉结扎法造成视网膜缺血模型,其中治疗组20只腹腔注射芹黄素,对照组10只注射溶媒二甲基亚酚。用视觉电生理仪检查视网膜功能恢复情况。结果芹黄素治疗组视网膜功能恢复明显好于对照组(P<0.05)。结论芹黄素能促进大鼠缺血视网膜的功能恢复。      

颅咽管瘤切除术后并发症的处理

目的　讨论颅咽管瘤切除术后并发症的处理原则。方法　分析 36例颅咽管瘤切除术后并发症的临床资料。结果　术后并发尿崩症者 14例、高热 11例、电解质紊乱 8例、消化道出血 3例、癫痫 5例 ,死亡2例。结论　颅咽管瘤术后并发症较多 ,加强早期监测和处理 ,可进一步提高该病的治愈率     

上颌骨牙源性囊肿刮除手术的疗效观察

目的探讨对上颌骨牙源性囊肿患者进行囊肿彻底刮除手术的临床疗效。方法对我科在2010年1月～2017年9月收治的73例上颌骨牙源性囊肿患者行囊肿彻底刮除手术治疗,对患者术区肿胀消退、术后伤口感染、伤口愈合、牙龈再附着、术后复发、骨质改建、骨质修复等情况随访观察。结果 73例患者术后肿胀消退时间为1～4 d。73例患者术后均未发生伤口感染,伤口均一期愈合。所有患者牙龈再附着情况好,术后均未见复发。术后未见并发症。骨质改建效果好,骨质修复的效果因影像学资料过少,缺乏客观依据,暂不下有效结论。结论对上颌骨牙源性囊肿患者进行囊肿彻底刮除手术,术后患者的恢复情况良好,值得在临床治疗上进行推广。