23例非小细胞肺癌患者肺癌组织和血浆中EGFR外显子21的基因突变检测

目的证明可以从非小细胞肺癌患者血浆中检测到表皮生长因子受体(epidermal growth factorreceptor,EGFR)突变,且与肿瘤组织的突变情况相一致,建立一种从外周血液中快速、经济、准确检测EGFR外显子21基因突变的方法。方法同时取得23例非小细胞肺癌患者的肺癌组织和血浆,采用突变富集PCR方法检测外周血液中EGFR外显子21的基因突变,并将检测结果与肺癌组织的检测结果进行对比。结果 23例非小细胞肺癌患者的肺癌组织中共检测到8例EGFR外显子21突变,其中7例突变可以从患者的外周血液中检测到。结论可以从非小细胞肺癌患者外周血液中检测到EGFR突变,通过本方法,可以从外周血液中检测EGFR外显子21基因突变。     

EGFR基因突变直接测序检测方法的建立

目的 建立一种适用于临床表皮生长因子受体（EGFR）基因直接测序突变检测方法.方法 以EGFR基因突变热点19、21外显子为突变检测靶位点设计特异性扩增、测序引物,以已知19、21外显子野生型、突变型样品分别做为阴、阳性对照品,建立EGFR基因突变直接测序检测方法,进行方法学评估.结果 成功建立了EGFR基因突变直接测序检测方法,该方法检测灵敏度为4.7 ng/μl,重复性良好.检测30例结非小细胞肺癌样品,突变率为26.7％.结论 本研究建立了可用于临床样品检测的EGFR基因突变直接测序检测方法.     

实时荧光PCR检测非小细胞肺癌外周血EGFR基因突变的临床应用

目的 分析非小细胞肺癌表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因突变的特征,为EGFR基因检测及靶向治疗提供指导.方法 选取本院2018年7月至2019年6月收治并行外周血EGFR突变检测的46例晚期非小细胞肺癌患者,采用突变阻滞扩增系统(amplification refractory mutation system,ARMS)法检测其血浆EGFR基因突变的特征,并应用SPSS 19.0软件进行统计学分析.分析其外周血EGFR突变与临床病理特征的关系.结果 46例非小细胞肺癌患者中EGFR突变11例,总体突变率为23.9％.突变类型以19号外显子缺失(19Del)(3例,27.2％)和21号外显子突变(L858R)(4例,36.3％)为主.腺癌突变率为33.3％,女性突变率为47.10％,不吸烟患者突变率为32.2％,分别与非腺癌突变率(6.2％)、男性突变率(10.3％)、吸烟患者突变率(6.6％)比较,差异均有统计学意义(P<0.05);EGFR基因突变与年龄无明显相关性(P>0.05).结论 非小细胞肺癌中,腺癌、女性和不吸烟患者EGFR基因突变率较高,临床特征可作为EGFR基因突变的预测指标.     

EGFR基因突变在非小细胞肺癌胸水细胞块中的检测分析

目的 分析表皮生长因子受体(epidermal growth factor,EGFR)基因突变在非小细胞肺癌阳性胸水中的表达情况.方法 将胸水内查见非小细胞肺癌的病例其阳性胸水离心沉渣制作细胞块.分离细胞块样品DNA,使用实时荧光检测PCR(ARMS-PCR)检测215例非小细胞肺癌细胞块和404例非小细胞肺癌组织块中EGFR的29种突变类型,并检测细胞块同时送检组织块的患者74例的一致性.结果 细胞决EGFR基因突变型102例,突变率47.44％(102/215);组织块EGFR突变型172例,突变率42.57％(172/404);74例有组织块对照的细胞块EGFR结果一致性有53例,一致率达71.62％(53/74),其中细胞块EGFR的突变率44.59％(33/74),组织块突变率70.27％(52/74).结论 可以应用非小细胞肺癌阳性胸水细胞块代替肿瘤组织检测EGFR基因突变,对指导晚期肺腺癌患者靶向药物治疗具有重要指导意义.     

连续100例肺癌术后EGFR基因突变检测结果分析

目的　探讨原发性支气管肺癌表皮生长因子受体（EGFR）基因突变特点及其与临床特征（病理类型、性别、吸烟情况、临床分期、分化程度）的关系。方法　采用PCR 扩增和基因测序法检测我院连续100 例原发性支气管肺癌EGFR 外显子18,19,20 和21 的突变情况,同时分析其突变与临床特征的关系。结果　100 例中检测到EGFR 基因突变33 例（33%,33/100）,其中不吸烟女性腺癌患者突变率达70.97%（22/31）。EGFR 突变主要集中在外显子19 和21 位,EGFR 基因突变与病理类型、性别和吸烟史相关,与临床分期无关,与病理分化程度似可见相关性。结论　揭示EGFR 基因突变特点以及与临床特征的关系有助于在临床中推荐潜在EGFR 突变患者进行基因检测,使突变患者有可能在TKI 靶向药物中获益。     

湖南地区238 例非小细胞肺癌EGFR 基因突变状态分析

目的：评价湖南地区非小细胞肺癌患者EGFR基因突变状态及其与临床特征之间的关系。方法收集2012年1月至2013年6月中南大学湘雅医学院附属肿瘤医院手术切除的非小细胞肺癌石蜡包埋组织238例,采用PCR扩增结合直接基因测序的方法,对组织DNA中EGFR基因第18-21外显子突变进行检测。结果在238例非小细胞肺癌中,EGFR突变的检出率为35.3％（84/238）。其中,第18、19、20、21号外显子突变占总突变的比例分别为2.4％（2/84）、67.9％（57/84）、3.6％（3/84）、26.2％（22/84）。19号外显子的突变均为第746-753密码子的碱基缺失,以Del E746-A750为主;21号外显子突变类型以L858R为主。女性EGFR基因的突变率显著高于男性,不吸烟者显著高于吸烟者（P〈0.05）。而EGFR基因的突变率与非小细胞肺癌患者的年龄、临床分期和淋巴结转移均无相关性（P〉0.05）。结论湖南地区的非小细胞肺癌EGFR基因突变以19、21外显子为主,且19外显子的突变率高于21外显子,多见于女性、腺癌、不吸烟患者。     

非小细胞肺癌患者EGFR检测的临床意义分析

目的探讨非小细胞肺癌患者外周血EGFR检测的临床意义。方法回顾性分析49例经病理证实为非小细胞肺癌患者的临床资料,患者均通过高通量测序法行外周血EGFR检测,分析有无EGFR突变与性别、年龄、吸烟史、病理分型和分期以及药物治疗后病情的关系。结果不同性别、年龄组的EGFR突变率比较差异均无统计学意义（P〉0.05）;吸烟组的EGFR突变率高于不吸烟组（P〈0.05）。不同病理分型及分期肺癌的EGFR突变率比较,差异均有统计学意义（P〈0.05）。EGFR无突变组服药后进展率高于EGFR突变组,差异有统计学意义（P〈0.01）。结论 EGFR突变与患者的性别、年龄无关,与吸烟、病理分型及分期有关,EGFR突变者服药后疗效高于无突变者。     

非小细胞肺癌患者外周血与组织中EGFR基因突变的研究

目的 检测非小细胞肺癌患者外周血与肿瘤组织EGFR基因突变率及两者的一致性,探讨外周血EGFR基因突变的临床应用价值.方法 应用实时荧光定量PCR方法检测453例非小细胞肺癌组织,229例非小细胞肺癌外周血,其中132例外周血标本和组织标本配对,检测其中EGFR基因突变,比较外周血和组织标本突变一致性,分析EGFR基因突变和患者临床特征相关性.结果 外周血标本中检测出66例突变(28.82％),组织中185例突变(40.84％),两种标本一致性为84.09％,差异有统计学意义(Kappa=0.652,P=0.000).结论 非小细胞肺癌患者外周血与组织EGFR基因突变一致性较高,在无法获得组织学标本时可以检测外周血EGFR基因状态,为非小细胞肺癌的临床诊疗提供帮助.     

某市蒙古族与汉族肺腺癌EGFR基因突变的分析

目的研究内蒙古包头市蒙古族肺腺癌EGFR突变与汉族肺腺癌EGFR突变表达是否存在差异。方法收集临床肺腺癌患者石蜡包埋组织标本108例,包括53例蒙古族和55例汉族肺腺癌的样本,采用ARMS(amplification refractory mutation system,ARMS)PCR扩增方法检测非小细胞肺癌EGFR基因外显子18、19、20及21的突变,χ2析对比内蒙古地区蒙古族和汉族肺腺癌EGFR基因突变差异。结果108例肺腺癌患者中有46例EGFR基因突变,总突变率为42.59%,其中蒙古族突变22例,突变率为41.51%,汉族突变24例,突变率为43.64%,内蒙古包头市蒙古族肺腺癌EGFR突变率与汉族肺腺癌EGFR突变率比较无明显差异(P<0.001),突变以外显子19核苷酸缺失起始位2 235为主要突变点。结论内蒙古包头市蒙古族中肺腺癌EGFR基因突变率为41.51%,汉族中EGFR基因突变率为43.64%,内蒙古包头市蒙古族肺腺癌EGFR突变率与汉族肺腺癌EGFR突变率比较无明显差异,都适宜靶向药物治疗。     

非小细胞肺癌表皮生长因子受体基因突变的结果分析

目的回顾性分析301例非小细胞肺癌(NSCLC)组织表皮生长因子受体(EGFR)基因突变检测结果,比较三种实验方法检查EGFR突变的差异。探讨肺癌临床靶向个体化治疗进行EGFR分子病理检查的最佳方法。方法应用聚合酶链反应(PCR)结合直接测序法检测171例肺癌DNA样本;TaqMan探针荧光定量PCR法检测88例肺癌DNA样本;扩增阻碍突变系统(ARMS)法检测42例肺癌DNA样本。结果 PCR直接测序法、TaqMan探针荧光定量PCR法、ARMS法的阳性总检出率分别是31.58%、27.27%、42.86%。结论 PCR直接测序法和TaqMan探针荧光定量PCR法阳性总检出率差异无统计学意义(P>0.05),ARMS法阳性总检出率高于PCR直接测序法和TaqMan探针荧光定量PCR法(P均<0.01)。对于不同来源的肺癌组织标本,不同方法检测EGFR突变具有各自的优点和不足。     

Detection of EGFR Somatic Mutations in Non-Small Cell Lung Cancer (NSCLC) Using a Novel Mutant-Enriched Liquidchip (MEL) Technology

We have developed and standardized a novel technology, mutant-enriched liquidchip (MEL), for clinical detection of EGFR mutations. The MEL integrates a mutant-enriched PCR procedure with liquidchip technology for detections of EGFR exon 19 deletions and L858R mutation on both formalin-fixed and paraffin-embedded (FFPE) slides and plasma samples from patients with non-small cell lung cancer (NSCLC). The detection sensitivity was 0.1% of mutant DNA in the presence of its wild-type DNA. The cross-reaction rate was lower than 5%. To evaluate the MEL platform, the EGFR mutation status of 59 patients with advanced NSCLC treated with EGFRTKIs (Tyrosine Kinase Inhibitors) were tested on their FFPE samples. EGFR exon 19 deletions and L858R were detected in 21 patients (21/59) and 76.2% (16/21) of them had partial response to the EGFR-TKIs, while by sequencing method, only 4 (4/59) mutations were detected. Plasma samples from 627 patients with various stages of NSCLC were examined with the MEL and 22% of EGFR exon 19 deletions and L858R were detected. Furthermore, in patients with advanced disease there are more mutations detected in plasma samples than in patients with less advanced disease. In conclusion, the MEL is a sensitive, stable, and robust technology for detecting EGFR DNA mutations from both FFPE and plasma samples from patients with NSCLC and is now routinely used for clinical diagnosis.     

T790M突变与表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂继发耐药的相关性

目的:探讨表皮生长因子本酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKIs)治疗晚期非小细胞肺癌继发耐药的机制。方法:用富集突变PCR(Mutation–enriched PCR)分析46例初治有效且维持≥6个月的晚期非小细胞肺癌患者的外周血和石蜡包埋组织标本的EGFR20外显子T790M突变,分析其与病理特征、疗效、无疾病进展生存时间(PFS)的相关性。结果:46例患者进展期外周血标本中,T790M突变率为39.13%(18/46例),明显高于治疗前标本中5.88%(2/34例)。T790M突变阳性者中位PFS为16.4个月(95%CI:10.83～17.47),野生型患者中位PFS10.2个月(95%CI:10.2～13.47)(P=0.6139)。结论:研究表明T790M突变与EGFR-TKIs继发耐药相关,在非小细胞肺癌患者中存在动态变化,与疗效和生存可能有一定相关性。     

非小细胞肺癌EGFR基因突变阳性的临床意义

目的：探讨非小细胞肺癌表皮生长因子受体（EGFR）第19、21号外显子突变与其临床病理特征、家族史的关系,以及对突变阳性患者使用表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂（EGFR-TKIs）靶向治疗的效果。方法采用扩增阻滞突变系统聚合酶链反应技术对EGFR第19、21号外显子进行检测。结果162例非小细胞肺癌患者发生EGFR突变阳性63例,突变阳性率为38.89%。腺癌、女性、非吸烟者、有肺癌及其他恶性肿瘤家族史的非小细胞肺癌患者EGFR突变率明显升高,差异有统计学意义（P0.05）。非小细胞肺癌发生EGFR突变阳性使用EGFR-TKIs靶向治疗患者的中位生存期明显长于未治疗及其他药物化疗患者,差异有统计学意义（P〈0.01）。结论非小细胞肺癌患者EGFR突变筛查应作为常规临床检测指标,特别是对于有肿瘤家族史患者更具有临床意义。     

高分辨率熔解曲线分析法检测非小细胞肺癌／结直肠癌患者KRAS和EGFR基因突变

目的采用高分辨率熔解曲线分析法检测非小细胞肺癌／结直肠癌中KRAS、EGFR基因突变,探索其应用于临床检测的可行性。方法首先采用高分辨率熔解曲线分析法检测5例非小细胞肺癌和5例结直肠癌患者KRAS基因第2外显子及EGFR基因第18-21外显子的突变情况,并以直接测序法对结果进行验证。结果通过高分辨率熔解曲线分析法,确认5例非小细胞肺癌和5例结直肠癌患者中有1例非小细胞肺癌发生了EGFR19外显子突变,其余检测均为野生型。突变患者的基因型为2236-2250del。经直接测序对以上10例标本进行验证,证实所有患者的突变情况与高分辨率熔解曲线分析法的结果一致。结论应用高分辨率熔解曲线分析法检测临床样本KRAS和EGFR突变与直接测序法相比较具有操作简便、快速、结果准确的优点,适合在临床开展。     

Sanger法检测分析非小细胞肺癌患者组织EGFR

目的探讨Sanger法检测非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）患者组织表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）基因突变情况,为肺癌病人“个体化靶向分子治疗”提供依据。方法收集63例NSCLC患者组织标本（石蜡切片）,提取组织DNA,用EGFR外显子18、19、20和21四位点的分子扩增（PCR）试剂盒进行外显子扩增,扩增产物先后进行电泳鉴定、酶解,酶解产物PCR扩增、纯化,纯化产物用ABI-3130型基因分析仪检测得出EGFR外显子18、19、20、21的野生或突变状态结果,并分析EGFR基因突变和患者临床病理生理特征、临床靶向用药疗效的关系。结果测试显示肺腺癌患者EGFR基因19、21外显子的突变率为33．3％（21／63）,而EGFR基因的突变与患者的病理组织学类型、吸烟状态有关（P〈0．05）。同时EGFR突变患者能从临床靶向用药获益。结论Sanger法检测NSCLC突变情况可为临床靶向用药提供技术支持。     

评估吉非替尼交替化疗对比化疗治疗Ⅳ期非小细胞肺癌的疗效及安全性

目的:比较吉非替尼交替化疗与单纯化疗在Ⅳ期非小细胞肺癌(Non-small cell lung cancer,NSCLC)患者治疗中的疗效和安全性。方法:回顾分析2013年9月-2014年9月Ⅳ期表皮生长因子受体(Epidermal growth factor receptor, EGFR)突变阳性NSCLC患者病历59例,依治疗方案分为2组:对照组(n=30):培美曲塞 (500 mg·m^-2,iv,d1),顺铂 (75 mg·m^-2,iv,d1),21 d为1个周期,治疗4~6个周期;观察组(n=29):化疗方案同对照组,加用吉非替尼(250 mg,po,d2~15),比较2组的客观缓解率(ORR)、疾病控制率(DCR)、中位无进展生存期(PFS)及药物不良反应(ADR)。结果:观察组和对照组的ORR分别为51.7%、16.7%(P=0.004),DCR分别为93.1%和86.7%(P=0.413),中位PFS分别为15.5个月和8.0个月(P=0.001);观察组外显子19 LREA缺失的患者疗效及耐受性优于21 L858R突变的患者,患者突变位点不同,ADR临床表现存在较大差异,严重ADR的发生率为13.79%。结论:吉非替尼交替化疗较单纯化疗对EGFR突变阳性的Ⅳ期NSCLC患者的疗效更好,其中对外显子19 LREA 缺失疗效最优。