肝细胞癌及癌旁组织HCVRNA原位杂交和HBsAg免疫组织化学研究

肝细胞癌及癌旁组织ＨＣＶＲＮＡ原位杂交和ＨＢｓＡｇ免疫组织化学研究冯德云程瑞雪颜亚晖沈明一、材料与方法１标本：５０例肝细胞癌（ＨＣＣ）标本均为我校附属医院１９９５年１月至１９９６年６月外科手术切除标本；组织均取得癌和癌旁成分。所有标本经１０％中性福...     

慢性乙型肝炎肝内HBV DNA和HBsAg的双标记定位研究

应用原位杂交和免疫组化PAP法双标记技术,结合病人乙型肝炎(乙肝)病毒血清学标志物检测结果,研究了31例慢性乙肝病人肝穿刺组织中乙型肝炎病毒DNA(HBV DNA)和HBsAg的分布及意义。结果显示,肝组织内检出HBV DNA 23例,HBsAg 26例,二者同时检出者21例。从同组病人肝组织内HBV DNA和HBsAg双标检测结果与其乙肝病毒血清学标志物检测结果的比较来看,肝组织内HBV DNA和HBsAg同时阳性很可能表明HBV正处于复制及表达的活动状态。     

慢性乙型肝炎肝内HBVDNA和HBsAg的双标记定位研究

应用原位杂交和免疫组化ＰＡＰ法双标记技术，结合病人乙型肝炎（乙肝）病毒血清学标志物检测结果，研究了３１例慢性乙肝病人肝穿刺组织中乙型肝炎病毒ＤＡＮ和ＨＢｓＡｇ的分布及意义。结果显示，肝辔内检ＨＶＤＮＡ２３例，ＨＢｓＡｇ２６例，二者同时检出者２１例。从同组病人肝组织的ＨＢＶＤＮＡ和ＨＢｓＡｇ双标检测结果与其乙肝病毒血清学标志物检测结果的比较来看，肝组织内ＨＢＶＤＮＡ和ＨＢｓＡｇ同时很可能表明ＨＢＶ正     

甲状腺髓样癌的组织病理学和免疫组织化学的研究

为探讨甲状腺髓样癌的多分化，用免疫组织化学方法对２４例甲状腺髓样癌进行研究。结果显示：癌组织中见甲状腺球蛋白阳性细胞３例、降钙素阳性细胞２４例、铬粒素Ａ阳性细胞２３例、５－羟色胺阳性细胞１４例、神经元特异性烯醇化酶和生长抑素阳性细胞均为１０例、血管活性肠肽阳性细胞４例、Ｓ－１００蛋白阳性细胞１例。本组癌的多种抗原表达提示，它可能来源于可以产生多种激素的神经外胚叶细胞。另有３例见甲状腺球蛋白阳性癌细胞，提示：甲状腺髓样癌伴滤泡上皮分化和混合性髓样癌并不少见，可能来源于能向两个方向分化为滤泡上皮细胞和滤泡旁细胞的后腮干细胞。     

人肝细胞肝癌与正常肝组织内C／EBP的分布及其mRNA…

以兔抗增强子结合蛋白多肽抗体，有ＡＢＣ法对１８例人正常肝组织、５例新生儿肝细胞肝癌（其中４０例带有癌旁肝组织）中Ｃ／ＥＢＰ进行免疫组化定位，同时运用Ｃ／ＥＢＰ ｃＤＮＡ探针对３例人正常肝组织、１例新生儿肝组织、１０例肝细胞肝癌（其中８例含配对的癌旁肝组织）进行Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交分析，免疫组化结果显示，Ｃ／ＥＢＰ弥漫分布于分化成熟的肝细胞浆及肝细胞核中（胞浆含量更丰富）。在肝癌分化差（或分化低）的     

鼻咽癌癌旁粘膜的p53蛋白免疫组织化学观察

我们曾报道过鼻咽癌（ＮＰＣ）组织中ｐ５３蛋白积聚的生物学特征和临床意义［１］，但是ｐ５３基因的突变发生在ＮＰＣ发生发展中的哪个阶段尚不清楚，为此我们以ＮＰＣ癌旁粘膜组织为材料，用免疫组化和图像定量分析的方法，观察癌旁粘膜上皮ｐ５３蛋白积聚的情况，以判...     

子宫癌组织癌胚抗原的免疫组织化学研究

应用PAP法对87例子宫颈鳞状上皮癌、20例子宫颈腺癌及54例子宫内膜癌的组织进行癌胚抗原研究。通过病理形态学观察及统计学处理,探讨癌胚抗原与癌的组织学变化、细胞学分化等因素的关系。     

肝硬变内HBV DNA及其五种抗原的表达及意义

取２２５例人肝硬变活检组织石蜡切片，检测了ＨＢＶＤＮＡ及其５种抗原。分别用免疫组化ＡＢＣ法检测ＨＢｘＡｇ、ｐｒｅ－Ｓ＿１和ｐｒｅ－Ｓ＿２抗原；用ＰＡＰ法检测ＨＢｓＡｇ和ＨＢｃＡｇ；用原位杂交方法检测ＨＢＶＤＮＡ；用免疫组化、原位杂交双标记方法检测ＨＢＶＤＮＡ和ＨＢｓＡｇ、ＨＢｘＡｇ或ＨＢｃＡｇ。结果显示，阳性检出率ＨＢｓＡｇ为７０．０％（１２８／１８３例），ｐｒｅ－Ｓ＿１抗原为６４．４％（８５／１３２例）、ｐｒｅ－Ｓ＿２抗原为６１．４％（８１／１３２例），ＨＢｘＡｇ为７５．３％（１１３／１５０例），ＨＢｃＡｇ为２２．４％（３９／１７４例），ＨＢＶＤＮＡ为６２．４％（５８／９３例）。双标阳性检出率ＨＢＶＤＮＡ和ＨＢｓＡｇ为３７．３％（１９／５１例），ＨＢＶＤＮＡ和ＨＢｘ－Ａｇ为８６．３％（４４／５１例），ＨＢＶＤＮＡ和ＨＢｃＡｇ为３９．２％（２０／５１例）。ＨＢＶＤＮＡ和ＨＢＶ５种抗原阳性病例中８０％以上均伴有肝细胞不典型增生。这一结果表明，在我国肝硬变的发生发展与ＨＢＶ慢性感染有密切的关系。     

在慢性乙型肝炎治疗过程中HBsAg水平与HBV DNA病毒复制的相关性分析

目的： 病毒载量的测定常被用来诊断和监测慢性乙型肝炎的疗效。文献报道采用全自动微粒子化学发光免疫反应测定HBsAg水平可作为替代标记。本研究旨在进一步分析慢性乙型肝炎治疗过程中血清HBsAg水平和HBV DNA水平的相关性。方法：本研究选取47例慢性乙型肝炎的患者［男性35人,女性12人,平均年龄(35±8)岁］。聚乙二醇化干扰素α-2a单一治疗患者（18例）、聚乙二醇化干扰素α-2a +拉米夫定联合治疗患者（14例）、拉米夫定单一治疗患者（15例）治疗48周并留取0、4、8、24、48、72周的血清。用TaqMan PCR测定HBV DNA水平,全自动微粒子化学发光免疫反应测定HBsAg水平。结果：18例聚乙二醇化干扰素α-2a单一治疗的患者和14例聚乙二醇化干扰素α-2a +拉米夫定联合治疗的患者可观察到HBsAg滴度随HBV DNA复制水平的一致变化,呈显著相关（r=0.83,P<0.01）。而在15例拉米夫定单一治疗的患者则未观察到HBsAg滴度随HBV DNA复制水平一致的变化趋势,但无相关性。聚乙二醇化干扰素α-2a单一治疗、聚乙二醇化干扰素α-2a+拉米夫定联合治疗的患者HBsAg水平中位数下降幅度均明显优于拉米夫定单一治疗的患者（P<0.05）。结论：在以干扰素为基础的慢性乙型肝炎治疗期间,血清HBsAg水平与HBV DNA 水平显著相关,动态HBsAg定量监测对治疗有一定的指导意义,可作为监测HBV疗效的替代标记。     

乙肝母婴阻断"成功"儿童外周血中检出HBV DNA

目的 检测乙型肝炎母婴阻断成功儿童血清HBV DNA,提出应该完善母婴阻断效果评价指标的建议.方法 采集乙肝疫苗母婴阻断后HBsAg阴性的儿童血清标本,经试剂盒提取HBVDNA,采用巢式PCR方法 扩增HBV DNA S区基因片段后纯化测序.结果 140例儿童血标本中,12例HBV DNA阳性,阳性率8.6%;S基因测序检测未发现突变株.结论 鉴于血清学检测方法 敏感性低于PCR扩增方法 .在评价乙型肝炎母婴阻断效果时,加入HBV DNA指标,可使其更完善.     

HBV携带者血清病毒标志物和HBV DNA与肝组织中HBVcccDNA相关性的研究

目的探讨HBV携带者血清病毒标志物和HBV DNA与肝组织中HBVcccDNA之间的关系。方法应用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测30例经肝组织活检病理检查确定为HBV携带者的肝组织中HBVcccDNA、HBVtDNA和血清HBV DNA,同时用化学发光免疫分析法检测HBsAg、HBeAg定量,分析感染者肝组织内HBVcccDNA与肝组织内HBVtDNA、血清HBVDNA、HBsAg及HBeAg定量水平之间的关系。结果HBV携带者肝组织中均可检出HBVcccDNA,范围在3．15×10^3拷贝／mg～1．06×10^7拷贝／mg（对数值：5．66±O．93）;肝组织cccDNA定量与肝组织总HBVDNA定量呈正相关（r=0．375,P〈0．05）,与血清HBVDNA无相关性（r=0．174,P〉0．05）。肝组织中HBVcccDNA水平与血清HBsAg定量呈高度正相关（r=0．562,P〈0．001）;而与血清HBeAg定量无相关性（r=0．152,P〉0．05）。结论HBV携带者肝组织内HBVcccDNA成稳定的中等水平复制;血清HBVDNA载量不能直接代表其肝组织中的HBVcccDNA水平;血清HBsAg定量可作为反映肝幺日织中HBVcccDNA水平的指标。     

CAS基因在原发性肝癌组织中的表达及其与HBV感染的关系

目的 探讨细胞凋亡易感基因(CAS)可否作为肝癌的病理诊断标志物,以及肝细胞癌中CAS蛋白的表达与HBV感染之间的关系.方法 应用免疫组化法检测肝癌、癌旁组织及未发生肿瘤的肝硬化、肝炎组织中CAS蛋白的表达情况,同时应用免疫组化法、核酸原位杂交法检测HBV感染的肝细胞癌组织、癌旁组织中HBsAg、HBcAg以及HBV DNA的表达情况,分析肝细胞癌中CAS蛋白的表达与HBV感染之间的关系.结果 CAS蛋白在肝癌组织中的表达较癌旁组织明显升高(P＜0.01),而癌旁组织中CAS蛋白表达较未发生肿瘤的肝硬化、肝炎组织显著增强(P＜0.01).低分化型肿瘤细胞的CAS蛋白表达明显高于中分化型和高分化型(P＜0.01).CAS蛋白在HBV感染的肝细胞癌组织中的表达明显高于非HBV感染的癌组织(P＜0.01),其中HBV DNA阳性的肝细胞癌组织中CAS蛋白表达水平显著高于HBV DNA阴性的肝细胞癌组织(P＜0.05).结论 CAS蛋白在肝细胞癌组织中呈高表达,肝细胞癌分化愈低其表达愈强,表明CAS蛋白可作为肝细胞癌的病理诊断与分化程度的评价标志物.并推测HBV DNA可能通过上调CAS的表达,在HBV感染相关性肝癌的发生发展过程中发挥重要的作用.     

乙型肝炎表面抗原定量与肝组织病理关系的临床研究

目的 探讨慢性乙型肝炎病毒感染者血清乙肝表面抗原定量水平与肝脏病理之间的关系.方法 收集我院272例乙肝表面抗原阳性超过6个月并接受肝脏穿刺活检的患者的临床资料.检测血清乙肝表面抗原定量、乙肝病毒基因型、ALT、HBV DNA、血常规、肝脏组织病理等各项资料,分别按照肝脏炎症活动程度(G0、G1、G2、G3、G4)和纤维化程度(S0、S1、S2、S3、S4)分组.观察分析乙肝表面抗原定量、HBV DNA与肝组织炎症活动程度和纤维化程度之间的关系.分析乙肝表面抗原定量与HBV DNA之间的相关性.结果 乙肝表面抗原定量与HBV DNA之间的相关性是显著的,表面抗原定量对数是对肝脏纤维化有显著影响的变量.结论 乙肝表面抗原对数是较DNA定量对数特异度和灵敏度更高的诊断肝脏纤维化程度的指标.     

乙型肝炎病毒(HBV)相关性肾炎患者肾活检组织中HBV DNA分布的分子生物学检测

为探讨乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）相关性肾炎的发病机理，应用地高辛素标记ＨＢＶＤＮＡ探针原位分子杂交（ＩＳＨ）和直接原位聚合酶链反应（ＩＳ－ＰＣＲ）技术，对２０例临床诊断为ＨＢＶ相关性肾炎患者肾活检石蜡包埋组织切片检查。在ＩＳＨ中采用ＨＢＶＤＮＡ两种探针：用全长段探针，８５％（１７／２０）ＨＢＶＤＮＡ阳性，这１７例阳性肾组织切片再用ＨＢＶＤＮＡＳ加Ｃ段探针检测，１４例阳性（８２．３５％）。在ＩＳ－ＰＣＲ中本组病例８５％（１７／２０）亦阳性。发现ＨＢＶＤＮＡ阳性颗粒弥漫沉积于肾小球毛细血管袢、系膜区、肾小管，表现形式以浆核型、核型为主。同组病例肾组织免疫组化染色法（ＬＳＡＢ）显示，ＨＢｓＡｇ与ＨＢＶＤＮＡ的存在部位基本一致。提示ＨＢＶ引起的肾脏病变不仅是免疫介导的损害，亦可能有病毒侵犯参加免疫反应。     

194例慢性乙型肝炎病理及其与血清HBV DNA、HBeAg、ALT关系的研究

目的探讨慢性乙型肝炎病理及其与血清HBV DNA、HBeAg、ALT关系。方法对194例慢乙肝患者进行肝组织病理、HBV免疫组化检查,并检测肝功能、血清HBVM和HBV DNA。结果血清HBeAg阳性组的肝组织G2、G3~4、S2、S3~4发生率与阴性组比较差异有统计学意义,肝组织S0组与S1~4组比较差异有统计学意义,肝组织G0~1组与G2~4组、HBcAg阳性组与阴性组的HBV DNA含量比较差异亦有统计学意义,肝组织HBsAg表达为" "者与" ~ "者血清HBV DNA含量比较差异无统计学意义,肝组织达S1或(和)G2以上者血清ALT水平分别为:<40U/L组占28.57%,40~80U/L组占53.33%,81~400U/L占80.15%,>400U/L组占77.88%。结论血清HBV DNA与肝组织HBcAg表达有一致性,与肝内HBsAg无关,HBV DNA含量低可能是肝组织炎症活动度和纤维化程度高,ASC和轻度肝损害者应争取肝活检,以及时判断肝组织病理程度和治疗时机。     

核苷类似物抗病毒过程中乙型肝炎表面抗原与DNA复制水平的相关性

目的 监测核苷类似物治疗慢性乙犁肝炎(CHB)的过程中HBsAg及HBV DNA水平的动态变化,并探讨HBsAg滴度与HBV DNA复制水平的相关性.方法 选取57例拉米夫定(LAM)、20例阿德福韦(ADV)抗病毒治疗2年以及23例未使用核苷类似物治疗的CHB患者,所有患者均未进行其它抗病毒药物治疗.于不同时间点采集血清标本,动态监测HBsAg及HBV DNA水平,并分析两者之间的相关性.结果 (1)57例LAM抗病毒治疗的CHB患者中,20例有效应答后出现病毒反弹的患者,在HBV DNA发生剧烈变化的4个时间点.未观察到HBsAg滴度随HBV DNA复制水平的一致变化,无相关性(P>0.05);37例应答良好的患者,可观察到HBsAg水平随HBV DNA复制水平的一致变化,呈正相关(r=0.71,P<0.05).(2)20例ADV抗病毒治疗的CHB患者中,7例有效应答后出现病毒反弹的患者,未观察到HBsAg随HBV DNA水平的一致变化,无相关性(P>0.05);13例应答良好的患者,可观察到HBsAg随HBV DNA复制水平的一致变化,呈正相关(r=0.73,P<0.05).结论 核苷类似物治疗CHB的过程中,对核苷类似物抗病毒治疗有良好应答的患者,HBsAg滴度在一定程度上能反映HBV DNA复制水平,HBsAg滴度与HBV DNA复制水平有相关性.     

检测乙型肝炎病毒表面抗原大蛋白的临床意义

目的检测乙肝患者血清中乙肝两对半（HBVM）、乙型肝炎病毒表面抗原大蛋白（HBV—LP）以及HBVDNA，比较在不同乙肝两对半模式的患者中HBV．LP与HBVDNA的检出率，探讨乙型肝炎病毒表面抗原大蛋白（HBV—LP）用于乙肝患者临床诊断的意义。方法采用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测HBV．LP和乙肝两对半，采用荧光定量PCR方法对患者HBVDNA进行检测。结果（1）相同乙肝模式患者血清中HBV．LP与HBVDNA检出率差异无统计学意义；（2）143例小三阳乙肝患者血清中HBV．LP与HBVDNA阳性率差异无统计学意义，二者的检出一致率为82．52％[（65＋53）／143]；（3）HBV—LP吸光度（A值）与HBVDNA呈正相关关系（r=0．983）。结论乙型肝炎病毒表面抗原大蛋白与HBVDNA有良好的正相关关系，在HBeAg阴性的乙肝患者中乙肝病毒表面抗原大蛋白（HBV—LP）与HBVDNA有较高检出一致率，HBV—LP用于临床反映乙肝病毒复制水平，特别是HBeAg阴性乙肝患者体内病毒复制情况有重要的意义。