阿尔茨海默病大鼠海马细胞外调节蛋白激酶的变化

目的探讨细胞外调节蛋白激酶（extracellular regulated protein kinase,ERK）与阿尔茨海默病（Alzheimer’Sdisease,AD）发病机制的关系。方法建立穹窿海马伞切断AD大鼠模型．应用Y型迷宫对大鼠进行行为学测试,分别用同位素方法和蛋白质印迹检测了ERK的水平、并用RT-PCR方法检测了ERK2 mRNA的表达。结果Y型迷宫测试发现穹窿海马伞切断AD大鼠学习和记忆的获得和再现均受损;同位素方法检测穹窿海马伞切断大鼠海马ERK的活性,手术组手术侧为（13．46士3．23）pmol·mg^-1·mm^-1,明显高于正常对照组（10．80±1．50）pmol·mg^-1·min^-1、假手术组（10．74土1．62）pmol·mg-^-1·min^-1和手术组非手术侧（10．79±2．23）pmol·mg^-l·min^-1;蛋白质印迹分析显示手术组条带深于正常对照组;RT-PCR显示ERK2 mRNA表达手术组条带亮于正常对照组。结论穹窿海马伞切断AD大鼠海马ERK升高,ERK信号转导途径在AD发病早期起作用。     

细胞外调节蛋白激酶与端粒酶对肝癌和白血病细胞系凋亡的调控作用

为了观察化疗药物三尖杉酯碱（HRT），长春新碱（VCR）和依托泊苷（VP-16）抑制肝癌细胞系SMMC7721和白血病细胞系K562细胞增殖，促进细胞凋亡过程中端粒酶活性及细胞外调节蛋白激酶（ERK）磷酸化蛋白表达水平的变化。应用MTT，流式细胞术，端粒重复序列扩增法（TRAP），生物发光分析及Western印迹等方法进行了检测和分析，研究结果发现，一定浓度的化疗药物作用24小时后，可以抑制细胞增殖，诱导细胞凋亡；在同样作用条件下，端粒酶活性和磷酸化ERK1/2的表达也受到一定程度的抑制，其中以HRT的作用最明显，结论：HRT，VCR和VP-16可能是通过抑制Ras/Raf/MEK/ERK1/2信号传导通路，降低ERK活性，减少ERK1/2靶基因的转录活化，间接下调端粒酶活性这一共同的作用机制而发挥作用的；细胞凋亡是端粒持续缺失的结果。     

白血病和卵巢癌亲代及耐药细胞系细胞外调节蛋白激酶与端粒酶活性的变化

本研究观察白血病和卵巢癌亲代及耐药细胞系中端粒酶活性及细胞外调节蛋白激酶(extracelluar regulated protein kinases ERK)磷酸化蛋白表达水平的变化，探讨端粒酶与ERK在白血病及卵巢癌耐药中的作用。采用MTT法评价白血病和卵巢癌亲代和耐药细胞系对HRT或DDP的敏感性，用流式细胞术分析这两种细胞系间细胞周期分布的差别，用端粒酶重复扩增技术(TRAP)、生物发光分析法定量和定性检测端粒酶活性及用Western blot检测法检测磷酸化ERK1和ERK2蛋白的表达水平。结果表明：白血病和卵巢癌耐药细胞系处于G0／G1期的细胞比例增加，端粒酶活性和磷酸化ERK1/2蛋白表达水平耐药细胞系较亲代细胞系高。结论：耐药细胞系G0／G1期细胞比例增加可能是细胞产生耐药的一种标志。白血病和卵巢癌细胞系耐药的产生可能与端粒酶活性和磷酸化ERK1/2蛋白表达水平的增高有关。     

奥氮平联合石杉碱甲对康复期精神分裂症患者记忆功能的影响

目的：探讨奥氮平联合石杉碱甲对康复期精神分裂症患者记忆功能的影响。方法将100例康复期精神分裂症患者随机分为两组,每组50例,均口服奥氮平治疗,研究组联合石杉碱甲治疗,观察12周。采用阳性与阴性症状量表评定临床疗效,韦氏记忆量表评定记忆功能,副反应量表评定不良反应。结果治疗后两组阳性与阴性症状量表评分均较治疗前显著下降,研究组治疗各时点总分及阳性症状、阴性症状因子分均显著低于对照组（ P＜0.05或0.01）;两组韦氏记忆量表的即刻、延迟、总数、再认因子评分均较治疗前显著改善（ P＜0.05或0.01） ,研究组较对照组改善更显著（ P＜0.05或0.01）。治疗12周末研究组显效率、总有效率显著高于对照组（ P＜0.05或0.01）。两组不良反应均较轻微,发生率比较差异无显著性（ P＞0.05）。结论奥氮平联合石杉碱甲治疗康复期精神分裂症患者具有增效作用,能有效改善患者的记忆功能,安全性高,依从性好。     

石杉碱甲对血管性痴呆患者认知功能及生活能力的影响：36例6个月随访

目的 观察石杉碱甲治疗血管性痴呆(vascular dementia，VD)的疗效及安全性。方法 将68例确诊为VD的患者随机分为观察组36例，对照组32例，对照组常规治疗6个月，观察组同时口服石杉碱甲6个月。结果 治疗组VD患者记忆功能、认知功能和精神神经功能改善较为明显，治疗后简易精神状态量表评分为(24．2&;#177;2．1)分，临床痴呆程度量表评分为(1．8&;#177;0．3)分，日常生活自理量表评分为(40．1&;#177;7．4)分，优于对照组(18．6&;#177;2．3)，(2．0&;#177;0．3)，(49．2&;#177;6．0)分．差异有显著性意义(P&;lt;0.05)。结论 石杉碱甲对VD患者的认知功能、痴呆程度和日常生活自理能力均有改善，耐受性好，安全性高，服用方便。     

三七总皂甙通过细胞外信号调节蛋白激酶1／2信号通路促进大鼠骨髓基质细胞向神经样细胞的增殖与分化

背景：三七总皂甙对骨髓基质细胞向神经样细胞分化的效应及相关信号通路目前尚不明确。目的：探讨细胞外信号调节蛋白激酶1,2信号通路对三七总皂甙调节大鼠骨髓基质细胞向神经细胞增殖、分化的作用。设计、时间及地点：细胞学体外观察,于2008-05／10在汕头大学医学院分子生物学实验室完成。材料：4-6周龄雄性SD大鼠9只,由汕头大学医学院实验动物中心提供。三七总皂甙为,一两梧州制药集团股份有限公司产品,细胞外信号调节蛋白激酶的抑制剂PD98059为CellSignalingTech公司产品。方法：全骨髓法体外分离纯化大鼠骨麓基质细胞,取传至第3代细胞进行诱导分化,设立3组：单纯诱导组向培养液中加入10ug／L碱性成纤维细胞生长因子,预诱导24h后全量换为正式诱导液（含10P-g／L碱性成纤维细胞生长因子、2％DMSO、200μmol／L丁羟回醚的α-MEM培养基）,每24h半量换诱导液1次;三七总皂甙组向预诱导液和正式诱导液内加入终浓度100mg／L三七总皂甙;PD98059组在三七总皂甙组培养液基础上加入10μmol／LPD98059。主要观察指标：细胞形态学观察,MTT法检测细胞增殖情况,免疫组织化学方法鉴定细胞Nestin的表达。 结果：诱导6h后,少数细胞呈锥形,细胞突起增多伸长,类似神经元,继续诱导培养后细胞突起增多,突起相互连接成网状。与单纯诱导组、PD98059组比较,诱导6,12,24h三七总皂甙组细胞均明显增殖（P〈005）,且随诱导时间延长呈递增趋势（P〈0．05）：单纯诱导组、PD98059组间比较无明显差异（P〉0．05）。与单纯诱导组比较,诱导24h后三七总皂甙组Nestin阳性率明显升高（P〈0．05）,PD98059组Nestin阳性率明显降低（P〈0．05）。 结论：三七总皂甙可以促进骨髓基质细胞的神经分化和分化后增殖,细胞外信号调节蛋白激酶1／2的特异性抑制剂PD98059能够拈抗三七总皂甙促增殖分化作用,提示细胞外信号调节蛋白激酶1,2信号通路是三七总皂甙促进骨髓基质细胞向神经细胞分化和增殖的重要环节。     

重症胰腺炎并急性肺损伤大鼠肺组织蛋白激酶C与细胞外信号调节激酶的表达

目的探讨重症胰腺炎并急性肺损伤大鼠肺组织蛋白激酶C（PKC）与细胞外信号调节激酶（ERK）的表达及意义。方法健康成年雄性SD大鼠40只,随机分为对照组（n=8）与胰腺炎组,胰腺炎组再按6、12、24、48h分（B1、B2、B3、B4）亚组。以大鼠重症胰腺炎所致ALI为模型,采用酶联免疫吸附（ELISA）法检测血清TNF-α、IL-1β及IE-6,Western blot检测肺组织PKC与ERK的蛋白表达,EMSA检测NF-κB活性变化,观察肺脏含水量、肺脏病理变化。结果内毒素致重症胰腺炎并发急性肺损伤早期即发生肺血管通透性增高,肺脏含水量上升,组织学显示肺脏出现明显的病理损害,血清TNF-α、IL-1β及IL-6增高,肺组织PKC、ERK与NF-κB DNA活性同步增强。结论PKC与ERK的活化参与了重症胰腺炎时ALI的发病,即ERK／NF-κB信号通路的活化。     

石杉碱甲对血管性痴呆患者认知功能及生活能力的影响:36例6个月随访

目的观察石杉碱甲治疗血管性痴呆(vasculardemen-tia,VD)的疗效及安全性。方法将68例确诊为VD的患者随机分为观察组36例,对照组32例,对照组常规治疗6个月,观察组同时口服石杉碱甲6个月。结果治疗组VD患者记忆功能、认知功能和精神神经功能改善较为明显,治疗后简易精神状态量表评分为(24.2±2.1)分,临床痴呆程度量表评分为(1.8±0.3)分,日常生活自理量表评分为(40.1±7.4)分,优于对照组(18.6±2.3),(2.0±0.3),(49.2±6.0)分,差异有显著性意义(P<0.05)。结论石杉碱甲对VD患者的认知功能、痴呆程度和日常生活自理能力均有改善,耐受性好,安全性高,服用方便。     

石杉碱甲对慢性精神分裂症记忆障碍的影响

目的 探讨石杉碱甲对慢性精神分裂症记忆障碍的影响.方法 将60例慢性精神分裂症患者随机分为两组,每组30例,研究组口服利培酮联合石杉碱甲治疗,治疗组单用利培酮治疗,观察6个月.于治疗前及治疗6个月末检测事件相关电位P300,采用韦氏记忆量表、韦氏成人智力量表测定认知记忆功能,采用阳性与阴性症状量表评定精神症状.抽取同期正常体检者30名设为对照组,于入组时进行P300及认知记忆功能测定.结果 治疗前研究组和治疗组P300潜伏期延长、波幅降低,与对照组比较差异均有极显著性(P＜0.01);韦氏记忆量表及韦氏成人智力量表测验成绩均显著低于对照组(P＜0.01).治疗6个月末研究组脑诱发电位P300潜伏期缩短,波幅提高,韦氏记忆量表及韦氏成人智力量表测验除背数外各项指标均较治疗前显著提高(P＜0.05或0.01);治疗组治疗后脑诱发电位P300潜伏期、波幅及韦氏记忆量表、韦氏成人智力量表测验与治疗前比较均无显著变化(P＞0.05).研究组治疗后阳性与阴性症状量表总分较治疗前有显著下降(P＜0.01),治疗组总分虽较治疗前有所下降,但差异无显著性(P＞0.05).结论 石杉碱甲能有效改善慢性精神分裂症患者认知记忆功能,对促进患者的全面康复具有显著的增效作用.     

电针干预自发性高血压大鼠主动脉丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶1及磷酸化细胞外信号调节激酶1/2蛋白的表达

背景:近年来大量临床研究表明针刺风池、太冲、曲池等穴位能有效降低血压,可用于高血压,但对其治疗的分子机制尚未阐明.目的:观察针刺大鼠风池、太冲、曲池等穴位对丝裂原活化蛋白激酶信号转导调控系统的影响,从而探讨针刺治疗高血压的分子机制.方法:选取8月龄自发性高血压雄性Wistar大鼠14只,随机分为针刺组和模型组,每组7只;另选取同月龄正常血压雄性Wistar-Kyoto大鼠7只作为对照组.对针刺组大鼠采用电针针刺双侧风池、曲池和三阴交穴,毫针刺太溪和太冲穴.3周后采用RT-PCR方法检测各组大鼠主动脉组织丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶1 mRAN的表达,Western blot方法检测丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶1、磷酸化细胞外信号调节激酶1/2蛋白表达.结果与结论:与对照组比较,模型组主动脉组织磷酸化细胞外信号调节激酶1/2蛋白表达水平升高,丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶1 mRNA及其蛋A表达水平降低(P<0.01);与模型组比较,针刺组主动脉组织磷酸化细胞外信号调节激酶1/2蛋白表达水平降低,丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶1 mRNA及其蛋白表达水平升高(P<0.05).提示针刺治疗自发性高血压大鼠可能是通过调控丝裂原活化蛋白激酶信号转导途径,增强磷酸化细胞外信号调节激酶1/2蛋白表达,降低丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶1蛋白表达,从而改善血管重塑,降低血压.     

耐力运动对大鼠骨骼肌PKB磷酸化与表达的影响*

目的：探讨耐力运动对大鼠骨骼肌蛋白激酶B（PKB）mRNA表达、蛋白总量（t-PKB）及磷酸化PKB（p-PKB)的影响。方法：SD大鼠随机分为对照组和运动组。运动组分为1 h/d、1.5 h/d组,运动7周,最后一次运动后24h和48h取材,分为1 h/d运动24h取材组、1 h/d运动48h取材组、1.5 h/d运动24h取材组、1.5 h/d运动48 h取材组。测定血清葡萄糖和胰岛素浓度;采用Western blot法检测t-PKB 和p-PKB水平;用RT-PCR法分析PKB mRNA的表达。结果     

电针结合重复经颅磁刺激对局灶性脑缺血大鼠蛋白激酶表达的影响

目的:探讨电针(EA)结合重复经颅磁刺激(rTMS)对局灶性脑缺血大鼠蛋白激酶A(PKA)表达的影响及其治疗缺血性脑损伤的机制。方法:Wistar大鼠75只,采用线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞模型,随机分为正常组、模型组、EA组、rTMS组和EA+rTMS组,通过Western印迹检测脑缺血后第7天、第14天与第28天三个不同时间点大鼠海马胞核内PKA表达的变化,并观测其神经功能评分。结果:脑缺血后不同时间点缺血侧海马PKA灰度值,模型组在第7天时高于正常组,第28天时低于正常组(P0.05),第14天时与正常组相比P0.05;EA组、rTMS组和EA+rTMS组3个时相均高于模型组,第7天、第14天时高于正常组,差异具有显著性意义(P0.05),第28天时与正常组相比P0.05,其中,EA+rTMS组第7天、第14天时高于EA组、rTMS组P0.05,EA组和rTMS组各时间点均无显著性差异(P0.05)。EA组、rTMS组和EA+rTMS组各时间点神经功能评分均较模型组改善(P0.01),尤以EA+rTMS组为明显。结论:EA结合rTMS对脑卒中后神经功能的恢复具有显著的促进作用,PKA蛋白的表达增强可能是其治疗缺血性脑卒中的机制之一。     

高脂血症对急性胰腺炎的影响

目的:探讨高脂血症对急性胰腺炎(AP)的影响及其可能的机制。方法:分别用triton WR1339、caerulein制作大鼠高脂血症和AP模型,同时应用两者制作伴有高脂血症的AP模型,比较各组胰腺病理损害评分、腹水量、胰腺湿/干比、血清淀粉酶和胰腺组织的凋亡;Western blot检测胰腺组织蛋白激酶C(PKC)的膜转位。结果:Triton WR1339诱导大鼠高脂血症以甘油三酯升高为主,6h达蜂,升高达20倍,使部分大鼠出现轻型AP。T+AP组病理评分、腹水量、胰腺湿/干比和血清淀粉酶较AP组均显著升高(P<0.05)。TUNEL法测得伴有高脂血症的AP腺泡出现凋亡数量最多。T+AP组PKC膜转位比例最高。结论:高脂血症可以诱导AP或加重AP的胰腺损伤。PKC的活化可能是高脂血症加重AP的机制之一。     

盐酸曲马多预先给药对急性心肌缺血大鼠心肌降钙素基因相关肽的影响

目的 观察盐酸曲马多预先给药对急性心肌缺血大鼠心肌组织缺血区和非缺血区降钙素基因相关肽(CGRP)表达的影响,探讨痛觉干预在缺血心肌保护中的作用机制.方法健康成年雄性SD大鼠18只,体质量270～300 g,随机分为3组(n=6):假手术组(S组)、单纯冠状动脉结扎组(Ⅰ组)和盐酸曲马多干预冠状动脉结扎组(T组).s组大鼠开胸后在冠状动脉左前降支下穿线不结扎;Ⅰ组大鼠开胸后结扎冠状动脉左前降支;T组大鼠经尾静脉注射盐酸曲马多12.5 mg·kg~(-1),15 min后结扎冠状动脉左前降支.各组在手术后计时3 h.采用免疫组化、酶免疫试验和反转录-聚合酶链反应从蛋白和基因水平观察各组大鼠缺血区和非缺血区心肌CGRP的表达并使用单因素方差分析进行统计学分析.结果 心肌中仅检测到β-CGRPmRNA;Ⅰ组大鼠缺血区CGRP平均光度(0.215±0.100)、阳性单位(36.95±1.70)、CGRP浓度(39.06±1.86)及β-CGRP mRNA表达(0.946±0.019)均较S组(0.139±0.006),(25.01±1.03),(20.80±1.24),(0.734±0.025)升高(P<0.05),T组(0.158±0.008),(28.53±1.21),(28.58±2.10),(0.872±0.024)明显低于Ⅰ组(P<0.05),但仍高于S组(P<0.05);Ⅰ组大鼠非缺血区心肌CGRP平均光度(0.156±0.017)、阳性单位(28.57±2.23)、CGRP浓度(28.58±1.12)及β-CGRPmRNA表达(0.810±0.021)均较S组(0.109±0.013),(20.91±2.14),(17.35±2.72),(0.701±0.018)升高(P<0.05),T组(0.120±0.008),(22.58±1.18),(23.26±2.41),(0.779±0.022)明显低于Ⅰ组(P<0.05),但仍高于S组(P<0.05).结论盐酸曲马多预先给药可降低急性心肌缺血大鼠心肌组织CGRP的表达,提示盐酸曲马多痛觉干预可能参与缺血心肌的保护.     

HOXB7基因沉默表达对大鼠氧化应激及肝脏Nrf2表达的影响

目的探讨同源盒基因(HOX)B7基因沉默表达对大鼠氧化应激及肝脏NF-E2相关因子2(Nrf2)表达的影响。方法C57野生型雄性大鼠20只(对照组)与HOXB7基因沉默C57雄性大鼠20只(沉默组)分别采用皮下多点注射50%四氯化碳法建立肝硬化模型。记录两组建模后第4周、第8周大鼠体重;采用速率法检测两组建模后第4周、第8周血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、γ-谷氨酰转肽酶(GGT)含量;采用化学比色法检测建模后第4周、第8周肝脏组织丙二醛(MDA)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)和谷胱甘肽还原酶(GSH)含量;免疫组化分析SOD表达;记录建模后第8周的肝脏Nrf2 mRNA与蛋白表达水平。结果两组大鼠建模后主要表现为毛发不整、反应变迟缓,病理显示所有大鼠均建模成功。建模后第4周、第8周沉默组大鼠体重显著高于对照组(P<0.05)、血清AST、ALT、GGT值以及肝脏组织MDA含量均显著低于对照组(P<0.05),肝脏组织T-SOD和GSH含量显著高于对照组(P<0.05);沉默组建模后第8周的肝脏SOD表达阳性率显著高于对照组(P<0.05)。沉默组建模后第8周的肝脏Nrf2 mRNA与蛋白表达水平显著高于对照组(P<0.05)。结论HOXB7基因沉默表达能抑制大鼠氧化应激反应,提高肝脏SOD表达水平,有利于肝脏Nrf2的表达,从而能促进肝硬化大鼠恢复体重,降低肝功能损伤。     

加味温胆汤对抑郁模型大鼠学习记忆能力及海马cAMP-PKA途径的影响

目的:探讨加味温胆汤对抑郁模型大鼠学习记忆能力及海马信号转导cAMP-PKA途径的影响。方法:32只SD大鼠随机分为正常组、模型组、盐酸氟西汀组及加味温胆汤组,每组8只,应用孤养加慢性轻度不可预见性应激方法造模,采用Morris水迷宫实验测试大鼠空间学习记忆能力、放射免疫法测定海马cAMP含量,以及免疫组化SABC法测定海马区PKA蛋白表达水平。结果:模型组大鼠学习记忆能力显著下降(P<0.01),海马cAMP含量增加(P<0.05)、PKA表达显著减少(P<0.01)。中、西药组与模型组比较,学习记忆能力增强(P<0.05),cAMP含量下降(P<0.05),PKA蛋白表达显著上升(P<0.05)。结论:加味温胆汤可增强抑郁症大鼠学习与记忆能力,其影响机制可能与海马信号传导cAMP-PKA途径有关。     

高氧液对脑缺血大鼠内皮素及降钙素基因相关肽含量的影响

目的 :探讨高氧液对缺血大鼠脑细胞的保护作用。方法 :40只 Wistar大鼠 (雌雄各半 )随机分成高氧液组、对照组、模型组和假手术组 ,每组各 10只。阻断 3条动脉造成急性不完全性脑缺血 ,制备动物模型。制模成功后 ,高氧液组立即以 10 ml· kg- 1 · h- 1 的速率经尾静脉输入高氧液 ,对照组以同种方法输入等量生理盐水 ,模型组和假手术组不治疗。制模后 1小时各组动物经腹主静脉取血 ,然后立即断头取脑 ,测定内皮素 (ET)和降钙素基因相关肽 (CGRP)含量。结果 :高氧液可明显降低脑缺氧后 ET水平 ,而升高 CGRP水平 ,纠正 ET、CGRP失衡。结论 :高氧液对缺血大鼠脑细胞有明显保护作用。     

一氧化氮及降钙素基因相关肽在肺炎并发心力衰竭的变化

目的：探讨肺炎和肺炎并发心力衰竭（肺炎心衰）病人血浆一氧化氮和降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）水平变化。方法：采用生化分析法测定一氧化氮、放射免疫分析法测定各患者ＣＧＲＰ。结果：肺炎及肺主衰病人一氧化氮及降钙素基因楔关肽有明显改变。结论：提示一氧化氮及ＣＧＲＰ与肺循环、缺氧有关。     

茶色素对缺血性脑血管病血浆ET,CGRP,TXB_2和6-k-PGF_(1α)的影响

目的探讨茶色素（ＴＰ）治疗缺血性脑血管病患者的意义。方法观察ＴＰ对缺血性脑血管病患者（５５例）治疗前后血浆内皮素（ＥＴ）、降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）、血栓素Ｂ２（ＴＸＢ２）和６ 酮 前列腺素Ｆ１α（６ ｋ ＰＧＦ１α）含量的变化。结果ＴＰ能明显降低ＥＴ、ＴＸＢ２水平（Ｐ＜０．０１，＜０．０５），升高ＣＧＲＰ含量（Ｐ＜０．０１）。结论ＴＰ能有效地降低缺血性脑血管病患者ＥＴ、ＴＸＢ２水平，升高ＣＧＲＰ含量，调整Ｅ／Ｔ、Ｔ／Ｋ失衡。因而对防治缺血性脑血管病具有重要意义