肾癌组织中PCDHIO基因甲基化状态的检测及临床意义的研究

目的：检测PCDH10基因在肾癌组织中的甲基化状态,并分析其临床意义。方法应用甲基化特异性PCR（MSP）技术检测PCDH10基因在5株肾癌细胞系和47例肾癌组织样本中的甲基化情况,同时分析47例患者的临床资料及病理信息,进行统计研究。结果5株肾癌细胞系中有2株检出PCDH10基因甲基化,比率为40%;47例肾癌样本中有31例检出PCDH10基因甲基化,比率为66.0%,6例癌旁组织中有1例检出PCDH10基因甲基化,比率为16.7%。PCDH10基因出现甲基化的患者与未出现甲基化的患者相比,二者在性别、年龄、肿瘤部位、大小、病理核分级等指标的差异无统计学意义（P＞0.05）,但在Ⅰ期肾癌与Ⅱ～Ⅲ期肾癌之间PCDH10基因甲基化率的差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 PCDH10基因在肾癌组织中甲基化程度较高,高分期的肾癌可能具有更高的PCDH10基因甲基化率,提示PCDH10基因甲基化可能与肾癌的发生发展有关。     

肾细胞癌中Wif-1基因的甲基化状态及表达

目的检测肾细胞癌(RCC)中Wnt抑制因子-1(Wif-1)基因的甲基化状态及表达水平,探讨其在肾细胞癌发生发展中的可能机制。方法分别应用甲基化特异性PCR(MSP)和逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测56例肾细胞癌及相应癌旁正常肾组织中Wif-1基因的甲基化状态及表达水平。结果 Wif-1基因在RCC组织中的甲基化率显著高于相应癌旁正常肾组织(P<0.05)。Wif-1基因在RCC组织中的相对表达量显著低于相应癌旁正常肾组织(P<0.05)。在RCC组织中,Wif-1基因甲基化阳性组mRNA的相对表达量与甲基化阴性组mRNA的相对表达量比较无显著差异(P>0.05)。结论 Wif-1基因启动子区的高甲基化在肾细胞癌的发生中是一个频发事件。     

TYMP基因在肾透明细胞癌中的表达及临床意义

目的:阐述胸苷磷酸化酶(thymidine phosphorylase,TYMP)基因在肾透明细胞癌(clear cell renal cellcarcinoma,CCRCC)中的表达及临床意义。方法:利用Oncomine及GEPIA数据库分析T YMP基因在正常肾组织及CCRCC组织中的表达差异;通过GEPIA数据库进行TYMP基因表达程度与病理分期的相关性分析;利用OncoLnc数据库对TYMP基因的表达水平与CCRCC患者生存率作Kaplan-Meier生存分析和log-rank检验;经MethHC数据库分析CCRCC组织和正常肾组织中T YMP启动子区DNA甲基化水平的差异;利用String-DB数据库分析与TYMP蛋白相互作用的蛋白;最后通过The Human Protein Atlas数据库分析TYMP蛋白在正常肾组织及CCRCC组织中的表达差异。结果:在mRNA及蛋白水平上,TYMP在CCRCC组织较正常肾组织中显著高表达,且TYMP mRNA表达水平越高,CCRCC病理分期越高;与TYMP基因低表达组相比,TYMP基因高表达的CCRCC患者总体生存率明显降低;CCRCC组织中TYMP启动子区DNA甲基化水平较正常组织甲基化水平显著降低;同时,与TYMP蛋白相关的蛋白有TK2,NT5M,CDA,UPRT,NT5C,UPP2,UMPS,TK1,UPP1和DPYD等,主要参与嘧啶核苷的合成、分解、代谢,转移戊糖基、蛋白质同源聚合等生物过程。结论:大样本数据挖掘能迅速获取CCRCC组织中TYMP基因表达的相关信息,为深入研究TYMP基因在CCRCC发生发展中的作用机制及预后奠定基础。     

白血病细胞系中抑癌基因PTEN启动子区甲基化状态检测及其去甲基化研究

目的 探讨抑癌基因PTEN表达沉默的机制及诱导PTEN表达对白血病细胞的作用.方法 应用甲基化特异性聚合酶链反应(Methylation specific PCR,MSP)检测白血病细胞系HL-60、Nalm-6、Raji、KG-1a、U937、NB4、K562中PTEN基因启动子区域甲基化状态;用甲基化转移酶抑制剂5-氮-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)处理白血病细胞,MSP检测甲基化状态的改变、RT-PCR检测PTEN mRNA水平的改变、瑞特染色观察细胞形态学改变、膜联蛋白V/碘化丙锭(Annexin V/PI)标记染色检测细胞凋亡.结果 检测的白血病细胞系中HL-60、Nalm-6、Raji、KG-1a、U937细胞PTEN基因显示超甲基化状态,而NB4和K562细胞显示低甲基化状态;5-Aza-CdR处理HL-60和Nalm-6细胞后,PTEN基因甲基化降低、mRNA表达水平则逐渐增高,并呈剂量依赖性,细胞出现凋亡现象.结论PTEN基因启动子区异常甲基化可能导致该基因转录表达失活或沉默,甲基化抑制剂可以诱导PTEN表达,并引起白血病细胞凋亡.     

CDH13基因在食管癌细胞株EC1和EC109中的甲基化研究

目的:探讨食管癌细胞中CDH13基因启动子区甲基化状态,以及5-杂氮-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)作用对CDH13基因甲基化状态及其表达的影响。方法:5-Aza-CdR处理前后分别采用甲基化特异性PCR(MSP)检测食管癌细胞EC1和EC109中CDH13基因启动子区甲基化状态,Western blot检测CDH13蛋白表达水平的变化。结果:CDH13基因在EC1中呈半甲基化,在EC109中呈完全甲基化。5-Aza-CdR可逆转食管癌细胞中CDH13基因甲基化,恢复其蛋白的表达。结论:CDH13基因异常甲基化可能是其在食管癌中失活的重要方式,应用5-Aza-CdR可逆转甲基化状态,并恢复CDH13表达。     

肝癌中Sall3基因甲基化的研究

目的:检测Sall3基因在肝癌细胞系和肝癌组织中的甲基化状况及其表达水平。方法:对7株肝癌细胞系、142对肝癌组织和6例正常肝组织进行Sall3基因启动子区域甲基化检测。甲基化研究使用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation specific polymerase chain reaction,MSP),基因表达水平研究采用实时定量反转录PCR(real-time RT-PCR)。结果:MSP结果显示,7株肝癌细胞株中有6株Sall3基因的启动子区域为纯合甲基化,1株为纯合去甲基化;在6例正常肝组织中Sall3均为纯合去甲基化;在142对肝癌组织标本中,癌旁组织Sall3基因启动子区域甲基化率为18.31%,在癌组织中为64.79%。real-time RT-PCR结果显示,肝癌肿瘤细胞系Sall3mRNA的表达水平明显低于去甲基化的正常肝组织。结论:Sall3基因启动子甲基化在正常肝组织、肝癌组织(和肝癌细胞系)中有明显差异。     

MSCT灌注成像在肾细胞癌诊断中的应用研究

目的：探讨MSCT灌注成像在肾细胞癌检查中的临床应用。方法：接受16排CT肾脏灌注扫描并行手术切除经病理证实的肾细胞癌患者19例，对比剂为优维显（300mgI/ml）50ml，注药速度4ml/s，经Perfusion 3软件处理后进行综合分析。结果：健侧肾脏与患侧肾脏的正常肾组织同一灌注指标无明显差异（P>0.05），肿瘤实质强化，BF值低于正常肾脏皮质，PS值和肿瘤的恶性程度有关，肿瘤坏死区灌注值降低。结论：MSCT灌注成像实现了肾脏血流的定量研究，直观评价肾癌的微循环变化。     

白血病等恶性血液病中p15基因甲基化的检测及临床意义

p15基因位于染色体 9p2 1,是一种肿瘤抑制基因 ,其编码产物p15蛋白特异地抑制细胞周期素依赖激酶 4 6 (CDK4 6 ) ,使细胞不能通过G1 期和S期间的监测点 ,从而停留在G1 期。血液系统恶性肿瘤有高频率的p15基因失活[1 ] ,研究发现 5′启动子及转录启始区域内的CpG岛的异常甲基化是p15基因的主要失活方式[2 ] 。Herman等[3] 研究出甲基化特异性聚合酶链反应 (MSP) ,为基因CpG岛甲基化研究提供了有效的方法。对象和方法1　研究对象　急性白血病患者共 4 0例 ,男 2 2例 ,女 18例 ,年龄 14～ 76岁 ,均符合FAB诊断和分型标准 ;其中初治或…     

半巢式甲基化特异性聚合酶链反应在胃癌p16基因甲基化检测中的应用

目的　改进甲基化特异性聚合酶链反应 (MSP) ,采用半巢式MSP检测胃癌组织p16基因启动子区CpG岛的甲基化状态。方法　用亚硫酸氢盐修饰被测DNA后 ,采用半巢式MSP(引物分别为MS ,M1A和MS ,M2A) ,分析了 6 0例胃癌组织及相应正常组织中p16基因的甲基化状态。结果　单独用MSP ,胃癌组织中p16基因甲基化的发生率为 80 %。采用半巢式MSP ,甲基化发生率为86 7% ,比单独采用MSP提高了几个百分点 ,并提示胃癌病例的p16基因启动子区存在甲基化发生的不同模式。结论　半巢式MSP能够有效地提高灵敏度和减少假阳性。同时 ,免疫组化的结果也说明了p16基因异常甲基化与胃癌组织P16蛋白的表达密切相关。     

胃腺癌患者术前腹腔冲洗液细胞中APC基因异常甲基化状态分析

摘要：目的：探讨胃腺癌（GAC）患者术前腹腔冲洗液细胞DNA中结肠腺瘤性息肉（APC）基因启动子区域5′-CpG 岛异常甲基化及其临床意义。 方法：用实时荧光甲基化特异性聚合酶链反应（real time-MSP）检测92例GAC患者术前腹腔冲洗液细胞中APC基因异常甲基化状况,分析APC基因异常甲基化与患者临床病理因素及预后之间的关系。 结果：在92例GAC患者术前腹腔冲洗细胞标本中,有49例（53.26%）APC基因异常甲基化,其中28例（30.43%）完全甲基化,21例（22.83%）半甲基化。APC基因异常甲基化分别与GAC的生长方式、分化程度、浸润程度、淋巴结转移、远处转移及临床分期有统计学意义（P＜0.05）;生存分析表明,胃癌患者中APC基因异常甲基化组的中位生存时间为21.5个月,非甲基化组为41.5个月,差异有统计学意义（P＜0.05）,COX回归分析显示APC基因异常甲基化与淋巴结转移、远处转移及TNM分期影响GAC患者的预后。 结论：术前腹腔冲洗液细胞DNA中APC基因异常甲基化可反映GAC进展状况,并提示患者预后不良。     

Wnt通路抑制因子SFRP5在皮肤鳞癌组织的甲基化状态及其作用

目的检测皮肤鳞癌组织中Wnt通路抑制因子SFRP5甲基化状态及其与临床病理的关系,以探讨SFRP5在皮肤鳞癌发生发展中可能的作用机制。方法运用Mass ARRAY质谱仪Epi TYPER甲基化方法检测皮肤鳞癌组织、癌旁组织和正常皮肤组织各40例样本中SFRP5基因启动子甲基化状态。结果对皮肤鳞癌组织、癌旁组织、正常皮肤组织中SFRP5共2个Cp G片段11个Cp G位点1 142个(86.52%)Cp G单位的甲基化率进行非参数秩和检验,在皮肤鳞癌与正常组织相比中检测到6个(6/11,54.54%)Cp G位点甲基化率差异具有统计意义(P<0.05),其甲基化率在皮肤鳞癌高于正常对照组。癌旁组织与正常组织相比,有6个(6/11,54.54%)Cp G位点甲基化率差异具有统计意义(P<0.05),其甲基化率在癌旁组织高于正常对照组织。其中Cp G 1_5位点甲基化率在不同病理级别具有统计学差异(P<0.05),CSCCⅢ级>CSCCⅡ级>CSCCⅠ级。结论 SFRP5在皮肤鳞癌中呈现高甲基化率,可能参与了皮肤鳞癌的发生与发展过程。     

造血系统肿瘤WT1基因启动子区域DNA甲基化及其调控的研究

目的 应用聚合酶链反应（PCR）的实验方法研究白血病细胞系中WT1基因启动了区域的DNA甲基化水平，及其与WT1基因表达的关系。方法 ①采用RT-PCR技术及甲基化特异性PCR（Methylation-spectific PCR，MSP）技术检测8226、HL-60、Jurkat、KG-1及Raji等血液系统肿瘤细胞系中WT1基因mRNA表达水平及其启动子区域的DNA甲基化状态；②以5-杂氮脱氧胞嘧啶（5-aza-CdR）对U937细胞系进行去甲基化处理，并观察WT1基因表达水平的改变。结果 ①HL-60、K562、KG-1、NB4及SHI-1细胞系中WT1表达水平高，而8226、Jurkat、Raji、U266和U937细胞系WT1表达水平则极低，同时检测到在8226、Jurkat、Raji、U266和U937这5个细胞系存和WT1基因启动子区域DNA高甲基化；②经去甲基化处理后，U937细胞系的WT1基因表达水平较未处理者上升，同时伴随着WT1启动子区域DNA甲基化水平的下降和未甲基化水平的升高。结论 WT1基因启动子区域DNA高甲基化是抑制其表达的机制之一。     

Vimentin在肾癌组织中的表达及临床意义

目的探讨波形蛋白（Vimentin）在肾癌组织中的表达与病理分期、分级及预后的相关性。方法采用免疫组织化学方法检测38例肾癌组织中Vimentin的表达。结果 Vimentin表达阳性率,在肾癌组织中为78.9%,在癌旁组织中为5%,两组比较,差异有统计学意义（P〈0.001）;Vimentin在肾癌组织中的表达,是预后不良的指标,随病理分期、分级的增高,有升高趋势,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 Vimentin在肾癌组织中的高表达有助于明确诊断,可作为肾癌分期、分级及预后判断的指标,对肾癌术后辅助治疗,可能有一定的参考价值。     

CEUS鉴别诊断肾透明细胞癌和嫌色细胞癌

目的 探讨CEUS对肾透明细胞癌（CCRCC）和嫌色细胞癌（ChRCC）的鉴别诊断价值。方法 收集接受肾脏CEUS检查并经术后病理证实为CCRCC的患者75例及ChRCC的患者26例。观察CCRCC和ChRCC的增强方式、增强程度、增强形态、假包膜征及病灶对局部淋巴结、肾包膜及肾静脉的侵犯情况,并绘制时间-强度曲线,获得校正的始增时间（ΔAT）、达峰时间（ΔTTP）和峰值强度（ΔPI）,进行统计学分析。结果 CCRCC多表现高增强（41/75,54.67%）、弥漫性增强（54/75,72.00%）和不均匀增强（58/75,77.33%）,56.00%（42/75）有假包膜征。ChRCC多表现为低增强（19/26,73.08%）、向心性增强（14/26,53.85%）和均匀增强（17/26,65.38%）,61.54%（16/26）有假包膜征。CCRCC与ChRCC增强程度、增强方式及增强形态的差异均有统计学意义（P均<0.05）,假包膜征检出率的差异无统计学意义（P>0.05）。CCRCC的ΔAT和ΔTTP与ChRCC比较,差异均无统计学意义（P均>0.05）,而CCRCC的ΔPI明显高于ChRCC（P<0.001）。以ΔPI=0.05%为阈值鉴别诊断CCRCC和ChRCC的准确率最高,其敏感度为82.70%,特异度为100%,ROC曲线下面积为0.969。CCRCC出现肾周和（或）肾窦脂肪受累和肾门和（或）腹膜后淋巴结转移的百分率均高于ChRCC（P均<0.05）。结论 CCRCC和ChRCC具有不同的CEUS特征,有助于二者的鉴别诊断。     

Expression and clinical significance of PTPN12 in clear cell renal cell carcinoma

BackgroundClear cell renal cell carcinoma (ccRCC) is a common urological disease. Expression of the protein tyrosine phosphatase 12 gene (PTPN12) is decreased in many cancers; however, the relationship between PTPN12 gene function and renal cancer remains unclear.MethodsWe detected PTPN12 protein expression in ccRCC and corresponding normal tissues from 64 patients with ccRCC by immunohistochemistry, and relative PTPN12 mRNA levels by real-time quantitative polymerase chain reaction. The relationships between the relative expression levels of PTPN12 mRNA and the patients’ clinical data were analyzed.ResultsPTPN12 protein and mRNA expression levels were significantly lower in ccRCC compared with the corresponding normal tissues. The mRNA expression levels in the ccRCC and corresponding normal tissues from the 64 patients with ccRCC were 0.459±0.445 and 1.001±0.128, respectively, compared with the control (glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase). There was a significant correlation between relative expression of PTPN12 mRNA in ccRCC tissues and tumor diameter and clinical stage.ConclusionThe expression levels of PTPN12 protein and mRNA were significantly lower in ccRCC tissues compared with normal tissues. The role of PTPN12 may provide new insights and evidence to aid the diagnosis and targeted therapy of ccRCC.     

多房性囊性肾细胞癌超声表现1例

患者男,37岁.体检中彩超检查发现左肾以囊性为主的混合回声的肿物.超声:左肾中下段实质内见一以囊性为主的斑片状混合回声,部分突出于肾被膜,大小3.0 cm×3.1 cm,边界清,内呈不规则多囊样回声.CDFI:内部周边见短棒状血流(图1).超声诊断:左肾囊实混合性占位性病变(以囊性为主、性质待查).MR示:左肾囊性乏血供病灶,考虑复杂囊肿可能性大;请结合临床随诊除外囊性肿瘤.     

CT多期增强扫描鉴别多房囊性肾癌与肾癌坏死囊变

目的 探讨CT多期增强扫描鉴别诊断多房囊性肾癌(MCRCC)与肾癌坏死囊变(NCRCC)的价值。方法 分析经手术病理证实的20例MCRCC及41例NCRCC的CT表现及临床资料,绘制ROC曲线,得出鉴别二者的CT值阈值,并应用CT值阈值联合Bosniak分级鉴别MCRCC与NCRCC。结果 35.00%(7/20)的MCRCC Bosniak分级为ⅡF级,60.00%(12/20)为Ⅲ级,5.00%(1/20)为Ⅳ级;4.88% NCRCC(2/41)Bosniak分级为ⅡF级,36.59%(15/41)为Ⅲ级,58.54%(24/41)为Ⅳ级。CT平扫及增强扫瞄中,MCRCC的CT值均低于NCRCC(P均<0.05);以皮髓期CT值34 HU为阈值,判断NCRCC的敏感度为79%,特异度为85%;联合Bosniak分级和皮髓期CT值阈值鉴别诊断MCRCC和NCRCC的敏感度、特异度分别为87%、93%。结论 MCRCC与NCRCC鉴别困难;皮髓期CT值阈值和Bosniak分级相结合,可提高鉴别诊断的敏感度及特异度。     

超声造影鉴别诊断肾透明细胞癌和肾血管平滑肌脂肪瘤

目的 比较肾透明细胞癌(CCRCC)和肾血管平滑肌脂肪瘤(AML)的超声造影声像图表现,探讨超声造影对二者的鉴别诊断价值.方法 回顾106个CCRCC和25个AML的超声造影声像图表现,观察指标包括肿瘤的增强程度、增强均匀度、包膜增强、增强消退情况以及增强方式,分析超声造影声像图特征对肾癌的鉴别诊断价值.结果 肿瘤的增强程度和增强消退时间在CCRCC与AML之间差异无统计学意义(P>0.05),而增强均匀度、包膜增强以及增强方式差异有统计学意义(P<0.01).表现为不均匀增强、包膜增强以及弥漫性增强的肿瘤具有恶性倾向,其阳性预测值分别为97.26%、100%、94.74%.如将肿瘤同时具有这3种声像图特征作为CCRCC的诊断标准,其阳性预测值和阴性预测值达100%及95.00%.结论 CCRCC和AML具有不同的超声造影声像图特征,超声造影有助于二者的鉴别诊断.     

超声造影诊断巨大肾细胞癌1例

患者男,41岁,主因"发现右肾肿物10余天"来我院复诊.患者无尿频、尿急、尿痛,无肉眼血尿.查体:双肾区无隆起、双侧肋脊角无压痛,卧位及坐位双肾均未触及.血尿常规及生化检查均未见异常.常规彩超检查:右肾形态异常,可探及多个偏低回声肿块,其中最大者约6.8 cm×6.4 cm,位于右肾门处,向肾外突出,右肾盂轻度分离,前后径约1.1 cm.