槐耳清膏能抑制裸鼠肺癌细胞的增殖活性

目的:探讨槐耳清膏对裸鼠异种肺癌移植瘤模型的抑瘤作用。方法:构建裸鼠异种肺癌移植瘤模型,给予该模型鼠槐耳清膏处理。将裸鼠随机分为实验组和对照组,分别给予槐耳清膏(剂量分别为1、3、5、7 g/kg)、0.9%NaCl溶液各0.2 mL灌胃,每3 d给药1次,持续给药3周。观察裸鼠肿瘤体积的变化及裸鼠体质量变化,比较瘤体质量,显微镜观察移植瘤组织病理变化和Ki-67阳性细胞比率。结果:裸鼠接种肺癌细胞14 d后,接种部位均出现肿瘤生长。槐耳清膏1、3、5、7 g/kg剂量组抑瘤率分别为(1.73±12.99)%、(6.68±11.34)%、(46.24±9.17)%、(35.05±12.15)%。与对照组相比,槐耳清膏5 g/kg(P=0.0044)和7 g/kg(P=0.0215)剂量组抑瘤率显著升高。槐耳清膏5 g/kg体质量组瘤重较对照组有降低趋势,但差异无统计学意义。Ki-67免疫组化染色显示,与对照组相比,槐耳清膏3、5、7 g/kg剂量组肿瘤细胞增殖率显著下降,其中7 g/kg组Ki-67阳性率最低(24.8%,P0.001)。结论:槐耳清膏能抑制裸鼠体内肺癌细胞的增殖活性,从而抑制肿瘤生长。     

多西环素对大肠癌裸鼠移植瘤的影响

目的观察金属蛋白酶组织抑制剂（多西环素）对大肠癌裸鼠皮下移植瘤的影响，为大肠癌的治疗寻求一个新的可能治疗途径。方法将10只BALB／C（nu／nu）裸鼠随机分为对照组和实验组，每组5只，将人大肠癌细胞系LoVo细胞种植入裸鼠皮下，建立裸鼠皮下人大肠癌移植瘤模型。对照组应用生理盐水瘤内多点直接注射；实验组应用多西环素瘤内多点直接注射。记录2组裸鼠肿瘤大小，观察肿瘤生长曲线，计算生长抑瘤率。结果第26天肿瘤体积大小和肿瘤生长抑制率：实验组分别为（889．8±80．8）mm^3和49．7％，对照组分别为（1755．8±203．8）mm^3和0，2组比较，差异均有统计学意义（P均〈0．05）。结论多西环素可以抑制大肠癌裸鼠皮下移植瘤的生长，有可能腐用于大肠痛的治疗。     

复方小柴胡汤调控microRNA抑制鼻咽癌细胞增殖

目的观察复方小柴胡汤（FFXCHT）对高分化鼻咽癌细胞CNE-1和低分化鼻咽癌细胞CNE-2增殖的抑制作用,探讨其调控CNE-2细胞microRNA的差异表达。方法通过磺基罗丹明B（SRB）法检测FFXCHT对CNE-1和CNE-2细胞增殖的影响;采用μParaflo^TM MicroRNA芯片检测,激光扫描器收集杂交的图像,经LOWESS滤器规范信号后比较数据,分析FFXCHT处理前后CNE-2细胞microRNA表达的差异。结果FFXCHT可抑制CNE-1和CNE-2细胞增殖,且呈剂量依赖性;FFXCHT处理CNE-1细胞24h、48h、72h,其IC50分别为12．23mg／mL,4．63mg／mL和4．97mg／mL;其对CNE-2细胞IC50分别为9．67mg／mL,4．33mg／mL,3．09mg／mL。microRNA芯片检测结果显示FFXCHT处理CNE-2细胞后,在检测的326个microRNA中,有10个microRNA上调,1个microRNA下调,其中检测量绝对值在1000以上且两者相差log2（Sample B signal／Sample A signal）〉1的microRNA有hsamiR-513、hsa-miR-498、hsa-miR-210和hsa—miR-602。结论该FFXCHT可抑制高低分化鼻咽癌细胞的增殖,其抑瘤作用可能与microRNA的差异表达有关。     

两种方法建立人胃癌裸鼠移植瘤模型的比较

目的采用两种不同方法建立人胃癌裸鼠皮下移植瘤模型。方法人胃癌细胞悬液直接注射法:将处于对数生长期的人胃癌细胞悬液接种于裸鼠皮下;胃癌裸鼠瘤转瘤法:将胃癌细胞悬液接种入裸鼠,待肿瘤生长直径在8 mm左右时,处死裸鼠并取其肿瘤组织边缘新鲜的组织,接种于裸鼠皮下,形成皮下移植瘤。观察并比较两种方法所建立的模型肿瘤移植成功率及瘤体生长速度,实验结束后MSP法检测移植瘤组织中Reprimo基因的甲基化水平并采用免疫组织化学法检测移植瘤的Ki-67和CD31分子表达。结果细胞悬液直接注射组的瘤体成瘤速度较瘤转瘤组慢(P<0.05);瘤转瘤组的Reprimo基因甲基化水平及Ki-67和CD31的表达均高于细胞悬液直接注射组(P<0.05)。结论胃癌裸鼠皮下瘤转瘤法的瘤体生长状况优于胃癌细胞悬液直接注射法。     

糖原合酶激酶3β抑制剂对前列腺癌细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用

目的研究糖原合酶激酶3β（glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β）抑制剂抗前列腺癌细胞裸鼠移植瘤生长的效用。方法建立前列腺癌PC-3和LNCaP／Bcl-xl细胞株裸鼠移植瘤模型,观测GSK-3β抑制剂氯化锂（LiCl）及SB216763腹腔内给药后移植瘤重量及体积的变化。同时通过BrdU掺入的免疫组化染色探讨移植瘤的增殖状态,TUNEL染色比较对移植瘤细胞凋亡的影响。结果LiCl及SB216763均可明显抑制移植瘤生长（P〈0．05）。与对照组相比,LiCl给药组细胞BrdU标记明显降低（P〈0．05）,TUNEL染色差异无统计学意义。结论抑制GSK-3β活性可抑制前列腺癌裸鼠移植瘤细胞在体内的生长,其中LiCl可能通过干扰癌细胞DNA复制发挥作用。     

复方黄连处理后HNE1鼻咽癌细胞移植瘤的基因表达

背景：复方黄连能够抑制鼻咽癌细胞移植瘤的生长，但其作用的机制并不很清楚。目的：探讨复方黄连抑制鼻咽癌细胞移植瘤生长的机制。设计：随机对照的实验研究。地点、材料和方法：实验在中南大学湘雅医学院动物实验中心完成。实验选用10只Balb／C裸鼠，鼠龄3-4周。饲养1周后，在每只裸鼠的前腋下接种0．5mL(0．5&;#215;10^7个)HNE1细胞。移植瘤形成后，根据移植瘤的大小，按数字法将裸鼠随机分成实验组和对照组，每组5只。实验组灌喂复方黄连，对照组裸鼠仅灌喂无菌水。从瘤组织提取RNA，经返转录荧光标记作为探针与cDNA芯片杂交后用激光共聚焦扫描仪分析基因表达并通过返转录-聚合酶链式反应技术进一步证实基因的表达。主要观察指标：复方黄连处理后HNE1鼻咽癌细胞移植瘤的基因表达。结果：复方黄连处理30d后，移植瘤明显减小，同时有335条基因的表达发生改变，即242条基因表达下调和93条基因表达上调。通过RT-PCR分析，6条基因证实为真正差异表达。其中，MAD3，H731和EGR-α基因mRNA表达增高，而TRAP5，P68激酶和CHK1基因mRNA的表达下降。结论：复方黄连能够抑制HNE1鼻咽癌裸鼠移植瘤的生长，对HNE1鼻咽癌裸鼠移植瘤的抑制作用可能与基因表达的改变有关。     

SELDI—TOF—MS技术对鼻咽癌裸鼠移植模型早期蛋白组学研究

目的 快速筛选人鼻咽癌裸鼠移植瘤模型血清中差异表达蛋白,为鼻咽癌的早期诊断提供特有的血清微量蛋白标志物.方法 采用SELDI-TOF-MS蛋白芯片技术检测10只正常裸鼠和50只人鼻咽癌裸鼠移植瘤模型在不同时间血清中的蛋白指纹图谱,用CiphergenProteinChip3.0软件自动采集数据,CiphergenBiomakerWizard3.1版软件统计分析筛选对照组与实验组间的差异表达蛋白.结果 对照组与实验组间检出15个差异表达的蛋白质(P<0.0001),分子量主要集中在2～20kD以内,大多数标志蛋白在实验组中表达明显增高,少数为低表达.尤其是质荷比(M/Z)为6741,8019,8102,8615的四个蛋白质在接种癌细胞后表达逐渐增强,质荷比(M/Z)为14740,15484的两个蛋白质表达逐渐减弱.结论 鼻咽癌细胞在裸鼠体内生长过程中,其裸鼠血清中出现明显的差异表达蛋白质,经临床盲法验证有可能成为鼻咽癌早期诊断的微量蛋白标志物.     

线粒体融合素-2对裸鼠移植瘤Ki-67、血管内皮生长因子的影响

目的:探讨瘤内注射vivo-jetPETTM/pEGFP Mfn2复合物对裸鼠移植瘤增殖的影响.方法:质粒pEGFPMfn2的构建及检测,将MCF-7细胞异种移植到裸鼠体内,建立人乳腺癌移植瘤模型,用vivo-jetPEITM试剂制备vivo-jetPEITM/DNA复合物,实验共分为实验组、空载体对照组和空白对照组.瘤内多点注射,RT-PCR检测肿瘤组织线粒体融合素-2(Mfh2)的表达,免疫组化检测Ki-67、血管内皮生长因子(VEGF)的表达情况.结果:pEGFP Mfn2构建成功并测序证实,实验组的相对平均吸光度值为(1.12±0.05)高于空载体对照组的(0.16±0.05)和空白对照组(0.17±0.07)(P<0.05),Ki-67在实验组的相对平均吸光度为(0.25±0.06)高于空载体对照组的(0.11±0.02)和空白对照组(0.12±0.03)(P<0.05),而VEGF在实验组的相对平均吸光度为(0.09±0.01)低于空载体对照组的(0.14±0.08)和空白对照组的(0.13±0.03)(P<0.05).结论:vivo-jetPEITM试剂能成功将Mfn2基因转染进瘤体细胞,Mfn2基因对人乳腺癌裸鼠移植成瘤后的Ki-67和VEGF有影响.     

复方黄连处理后HNE1鼻咽癌细胞移植瘤的基因表达

背景复方黄连能够抑制鼻咽癌细胞移植瘤的生长,但其作用的机制并不很清楚.目的探讨复方黄连抑制鼻咽癌细胞移植瘤生长的机制.设计随机对照的实验研究.地点、材料和方法实验在中南大学湘雅医学院动物实验中心完成.实验选用10只Balb/C裸鼠,鼠龄3～4周.饲养1周后,在每只裸鼠的前腋下接种0.5 mL(0.5×107个)HNE1细胞.移植瘤形成后,根据移植瘤的大小,按数字法将裸鼠随机分成实验组和对照组,每组5只.实验组灌喂复方黄连,对照组裸鼠仅灌喂无菌水.从瘤组织提取RNA,经返转录荧光标记作为探针与cDNA芯片杂交后用激光共聚焦扫描仪分析基因表达并通过返转录-聚合酶链式反应技术进一步证实基因的表达.主要观察指标复方黄连处理后HNE1鼻咽癌细胞移植瘤的基因表达.结果复方黄连处理30 d后,移植瘤明显减小,同时有335条基因的表达发生改变,即242条基因表达下调和93条基因表达上调.通过RT-PCR分析,6条基因证实为真正差异表达.其中,MAD3,H731和EGR-α基因mRNA表达增高,而TRAF5,P68激酶和CHK1基因mRNA的表达下降.结论复方黄连能够抑制HNE1鼻咽癌裸鼠移植瘤的生长,对HNE1鼻咽癌裸鼠移植瘤的抑制作用可能与基因表达的改变有关.     

人鼻咽癌CD133^＋干细胞的生物学特性及意义

背景：有研究表明肿瘤细胞株中存在肿瘤干细胞,是肿瘤复发、转移的根源,但人鼻咽癌细胞株CNE-2中肿瘤干细胞的表达及生物学特性至今少有报道。目的：观察人鼻咽癌CD133^＋干细胞生物学特性及意义。方法：采用流式细胞仪检测人鼻咽癌细胞株CNE-2中CD133的表达情况。免疫磁珠分选技术获得人鼻咽癌CD133^＋干细胞,分别采用无血清培养法、CCK-8法、平板克隆形成试验及裸鼠体内成瘤实验检测CD133^＋干细胞的体外增殖及体内成瘤能力,并将其与CD133-及未分选鼻咽癌细胞进行比较,以了解CD133^＋干细胞的生物学特性。结果与结论：免疫磁珠富集的CD133^＋细胞在无血清培养基中呈悬浮生长,并可以形成肿瘤干细胞球。CD133^＋细胞与CD133-细胞比较具有较高的克隆形成能力（P〈0.01）;CD133^＋细胞在裸鼠体内的成瘤率高于CD133-细胞（P〈0.05）。结果证实,鼻咽癌CD133^＋干细胞能在体外分离培养,形成干细胞球,增殖能力强,在裸鼠体内具有极强的成瘤能力。     

枸杞皂苷通过调控Suv39H1/JAK2/STAT3通路对鼻咽癌细胞增殖、侵袭和凋亡的影响

目的　探究枸杞皂苷介导Suv39H1/JAK2/STAT3通路对鼻咽癌CNE-2细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。方法　将人鼻咽癌CNE-2细胞株分为枸杞皂苷干预组（5,10,50 μmol/L枸杞皂苷）及对照组,采用CCK-8检测不同浓度枸杞皂苷作用0,24,48和72 h时CNE-2细胞增殖率,Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术检测枸杞皂苷干预48 h后CNE-2细胞凋亡率,Transwell小室实验检测CNE-2细胞侵袭能力,实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）与蛋白免疫印迹法（Western blot）分别检测组蛋白甲基化酶Suv39H1的表达水平;采用qRT-PCR和Western blot分别检测Suv39H1在鼻咽癌组织和癌旁组织,以及鼻咽癌细胞系（HONE1,C666-1,CNE-1和CNE-2）和人鼻咽癌上皮细胞（NP69）中的表达差异;构建Suv39H1过表达载体（pcDNA-Suv39H1）以及针对Suv39H1的小干扰RNA（Suv39H1 siRNA）,分别转染于CNE-2细胞,检测细胞增殖、侵袭和凋亡;将pcDNA-Suv39H1载体转染于50 μmol/L枸杞皂苷干预的细胞中,分别检测细胞增殖、侵袭和凋亡。Western blot检测JAK2/STAT3通路相关蛋白p-JAK2和p-STAT3的表达。结果　与对照组相比,枸杞皂苷干预鼻咽癌CNE-2细胞呈剂量依赖性降低细胞增殖（F=12.030,P=0.002 5）和侵袭（F=4.807,P=0.031 5）,增加细胞凋亡率（F=5.232,P=0.026 1）,抑制Suv39H1蛋白表达（F=14.64,P=0.001 3）;与正常组织和NP69细胞相比,鼻咽癌组织和HONE1,C666-1,CNE-1,CNE-2细胞中Suv39H1表达水平显著升高（P<0.01）;转染pcDNA-Suv39H1组细胞增殖、侵袭率增强、凋亡率降低;转染Suv39H1 siRNA组细胞增殖、侵袭率降低,凋亡率升高,差异与对照组相比具有统计学意义（P<0.01） ;与50 μmol/L枸杞皂苷干预组相比,转染pcDNA-Suv39H1组细胞增殖、侵袭率增加、凋亡率降低,p-JAK2和p-STAT3蛋白表达升高（P<0.01）。结论　枸杞皂苷通过下调Suv39H1/JAK2/STAT3通路抑制鼻咽癌CNE-2细胞增殖、侵袭,促进凋亡。     

MUC1表达与食管癌细胞对紫杉醇及顺铂反应的关系

目的:探讨MUC1过表达与食管癌细胞对紫杉醇及顺铂反应的关系。方法:构建MUC1过表达的食管癌细胞株,建立食管癌细胞裸鼠移植瘤模型;然后,对成瘤裸鼠腹腔注射顺铂(8μg/kg,d1、d7)及紫杉醇(20μg/kg,d1、d7)。每3 d测量肿瘤体积及裸鼠体质量,绘制肿瘤生长曲线及裸鼠体质量曲线;测量肿瘤的终末体积,计算肿瘤抑瘤率;采用免疫组化方法检测化疗药物对肿瘤中Bcl-2及Ki-67表达的影响。结果:顺铂与紫杉醇都能抑制MUC1过表达的食管癌移植瘤的肿瘤体积及裸鼠体质量增加,与空载组相比差异有统计学意义(P0.05),但顺铂与紫杉醇之间差异无统计学意义(P0.05);顺铂和紫杉醇对MUC1沉默的食管癌移植瘤的抑制效应不明显;顺铂与紫杉醇能够明显下调MUC1过表达的移植瘤中Ki67的表达(P0.01),上调Bcl-2的表达(P0.01)。结论:顺铂与紫杉醇都能明显抑制MUC1过表达的食管癌移植瘤的生长及细胞增殖,促进细胞凋亡,顺铂的抑制效应与紫杉醇无明显差异,但顺铂对裸鼠体质量的影响较明显。     

EBV病毒 PCNA Ki-67和C-myc癌基因蛋白在鼻咽癌中的表达及预后意义

目的 探讨EBV病毒、PCNA、Ki-67、C-myc癌基因蛋白在鼻咽癌中表达及预后意义.方法 收集鼻咽角化性鳞状细胞癌20例,鼻咽非角化性癌40例和对照组鼻咽粘膜慢性炎组织30例.用原位分子杂交方法检测EBV(EBER)病毒及采用免疫组织化二步法检测PCNA、Ki-67和C-myc癌基因蛋白的表达.结果 EBER在对照组鼻咽粘膜慢性炎30例及角化性癌鳞状细胞癌20例中均阴性0%(0/30,0/20);而EBER在鼻咽非角化性癌中阳性表达率100%(40/40);对照组和角化性鳞状细胞癌与非角化性癌比较差异有统计学意义(P<0.05).生存期<5年的40例鼻咽非角化性癌(NKC)组织中PCNA、Ki-67、C-myc分别为67.5%(27/40),65.7%(23/35),66.6%(16/24);生存期≥5年分别为32.5%(13/40)、34.2%(12/35)、33.3%(8/24).以上可见40例NKC患者中生存期<5年及≥5年的生存率有明显的相关性(P<0.05).除此之外,在40例非角化性癌组织中PCNA、Ki-67、C-myc癌基因阳性率在有远处转移的患者中分别为60%(24/40)、62.8%(22/35)、62.5%(15/24);在无远处器官转移的患者中分别为40%(16/40)、37.1%(13/35)、37.5%(9/24),显示与有无远处器官转移有明显的相关性(P<0.05).结论 鼻咽非角化性癌几乎100%有EBV病毒感染;PCNA、Ki-67、C-myc蛋白表达与鼻咽癌的生存率及预后密切相关.     

小飞蓬活性成分对乳腺癌MCF-7荷瘤裸鼠的体内抑制作用

目的探讨小飞蓬活性成分对人乳腺癌裸鼠皮下移植瘤生长的影响及可能的作用机制。方法将人乳腺癌MCF-7细胞接种于16只裸鼠右背部皮下建立荷瘤裸鼠模型,将裸鼠随机分为3组,其中生理盐水组5只,小飞蓬组6只,5-FU组5只;接种细胞24h后进行腹腔注射给药治疗,检测各组荷瘤裸鼠体重变化,绘制肿瘤体积生长曲线,待第一只正常死亡裸鼠出现时处死所有裸鼠,检测肿瘤的体积和重量。应用免疫组化方法检测各组肿瘤组织中增殖细胞核抗原（PCNA）、半胱氨酸天冬氨酸酶（Caspase-3）的表达情况。结果①各治疗组荷瘤裸鼠的生长较对照组均有不同程度的抑制（P〈0.01）;治疗后各组肿瘤重量和抑瘤率相互比较,差异均有统计学意义（P〈0.05）;②各组肿瘤组织中PCNA表达水平均显著低于对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）,而Caspase-3表达明显高于对照组、差异有统计学意义（P〈0.05）。结论小飞蓬体内可抑制荷瘤裸鼠人乳腺癌的生长。     

增殖细胞核抗原表达与鼻咽癌放射敏感性关系的研究

[目的]探讨增殖细胞核抗原(PCNA)的表达与鼻咽癌(NPC)放射敏感性的关系.[方法]采用PCNA抗体进行ABC法免疫组化染色.检测108例患者初行放疗前鼻咽癌组织中PCNA表达情况,显微镜下计数阳性细胞,计算增殖指数(PI),并将所有病例按照PI值的高低以25%为界划分两组;高PCNA表达者(HPI)>25%,低P...     

Apo-2L对放射线诱导鼻咽癌CNE细胞凋亡作用

目的了解凋亡素2配体（Apo-2L）与放射治疗协同对体外培养鼻咽癌CNE细胞增殖周期及凋亡率的影响。方法 MTT法检测不同浓度Apo-2L对鼻咽癌CNE细胞的影响,确定Apo-2L与细胞作用时间及浓度。将细胞随机分为对照组、Apo-2L组、Apo-2L＋放射组及单纯放射组,分别给予相应的处理后制成细胞悬液,流式细胞仪分析细胞凋亡率和细胞周期变化。结果鼻咽癌CNE细胞的抑制率与Apo-2L的浓度呈正相关（r=0.91,P〈0.05）,当用浓度为100μg/L的Apo-2L处理CNE细胞24h,Apo-2L＋放射组凋亡率较其他各组明显升高,差异有显著性（F=8.64,P〈0.05）。Apo-2L＋放射组G2-M期比率较其他各组显著降低（F=7.74,P〈0.05）。结论Apo-2L对体外培养鼻咽癌CNE细胞有抑制增殖和促进凋亡作用;Apo-2L联合放射线治疗可以使细胞周期同步化,并明显提高CNE细胞的凋亡率。     

PPARγ基因静默抑制裸鼠肝癌肺转移

目的探讨过氧化物酶体增殖物活化受体γ（Peroxisome proliferator-activated receptor gamma,PPAR-γ）基因静默对肝癌裸鼠模型肺转移的影响。方法构建PPARγ短发夹状RNA表达质粒并转染HCCLM3细胞（pshPPARγ组）,以空质粒转染为对照组。观察两组皮下种植瘤生长曲线及体积,肺转移灶数量及分级。结果pshPPARγ组种植瘤体积为（1．86±0．65）cm^3,肺转移灶数量为（37．2±0．7）个／肺,分级为1—2级;对照组体积为（4．86±1．15）cm^3,肺转移灶数量为（107．8±6．1）个／肺,分级多为3—4级,两组种植瘤体积和转移灶数量、分级的差异有统计学意义（P〈0．05）。结论PPARγ基因静默可降低肝癌种植瘤肺转移数量。     

反义miRNA-21/rAV-Tumstatin病毒载体对裸鼠膀胱癌生物学行为的影响

目的探讨反义miRNA-21/rAV-Tumstatin病毒载体对裸鼠膀胱癌生长及转移的影响。方法通过构建裸鼠原位膀胱癌移植瘤模型并灌注携带基因的腺病毒载体,观察肿瘤生长及盆腔淋巴结转移情况,同时采用免疫组化法检测肿瘤细胞增殖和凋亡指数。结果肿瘤大小:治疗组为(14.60±5.31)mm2,对照组为(58.92±7.16)mm2,两组比较P<0.01;肿瘤细胞增殖率:治疗组为41.30%,对照组94.70%,两组相比P<0.05;凋亡指数治疗组和对照组分别是30.18和9.53,两者比较P<0.05;治疗组5只中无一只发生盆腔淋巴结转移,而对照组3只出现转移(60.0%),两组比较P<0.01。上述各项组间差异均有统计学意义。结论反义miRNA-21/rAV-Tumstatin病毒载体对人膀胱癌裸鼠原位移植瘤具有良好的靶向性,能够通过抑制肿瘤细胞增殖和加速肿瘤细胞凋亡,遏制实验性裸鼠膀胱移植癌模型的生长转移,从而为该载体用于人类膀胱癌的治疗提供了一定的实验依据。