MiR-21靶向调控KLF5促进多发性骨髓瘤细胞增殖的机制研究

目的：探讨多发性骨髓瘤（MM）细胞中miR-21的表达及其作用机制。方法：从30例MM患者及20例健康者骨髓标本中分选出浆细胞,检测miR-21的表达水平;选取MM1.S、RPMI-8226和U266细胞,用q RT-PCR方法检测miR-21的水平;转染hsa-miR-21 mimics和hsa-miR-21 inhibitor后通过CCK-8和细胞克隆实验检测MM细胞增殖情况;预测miR-21调控的靶基因,通过荧光酶素报告基因实验检测miR-21与KLF5的结合位点;利用Western blot和q RT-PCR方法检测转染hsa-miR-21 mimics和hsa-miR-21 inhibitor后KLF5蛋白的表达水平;合成缺失3′UTR的KLF5质粒转染进入过表达miR-21的RPMI-8226细胞,利用CCK-8和细胞克隆实验检测MM细胞增殖情况。结果：MM患者浆细胞中miR-21表达水平较正常对照组显著升高（P<0.001）;MM1.S、RPMI-8226和U266细胞中miR-21的表达较对照组也显著升高（P<0.05）。转染hsa-miR-21 mimic...     

miR-181a靶向RASSF1A促进多发性骨髓瘤U266细胞增殖、侵袭

目的探讨miR-181a靶向Ras相关区域家族1(RASSF1A)促进多发性骨髓瘤U266细胞增殖、侵袭的作用。方法收集40例多发性骨髓瘤患者骨髓组织及50例受试者的正常骨髓组织标本;培养多发性骨髓瘤U266细胞,并分为NC mimic组、miR-181a mimic组、NC inhibitor组、miR-181a inhibitor组。采用MTS法检测细胞增殖活力;Transwell试验检测细胞侵袭能力;实时荧光定量PCR检测各组miR-181a的表达水平;western blot检测RASSF1A、cyclinD1、RhoA蛋白的表达水平;荧光素酶报告试验验证miR-181a靶向RASSF1A 3′非翻译区(UTR)。结果实时荧光定量PCR结果显示,多发性骨髓瘤组织中miR-181a的表达量明显高于正常骨髓组织(P均<0.05);western blot检测结果显示,多发性骨髓瘤组织中cyclinD1、RhoA蛋白的表达量明显高于正常骨髓组织(P均<0.05),而RASSF1A蛋白的表达量明显低于正常骨髓组织(P<0.05);western blot检测结果还显示,miR-181a mimic组cyclinD1、RhoA蛋白的表达量明显高于NC mimic组(P均<0.05),而miR-181a inhibitor组cyclinD1、RhoA的表达量明显低于NC inhibitor组(0.32±0.07 vs 0.71±0.12,0.39±0.06 vs 0.66±0.10,P均<0.05);Transwell试验结果表明,miR-181a mimic组侵袭细胞数(个)明显高于NC mimic组(38.59±7.41 vs 10.29±2.12,P<0.05),而miR-181a inhibitor组侵袭细胞数(个)明显少于NC inhibitor组(7.28±1.24 vs 11.41±2.76,P<0.05);荧光素酶报告试验结果表明,miR-181a mimic组RASSF1A的表达量及RASSF1A 3′UTR荧光素酶报告基因的荧光活力均明显低于NC mimic组(0.81±0.15 vs 1.54±0.26,0.173±0.035 vs 0.291±0.062,P均<0.05),而miR-181a inhibitor组RASSF1A的表达量及RASSF1A 3′UTR荧光素酶报告基因的荧光活力明显高于NC inhibitor组(1.83±0.31 vs 1.25±0.21,0.399±0.067 vs 0.273±0.057,P均<0.05)。结论miR-181a能够促进多发性骨髓瘤U266细胞的增殖、侵袭,并靶向抑制RASSF1A的表达。     

miR-145-3p在多发性骨髓瘤中表达及其对多发性骨髓瘤细胞凋亡与自噬作用机制的研究

目的探讨微小m RNA-145-3p(miR-145-3p)在多发性骨髓瘤(MM)中表达及其对MM细胞凋亡与自噬作用机制。方法 2014年6月至2017年5月我院收治的MM患者60例(MM组)、健康体检者30例(正常组),采用荧光定量PCR法检测两组血浆样本及细胞株(MM细胞株选择U266、RPMI-8266、LP-1、H929,以CD138+浆细胞为对照组)中miR-145-3p表达水平,后选择毒性最低的MM细胞株(LP-1)进行miR-145-3p mimic或inhibitor转染(分别为mimic组、inhibitor组),并设立对照,以流式细胞仪进行凋亡检测[吸光度值(OD值)],并采用westren blot检测转染细胞凋亡与自噬相关标志物[肿瘤蛋白21(P21)、unc-51样激酶1(ULK1)、溶酶体相关膜蛋白2(LAMP2)]。结果 MM组血浆及细胞株(U266、RPMI-8266、LP-1、H929)中miR-145-3p水平均低于正常组(P 0. 05);转染后随时间延长,OD值均增加,且转染后3 d及5 d OD值大小均为mimic组对照组inhibitor组; mimic组P21水平高于inhibitor组及对照组,ULK1、LAMP2水平低于inhibitor组及对照组(P 0. 05)。结论 miR-145-3p在MM中呈低表达,可能通过靶向调控P21/ULK1/LAMP2信号通路而抑制细胞凋亡,促进细胞自噬。     

miR-335 通过下调Fra-1 表达抑制人乳腺癌细胞增殖机制的实验研究

目的　探讨微小核糖核酸（microRNA,miR）-335 对人乳腺癌细胞增殖能力的影响,以及其可能存在的机制。方法　体外培养乳腺癌细胞及正常乳腺组织细胞,检测miR-335 及Fros 相关抗原1(fros related antigent-1,Fra-1) 的表达量;体外转染miR-335 mimics 后,通过细胞活力检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8) 检测细胞的增殖能力,检测Fra-1 的表达变化及下游细胞增殖相关蛋白分子基质金属蛋白酶9（matrix metalloproteinase-9,MMP-9）、血管内皮生长因子C(vascular endothelial growth factor- C,VEGF-C) 的表达量;生物信息学预测及双荧光霉素报告基因验证Fra-1 为miR-335作用靶基因。结果　乳腺癌细胞中miR-335 的表达量（0.755±0.034）低于正常乳腺细胞（1.495±0.029）,Fra-1 蛋白的表达量（2..347±0.120）高于正常乳腺细胞（1.319±0.038）,差异均有统计学意义（t=0.075,4.191, 均P ＜ 0.001）。转染miR-335 mimic 后48,72 h 乳腺癌细胞增殖能力（0.881±0.062,0.887±0.082）低于对照组细胞（1.326±0.051,1.493±0.038）,差异均有统计学意义（t=44.096,59.307, 均P ＜ 0.001）;转染miR-335 mimic 后乳腺癌细胞中Fra-1的蛋白表达量（0.567±0.091）低于未转染细胞（2.347±0.204）,差异有统计学意义（t=3.763, P<0.001）;转染miR-335 mimic 后细胞中MMP-9（0.469±0.027）,VEGF-C（0.540±0.041）的蛋白表达量低于对照组（0.958±0.058,1.024±0.171）,差异均有统计学意义（t=1.953,7.856, 均P ＜ 0.001）;荧光霉素报告基因实验结果显示miR-335 下调Fra-1 启动子核心转录区域（-164 ～ -52nt）的转录活性。结论　miR-335 通过抑制MMP-9 和VEGF-C 的表达,并下调Fra-1 启动子转录活性,抑制了体外乳腺癌细胞的增殖。     

白藜芦醇对多发性骨髓瘤细胞的增殖抑制作用及相关机制研究

目的：探讨白藜芦醇(resveratrol,RSV)对多发性骨髓瘤(MM)细胞增殖的影响及其分子机制。方法：不同浓度的RSV作用于MM细胞(MM1.S、RPMI-8226和U266)24-72 h,CCK-8法检测RSV对MM细胞增殖的影响；将RPMI-8226细胞分为RSV、miR-21 mimic、RSV+miR-21 mimic、miR-21 inhibitor和RSV+miR-21 inhibitor组，转染相应的质粒，碘化丙啶单染流式细胞术检测各组细胞的周期分布，Annexin V-FITC/PE-PI双染法观察各组细胞的凋亡情况，q RT-PCR技术检测RSV处理后MM细胞中miR-21的表达水平和各组细胞中的KLF5 miRNA表达水平，Western blot技术检测各组细胞中的KLF5蛋白的表达水平。结果：RSV呈时间-剂量依赖性抑制MM细胞增殖，诱导细胞凋亡发生；RSV处理MM细胞后，亚G₁期细胞增多，G2/M期细胞减少；同时RSV显著下调了MM细胞中miR-21的表达，且给予RSV后抵消了miR-21 mimic对MM细胞中KLF5表达的抑制...     

miR-103a-3p对肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响

摘要：目的〓探讨miR-103a-3p在人肺癌组织中的表达及对肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响。 方法：收集南通市肿瘤医院52例肺癌患者手术组织标本,qRT-PCR检测肺癌组织及癌旁组织中miR-103a-3p的表达;采用Lipofecta mineTM 3000 将miR-103a-3p mimic、mimic NC、miR-103a-3p inhibitor及inhibitor NC转染至A549细胞中,qRT-PCR检测miR-103a-3p的转染效率;CCK8实验检测其细胞增殖能力;流式细胞术检测其细胞凋亡能力;划痕愈合实验检测细胞的迁移能力;Transwell小室实验检测细胞的侵袭能力。 结果：miR-103a-3p在肺癌组织中的表达水平明显低于癌旁组织（p＜0.01）;qRT-PCR结果显示,转染miR-103a-3p mimic组细胞中miR-103a-3p的表达水平明显高于mimic NC组,且细胞增殖、迁移和侵袭能力受到抑制;而转染miR-103a-3p inhibitor 组细胞中miR-103a-3p的表达水平低于inhibitor NC组,且细胞增殖、迁移和侵袭能力增强;但细胞凋亡在4组中变化均不明显。 结论：miR-103a-3p在肺癌组织中低表达,miR-103a-3p能够抑制肺癌A549细胞的增殖、迁移和侵袭。     

miR-124 靶向调控CMTM6 增强CIK 对胶质瘤细胞杀伤效应机制研究

目的 研究细胞因子诱导杀伤（cytokine induced killer ,CIK）细胞对胶质瘤细胞杀伤效应的影响以及微小核糖核酸（miRNA,miR）-124 在此过程中的调节作用及可能机制。方法 收集2017 年3 月～ 2019 年10 月鄂州市中心医院神经外科收治的30 例脑胶质瘤患者的癌组织及癌旁组织标本,通过qRT-PCR 法检测脑胶质瘤及癌旁组织中miR-124,含MARVEL 跨膜结构域的趋化素样因子家族基因6 (chemokine-like factor-like MARVEL transmembrane domaincontainingfamily member 6,CMTM6) mRNA 表达量及相关性。诱导培养CIK 细胞后,分别与胶质瘤细胞C6 和U87共培养,另转染miR-124 mimic,inhibitor 及阴性对照序列,通过CCK-8 实验检测CIK 细胞及转染对胶质瘤细胞的杀伤效应;双荧光素酶报告实验分析miR-124 与CMTM6 基因的靶向关系,qRT-PCR 和Western blot 检测胶质瘤细胞中miR-124,CMTM6 mRNA 及蛋白表达。结果 与癌旁组织比较,脑胶质瘤组织中miR-124 表达(0.325±0.031 vs1.004±0.086) 显著降低,CMTM6 mRNA 表达(3.167±0.324 vs 0.981±0.089) 显著升高,差异有统计学意义（t=39.051,26.337,均P ＜ 0.001）,二者呈负相关（r2=0.262）。与转染阴性对照比较,miR-124 mimic 转染及其与CIK 细胞共培养对C6(72.84%±3.81% vs 99.67%±3.45%,51.46%±3.18% vs 74.59%±3.47%),U87 细胞(71.93%±3.94% vs98.26%±3.59%,52.67%±3.24% vs 76.28%±3.64%) 增殖均有显著抑制作用,差异有统计学意义（q=16.340,15.486,14.087, 13.886,均P ＜ 0.001）。双荧光素酶报告实验显示,miR-124 和CMTM6 具有明显的靶向关系。Western blot 结果显示,与转染阴性对照+CIK 组比较miR-124 mimic 与CIK 细胞共培养的C6,U87 细胞CMTM6蛋白表达(0.435±0.042vs 0.897±0.061,0.354±0.029 vs 0.725±0.068) 显著降低,转染miR-124 inhibitor 与CIK 细胞共培养的C6,U87 细胞CMTM6 蛋白表达(1.142±0.121 vs 0.897±0.061,1.326±0.125 vs 0.725±0.068) 显著增加,差异均有统计学意义（q=13.817,10.839, 7.327,17.558,均P ＜ 0.001）。结论 CIK 细胞可有效杀伤胶质瘤细胞,miR-124 可通过靶向抑制CMTM6 增强CIK 细胞对胶质瘤细胞的杀伤效应。     

miR-153-3p调控神经突的生长

目的探讨miR-153-3p在大、小鼠神经突生长中的作用。方法对数生长期C57BL/6小鼠N2A细胞和Rattus norvegicus大鼠PC12细胞,随机分为miR-153-3p过表达组(转染miR-153-3p过表达试剂miR-153-3p mimic)、miR-153-3p抑制组(转染miR-153-3p表达抑制剂miR-153-3p inhibitor)、过表达对照组(转染miR-153-3p mimic空白对照试剂miR-153-3p mimic NC)、抑制剂对照组(转染miR-153-3p inhibitor空白对照试剂miR-153-3p inhibitor NC)。转染48 h,采用实时荧光定量PCR法检测4组细胞miR-153-3p mRNA相对表达量,免疫荧光法检测神经突生长情况。结果 miR-153-3p过表达组N2A细胞、PC12细胞miR-153-3p mRNA相对表达量(28.98±1.63、19.67±0.88)均高于miR-153-3p抑制组(0.94±0.19、0.89±0.05)、过表达对照组(0.99±0.08、1.00±0.09)、抑制剂对照组(1.00±0.04、1.00±0.14)(P0.05),miR-153-3p抑制组、过表达对照组、抑制剂对照组比较差异均无统计学意义(P0.05);miR-153-3p过表达组N2A细胞、PC12细胞神经突总长度[(31.13±3.85)、(38.08±2.12)μm]和最长神经轴突长度[(18.04±2.58)、17.48±1.75)μm]均较miR-153-3p抑制组[N2A细胞:(54.53±1.83)、(31.74±2.36)μm;PC12细胞:(64.46±12.85)、(29.46±7.36)μm]、过表达对照组[N2A细胞:(42.53±6.29)、(24.99±3.47)μm;PC12细胞:(53.58±4.88)、(25.31±3.66)μm]、抑制剂对照组[N2A细胞:(41.33±2.77)、(24.57±3.86)μm;PC12细胞:(44.44±7.59)、(23.04±4.31)μm]短(P0.05),且过表达对照组、抑制剂对照组PC12细胞、N2A细胞神经突总长度和最长神经轴突长度较miR-153-3p抑制组短(P0.05),过表达对照组、抑制剂对照组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论miR-153-3p可抑制小鼠N2A细胞、大鼠PC12细胞神经突生长。     

miR-1290对肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的探究miR-1290对肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法回顾性收集2018年3月至2019年6月海南省人民医院收治的45例患者,取肺腺癌组织及癌旁组织,采用荧光定量聚合酶链式反应(PCR)检测组织中miR-1290的表达。将肺腺癌细胞随机分为对照组、miR-1290 mimic组和miR-1290 inhibitor组,通过脂质体2000试剂盒,分别以无意义序列、miR-1290 mimic、miR-1290 inhibitor转染细胞。分别采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、Transwell小室、划痕实验检测细胞增殖、迁移和侵袭能力。蛋白质印迹法检测Cyclin D1、p27、基质金属蛋白酶(MMP-2和MMP-9)蛋白的表达。经在线生物信息学和双荧光素酶报告基因检测miR-1290的靶基因,荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测miR-1290靶基因的表达。结果与癌旁组织比较,肺腺癌组织中miR-1290表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,miR-1290 mimic组miR-1290表达明显增加,miR-1290 inhibitor组miR-1290表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。培养48 h时,与对照组比较,miR-1290 mimic组细胞吸光度值、侵袭细胞数及划痕“愈合”率明显增加,miR-1290 inhibitor组细胞吸光度值、侵袭细胞数及划痕“愈合”率明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,miR-1290 mimic组细胞周期蛋白Cyclin D1、MMP-2和MMP-9蛋白表达量明显增加、p27蛋白表达明显降低,miR-1290 inhibitor组Cyclin D1、MMP-2和MMP-9蛋白表达量明显降低、p27蛋白表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。双荧光素酶报告基因检测显示,与对照组比较,共转染INPP4B-WT、miR-1290 mimic细胞中荧光表达量明显降低(P<0.05);与对照组比较,miR-1290 mimic组二型磷脂酰肌醇4磷酸酶(INPP4B)mRNA和蛋白表达量明显降低,miR-1290 inhibitor组INPP4B mRNA和蛋白表达量明显增加(P<0.05)。结论miR-1290在肺腺癌组织中表达上调,miR-1290可能靶向抑制INPP4B水平,促进肺腺癌细胞的增殖、侵袭和迁移。     

miR-495 对食管癌细胞株Eca109 在不同放射剂量和顺铂浓度作用的影响及机制研究

目的 探讨微小核糖核酸(microRNA,miR) -495 对食管癌细胞株Eca109 在不同放射剂量和顺铂浓度作用下的影响及机制。方法 采用分次放疗递增法诱导建立放射抵抗型细胞株Eca109（Eca109-RAD）及分次顺铂递增法诱导建立顺铂耐药型细胞株Eca109（Eca109-DDP）,实时荧光定量聚合酶链反应 (qRT-PCR) 检测miR-495 在Eca109-RAD 及Eca109-DDP 细胞中的表达。Eca109-RAD 及Eca109-DDP 分为NC 组和miR-495 mimic 组,转染后qRT-PCR 检测各组细胞中miR-495 的表达,CCK8 检测不同放射剂量对Eca109-RAD 细胞和Eca109 细胞存活能力的影响,及不同浓度的顺铂对Eca109-DDP 细胞和Eca109 细胞存活能力的影响,NC 组和miR-495 mimic 组经放射及顺铂处理后,采用流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率,Western blot 检测各组细胞中凋亡相关蛋白caspase 3,Bax 和Bcl-2 蛋白的表达。结果 与Eca109 细胞（0.99±0.01）相比,Eca109-RAD 细胞中miR-495 的表达（0.48±0.03 ）及Eca109-DDP 细胞中miR-495的表达（0.52±0.05）均降低,差异有统计学意义(t=27.930,15.970, 均P=0.000)。与NC 组细胞相比,miR-495 mimic组Eca109-RAD 细胞中miR-495 的表达（4.82±0.48 vs 1.00±0.03）及Eca109-DDP 细胞中miR-495 的表达（5.68±0.54vs 1.00±0.01）均显著增加,差异有统计学意义(t=13.760,15.100, 均P=0.000)。与NC 组相比,miR-495 mimic 组Eca109-RAD 细胞对放疗敏感度增加,差异均有统计学意义(t=6.780 ～ 18.860,P = 0.000 ～ 0.001);与NC 组相比,miR-495 mimic 组Eca109-DDP 细胞对顺铂敏感度增加,差异均有统计学意义(t=7.510 ～ 21.630,均P=0.000)。经放射处理后,与NC 组相比,miR-495 mimic 组Eca109-RAD 细胞平板克隆形成能力（46.33±5.69 个vs 93.33±4.51 个）及Eca109-DDP（34.67±2.52 个vs 89.00±4.03 个）细胞平板克隆形成能力显著降低(t=11.210,19.800, 均P=0.000) 。经放射处理后,与NC 组相比,miR-495 mimic 组Eca109-RAD 细胞凋亡率（25.66%±2.41% vs 8.39%±0.82%）及Eca109-DDP 细胞凋亡率（21.05%±5.37% vs 8.67%±1.15%）均显著增加(t=11.750,10.030,P=0.000,0.001)。经放射处理后,与NC 组相比,miR-495 mimic 组Eca109-RAD 细胞及Eca109-DDP 细胞中Bcl-2 蛋白表达均降低(t=4.650,7.450,P=0.006,0.001),Bax 和caspase 3 蛋白的表达均增加(t= 7.100 ～ 14.290, P=0.000 ～ 0.001)。结论 MiR-495 可能通过调控凋亡相关蛋白促进食管癌细胞放化疗敏感度。     

C反应蛋白对多发性骨髓瘤细胞系U266增殖机制的研究

为了观察C反应蛋白（CRP）对人骨髓瘤细胞系U266细胞增殖活性的作用机制,将液氮冻存的U266细胞复苏后,悬浮培养,第3天收集细胞备用,分别以不同浓度CRP（0、5、10、20mg／L）培养24小时,采用血液分析仪检测细胞增殖情况,采用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）方法检测凋亡相关蛋白survivin和HSP90ct的表达。结果发现：CRP处理的细胞组增殖率及survivin、HSP90α的表达量均高于对照组（P〈0．05）,20mg／LCRP组作用最显著;survivin、HSP90α之间表达具有显著相关性（r=0．737,P〈0．0001）。结论：CRP是通过调节凋亡抑制蛋白Survivin及HSP90α的表达发挥促进U266细胞增殖的作用。     

中电导钙激活性钾通道在多发性骨髓瘤细胞增殖、迁移、侵袭和IgE分泌中的作用

本研究旨在探讨中电导钙激活性钾通道（IKCal）在多发性骨髓瘤细胞增殖、迁移、侵袭及单克隆免疫球蛋白分泌中的作用。应用台盼蓝拒染法检测IKCal阻滞剂克霉唑（clotrimazole,CLO）对MM细胞株U266生存能力的影响;应用Transwell迁移及Matrigel侵袭实验检测CLO对U266细胞迁移及侵袭能力影响;应用双抗夹心法（ELISA法）检测CLO对U266细胞单克隆免疫球蛋白IgE分泌的影响。结果表明,小剂量CLO（≤1．0μmol／L）对U266细胞活力无明显影响。Transwell迁移实验及Matrigel侵袭实验显示,小剂量CLO（≤1．0μmol／L）作用后,u266迁移及侵袭能力明显降低（P〈0．05）。1．00μmol／LCLO作用24h与48h后,细胞上清液IgE浓度分别为（4．98±0．39）、（4．38±0．32）ng／ml,24h与48h对照组IgE浓度分别为（15．41±1．88）、（21．73±2．01）ng／ml,提示1．00μmol／L组与对照组比较具有显著差异（P〈0．05）。结论：CLO通过阻滞IKCal而抑制MM细胞迁移和侵袭及M蛋白分泌,这为MM靶向治疗提供新思路。     

马钱子碱对多发性骨髓瘤中成骨细胞及破骨细胞代谢的影响

本研究旨在探讨体外马钱子碱对多发性骨髓瘤(MM)中成骨细胞早期分化和破骨细胞代谢途径的影响,同时比较马钱子碱与硼替佐米在体外对多发性骨髓瘤的影响。用MTT法检测硼替佐米与马钱子碱对多发性骨髓瘤细胞株U266的半数抑制浓度(IC50);将多发性骨髓瘤细胞株U266的上清液加入到成骨细胞MC3T3-E1诱导分化体系中培养后,用RT-PCR方法测定碱性磷酸酶(ALP)、骨钙蛋白(OC)、骨保护蛋白(OPG)及骨保护蛋白配体(RANKL)的mRNA水平。结果表明,硼替佐米作用于多发性骨髓瘤细胞株U266 48小时后半数抑制浓度(IC50)为22.4 nmol/L,马钱子碱为0.16 mg/ml;经马钱子碱及多发性骨髓瘤细胞上清液共同干预组的成骨细胞中ALP、OC及OPG的mRNA水平高于只经多发性骨髓瘤细胞上清液干预组的成骨细胞的表达水平(p<0.05),而RANKL的mRNA水平则降低(p<0.05),且它们增高或降低的程度大于硼替佐米作用组(p<0.05)。结论:马钱子碱对多发性骨髓瘤中骨代谢机制的影响可能通过成骨细胞对破骨细胞的调节而发挥作用。实验证实,马钱子碱对多发性骨髓瘤的治疗效果优于硼替佐米。     

BAFF及其受体在多发性骨髓瘤中的表达

目的通过测定B淋巴细胞刺激因子（BLyS）及其受体在单克隆丙球蛋白血症中的表达水平,探讨BLyS及其受体与多发性骨髓瘤（MM）的关联性。方法流式细胞术对9例不同型别的MM患者及11例良性单克隆丙球蛋白血症（MGUS）患者,以及7名正常人外周B淋巴细胞表面BLyS及其3种受体BLyS受体（BAFFR）、穿膜蛋白活化物（TACI）、B细胞成熟抗原（BCMA）进行分析。并运用酶联免疫吸附试验（ELISA）对20例MM患者、23例MGUS患者、20名健康者血清BAFF水平进行检测。结果 MM、MGUS及正常对照组外周B淋巴细胞膜表面均表达BAFFR,但各组间差异无统计学意义（P〉0.05）。膜表面受体结合BAFF情况比较,各组间差异有统计学意义（P〈0.05）。MM组结合能力最强。TACI在MM及MGUS组低表达,其中MM组与正常对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。胞浆BCMA高表达,MM组与正常对照组或与MGUS组比较差异均有统计学意义（P〈0.05）。血清BLyS水平MM组高于MGUS组（P〈0.05）,MGUS组高于正常对照组（P〈0.05）。结论 BLyS及其受体BAFFR、TACI、BCMA可能与MM的发病机制有关。血清BLyS可作为MM的实验室辅助诊断指标之一。     

不同方案治疗多发性骨髓瘤患者血管内皮细胞功能的变化

目的探讨初治多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)患者不同方案治疗前、后内皮细胞功能的变化及其意义。方法 76例MM患者随机分成两组,36例MM患者采用长春地辛加表阿霉素加地塞米松(VAD)方案治疗,40例MM患者采用沙利度胺联合VAD(T-VAD)方案治疗,应用双抗体夹心酶联免疫法(ELISA)测定MM患者治疗前及2周期治疗后血浆内皮素1(ET-1)、凝血酶调节蛋白(TM)、组织因子(TF)、血管性血友病因子(vWF)水平以及应用发色底物法检测其血浆抗凝血酶(AT)、组织型纤溶酶原激活物(t-PA)及纤溶酶原激活物抑制物1(PAI-1)的活性水平。结果两组不同方案治疗后MM患者血浆ET-1、TM、t-PA、PAI-1水平均较治疗前明显升高;治疗后血浆TF、AT水平有明显下降;治疗前、后比较差异有统计学意义(t=2.061~3.674,P0.05或0.01);VAD方案治疗前、后血浆vWF水平变化不明显,差异无统计学意义(t=1.873,P0.05);T-VAD组治疗后血浆vWF水平比治疗前明显升高,差异有统计学意义(t=2.648,P0.05)。治疗后血浆ET-1、TM、TF、vWF、PAI-1水平T-VAD组比VAD组变化更明显,分别为(20.25±6.38)ng/L vs(14.12±5.16)ng/L(P0.01);(39.56±9.53)μg/L vs(33.91±9.42)μg/L(P0.05);(12.25±7.36)ng/L vs(15.85±5.28)ng/L(P0.05);(157.76±35.78)%vs(138.79±45.25)%(P0.05);(1.02±0.34)U/L vs(0.88±0.29)U/L(P0.05)。结论不同方案治疗MM患者均可导致内皮细胞损伤及纤溶异常,T-VAD治疗方案影响更显著;内皮细胞损伤及纤溶异常可能是MM患者治疗过程中易于发生血栓的主要原因。     

多发性骨髓瘤患者骨髓单个核细胞与U266细胞中ICSBP/IRF8基因表达沉默的初步研究

本研究旨在探讨多发性骨髓瘤(MM)细胞株U266和MM患者骨髓单个核细胞(MM-BMMNC)中干扰素调节因子8(ICSBP/IRF8)的表达,及DNA甲基化与ICSBP/IRF8表达沉默的关系。选取U266细胞株及10例MM患者MM-BMMNC,同时提取10例正常人骨髓单个核细胞(N-BMMNC)为对照。用荧光定量PCR测定ICSBP/IRF8的表达(利用2-ΔΔCT进行计算);利用甲基化特异性PCR检测ICSBP/IRF8启动子序列甲基化程度(以目的基因ICSBP/IRF8与内参照β-actin表达量的比值作为结果)。结果发现,与N-BMMNC相比,ICSBP/IRF8在U266细胞和MM-BMMNC中表达低下,且ICSBP/IRF8启动序列CpG岛甲基化程度明显增高,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:MM-BMMNC和U226细胞中ICSBP/IRF8基因表达沉默,ICSBP/IRF8启动序列CpG岛甲基化程度较正常显著增高,说明DNA甲基化可能造成了ICSBP/IRF8表达沉默。结果初步提示ICSBP/IRF8与MM的发生和发展机制可能有密切联系。     

抗原致敏、GM-CSF基因修饰的树突状细胞诱导免疫杀伤多发性骨髓瘤细胞U266的研究

本研究探讨负载有多发性骨髓瘤细胞U266可溶性抗原并携带外源基因粒-巨噬细胞集落刺激因子（GM—CSF）的树突状细胞（DC）,在体外激活自身T淋巴细胞形成细胞毒T淋巴细胞（CTLs）对U266细胞的杀伤作用。用U266可溶性抗原致敏DC,再用含有外源基因GM—CSF的腺病毒感染DC,将所得的DC与T细胞混合培养以形成对U266具有特异杀伤作用的CTL,最后通过测定乳酸脱氢酶（LDH）以计算CTL对U266的杀伤率。结果表明：负载抗原及外源基因组、负载抗原组和对照组之间的杀伤率存在显著差异（n=3,F=10．939,P〈0．05）;两两比较表明,负载抗原及外源基因组的杀伤率高于其它两组（P〈0．001）,且负载抗原组高于对照组（P〈0．001）。结论：以U266可溶性抗原致敏的DC可诱导出对U266具有特异杀伤作用的CTL,当所致敏的DC通过腺病毒感染而带有外源基因GM—CSF时,所诱导的细胞毒杀伤反应则进一步增强。     

膜联蛋白A2基因对多发性骨髓瘤细胞的诱导凋亡作用及相关机制研究

本研究探讨膜联蛋白A2（AnxA2）基因诱导骨髓瘤U266、RPMl8226细胞凋亡的作用及相关机制。采用AnxA2siRNA转染人骨髓瘤U266、RPMl8226细胞,应用实时PCR和Westernblot检测AnxA2基因和蛋白的表达。应用流式细胞术检测细胞凋亡,应用实时PCR检测凋亡相关基因的表达水平。结果表明,AnxA2siRNA转染U266和RPMl8226后,AnxA2基因和蛋白表达水平均明显下调;细胞凋亡率增高（P〈0．05）,同时降低凋亡相关基因p65NF-κB、儿_2、IL-6的表达（P〈0．05）,增强P53基因的表达（P〈0．05）。结论：AnxA2基因沉默在骨髓瘤细胞U266和RPMl8226凋亡中起促进作用。     

反义miR-21抑制宫颈鳞状细胞癌CaSki细胞系生长体外研究

目的探讨敲低miR-21表达对宫颈鳞状细胞癌细胞系CaSki增殖活性与凋亡的影响。方法实时荧光定量RT-PCR法检测正常宫颈组织、CaSki细胞转染前后miR-21的表达水平,采用MTT法、流式细胞术等技术检测转染后CaSki细胞增殖活性与凋亡的变化。结果 miR-21在CaSki细胞中表达水平为正常宫颈组织的3.25倍。CaSki细胞中转染反义miR-21(AS-miR-21)可显著抑制其表达。转染后24h、48h、72h、96h,MTT检测提示10nmol与20nmolAS-miR-21转染组中细胞增殖率较对照组明显降低(P<0.05),自48h抑制作用显现,且随着转染浓度增加,抑制作用增强,呈现剂量依赖性。细胞周期检测结果显示AS-miR-21转染组的G0/G1期细胞明显增多,S期细胞减少(P<0.05)。AnnexinⅤ联合PI技术检测细胞凋亡,结果显示AS-miR-21转染组早期凋亡细胞率[(23.40±2.16)%]明显高于空白对照组[(5.1±2.16)%]、阴性对照组[(6.87±0.55)%](P=0.000)。结论 AS-miR-21转染可敲低CaSki细胞中miR-21表达,并有效抑制细胞增殖活性,促进细胞凋亡。     

多发性骨髓瘤U266细胞株DNA甲基转移酶和甲基结合蛋白的表达

目的检测多发性骨髓瘤（MM）细胞DNA甲基转移酶（DNMTs）及甲基结合结构域（MBD）蛋白[包括甲基CpG结合结构域蛋白（MeCP2）和MBD2]的表达状况,探索其在基因甲基化过程的作用。并观察5-氮杂-2＇-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）和/或曲古霉素A（TSA）对DNMTs及MeCP2和MBD2的作用。方法利用荧光定量聚合酶链反应（PCR）分析MMU266细胞株DNMTs（DNMT1、DNMT3a、DNMT3b）及MeCP2和MBD2蛋白的mRNA水平,与10名正常人单个核细胞（PBMC）mRNA比较。4μmol/L5-Aza-CdR和/或0.1μmol/LTSA与U266细胞共培养,分析MBD2和MeCP2蛋白mRNA的变化情况。WesternBlot检测这2种药物对U266细胞MBD2蛋白的影响。结果各甲基化调控蛋白mRNA与PBMCmRNA相比,差异有统计学意义（P均〈0.05）。其中DNMTs和MBD2蛋白在U266细胞中表达升高,而MeCP2蛋白表达下降。经5-Aza-CdR和/或TSA作用后,MBD2表达下降,MeCP2升高。5-Aza-CdR在蛋白水平对MBD2的作用亦不显著;TSA可明显降低MBD2的表达,且具有时间依赖性。结论 DNMTs和MBD2、MeCP2蛋白在MMU266细胞中表达异常,可能与U266细胞多个抑癌基因启动子高甲基化相关。5-Aza-CdR和TSA可以逆转U266细胞MBD2和MeCP2的表达。