六氟化硫微泡介导人脂联素基因兔主动脉内转染及表达

背景:超声微泡载基因传输技术是一种新兴起的定向传输基因技术。目的:构建含人脂联素基因脂联素的真核表达载体,采用六氟化硫微泡介导脂联素基因进行兔主动脉转染及表达,为脂联素用于体内干预动脉粥样硬化的研究奠定基础。方法:人心外膜脂肪组织提取总RNA构建pcDNA3.1-脂联素重组体,通过瞬时转染人脐静脉内皮细胞验证载体构建是否成功。21只大白兔随机分成对照组(n=6)和脂联素转基因组(n=15),脂联素转基因组经兔耳缘静脉注射pcDNA3.1-脂联素与六氟化硫微泡的混合物,诊断超声仪照射兔胸腹主动脉区域,于照射后2,7,14d取兔主动脉血管及血清,检测主动脉血管壁中脂联素基因的表达及血清中脂联素蛋白水平。结果与结论:pcDNA3.1-脂联素瞬时转染入人脐静脉内皮细胞可有效表达。六氟化硫微泡传输脂联素基因2d后即可检测到兔主动脉血管壁脂联素基因高表达,持续至14d,且兔血清脂联素蛋白水平显著增加(P<0.01)。说明pcDNA3.1-脂联素重组体构建成功,六氟化硫微泡可在快速血流状态下,安全、高效传输脂联素基因入兔主动脉血管壁并有效表达与分泌至血浆。     

脂联素受体基因多态性与新疆维吾尔族、汉族原发性高血压的相关研究

目的:探讨脂联素受体基因rs12045862T/C、rs7539542G/C两个等位基因多态性与新疆维吾尔族、汉族原发性高血压之间的关系.方法:选择新疆维吾尔族原发性高血压患者309例,汉族原发性高血压患者368例,同时选取维吾尔族正常对照组300例,汉族正常对照组349例,采用TaqMan探针法,对脂联素受体基因的2个等位基因多态性rs12045862T/C、rs7539542G/C进行检测.结果:新疆维吾尔族、汉族原发性高血压组与正常对照组中脂联素受体基因rs12045862T/C基因多态性无显著差异(P=0.49;P=0.79),新疆维吾尔族、汉族原发性高血压组与正常对照组中脂联素受体基因rs7539542G/C基因多态性无显著性差异(P=0.18;P=0.55).结论:脂联素受体基因rs12045862T/C、rs7539542G/C等位基因多态性与新疆维吾尔族、汉族原发性高血压均无显著相关,其结论在两个民族中一致.     

不同糖耐量人群脂联素基因多态性与胰岛素抵抗的关系

目的 探讨不同糖耐量人群血清脂联素基因多态性与胰岛素抵抗(IR)的关系.方法 240例受试者,其中2型糖尿病患者(DM组)104例,糖耐量减低者(IGT组)46例,对照组(NGT组)90例,各组按体质量指数(BMI)分成肥胖和非肥胖亚组,放射免疫法测定胰岛素(FINS);酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清脂联素水平,同时测量身高、体质量、腰围、臀围.聚合酶链反应限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)检测脂联素 45位T/G基因多态性.结果 ①IGT组脂联素水平(5.29±1.13) mg/L和DM组脂联素水平(4.15±0.76) mg/L较NGT组脂联素水平(8.08±0.45) mg/L明显降低(均P＜0.01);②与NGT组相比,IGT组的空腹血糖(FBG)、甘油三酯(TG)明显升高,高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)明显下降(P＜0.05～0.01);DM组的FBG、胰岛素抵抗指数(IRI)、TG的水平高于前两组,HDL-C明显低于NGT组(P＜0.05～P＜0.01);③脂联素与WHR、IRI、SBP、FBG和TG呈负相关,与HDL-C呈正相关;④IGT组、DM组GG基因型频率分别为8.7%和11.6%,显著高于NGT组(4.5%),GG基因型携带者脂联素水平显著降低.结论 ①脂联素水平在IGT和DM患者中明显降低,提示脂联素在2型DM发病中可能起一定作用,可作为2型DM发病的一个预测指标;②各组中肥胖亚组IRI明显升高,说明肥胖人群存在IR,而各组肥胖亚组脂联素水平也明显降低,提示脂联素可能是联系肥胖、IR和2型DM的一个纽带;③循环中的脂联素水平与脂联素 45位基因多态性密切相关,GG基因型携带者循环中的脂联素水平明显降低;④脂联素 45位基因多态性与糖尿病的发生有关,GG基因型可能是糖尿病的易感基因.     

脂联素单核苷酸多态性+45位点的表达在2型糖尿病中的研究

目的研究脂联素单核苷酸多态性SNP＋45位点基因在广州汉族2型糖尿病患者中的分布,评价该基因是否为2型糖尿病的易感基因。方法采用聚合酶链式反应-限制性内切酶长度多态性技术,对2型糖尿病（T2DM）组和健康对照（CON）组人群进行脂联素基因SNP＋45多态位点基因的检测。结果T2DM组人群脂联素SNP＋45位点的基因型分布：TT型56．4％、GT型34．9％、GG型8．7％。CON组脂联素SNP＋45位点的基因型分布：TT型42．0％、GT型48．2％、GG型9．8％。结论广州地区T2DM组与CON组脂联素SNP＋45位点的基因型差异有统计学意义。T2DM组T／T型基因明显增多;CON组GT＋GG型基因增多。提示脂联素基因第2外显子45位点多态性与2型糖尿病相关,TT基因型者具有较高的2型糖尿病易感性。     

2型糖尿病与代谢综合征患者血清脂联素水平及脂联素单核苷酸多态性45基因分析

目的探讨血清脂联素水平及脂联素基因单核苷酸多态性（SNP）45T→G与2型糖尿病（T2DM）及代谢综合征（MS）的关系。方法采用放射免疫法对MS组患者183例、T2DM组患者180例和健康人群（对照组）144例进行血清脂联素水平测定,并用TaqMan探针技术进行脂联素基因SNP45分析。结果T2DM组和MS组血清脂联素水平较对照组显著降低（7．17±3．43）mg／L,（6．81±2．99）mg／Lvs（12．06±5．74）mg／L（均P〈0．05）;多元逐步回归分析显示：空腹胰岛素是影响MS组患者血清脂联素水平的独立相关因素。脂联素基因多态性分析：SNP45在T2DM组、MS组与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）;等位基因分布频率提示G等住基因在T2DM组与MS组中多见（P〈0．05）;T2DM组、MS组中携带TG＋GG型的患者血清脂联素水平（6．63±2．79）mg／L、（6．19±2．40）mg／L显著低于TT型的患者（9．17±4．47）mg／L、（8．20±3．88）mg／L（P〈0．05）。结论低脂联素血症与T2DM、MS的发生发展有关,SNP45G／G基因型可能是中国汉族人MS的易感基因。     

脂联素及其受体基因多态性与乳腺癌相关性的研究进展

脂联素是体内唯一一种来源于脂肪组织的保护性脂肪因子,与乳腺癌的发生、发展密切相关。近年来关于脂联素与乳腺癌发病危险性的研究取得了较大进展,本文就脂联素及其受体基因多态性与乳腺癌的相关性研究进展做一综述。     

脂联素基因多态性与妊娠期糖耐量受损相关性研究

目的探讨脂联素基因多态性与妊娠期糖耐量受损相关性。方法选取2013年2月-2014年2月我院收治的妊娠期糖尿病患者共60例,以及选取同期我院体检糖耐量正常的孕妇共60例,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术分析脂联素基因多态性位点(+276G/T、+45T/G、-3971A/G)。结果脂联素基因、276、+45位点的等位基因频率经过Hardy-Weinberg遗传平衡定律检验指出各基因频率已达遗传平衡(P0.05)。两组的脂联素基因+276G/T等位基因、基因型频率分布对比,均不存在显著性差异(P0.05)。受损组患者的G等位基因频率明显低于正常组(P0.05)。两组的脂联素基因+45T/G基因型频率分布对比,均不存在显著性差异(P0.05)。两组的脂联素基因-3971的G、A等位基因、基因型频率分布对比,均存在显著性差异(P0.05)。结论本文推测脂联素基因多态性+45T/G可能是妊娠糖尿病发病的易感位点之一,-3971位点A等位基因可能为妊娠糖尿病的一个危险原因,因此监测孕妇此位点能预测妊娠期糖尿病的发生,从而及早积极处理多种危险因素,从而有助于早期预防妊娠期糖尿病,降低远期并发症发生及对于胎儿不佳的影响。     

脂联素水平及基因多态性与原发性高血压的研究进展

脂联素(adiponectin,APN)由脂肪细胞特异性分泌的蛋白质,可直接作用于肝脏、骨骼肌和血管,具有调节糖脂代谢、抗炎症、抗动脉粥样硬化等多种作用,是一种具有广泛生物学效应的细胞因子.人脂联素基因序列中存在相当数量的等位基因单核苷酸多态性(SNPs),而该基因的SNPs部分调控着脂联素的表达,影响着血清中脂联素水平及功能,是原发性高血压的一个新的易感因素,但存在种族和区域差异.     

血浆脂联素水平与原发性高血压的关系

目的:查明原发性高血压及降压药物对血浆脂联素水平的影响,揭示升高血浆脂联素水平的临床意义。资料来源:应用计算机检索Medline 1996-01/2006-12与脂联素及高血压相关的文献,检索词为“adiponectin,hypertension”,并限定文章语种为English。同时检索中国期刊全文数据库1996-01/2006-12有关脂联素的文章,检索词为“脂联素,高血压”,限定文章语种为中文。资料选择:对资料进行初审,选取包括脂联素基因、蛋白、受体及与高血压研究密切相关的文献。涉及到影响血浆脂联素的治疗药物,优先选择临床随机对照试验。排除标准:重复性研究。资料提炼:共收集210篇关于脂联素与高血压的研究文献,其中综述类文献20篇,选择2篇,英文随机对照试验8篇,全部选入。排除与选择标准关系不大的177篇。资料综合:符合标准文章33篇。脂联素是近年发现的脂肪细胞因子之一,具有重要的生理功能影响体内代谢和某些疾病的发生发展。原发性高血压患者血浆脂联素水平降低日益受到重视。已有的研究结果表明,脂联素及其受体可能成为防治高血压等心血管病的新靶点。结论:原发性高血压患者的血浆脂联素水平是降低的,但原发性高血压致血浆脂联素水平降低的确切机制尚未完全阐明。人们正在研究降压药物对血浆脂联素水平的影响,所取得的一些初步结果有待于进一步验证和评价。     

脂联素基因多态性与代谢综合征相关性研究

目的分析脂联素基因(apM1)多态性与代谢综合征的相关性。方法无亲缘关系的344例汉族不同程度代谢异常者,根据代谢异常程度分为代谢综合征组180例(MS组)与代谢异常组164例,选择同期50例无代谢异常者为对照组,采用多聚酶链反应-限制性片段长度多态性方法检测3组apM1基因外显子2+45和外显子3+331 2个位点的基因多态性,并检测血脂等指标。结果中国汉族人apM1基因外显子2+45位点存在基因多态性,有TT,TG,GG 3种基因型;3组间基因型频率及等位基因频率比较差异无统计学意义(P>0.05);G等位基因携带者(G+)与非G等位基因携带者(G-)血清脂联素、血脂、血糖及胰岛素水平差异无统计学意义(P>0.05);中国汉族人外显子3+331位点不存在基因多态性,均为TT基因型。结论中国汉族人脂联素基因外显子2+45位点的多态性与代谢综合征无相关性;外显子3+331位点不存在基因多态性。     

脂联素基因启动子区甲基化状态对大鼠实验性非酒精性脂肪性肝病的影响

目的探讨脂联素基因启动子区甲基化与大鼠实验性非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的相关性。方法以24只SD大鼠为实验对象,分为3组,各为正常组、NAFLD模型组和姜黄素组。每只大鼠检测血生化指标,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测大鼠肝脏脂联素基因mRNA表达和亚硫酸氢盐克隆测序法(BSP)检测其甲基化程度,比较两组间的差异。结果 1NAFLD模型组对比正常组大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、甘油三脂(TG)、总胆固醇(TC)、血糖均显著提高(P0.05);姜黄素组较NAFLD模型组上述血清指标明显下降(P0.05)。2在NAFLD模型组中大鼠肝脏脂联素mRNA表达率显著低于正常组,姜黄素干扰后,对比NAFLD模型组表达上调(P0.05)。3NAFLD肝脏组织脂联素的甲基化程度明显高于正常大鼠肝组织,给予姜黄素去甲基化后,甲基化程度明显下降。对脂联素启动子区10个CpG位点分析,发现除了1679、1714两个位点外,余位点甲基化率均高于正常组,经数据统计后,发现只有1629、1641、1669、1690、1708、1791共6个位点甲基化率显著高于正常组(P0.05);给予姜黄素干扰后,除过1629、1679之外所有位点甲基化率均有下降,但只有整体甲基化率及1641、1669、1690、1708、1791共5个位点具有统计学意义(P0.05)。结论 1给予姜黄素治疗后,大鼠血清学指标改善,提示姜黄素在护肝、降脂、降糖方面发挥重要作用。2DNA甲基化可能是NAFLD的发病机制之一,姜黄素可能通过降低脂联素启动子区CpG甲基化水平,上调脂联素mRNA表达,减轻大鼠NAFLD大鼠模型的肝脂肪变性。3脂联素基因表达异常与该基因启动子区甲基化密切相关。     

脂联素基因SNPs-11377C/G多态性与女性乳腺癌的相关性

目的探讨脂联素基因SNPs-11377C/G多态性与女性乳腺癌发生的相关性。方法用聚合酶链式反应-限制性内切酶长度多态性(PCR-RFLP)技术观察脂联素基因在不同人群中的单核苷酸多态性,其中包括乳腺癌组患者70人,健康对照组30人。结果 SNPs-11377C/G等位基因频率在乳腺癌和正常对照组间分布差异无统计学意义(P0.05),乳腺癌患者组CG基因型分布频率高于GG型和对照组相比差异有统计学意义(P0.05)。乳腺癌组CC基因型CA153与CEA表达水平高于对照组(P0.05),差异有统计学意义。结论脂联素基因启动子区SNPs-11377C/G基因多态性与乳腺癌疾病发生有相关性。     

APN与疾病关系的研究

1概述 脂联素（adiponectin,APN）是一种由白色脂肪细胞分泌的脂肪因子之一,APN在人类属于可溶性防御性胶原家族成员,由244个氨基酸组成的多肽.人APN基因（aPM1）定位于3q27染色体上,全长16kb,aPM1基因由3个外显子和2个内含子构成.     

脂联素基因SNP+45(T/G)多态性与昆明汉族2型糖尿病的相关性研究

目的:研究脂联素基因SNP+45(T/G)多态性与昆明地区汉族2型糖尿病(T2DM)患者之间的关系。方法:PCR-RFLP方法检测脂联素SNP+45(T/G)多态性。结果:昆明汉族脂联素SNP+45(T/G)多态性分布与国内其他地区类似,而与德国人群有差别。T2DM患者GG基因型频率明显增高,GG型HOMA-IR增高、HDL-C降低。结论:昆明汉族脂联素SNP+45(T/G)多态性与T2DM相关,GG型基因可能是中国昆明汉族人群T2DM的遗传危险因素。     

2型糖尿病女性人群AMPKα2基因多态性与冠心病及脂联素抵抗素的关系

目的 探讨2型糖尿病(T2DM)女性患者AMPKα2基因多态性(rs2796516)与冠状动脉粥样硬化性心脏病(CAD)的相关性,及与脂联素、抵抗素的关系.方法 收集40例CAD合并T2DM女性患者(CAD+DM组)和45例T2DM女性患者(DM组),利用聚合酶链限制性长度多态性分析(PCR-RFLP)及基因测序技术检测AMPKα2基因多态性.并通过酶联免疫法(ELISA)测定血清脂联素、抵抗素浓度.结果 两组间AMPKα2基因型分布差异有统计学意义(χ2=6.50,P=0.04),GG基因型为CAD+DM发病的保护因素(OR为0.33,95% C.I.为0.13~0.81;χ2=5.95;P=0.02),AMPKα2基因多态性与脂联素、抵抗素及低密度脂蛋白水平明显相关.结论 T2DM女性患者AMPKα2基因多态性(rs2796516)与CAD及脂联素、抵抗素水平具有相关性.     

枸杞多糖对2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗及脂联素基因表达的影响

目的 观察枸杞多糖(LBP)对2型糖尿病(2-DM)大鼠胰岛素抵抗及肾周脂肪组织脂联素基因mRNA表达的影响.方法 选用高脂饲料加小剂量链尿佐菌素建立2-DM大鼠模型,将2-DM大鼠随机分为模型对照组(水)和LBP高、中、低剂量组,每组10只,另选10只大鼠为正常对照组.各组灌胃8周后,RT-PCR法检测肾周白色脂肪组织脂联素基因mRNA水平,同时测定空腹血糖(FBG)、血清胰岛素(FINS)和血脂的含量,并计算胰岛素抵抗指数(IRI).结果 与模型组比较,LBP高、中剂量组2-DM大鼠肾周脂肪组织脂联素基因mRNA表达明显升高(P<0.01),LBP各剂量组FBG、FINS、IRI、总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白水平明显降低(P<0.05～0.01).结论 LBP可通过增加脂联素基因mRNA表达,改善2-DM大鼠脂代谢紊乱,降低胰岛素抵抗,从而实现其降血糖作用.     

云南汉族脂联素基因-11377 C＞G多态性特点

目的:研究脂联素基因-11377 C＞G在云南汉族人群中的基因多态性特点.方法:应用MassArray分子量阵列技术,对83例云南汉族人群脂联素基因-11377 C＞G单核苷酸多态性进行检测.结果:云南汉族人群中脂联素基因-11377 C＞G的CC、CG、GG基因型频率分别为46.4％、48.8％和4.8％,C、G等位基因频率分别为70.8％和29.2％. CC基因频率和C等位基因频率与国内各研究、日本人、多数高加索人间无显著性差异(p＞0.05),但明显低于南非黑人,差异存在统计学意义(p＜0.001),明显高于瑞典人群(p＜0.001).结论:不同人种间-11 377 C＞G是存在种族差异性的.     

抵抗素基因多态性与结直肠癌易感性的相关性

目的 探讨抵抗素基因多态性与结直肠癌易感性的相关性。方法 选取56例结直肠癌患者为研究对象(病例组),选取同期52例结直肠腺瘤患者为对照组,选取同期60例健康体检者作为健康组。提取3组血清基因组DNA,采用聚合酶链反应(PCR)法扩增抵抗素基因rs1862513片段并进行基因测序,探究其基因多态性;采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清抵抗素、脂联素和瘦素水平;比较3组抵抗素基因多态性位点rs1862513基因型分布;采用Logistic回归分析法分析影响结直肠腺癌发生的因素。结果 抵抗素基因在rs1862513位点上有GG型、GC型、CC型共3种基因型,健康组中GG型基因型最多,CC型基因型最少;对照组GC型基因型最多,CC型基因型最少;病例组CC型基因型最多,GG型基因型最少。病例组、对照组及健康组各基因型符合Hardy-Weinberg平衡定律(P>0.05)。病例组抵抗素水平低于健康组和对照组,脂联素、瘦素水平高于健康组和对照组,差异有统计学意义(P<0.05);对照组抵抗素水平低于健康组,脂联素、瘦素水平高于健康组,差异有统计学意义(P<0.05)。CC型...     

人脂联素基因的克隆构建及其序列分析

背景:脂联素已经成为缺血性疾病基因治疗的新靶点,而成功进行脂联素基因治疗的关键是脂联素基因的克隆.基因克隆主要有定向克隆法和T-A克隆法,定向克隆法操作较复杂;而T-A克隆法操作简便,成功率高.目的:应用T-A克隆法克隆人脂联素基因编码区,对其进行测序验证,并与GenBank比对.设计、时间及地点:基因水平的验证实验,于2006-061/2008-12在福建医科大学附属第一医院高血压研究所及福建中医学院中西医结合研究院完成.材料:脂肪组织取自福建医科大学第一附属医院外科患者术中切除的大网膜脂肪垫,液氮中冻存.Trizol为Invitrogen公司产品:M-MLV,Gel Extract Kit为PROMEGA公司产品;Taq酶为TIANGEN公司产品;限制性内切酶BamH Ⅰ,Sal Ⅰ,pMD18-T载体为TAKARA公司产品.方法:从人大网膜脂肪组织提取总RNA,经反转录-聚合酶链反应扩增出人脂联素编码区基因,再将人脂联素基因编码区克隆入载体pMD18-T中,通过限制性内切酶酶切鉴定后,对其进行测序验证,并与GenBank比对.主要观察指标:人脂联素克隆质粒酶切鉴定结果,人脂联素基因克隆序列与GenBank比对结果.结果:扩增得到人脂联素基因编码区,获得人脂联素的正向和反向克隆,与GenBank中人脂联素基因编码区序列比对均为完全一致.结论:成功地克隆出人脂联素基因编码区.