HBV相关慢加急性肝衰竭患者血清HBsAg水平与HBV DNA水平及病情严重程度的关系

目的 探讨HBV相关慢加急性肝衰竭(ACLF)患者血清HBsAg水平与HBV DNA水平及病情严重程度的关系.方法 选取慢性乙型肝炎(CHB)患者119例(CHB组)和ACLF患者98例(ACLF组).采用罗氏电化学发光法检测血清HBsAg和HBeAg,荧光定量PCR法检测血清HBVDNA水平.分别比较两组不同HBeAg状态患者的HBsAg和HBV DNA水平差异以及HBsAg和HBV DNA水平的相关性.结果 ACLF组和CHB组患者血清HBeAg阴性患者分别占68.4％(67/98)和42.9％(51/119),差异有统计学意义(P＜0.01).ACLF组血清HBV DNA水平与CHB组比较差异无统计学意义(P＞0.05),两组血清HBeAg阳性患者HBV DNA均高于同组血清HBeAg阴性患者(P＜0.05).ACLF组血清HBsAg水平在血清HBeAg阳性和阴性患者间比较差异无统计学意义(P＞0.05),但均高于CHB组血清HBeAg阳性患者(P＜0.05).血清HBeAg阳性患者血清HBsAg与丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶具有相关性(P＜0.05),血清HBeAg阴性患者血清HBsAg与血清HBV DNA水平及生化指标无显著相关性(P＞0.05).不同HBV DNA水平ACLF患者中不同HBsAg水平患者的比例比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 HBV相关ACLF患者血清HBsAg水平与HBV DNA水平及病情的严重程度无直接平行关系.     

HBV DNA及HBeAg定量在乙型肝炎患者抗病毒治疗方案选择中的指导作用

目的 根据慢性乙型肝炎患者HBV DNA及HBeAg定量高低的不同组合,观察其对IFN、阿德福韦酯(ADV)的治疗效果,寻求抗病毒药物的最佳治疗方案.方法 选择HBeAg阳性患者165例,根据所测HBV DNA及HBeAg定量高低的不同,将其分为A、B、C、D组.每组患者再随机分为IFN治疗组及ADV治疗组,48周时观察不同药物在各组患者治疗效果中的各项指标.结果 IFN治疗组对HBV DNA抑制率、HBV DNA水平下降(≥2lg拷贝/ml)的患者比例、HBV DNA阴转率及ALT复常率与ADV治疗组比较差异均无统计学意义,但在HBeAg定量下降≥500.00 COL/ml的患者比例、HBeAg阴转率、HBeAg血清转换率等项指标比较差异有统计学意义(P<0.05).并提示随着HBV DNA及HBeAg定量的增高,IFN和ADV的疗效依次下降,表现在ADV治疗组更为明显,显示在HBeAg血清转换率方面,IFN疗效明显优于ADV.结论 根据HBV DNA及HBeAg定量的高低,对选择不同的抗病毒治疗方案具有指导作用.     

IFN-α治疗慢性乙型肝炎中出现HBeAg血清学转换的预测因素分析

目的 观察慢性乙型病毒性肝炎(chronic hepatitis B,CHB)患者治疗后不同时期外周血谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、乙肝病毒脱氧核糖核酸(hepatitis B virus deoxyribonucleic acid,HBV DNA)、乙肝表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)、乙肝e抗原(hepatitis B e antigen,HBeAg)滴度的变化,并探讨其预测HBeAg血清学转换的价值.方法 对72例选择干扰素(interferon,IFN)治疗的HBeAg阳性CHB患者随访48周,在治疗0、12、24、48周收集患者的血清,定量检测HBsAg、HBeAg、HBV DNA、ALT水平.结果 基线ALT、HBeAg水平与治疗应答相关.治疗12、24周时HBsAg＜4.33、4.07(lg IU/ml),下降率＞65％、47％,治疗12、24周时HBeAg＜2.38、0.87(lg S/CO),下降率＞71％、95％预测治疗48时出现HBeAg血清学转换的敏感性、特异性高(均有P＜0.05).结论 IFN治疗HBeAg阳性CHB患者时,动态监测HBsAg、HBeAg的水平变化能作为预测是否出现HBeAg血清学转换的良好指标.     

乙型肝炎病毒核酸载量与乙型肝炎病毒大蛋白的相关性研究

目的 探讨慢性乙型肝炎e抗原( HBeAg)阴性患者血清中乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)病毒核酸载量与乙型肝炎病毒大蛋白(hepatitis B virus large surface protein,LHBs)之间的相关性,从而探讨LHBs是否可以用作HBeAg阴性乙型肝炎患者病毒复制程度的判定指标.方法 采集83例HBeAg阴性慢性乙型肝炎患者血清,采用ELISA进行LHBs检测,全自动免疫分析仪进行HBeAg检测,实时荧光定量PCR方法进行HBV DNA检测.分析HBV DNA无拷贝数组、低拷贝数组及高拷贝数组3组中LHBs的检出率以及HBV DNA不同拷贝数组与LHBs的相关性.结果 在HBV DNA无拷贝数组,LHBs的阳性率为6.4％;低拷贝数组,LHBs的阳性率为56.3％,吸光度值与拷贝数对数值呈正相关,但无统计学意义(r=0.25,P=0.362);高拷贝数组,阳性率为95.0％,吸光度值与拷贝数对数值有良好相关性(r=0.90,P＜0.001).结论 检测HBeAg阴性慢性乙型肝炎患者血清LHBs,有助于判断患者体内HBV的复制程度,但是否能够作为HBeAg阴性乙型肝炎抗病毒治疗终点的有效判定指标,尚有待进一步探讨.     

慢性HBV感染者血浆循环DNA水平相关因素的研究

目的探讨影响慢性HBV感染者血浆循环DNA水平变化的相关因素。方法选择145例慢性HBV感染者作为研究对象,其中慢性乙型肝炎轻度30例、中度30例、重度25例;乙肝后肝硬化30例;肝癌30例。选择30例健康体检者作为对照组。采用双重荧光定量PCR法检测血浆中循环DNA的含量。结果随着慢性乙型肝炎病情加重,外周循环DNA水平逐渐升高,但在肝硬化组循环DNA水平反而降低,肝癌组又显著升高,组间差异具有统计学意义(P<0.05)。在115例慢性HBV感染者中HBeAg阳性79例,HBeAg阴性36例,HBeAg阳性患者外周循环DNA水平(68.79±14.23ng/mL)显著高于HBeAg阴性患者(23.68±12.56ng/mL)(t=2.162,P=0.032);慢性HBV感染者外周循环DNA水平与ALT和AST水平呈显著正相关,r值分别为0.612和0.632,P值分别为0.014和0.021,但与血清HBVDNA无相关性(P>0.05)。结论慢性HBV感染者外周循环DNA水平与病毒复制无关,但可反映肝细胞的炎症坏死程度。     

乙型肝炎病毒表面抗原在慢性乙型肝炎病毒感染后不同临床阶段的定量检测及临床意义

目的 测定慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染后不同临床阶段患者血清乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）定量,同时探究其与患者血清HBV DNA水平和年龄的相关性.方法 将未经抗病毒治疗的774例慢性HBV感染患者按照临床特征分为六组：慢性HBV携带组（102例）、非活动性HBsAg携带组（211例）、乙型肝炎病毒e抗原（HBeAg）阳性慢性乙型肝炎组（236例）、HBeAg阴性慢性乙型肝炎组（114例）、HBeAg阳性乙型肝炎肝硬化组（52例）、HBeAg阴性乙型肝炎肝硬化组（59例）,采用化学发光微粒子免疫分析法测定患者血清HBsAg定量,实时荧光定量聚合酶链反应法测定患者血清中HBV DNA定量,血清HBsAg和HBV DNA需要经常用对数转换后进行组间比较.结果 HBsAg定量由高到低分别为慢性HBV携带组、HBeAg阳性慢性乙型肝炎组、HBeAg阴性慢性乙型肝炎组、非活动性HBsAg携带组、HBeAg阴性乙型肝炎肝硬化组和HBeAg阳性乙型肝炎肝硬化组[7.80（6.69 ～ 8.32）、7.11（5.42～8.27）、6.57（5.66 ～ 7.53）、6.38（4.39～ 7.40）、6.22（4.84～ 6.91）、6.13 （5.48～7.01）].HBeAg阳性慢性乙型肝炎组和HBeAg阴性慢性乙型肝炎组HBsAg定量与HBV DNA呈正相关（r=0.714和0.390,P＜0.01）.慢性HBV感染患者血清HBsAg的定量与年龄呈负相关（r=-0.416,P＜0.01）;监测年龄≥40岁非活动性HBsAg携带者的血清HBsAg定量有重要的临床价值.结论 慢性HBV感染后不同临床阶段患者血清HBsAg定量不同,血清HBsAg定量与患者HBV DNA水平和年龄相关,临床上应重点监测年龄≥40岁非活动性HBsAg携带患者血清HBsAg定量.     

乙型肝炎患者血清前S1抗原检测的临床意义

目的探讨前S1抗原在乙型肝炎血清标志物模式中的价值及临床意义。方法对3017例乙型肝炎表面抗原(HBsAg)阳性患者血清标本同时进行乙型肝炎病毒(HBV)标志物、前S1抗原的酶联免疫吸附试验(ELISA)检测和HBV DNA的实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测,并分前S1抗原阳性组与阴性组进行统计学分析。结果前S1抗原阳性的乙型肝炎血清标志物模式组中HBV DNA的检出率为77.09%,检出率较高的3种血清学模式是HBsAg与乙型肝炎e抗原(HBeAg)双阳(模式⑤,100.00%),HBsAg、HBeAg、乙型肝炎核心抗体(HBcAb)三阳(模式①,95.99%),HBsAg、HBeAg、HBeAb、HBcAb四阳(模式③,94.44%);前S1抗原阴性的乙型肝炎血清标志物模式组中HBV DNA的检出率是29.30%,检出率较高的3种血清学模式是模式⑤(100.00%)、模式③(66.67%)、模式①(64.04%)。前S1抗原阳性组检出HBV DNA的平均含量是(7.36±0.90)拷贝/mL,阴性组是(5.42±1.16)拷贝/mL。两组比较:HBV DNA的检出率(P<0.005)和HBV DNA的含量(P<0.05)差异都有显著性。结论前S1抗原作为一种新的反映HBV复制状态和传染性的指标,在乙型肝炎血清标志物模式中具有重要意义,其阳性血清标志物模式患者HBV复制活跃,HBV含量高。     

HBsAg阳性母亲血清HBV DNA含量对婴儿联合免疫接种效果的影响

目的:探讨孕妇血清HBV DNA含量对乙肝疫苗与HBIG联合免疫阻断HBV母婴传播效果的影响.方法:53例HBsAg阳性且持续时间超过6个月的孕妇及其所生的53例婴儿,按照孕妇血清HBV DNA水平分3组,即＞106拷贝/ml、103～106拷贝/ml和＜103拷贝/ml 3组,所有婴儿于出生6h内及30天分别注射200 IU HBIG,同时分别于出生24 h内、生后1个月及生后6个月注射3次20 μg的重组酵母乙肝疫苗.检测孕妇分娩时和婴儿出生时以及1岁时静脉血HBV标志物和HBVDNA含量.结果:3组孕妇HBsAg滴度之间无显著差别(P＞ 0.05);HBV DNA＞ 106拷贝/ml组血清HBeAg阳性率和滴度均显著高于103～106拷贝/ml和＜103拷贝/ml组(P＜0.05).所有新生儿血清HBV DNA水平均小于检测下限(1 000拷贝/mL);HBsAg阳性率为9.4％ (5/53),3组新生儿HBsAg阳性率和滴度无显著差别(P＞0.05);随着孕妇HBV DNA水平升高,新生儿血清HBeAg阳性率和滴度相应增高,而抗-HBe阳性率和滴度相应降低,各组间差异具有统计学意义(P＜0.05).婴儿出生12个月时,所有婴儿血清HBsAg和HBeAg检测结果均为阴性,血清HBV DNA水平均在检测下限以下.HBV DNA ＞106拷贝/ml组血清抗-HBs水平显著低于103 ～ 106拷贝/ml和＜103拷贝/ml组,P值分别为0.021和0.011.结论:孕妇高病毒载量对乙肝母婴传播阻断成功率有一定影响.     

乙肝病毒携带产妇感染状态与新生儿发生宫内感染的相关性分析

目的 探讨孕妇乙肝感染状态与新生儿宫内感染的关系.方法 将115例乙肝表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)阳性的孕妇分为A组(乙肝HBsAg,HBeAg,HBcAb阳性组)、B组(乙肝HBsAg,HBeAb,HBcAb阳性组)、C组(HBsAg,HBcAb阳性组)、D组(HBsAg,HBeAg阳性组).对上述部分孕妇进行乙肝两对半及PCR-HBV-DNA值的检测,对其所生的新生儿在出生后24h内进行乙肝两对半的检测.结果 乙肝大三阳(HBsAg,HBeAg,HBcAb阳性)孕妇与乙肝小三阳(HBsAg,HBeAb,HBcAb阳性)孕妇比较,新生儿发生宫内感染差异无统计学意义(P=0.256),乙肝孕妇体内HBV-DNA值＞105基因拷贝/ml时发生新生儿宫内感染高于体内HBV-DNA值＜105基因拷贝/ml(P=0.001).结论 乙肝大三阳孕妇或体内HBV-DNA载量高是新生儿宫内感染的危险因素,应及时给予阻断,产后及时采取联合免疫措施,减少乙肝患儿的发生.     

检测表面大蛋白对HBeAg阴性乙型肝炎的临床评价

目的 检测乙型肝炎患者血清中3种HBV标志物(HBV-M)模式的HBV表面大蛋白(LHBs)和HBV DNA,对比并观察其相关关系,探讨HBeAg阴性的乙型肝炎检测LHBs的临床价值.方法 对534例乙型肝炎患者中的HBeAg阴性者346例,以ELISA法进行LHBs和HBV-M检测,荧光定量PCR方法 进行HBV DNA检测,并与HBeAg阳性者的检测结果 作比较.结果 534份乙型肝炎患者的LHBs、HBV DNA检测结果 显示:L组(大三阳)LHBs与HBV DNA检测阳性率分别为95.21%和86.17%,两种检测方法 之间有很好的相关性;S组(小三阳)及DN组(HBeAg和抗-Hbe均阴性)LHBs与HBV DNA阳性率分别为73.67%、81.48%和42.32%、55.56%,差异均有统计学意义(P<0.01,P<0.05);HBeAg阴性的346例样本中LHBs与HBV DNA的阳性率分别为71.39%和43.35%,差异有统计学意义(P<0.01),其中HBV DNA检测的196例阴性样本经LHBs检测阳性率为68.88%.结论 LHBs可作为从蛋白水平反映乙型肝炎患者体内病毒复制的血清学指标,且与HBV DNA检测具有很好的相关性,特别对于HBeAg阴性的患者LHBs检测可作为体内HBV复制及预后判断的较好血清免疫学指标.     

乙肝后肝硬化失代偿期HBeAg阴性与阳性患者 病毒学特点及肝功能指标的比较

摘要:目的　分析乙型肝炎后肝硬化失代偿期患者中HBeAg阴性者与HBeAg阳性者的血清病毒学指标、肝功能检测结果的差异。方法　将90例乙肝后肝硬化失代偿患者分为HBeAg阴性组和HBeAg阳性组,观察年龄、性别、乙肝病毒基因型、血清病毒DNA载量、肝功能指标等的差异。结果　HBeAg阴性组和HBeAg阳性组比较,年龄、性别、肝功能指标、Child-Pugh分级均无差异;HBeAg阴性组血清乙肝病毒DNA载量（5.14±0.63）log 10copies/ml 低于HBeAg阳性组（6.66±0.75）log10copies/ml,（t＝10.386,P＜0.001）;两组乙肝病毒基因型的比较差异有统计学意义,HBeAg阴性组基因型B占26.2%（11/42）,基因型C占54.8%（23/42）,B/C混合型占19.0%（8/42）,HBeAg阳性组基因型B占12.5%（6/48）,基因型C占87.5%（42/48）,（χ2＝14.580,P＜0.001）。结论　HBeAg阴性与阳性乙型肝炎后肝硬化失代偿期患者在乙肝病毒基因型构成特点、病毒DNA载量上有差异,两组肝功能受损程度没有显著差异。     

HBV感染者精液HBV-DNA载量对子代垂直传播的影响

目的　探讨HBV感染者精液HBV-DNA载量对子代垂直传播的影响。方法　选择福建省妇幼保健院2009年8月至2011年11月初次产前检查孕妇（母）血清HBsAg阴性、丈夫（父）血清HBsAg阳性的138个家庭及其新生儿为研究对象。知情同意下收集孕妇血液、其夫血液和精液及分娩时新生儿脐带血,检测HBV血清学标志物（HBVM）、HBV-DNA。以脐带血HBV-DNA载量≥5 X 10² copies／ml为病例组,脐带血HBV-DNA载量<5×10² copies／ml为对照组。结果　（1）新生儿脐带血HBV-DNA阳性率为34．8％（48／138）、HBsAg阳性率为28．3％（39／138）,HBeAg阳性率为15．2％（21／138）。（2）父血清HBVoDNA阳性率为76．8％（106／138）、HBeAg阳性率为42．8％（59／138）;精液HBV-DNA阳性率为21．0％（29／138）。（3）单因素分析显示,父血清HBV-DNA阳性、父血清HBeAg阳性、精液HBV-DNA阳性、父对乙型肝炎（乙肝）传播途径及预防方法、乙肝一级家族史为HBV垂直传播的危险因素（P<0．05）。（4）多因素分析显示,父血清HBV-DNA阳性、父HBeAg阳性、精液HBV-DNA阳性为HBV父婴垂直传播的危险因素,OR值（95％CI）分别为5．7（1．1—29．1）、4．2（1．7～10．0）、6．7（2．4～18．9）。（5）父血清HBV-DNA载量与精液HBV-DNA载量存在剂量反应关系。（6）ROC曲线分析表明,父血清HBV-DNA载量为10< sup>5 copies／ml、精液HBV-DNA载量为10 ³ copies／ml其预测的敏感度和特异度较高,是预测发生HBV垂直传播的分界点。结论　父血清HBV-DNA阳性、父HBeAg阳性、精液HBV-DNA阳性是HBV父婴垂直传播的危险因素;父血清HBV-DNA载量>10⁵ copies／ml、精液HBV-DNA载量>10³ copies／ml时,增加父婴HBV垂直传播的阳性率。     

手术患者中乙型肝炎病毒感染的特点和传染性

目的探讨手术患者中乙型肝炎病毒（HBV）感染的特点和传染性。方法在确定手术患者中HBV感染剂量（ID）的基础上，探讨病毒感染的特点和传染性。结果HBsAg阴性组、HBeAg阴性和阳性组患者中的HBVDNA阳性率分别为9．00％、67．20％和100．00％；HBV传染性范围分别为0～10^4ID／ml、0～10^4ID／ml、10^2～10^9ID／ml；HBV复制者的ID均值分别为10^1.80±1.30、10^2.16±1.35和10^5.10±1.62ID／ml。HBV浓度≥10^5ID／ml者分别为0、3．20％和83．87％。53．60％的HBeAg阴性患者血清病毒水平≤10^0ID／ml，45．16％的HBeAg阳性患者≥10^7ID／ml。结论手术患者中存在三种类型的HBV携带状态，他们的病毒携带率、经手术感染的传染性和手术中手套的防护效果都不相同。     

乙型肝炎病毒感染血清学标志与慢性感染自然史研究进展

乙型肝炎（乙肝）病毒（Hepatitis B Virus,HBV）感染的血清学标志主要有乙肝病毒表面抗原、乙肝病毒表面抗体、乙肝病毒e抗原（Hepatitis B e Antigen,HBeAg）、乙肝病毒e抗体和乙肝病毒核心抗体。慢性HBV感染自然史复杂、多样,与初次感染年龄、HBV载量、基因型、突变位点、HBeAg状态、丙氨酸氨基转移酶（Alanine Aminotransferase,ALT）水平、丙型肝炎病毒和／或丁型肝炎病毒合并感染及宿主免疫状态等有关。慢性HBV感染过程可分免疫耐受期、免疫清除期、低或无病毒复制期和病毒恢复活性期。部分HBeAg阴性、ALT高水平和HBV脱氧核糖核酸高滴度（〉10^5拷贝／ml）患者,可出现肝硬化、肝细胞癌和肝功能衰竭等肝脏相关综合征。现有证据表明,合理使用抗HBV药物可减少后遗症发生率和病死率。     

HBV父婴垂直传播水平与HBV-DNA载量的相关研究

目的 探讨HBsAg阳性父亲血HBV-DNA的不同载量水平对其新生儿发生HBV父婴垂直传播的影响.方法 对161例HBsAg阳性的父亲及其新生儿(母亲血清HBVM全阴性或仅HBsAb阳性及HBV-DNA均为阴性)HBV感染状况进行调查分析.采用ELISA检测HBVM,FQ-PCR法检测血清HBV DNA载量水平.结果 (1)父亲血HBV-DNA载量水平与新生儿脐带血HBV DNA阳性存在剂量反应关系趋势(χ~2=64.117,P=0.000).父亲血HBV-DNA≥1.0×107 copies/ml组新生儿的HBV父婴垂直传播水平显著高于＜1.0×107 copies/ml组(χ~2=71.539,P=0.000);(2)HBeAg阳性组与HBeAg阴性组父亲其新生儿的HBV-DNA阳性率差异有统计学意义(χ~2=6.892,P=0.009).结论 父亲血清HBV-DNA载量水平与是否发生HBV父婴垂直传播密切相关,随血清HBV-DNA载量增加而上升,并存在影响传播的浓度界面;父亲血清HBV-DNA 1.0×107 copies/ml及HBeAg阳性是HBV父婴垂直传播的危险因素.     

肝组织中HBV cccDNA荧光定量聚合酶链反应检测法的建立

目的 建立和优化一种灵敏、特异的检测肝组织中乙型肝炎(乙肝)病毒(HBV)共价闭合环状DNA(cccDNA)荧光定量聚合酶链反应(荧光定量PCR).方法 设计检测HBV DNA(tDNA)和cccDNA特异性引物及探针,用3.44×100-3.44×109copies/μl含HBV全基因组序列(C基因型)质粒作为标准品,建立荧光定量PCR检测标准曲线.取33例乙肝肝癌患者肝组织标本、13例慢性乙肝患者肝活检组织标本和10例非乙肝患者肝组织标本,验证该法灵敏度和特异度.提取肝组织中DNA,取一部分进行质粒安全ATP依赖的DNA酶(PSAD)酶切;另一部分不酶切作为tDNA和β-globin检测样本,分别进行HBV cccDNA、tDNA和p-globin定量检测,以β-globin为参比,对每个细胞的HBV cccDNA和tDNA含量进行标准化.结果 检测肝组织中HBV cccDNA和tDNA定量的线型范围均为3.44 × 100-3.44×109 copies/μl.检测HBV cccDNA和HBV DNA下限均为3.44×100copies/μl.33例乙肝肝癌患者和13例慢性乙肝患者的肝组织中HBV cccDNA最低含量分别为0.003 copies/cell和0.031 copies/cell;检测10份非乙肝肝癌患者的肝组织标本均为阴性.应用PSAD消化肝组织中提取的DNA可减少假阳性,提高cccDNA检测法特异度达7.24× 102倍.对2例乙肝肝癌患者的肝组织标本重复检测5次,Ct值的变异系数为0.224%～0.609%.结论 该方法灵敏度和特异度高,重复性好,可用于检测肝组织中HBV cccDNA.

Abstract：

Objective To establish and optimize a sensitive and specific quantitative realtime polymerase chain reaction(PCR)method for detection of hepatitis B virus covalently closed circular DNA(HBV cccDNA)in liver tissue. Methods Specific primers and probes were designed to detect HBV DNA(tDNA)and cccDNA. A series of plasmids(3.44 × 100-3.44 × 109 copies/μl)containing a full double-stranded copies of HBV genome(genotype C)were used to establish the standard curve of real-time PCR. Liver samples of 33 patients with HBV related hepatocellular carcinoma(HCC), 13 Chronic hepatitis B patients(CHB)and 10 non-HBV patients were collected to verify the sensitivity and specificity of the assay. A fraction of extracted DNA was digested with a Plasmid-Safe ATP-dependent Dnase(PSAD)for HBV cccDNA detection and the remaining was used for tDNA and β-globin detection. The amount(copies/cell)of HBV cccDNA and tDNA were measured by a real-time PCR, using β-globin housekeeping gene as a quantitation standard. Results The standard curves of real-time PCR with a linear range of 3.44 × 100 to 3.44 × 109 copies/μl were established for detecting HBV cccDNA and tDNA, and both of the lowest detection limits of HBV cccDNA and tDNA were 3.44 × 100 copies/μl. The lowest quantitation levels of HBV cccDNA in liver tissues tested in 33 HBV related HCC patients and 13 CHB patients were 0.003 copies/cell and 0.031copies/cell, respectively. HBV cccDNA and tDNA in liver tissue of 10 non-HBV patient appeared to be negative. The true positive rate was increasing through the digestion of HBV DNA by PSAD, and the analytic specificity of cccDNA detection improved by 7.24 × 102 times. Liver tissues of 2 patients were retested 5 times in the PCR for detecting cccDNA and the coefficience of variations on cycle threshold (Ct)were between 0.224%-0.609%. Conclusion A highly sensitive and specific quantitative real time PCR method for the detection of HBV cccDNA in liver tissue was established and could be used for clinical and epidemiological studies.     

HBsAg阳性孕妇血清乙肝病毒含量与HBV宫内感染关系的研究

目的探讨孕妇外周血中HBV含量与HBV宫内感染的关系。方法ELISA法检测孕妇及新生儿外周血HBsAg、HBeAg;FQ-PCR对血清HBVDNA定量检测。结果166例新生儿中有28例发生HBV宫内感染(16.87%);在HBV宫内感染组和非感染组孕妇HBVDNA暴露、各级病毒载量与HBV宫内感染趋势χ2检验差异为有统计学意义;HBVDNA?156copies/ml为HBV宫内感染最佳临界预测值,它的敏感度为81.80%,特异度为72.10%,阳性预测值为37.10%,阴性预测值为95.19%。结论孕妇外周血HBVDNA阳性不仅是HBV宫内感染的危险因素,且随着孕妇血中乙肝病毒含量的增高,其发生HBV宫内感染的危险性呈现增高趋势;孕妇血HBVDNA156copies/ml为HBV宫内感染最佳临界预测值,孕妇血清中HBVDNA水平对于预测新生儿HBV宫内感染较为重要。     

PCR荧光法对乙型肝炎病毒基因分型的检测及临床意义

目的 用荧光聚合酶链反应(PCR)技术,对乙型肝炎(HBV)患者基因型进行检测,了解该地区HBV基因型分布及其与肝功能损害、病毒复制水平的关系.方法 采用荧光聚合酶链反应(PCR),检测乙型肝炎病毒基因型,通过荧光探针识别基因型特异性序列,采集分析荧光信号确定病毒基因型,并分别检测谷丙转氨酶(ALT)水平、乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)和HBV-DNA含量.结果 532例慢性HBV感染者中,HBV基因型以C型为.主占60.2％,其次为B型占31.6％,B、C混合型占6.0％,未分型占2.3％例;C基因型HBV-DNA水平和HBeAg阳性率分别为(6.41±1.15)lg拷贝/ml和91.3％,明显高于B型(5.88±1.30)lg拷贝/ml和83.3％,差异有统计学意义(P＜0.01);C基因型患者的ALT(130.16±197.19)U/L高于B基因型(125.6±145.02)U/L,但差异无统计学意义.结论 甘肃地区HBV基因型以C型为主,B型次之,C基因型HBV-DNA水平显著高于B基因型,C基因型HBeAg阳性率较B基因型高,C基因型对肝脏损害较B基因型重,并与HBV载量及HBeAg系统具有相关性.     

乙型肝炎病毒感染产妇乳汁中乙型肝炎病毒DNA载量对母乳喂养的指导意义

目的 探讨乙型肝炎病毒(HBV)感染产妇乳汁中HBV-DNA病毒载量对母乳喂养的指导意义.方法 对2008-2010年在某院住院的152例HBV感染产妇,采用荧光PCR技术检测其外周血清及乳汁中HBV-DNA病毒载量水平,并以1.0×103 U/ml为判断临界值,分析血清和乳汁中HBV-DNA病毒载量之间的关系.结果 152例HBV感染产妇血清和乳汁中HBV-DNA载量大于1.0×103 U/ml者分别占50.66％ (77/152)和36.18％(55/152).血清和乳汁HBV DNA载量与乙肝病毒e抗原(HBeAg)是否阳性相关,HBeAg阳性时血清和乳汁中HBV-DNA载量大于1.0×103 U/ml者分别占95.38％( 62/65)和76.92％( 50/65),HBeAg阴性时分别为17.24％(15/87)和5.75％(5/87).血清HBV-DNA与乳汁HBV-DNA载量存在相关性,当血清HBV-DNA载量为3～4 lg U/ml时,乳汁中HBV-DNA检出率仅为20.00％ (5/25),在血清HBV-DNA载量大于5 lg U/ml时,乳汁中HBV-DNA检出率达96.15％( 50/52).结论 HBV感染产妇乳汁中HBV-DNA载量随着血清中HBV-DNA载量升高而升高,当乳汁中存在HBV-DNA病毒大于1.0×103 U/ml时,应避免母乳喂养.