小檗红碱毒性的初步研究

目的 初步了解中药成分小檗红碱的体内毒性及毒性损害特点.方法 以昆明种小鼠为实验动物,采用改良寇氏法测定小檗红碱的半数致死量(LD_(50)).为进一步确证小檗红碱的内脏毒性,以wistar大鼠为实验动物,小檗红碱100mg/kg单剂量连续灌胃3周,观察小檗红碱对实验大鼠的内脏毒性.结果 小檗红碱的LD_(50)值为154.2mg/kg.远大于盐酸小檗碱(763.5mg/kg);小檗红碱100mg/kg单剂量3周连续灌胃后,实验大鼠均出现肾脏病变甚至死亡.结论 小檗红碱毒性大大高于小檗碱,具有很强的肾脏毒性.     

利川黄连小檗碱含量

目的分析利川黄连中小檗碱含量,以确定利川黄连的最佳栽培方案.方法利用高效液相色谱(HPLC)方法测定不同海拔高度,不同株龄及不同叶片形态的利川黄连小檗碱含量.结果黄连根茎中的小檗碱含量不受株龄的影响;低海拔地区比较适宜黄连小檗碱的合成;冷杉林遮光不影响小檗碱的合成;大花叶和小花叶品种相对较有光叶和无光叶植株根茎中小檗碱含量高,但无统计学差异.结论小檗碱的合成与遮荫条件密切相关,如果在第2～3年降低遮荫率或拆除遮荫棚以促进黄连根茎快速肥大,在采收前1年再通过遮光处理促进小檗碱的合成,可能会获得小檗碱含量更高的优质黄连.     

小檗碱对OX-LDL诱导的巨噬细胞泡沫化的作用

目的:观察小檗碱对巨噬细胞泡沫化的保护作用.方法:利用ox-LDL诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7泡沫化,并在此过程中加入不同浓度小檗碱,通过油红O染色及胆固醇酯与总胆固醇的测定判断细胞泡沫化程度,评价小檗碱的作用效果.结果:与ox-LDL诱导的泡沫细胞组相比,小檗碱加入后细胞内脂质累积明显减少,而且泡沫化程度也降低了.结论:小檗碱能够降低ox-LDL诱导的巨噬细胞泡沫化程度.     

小檗碱对EB病毒DNA复制的抑制作用

目的 通过分析小檗碱处理后的Raji细胞中EB病毒DNA的变化,探讨小檗碱对EB病毒DNA复制的抑制作用.方法 运用四甲基偶氮唑蓝法确定小檗碱对Raji细胞生长的细胞无毒性浓度,然后采用巢式荧光定量PCR方法检测该浓度处理后的Raji细胞EB病毒DNA含量,分析小檗碱对EB病毒DNA复制的影响.结果 小檗碱对Raji细胞的细胞无毒性浓度(NCC)为0-10μmol/L.不同浓度(1.25、10和40μmol/L)的小檗碱处理后的Raji细胞EB病毒DNA拷贝数与未加药组相比显著降低(P<0.05),呈药物浓度依赖性.结论 小檗碱在细胞无毒性浓度下,可抑制Raji细胞中EB病毒DNA的复制,为使用小檗碱或含小檗碱的中药复方防治EB病毒相关肿瘤提供了新的实验依据.     

盐酸小檗碱固体脂质纳米粒包封率的聚结离心法测定

目的:建立测定盐酸小檗碱固体脂质纳米粒(SLN)包封率的聚结离心法.方法:0.5 mL盐酸小檗碱SLN中加入0.05 mL饱和氯化钠水溶液,充分振摇聚结后离心,取上清液,高效液相色谱法测定盐酸小檗碱SLN及上清液中盐酸小檗碱的含量,计算包封率.结果:该方法可将制剂中包裹药物的SLN充分沉淀.平均加样回收率为100.2%(n=3),测得的盐酸小檗碱SLN的平均包封率为93.4%(n=3).结论:使用聚结离心法可准确、快速地测定盐酸小檗碱SLN的包封率.     

小檗碱通过ERK,JNK信号转导途径对COX-2的抑制作用

目的：研究中药小檗碱是否通过ERK,JNK信号转导途径抑制人外周血单核细胞COX-2mRNA及蛋白表达.方法：取人外周静脉血分离及培养单核细胞,分为对照组、LPS组、LPS＋小檗碱25μmol/L组、LPS＋小檗碱50μmol/L组、LPS＋小檗碱100μmol/L组.分别在培养后30min,6,12,24h提取细胞,行RT-PCR法测定COX-2mRNA水平,行Western Blot法测定ERK,p-ERK,JNK,p-JNK及COX-2蛋白水平.同时加入选择性ERK,JNK抑制剂,分别测定COX-2mRNA及蛋白水平.结果：与LPS组相比,小檗碱组COX-2mRNA及蛋白表达明显抑制（P〈0.05）.与LPS组相比,小檗碱组ERK活性水平有统计学差异（P〈0.05）.但是与LPS组相比,低、中浓度小檗碱组（25,50μmol/L）JNK活性水平无统计学差异,高浓度小檗碱组（100μmol/L）JNK活性水平有明显统计学差异（P〈0.05）.加入ERK,JNK抑制剂之后,COX-2mRNA及蛋白水平降低明显（P〈0.05）.结论：小檗碱能抑制人外周血单核细胞COX-2mRNA及蛋白水平,其作用程度呈浓度依赖性.小檗碱可能通过ERK信号转导途径抑制人外周血单核细胞COX-2mRNA及蛋白表达.高浓度小檗碱可能通过JNK信号转导途径抑制人外周血单核细胞COX-2mRNA及蛋白表达.     

基于网络药理学的盐酸小檗碱治疗抑郁症作用机制研究

目的 运用网络药理学方法探讨盐酸小檗碱治疗抑郁症的作用机制.方法 通过中药系统药理学数据库与分析平台及PharmMapper网站预测盐酸小檗碱的作用靶点,并利用STRING数据库构建靶点的蛋白-蛋白相互作用(PPI)网络,获得盐酸小檗碱的潜在作用靶点.检索GeneCards数据库以获得抑郁症相关靶点,与盐酸小檗碱的潜在...     

小檗碱与β-内酰胺类抗生素对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的协同抗菌作用*

目的 探讨小檗碱与临床常用抗生素联合应用对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的抗菌作用.方法 收集临床MRSA菌株,采用PBP2′胶乳凝集试剂盒对MRSA所产的PBP2′蛋白进行鉴定.微量肉汤稀释法测定抗生素及小檗碱对MRSA的MIC.微量棋盘稀释法测定小檗碱与β-内酰胺类抗生素的协同抗菌作用.结果 10株实验菌株均为MRSA.单用小檗碱对MRSA的MIC值在32～128 μg/mL之间.8～16 μg/mL的小檗碱能使MRSA及ATCC 25923对苯唑西林、头孢唑林及氨苄西林的敏感性增高,FIC指数在0.266～0.75之间.结论 8～16 μg/mL小檗碱与苯唑西林、头孢唑林与氨苄西林联用对MRSA有协同抗菌作用.该研究为今后小檗碱用于临床抗MRSA感染提供了科学依据.     

小檗碱的体外降糖作用

目的研究小檗碱能否通过刺激胰岛素分泌或直接作用于肝细胞而产生降糖作用. 方法检测HepG2细胞24h培养液中葡萄糖的消耗量.另外检测βTC3细胞胰岛素的释放量. 结果小檗碱5～100μmol/L可使HepG2细胞的葡萄糖消耗量增加32%～60%(P＜0.001),与1mmol/L二甲双胍相比无显著差异;小檗碱的降糖效能随着培养液中葡萄糖浓度的升高而降低;胰岛素对小檗碱的降糖作用没有明显的影响.小檗碱没有刺激βTC3细胞胰岛素分泌的作用. 结论小檗碱能通过肝细胞发挥非胰岛素依赖的降糖作用,但不能增加胰岛素的分泌.     

小檗碱对脂肪细胞糖代谢的影响

目的探讨小檗碱对脂肪细胞糖代谢的影响.方法检测药物处理24h或48h后3T3-L1脂肪细胞对培养液中的葡萄糖消耗量,以2-脱氧-3H-D-葡萄糖摄入法观察葡萄糖的转运率. 结果在低糖(5.5mmol/L)和高糖(25mmol/L)培养液中,小檗碱皆有显著的降糖作用,0.1～200μmol/L小檗碱能使葡萄糖的消耗量增加26%～201%,其作用呈剂量效应,10μmol/L小檗碱能明显增强1、100nmol/L胰岛素的降糖作用(P＜0.01).0.1、1、10μmol/L小檗碱使3T3-L1脂肪细胞的葡萄糖转运率明显增加,50、100μmol/L小檗碱使其葡萄糖转运率明显降低.结论小檗碱能显著增加脂肪细胞的葡萄糖转运和消耗.     

小檗碱诱导人胃癌细胞BGC-823细胞凋亡

目的观察小檗碱对人胃癌细胞BGC-823凋亡的诱导作用,以探讨具抗癌作用机理.方法采用体外细胞培养技术,以lO～40 mg/L小檗碱作用于培养的BGC-823细胞48 h后,进行光镜、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞仪和TUNEL法的观察和分析.结果小檗碱作用后,光镜、TUNEL观察到细胞呈现凋亡特征,琼脂糖凝胶电泳显示细胞DNA呈梯状降解,流式细胞仪分析出现典型亚二倍体峰.结论小檗碱可诱导人胃癌细胞BGC-823细胞凋亡,这可能为小檗碱抗癌的机理之一.     

剥糖衣与否对测定三黄片中盐酸小檗碱含量的影响

目的:研究糖农对测定三黄片中盐酸小檗碱含量的影响.方法:采用高效液相色谱法进行测定.结果:剥糖衣与否对测定三黄片中盐酸小檗碱含量无明显影响.结论:对三黄片中盐酸小檗碱含量的测定可不除去糖衣.     

生物信息模拟及生物学效应结合研究盐酸小檗碱对乙酰胆碱酯酶的抑制作用

目的 体外研究盐酸小檗碱对乙酰胆碱酯酶(AchE)活性的抑制作用.方法 利用生物信息模拟技术,体外模拟以盐酸小檗碱为代表的5种生物碱(配体)与AchE(受体)相互分子对接效应与差异性;将小鼠眼眶取血后脱臼处死,立刻开腹取出十二指肠制备组织匀浆,采用双缩脲法测定肠组织匀浆中总蛋白含量,将盐酸小檗碱与肠组织液共孵育后用酶法检测小鼠十二指肠组织和血清中AchE活性,以生物信息模拟和生物学效应相结合对比研究盐酸小檗碱对AchE的抑制作用.结果 体外分子模拟5种生物碱中只有盐酸小檗碱和药根碱能与AchE受体活性中心进行分子对接;盐酸小檗碱能明显抑制小鼠十二指肠组织和血清中AchE活性,抑制程度与其浓度具有明显的量效关系.结论 体外生物信息模拟和生物学效应研究均表明盐酸小檗碱对AchE有明显的抑制作用.     

配伍对葛根芩连汤中小檗碱含量的影响

目的　建立 HPL C法测定葛根芩连汤各配伍煎液中小檗碱的含量测定方法 ,研究配伍对小檗碱含量的影响。方法　采用 L8(2 7)正交设计及统计软件 SPSS10 .0统计方法 ,以 HPL C法测定小檗碱的含量。结果　葛根、黄芩、甘草对方中小檗碱含量的影响差异存在显著性 (P<0 .0 5 ) ,葛根与黄芩、黄芩与甘草、葛根与甘草对小檗碱的含量影响交互作用不显著。实验中观察到凡是黄连与葛根、黄芩、甘草的配伍组皆有沉淀产生 ,沉淀中含有一定量的小檗碱。结论　葛根、黄芩、甘草降低小檗碱的含量。     

小檗碱对人肝癌Bel-7402细胞增殖和凋亡的影响

目的观察小檗碱对人肝癌Bel-7402细胞增殖抑制及诱导凋亡的作用.方法体外培养人肝癌Bel-7402细胞,台盼兰活细胞计数及集落形成抑制实验观察不同浓度小檗碱对Bel-7402细胞的增殖抑制作用,Hochest33258染色观察凋亡形态学变化,流式细胞仪分析细胞周期及凋亡率.结果小檗碱可显著抑制Bel-7402细胞生长,使集落形成能力明显下降,均呈时间、剂量依赖性.小檗碱处理后72 h,Hochest33258染色可观察到细胞核边集、固缩,有明显凋亡小体形成,流式细胞仪检测出现明显Sub-G1峰.结论小檗碱可以抑制人肝癌Bel-7402细胞增殖,诱导细胞凋亡,小檗碱可能具有治疗人肝细胞癌的潜在应用价值.     

HPLC法测定盐酸小檗碱β-环糊精包合物中盐酸小檗碱的含量

黄柏为常用中药,性寒、味苦,具有清热燥湿、解毒疗疮、退虚热之功效,用于湿热痢疾、黄疸、带下、热淋、盗汗、遗精等症状[1].黄柏中含有小檗碱、黄柏碱等多种生物碱及内酯、甾醇等成分,其中盐酸小檗碱为主要有效成分[2,3].但由于盐酸小檗碱在常温下的溶解度比较低,影响了临床疗效.本研究采用饱和技术制备了盐酸小檗碱β-环糊精包合物,以增强其在体内的溶解度并最终提高其生物利用度.同时本研究建立的分析方法可以快速、准确的测定β-环糊精包合物中盐酸小檗碱的含量.     

黄芩苷-小檗碱复合物纳米晶的制备和在体肠吸收评价

[目的]研究纳米晶对黄芩苷-小檗碱复合物的肠吸收促进作用.[方法]使用抗溶剂法结合高压均质法制备黄芩苷-小檗碱复合物纳米晶,进行初步体外评价.建立在体单向肠灌流模型,评价纳米晶对复合物吸收的促进效果.[结果]制备了黄芩苷-小檗碱复合物纳米晶.体外评价结果表明,黄芩苷-小檗碱复合物纳米晶为圆柱状,粒径为(225.10±9...     

小檗碱增加亲脂素在巨噬细胞的表达

目的观察小檗碱对人单核细胞系(THP1细胞)来源的巨噬细胞的亲脂素表达的影响,探讨小檗碱改善血脂紊乱的机制。方法用佛波脂(TPA)诱导人THP1细胞,使之成为巨噬细胞,再用不同浓度(5μmol.L-1、10μmol.L-1、20μmol.L-1、50μmol.L-1)的小檗碱干预巨噬细胞,等体积的生理盐水为对照;分别采用逆转录-实时定量聚合酶链反应及免疫印记的方法观察小檗碱对巨噬细胞亲脂素的核酸和蛋白表达的影响。结果5~20μmol.L-1小檗碱明显增加人巨噬细胞亲脂素的表达(P<0.05),呈浓度依赖性。结论小檗碱增加人巨噬细胞亲脂素的表达,可能与其改善血脂紊乱和抗动脉粥样硬化有关。     

小檗碱及其亲脂性衍生物抑制恶性胶质瘤C6细胞的增殖及迁移与侵袭

[目的]考察小檗碱及其亲脂性衍生物对大鼠C6胶质瘤细胞增殖、迁移与侵袭的影响.[方法]合成四种小檗碱衍生物9-O-十二烷基小檗碱(B3)、9-O-十六烷基小檗碱(B4)、9-O-十八烷基小檗碱(B5)、9-O-苄基小檗碱(B6).采用1H NMR、13C NMR及ESI-MS确证其结构.四唑盐(MTT)比色法检测化合物在不同浓度下作用24、48、72 h后对C6细胞增殖活性的影响;细胞划痕实验和transwell迁移实验检测对细胞迁移能力的影响,transwell侵袭实验检测对细胞侵袭能力的影响.[结果]MTT结果显示,衍生物抑制细胞增殖作用显著强于对照组与小檗碱组(P＜0.05);其中,B3的抑制作用最强.划痕实验、transwell迁移与侵袭实验结果显示,与对照组比较,小檗碱及其衍生物能明显抑制C6细胞的迁移与侵袭(P＜0.05);其中,B3与B4抑制作用最强.[结论]小檗碱的亲脂性衍生物能有效地抑制C6胶质瘤细胞的增殖、迁移与侵袭,为开发新的恶性胶质瘤治疗方法提供新的思路.     

小檗碱对大鼠脂代谢的影响

目的研究小檗碱对实验大鼠血脂和组织内甘油三酯沉积的影响.方法设计七组大鼠普食对照组,普食小檗碱治疗组;高脂对照组,高脂小檗碱治疗组;高脂饮食与极小剂量链脲霉素诱导的糖尿病对照组,糖尿病小檗碱治疗组和糖尿病二甲双胍治疗组.5周后观察分析各组血清甘油三酯(TG)、总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、游离脂肪酸(FFA)水平以及肝脏和骨骼肌中甘油三酯含量.结果小檗碱使普食、高脂、糖尿病鼠的血FFA水平分别下调14%、24%、20%,TG分别降低11%、57%、14%.小檗碱使高脂鼠肝脏和骨骼肌中的甘油三酯含量分别减少36%和23%.结论小檗碱对实验大鼠的脂代谢有显著的改善作用,该药能降低血清和组织中的甘油三酯含量,同时降低血清FAA水平.