氯胺酮对缺氧大鼠海马神经元钙激活钾通道的作用

目的 研究氯胺酮对缺氧马神经元钙激活钾通道（KCa通道）的作用,以揭示氨胺酮抗缺血性脑损伤的电生机机制。方法 应用膜片钳制技术记录缺氧海马神经元上的单通道电流活动,经P－clamp软件进行微机采样、储存数据和数据的分析处理。结果 氨胺酮对缺氧海马神经元KCa通道具有明显激活作用：增加通道开放概率P0,缩短通道关闭时间。结论 氯胺酮对海马神经元KCa通道的作用可能为氯胺酮治疗脑缺血损伤的另一种重要机制。     

钙激活钾通道及ATP敏感性钾通道在海马神经元缺氧超极化中的作用

研究缺氧超极化缺氧海马神经元中的电生理机制,以提示缺氧超极化在脑损伤中的作用。方法：应用膜片钳制技术的细胞贴附式膜片记录缺氧海马神经元的单通道电流活动,经p-CLAMP软件进行采样储存数据和数据的分析处理。结果：缺氧引起钙激活钾通道（KCa通道）和ATP敏感性通道（KATP通道）的激活,增加通道的开放概率。结论：缺氧超极化可能是缺血性脑损伤早期的重要代偿机制。     

PPARγ激动剂通过激活JNK通路促进海马神经元轴突的生长

目的 初步探讨过氧化物酶体增殖物激活受体（PPARγ）激动剂对体外培养海马神经元轴突生长的作用及其机制.方法 通过向原代培养的胎鼠海马神经元中加入PPARγ激动剂曲格列酮（TGZ）及其抑制剂GW-9662 （GW）以及JNK特异性抑制剂SP 600125 （SP）,以研究PPARγ激动剂对海马神经元轴突生长的作用,以及JNK通路的活化在此过程中的作用.结果 TGZ活化PPARγ后能明显促进海马神经元轴突的延长（P＜0.05）.PPARr拮抗剂GW消除了TGZ的促轴突生长作用.PPARγ活化后激活了JNK通路,且JNK特异性抑制剂SP能明显阻断TGZ的促轴突生长作用（P＜0.05）,表明TGZ诱导的促轴突生长作用依赖JNK通路的激活.结论 PPARr激动剂能促进海马神经元轴突的生长,且此作用依赖JNK通路的激活.     

腺苷对原代培养的大鼠海马神经元大电导钙激活钾通道的作用

目的在离子通道水平研究腺苷对原代培养的大鼠海马神经元大电导钙激活钾通道(BKCa)的作用。方法采用新生24h的乳鼠,取出海马,清除表面血管,以胰酶消化和巴氏管吹打的方法制备海马神经元,细胞培养6～8d后,MAPⅡ染色鉴别神经元表面标志;采用全细胞膜片钳技术,对细胞进行封接、破膜并记录BKCa通道电流,以细胞旁方式给药观察不同浓度腺苷对BKCa通道的作用。结果原代培养的海马神经元上可以成功记录到BKCa电流,其为一组幅值较大,可以快速激活且几乎不失活的外向电流;腺苷(1～100μmol/L)可以增大BKCa电流,浓度越高,增长幅度越大;100μmol/L腺苷对BKCa电流的影响具有电压依赖性,同时它还可以使BKCa电流的激活曲线负向漂移。结论腺苷可以增大海马神经元BKCa电流幅值,这可能是腺苷作为内源性抗癫痫物质发挥抗癫痫作用的机制之一。     

钙离子致神经细胞损伤中钙激活钾通道的应用研究

目的:采用膜片钳单通道记录法,对新生SD大鼠的皮层神经元中,钙激活钾通道(KCa)特征,及胞内不同游离钙水平,开放动力学的调节。结果:培养SD大鼠皮层神经元中,KCa以大电导活动占优势,胞内游离钙为10-8 mol/L时,通道几乎不开放,在10-6 mol/L时达最大激活。结论:神经元上KCa通道开放概率,依赖于胞浆中钙离子膜电位,KCa对胞内钙离子浓度敏感。钾通道的开放剂,有一定神经细胞保护作用。     

胍丁胺拮抗谷氨酸所致大鼠海马神经元兴奋性神经毒性的研究

目的探讨胍丁胺对L-谷氨酸（Glu）诱导的大鼠海马神经元损伤的影响。方法采用大鼠原代海马神经元培养的方法,用不同浓度Glu（1、10、100μmol/L）处理原代培养海马神经元1h,建立Glu诱导的原代培养大鼠海马神经元损伤模型,经乳酸脱氢酶（LDH）活性检测和显微镜下观察,确定建立大鼠海马神经元损伤模型的最佳浓度。处理组在已建立的大鼠海马神经元损伤模型中加入不同浓度（10、50、100μmol/L）胍丁胺,观察胍丁胺对Glu诱导的海马神经元损伤的作用。未经Glu处理的为正常对照组。结果上清液中的LDH活性（P〈0.01）和形态学观察均提示100μmol/L Glu为诱导原代海马神经元损伤的最佳浓度;100μmol/L胍丁胺能显著抑制模型中大鼠海马神经元LDH的释放（P〈0.01）;明显改善损伤后的神经元形态。结论胍丁胺对Glu诱导的大鼠海马神经元损伤具有保护作用。     

氧化苦参碱对大鼠海马神经元细胞钠通道的影响

目的 研究氧化苦参碱(oxymatrine,OMT)对培养的新生大鼠海马神经元细胞膜钠电流作用,探讨OMT在离子通道水平的作用机制.方法 采用原代培养新生大鼠海马神经元细胞,应用全细胞膜片钳技术,观察不同浓度OMT对培养8～12天的大鼠海马神经元细胞膜钠通道的作用.结果 OMT对海马神经元细胞膜钠电流有明显的抑制作用(n=20,P＜0.05),且这种作用具有浓度依赖性,OMT对钠电流作用的半数抑制浓度为(46.1±1.3)μmol/L.在30μmol/L时,OMT可使钠电流Ⅰ～Ⅴ曲线显著上移,并且改变钠电流的翻转电位,但不影响激活电位和峰电位.通道动力学显示OMT可以促进钠电流复活曲线向右移动,减慢通道由失活状态恢复到激活状态的过程,但对激活曲线和失活曲线则没有明显的作用.结论 OMT呈浓度依赖性和电压依赖性抑制大鼠海马神经元细胞膜钠电流,并且抑制钠通道的复活过程.     

HPK1在缺糖缺氧诱导的大鼠海马神经元凋亡中的作用

目的观察造血祖细胞激酶1（HPK1）对缺糖缺氧（OGD）诱导的大鼠海马神经元凋亡的作用。方法采用细胞免疫荧光技术通过免疫荧光显微镜和激光共聚焦显微镜观察HPK1是否在大鼠脑细胞中存在;采用DAPI染色技术观察HPK1反义寡核苷酸对OGD诱导的海马神经元凋亡的作用。结果在体外培养的原代大鼠海马神经元中有HPK1的表达。HPK1反义寡核苷酸对OGD诱导的海马神经元凋亡具有保护作用,并有剂量依赖性。结论HPK1反义寡核苷酸对OGD诱导的海马神经元凋亡具有保护作用。     

促肾上腺皮质激素释放激素对原代培养海马神经元谷氨酸诱发电流的调节作用

目的:研究促肾上腺皮质激素释放激素（CRH）对原代培养海马神经元谷氨酸诱发电流（IGLU）的调节作用,并初步探讨其可能机制。方法:应用免疫荧光细胞化学方法观察原代培养的大鼠海马神经元CRH两型受体的表达;通过全细胞膜片钳技术研究CRH对海马神经元IGLU的调节作用及其可能涉及的胞内信号通路。结果:CRH作用2 min明显抑制海马神经元IGLU,且呈剂量依赖性;细胞外给予CRH受体广谱拮抗剂α-helical CRH或CRHR1特异性拮抗剂antalarmin能完全阻断CRH对IGLU的抑制作用,CRHR2特异性拮抗剂astressin-2B对此没有明显作用;细胞内给予蛋白激酶C（protein kinase C, PKC）的抑制剂G6976可阻断CRH对IGLU的抑制作用。结论:多肽类激素CRH可抑制原代培养的海马神经元IGLU,这种作用由CRHR1介导,并可能涉及PKC信号通路。     

2-花生四烯酸甘油对海人酸诱导损伤的大鼠尾状核神经元电压门控钠电流的调制作用

目的 探讨内源性大麻素2-花生四烯酸甘油（2-AG）对海人酸（KA）损伤的大鼠尾状核神经元电压门控钠通道电流（INa）的调制作用及其分子机制。方法 原代培养大鼠尾状核神经元,分为空白对照组、KA组、2-AG+KA组、RIM（CB1受体拮抗剂）+2-AG+KA组。培养7 d后,各组细胞于培养基中处理12 h;其中,2-AG+KA组和RIM+2-AG+KA组在添加2-AG、RIM 30 min后添加KA。应用全细胞膜片钳技术检测大鼠尾状核神经元电压门控钠通道电流：包括各组电流密度的变化、通道的电流-电压特性、通道的激活动力学特性和失活动力学特性。结果 在培养的大鼠尾状核神经元中,与对照组相比,KA显著增加神经元电压门控钠通道电流密度（P=0.009）;并使VGSCs的激活电压曲线向超极化方向偏移,半激活电压绝对值明显增大（P=0.008）。与KA组相比,直接给与2-AG提高2-AG水平可阻止KA诱导的钠电流密度增加（P=0.009）和钠电流激活曲线超极化方向移动（P=0.009）,且2-AG的这种作用是通过CB1受体依赖性途径介导的。2-AG本身对尾状核神经元电压门控钠通道电流密度、激活及失活等电流特性均不产生效应。结论 2-AG可通过CB1受体途径调控尾状核神经元VGSCs电流朋而起到神经保护作用。