毛乳头细胞凝聚性生长差异表达基因的筛选及HSPC016全长克隆的生物信息学分析

目的　筛选与毛乳头细胞 (DPC)凝聚性生长相关的基因表达 ,全长克隆凝聚性生长相关基因HSPC0 16并进行生物信息学分析。方法　应用抑制性消减杂交技术 ,构建DPC凝聚性生长与非凝聚性生长的cDNA消减文库 ,克隆鉴定凝聚性生长特异表达基因。应用RACE技术 ,克隆DPC凝聚性状态下HSPC0 16全长表达序列 ,使用生物信息学手段分析其染色体定位、蛋白序列、结构域及功能。结果　成功构建了DPC凝聚性生长差异表达cDNA文库 ,筛选出DPC与细胞同源凝集、生长调控、分化发育及信号转导相关的基因 ,其中包括HSPC0 16。HSPC0 16全长cDNA为 4 0 0bp ,染色体定位于 3q2 1 31;HSPC0 16蛋白为 6 4aa,结构域属于PD0 5 3992家族 ,与T2FA基因功能域同源。结论DPC凝聚性生长的差异表达cDNA文库为进一步筛选并克隆DPC凝聚性生长相关基因奠定了基础 ,也为宏观分析多基因协同参与DPC生长调控和功能发挥提供了依据。HSPC0 16的生物信息学分析显示此基因与DPC基因转录调节有关     

毛乳头细胞与毛囊生长周期

毛囊是一个具有生长、退化、休止三个阶段周期性循环的器官,它由上皮和真皮二部分组成。在生长期,毛囊的上皮和真皮部分增殖分化,上皮部分向真皮延伸,形成毛母质、内根鞘、毛乳头和毛干。进入退化期,毛母质向上运动,与不断缩小的毛乳头分离。在休止期毛囊内毛母质消失,毛乳头浓缩成球点状,直到下一周期的开始［１］。尽管毛囊的这些周期性变化早已为大家所熟悉,但有关控制这些变化的机制至今尚未阐明。近年来研究毛囊生长周期（Ｆｏｌｌｉｃｌｅ ｇｒｏｗｔｈ ｃｙｃｌｅ,ＦＧＣ）调控的文章较多,一些研究显示,毛乳头细胞（Ｄｅ…     

毛乳头细胞的研究现状

毛囊是一种皮肤附属器官,其结构的完整不仅为机体新陈代谢所需,同时对于动物的取暖、人的外表美观都有重要意义。毛囊具有自我更新和周期性生长的特点,这与毛球部存在的一群间充质细胞密切相关,即毛乳头细胞(DPC),它在毛囊发育以及生后毛囊周期过程中都发挥着重要的诱导作用。缺失DPC,无法形成毛囊;而在生后毛囊周期中,DPC通过与周围的毛囊上皮细胞相互作用,直接或间接地诱导毛囊周期性的生长。研究DPC的特性及其发挥的生物学功能,对了解毛囊的发育和再生具有重要的指导意义。     

人毛乳头细胞凝集性生长差异表达基因cDNA文库的构建

目的 构建毛乳头细胞凝集性生长状态下差异表达基因的消减cDNA文库。方法 分别提取凝集性生长和非凝集性生长状态下毛乳头细胞中的总RNA，应用SMART cDNA合成技术和抑制性消减杂交技术分离毛乳头细胞凝集性生长状态下差异表达基因的cDNA片段并建立消减cDNA文库；利用PCR对随机挑选的100个白色菌落进行插入片段的验证，对其中证实有插入片段的30个克隆进行cDNA斑点杂交验证。结果 所构建的消减cDNA文库扩增后得到320个阳性克隆，随机挑选的100个阳性克隆中95％的均有长度在100—600bp的插入片段，cDNA斑点杂交验证显示27个(90．0％)克隆为阳性。结论 结合SMART cDNA合成技术，应用抑制性消减杂交成功地构建了毛乳头细胞凝集性生长差异表达基因消减cDNA文库，为进一步筛选和克隆毛乳头细胞凝集性生长相关基因奠定了基础。     

毛乳头细胞的高效快捷培养方法

目的：为了提高分离毛乳头的效率和培养细胞的成功率，建立一种新的培养方法。方法：采用0.2%胶原酶直接消化人头皮毛囊下部的真皮组织，对分离出来的真皮鞘细胞和毛乳头细胞分别用DMEM培养基进行培养，结果：消化法显著降低了劳动强度，提高了培养成功率。加快了毛乳头细胞的生长。结论：消化法是一种简捷快速的、高效的培养毛乳头细胞的方法。     

正常人毛乳头细胞和真皮鞘细胞的生长特性观察

目的 观察毛乳头细胞和真皮鞘细胞在体外培养条件下的生长特性。方法 采用胶原酶消化法培养正常人头皮毛囊的毛乳头细胞和真皮鞘细胞,在体外进行传代培养,测定毛乳头细胞不同时相点的细胞数,并观察表皮细胞生长因子、氢化可的松＋胰岛素、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子对毛乳头细胞和真皮鞘细胞增殖的影响。结果 毛乳头细胞、真皮鞘成纤维细胞和真皮成纤维细胞的生长呈现３个时相,即停滞期、指数生长期和缓慢生长期。３种细胞都有４ｄ的停滞期,５～１１ｄ为指数生长期,之后呈现出缓慢生长。ＥＧＦ对３种细胞都有显的促进作用（Ｐ〈０．００１）,尤其是对真皮鞘成纤维细胞的作用更强。氢化可的松和胰岛素、ＧＭ－ＣＳＦ对３种细胞的作用不明显。毛乳头细胞、真皮鞘细胞和成纤维细胞的倍增时间分别为６０、５９．２、７６．８ｈ。结论 ＥＧＦ对毛乳头细胞、真皮鞘细胞和     

毛乳头细胞凝集性生长与细胞外基质分泌关系的组织化学研究

目的：研究毛乳头细胞的凝集性生长方式与其产生的细胞外基质之间的关系。方法：用人头皮分离的低传代毛乳头细胞与毛发上皮细胞共同培养形成的毛乳头细胞凝集性生长区及非凝集生长区的毛乳头细胞进行阿新蓝、过碘酸雪夫氏染色,观察染色反应的强弱。结果：新分离的毛乳头,阿新蓝和过碘酸雪夫氏染色均呈强阳性,培养的毛乳头细胞凝集性生长区阿新蓝－过碘酸雪夫氏染色亦显示强阳性,而非凝集区的毛乳头细胞显色呈弱阳性。结论：培养的毛乳头细胞凝集性生长后,合成分泌细胞外基质的功能较非凝集生长的毛乳头细胞明显增强。     

毛乳头在毛囊生长周期中的变化和作用

目的 了解人毛乳头结构在毛发生长周期中的变化及其对毛发生长的调控作用.方法 将整形手术后取下的头皮在无菌条件下分离成游离的毛囊,在Williams E培养基中培养;通过横断毛囊和完整毛囊的培养来观察毛囊的生长状况和处于不同生长周期的毛囊的毛乳头结构变化.结果 分离后的完整毛囊在Williams E培养基中平均可继续生长12 d,平均生长速度为每天0.2～0.3 mm;静止期或生长初期毛囊的毛乳头呈圆形贴在毛球底部,快速生长的毛囊毛乳头变长呈锥形,结构疏松,与毛根紧密相接,当毛囊进入衰退期直至停止生长后毛乳头萎缩变小,并与毛根逐渐分离.在低位横断毛囊,毛囊可再生毛球并继续生长,但生长速度减慢;在高位横断毛囊,毛囊不能继续生长.结论 毛乳头在毛发生长周期中不断变化,生长期毛乳头体积增大,与毛母质联系紧密,它在毛囊的生长和生长周期中起着不可缺少的调控作用.     

人毛乳头细胞HSPC016基因在毕赤酵母中的表达和鉴定

目的构建人毛乳头细胞HSPC016基因的真核表达载体,诱导其表达并对目的蛋白基本生物学特性进行鉴定.方法用PCR从pET-28a( )/HSPC016中扩增出195 bp目的基因,克隆至酵母表达载体pPIC9K质粒,经酶切鉴定后转化毕赤酵母菌GS115,G418-YPD平板筛选高拷贝转化子,甲醇诱导表达后进行Western blot检测和目的蛋白N-端氨基酸测序鉴定.结果用PCR成功扩增出目的基因;pPIC9K/HSPC016转化GS115用G418-YPD平板筛选高拷贝转化子,甲醇诱导后,SDS-PAGE电泳鉴定:目的蛋白相对分子量约为7.2×103,与理论预测值相吻合;UVP扫描表明目的蛋白表达率约18%;Western blot检测具有良好的免疫反应性;N-端氨基酸测序结果与预期序列完全一致.结论HSPC016基因能通过酵母表达载体pPIC9K及宿主菌GS115进行高效、正确地表达,为研究HSPC016基因在真核细胞水平表达的生物学意义奠定了基础.     

毛乳头及毛囊生长调控的若干研究进展

毛囊是控制毛发生长的皮肤附属器官 ,其生长周期可分为生长期 (anagen)、退行期 (catagen)和休止期 (telogen)。在毛囊生长的不同周期 ,一些活性蛋白、细胞因子及激素均可对毛囊周期或生长产生促进或抑制作用。毫无疑问 ,寻找能够影响毛发生长的成分对阐明毛囊生长周期调控机制、发展有效治疗脱发的手段具有重要意义。本文将近期有关毛囊和毛乳头生长调控的相关进展作一综述。1　毛囊的结构及其生长周期毛囊是一个复杂的皮肤附属结构 ,它由上皮 (毛母质与外根鞘 )和真皮 (毛乳头和结缔组织鞘 )两大部分组成。其中包含有 2 0余种细胞 ,包括角…     

休止期毛乳头细胞差异表达基因的分析

目的筛选休止期毛乳头细胞差异表达基因,探讨脱发机制.方法从同一斑秃患者头皮获得脱发区和非脱发区毛乳头,应用SMART cDNA和抑制性消减杂交建立消减文库,对部分克隆进行杂交筛选、测序及同源性检索分析.结果成功构建了休止期(斑秃脱发区)毛乳头cDNA消减文库,代表毛乳头在休止期表达上调的基因,测序发现1条与甲状腺相关的自身抗原基因,还发现脱发区毛乳头差异表达与抑制性信号转导途径有关的基因.这些基因多是首次发现在毛囊中有表达.结论斑秃毛乳头可能由于表达自身抗原基因而导致针对其的自身免疫反应的启动,后者通过多种信号转导途径影响毛乳头的生长和功能发挥.     

硫酸软骨素、硫酸肝素对毛乳头细胞粘附及生长的影响

目的：探讨细胞外基质在毛囊生长发育中的作用,寻持毛乳头细胞（DPC）生长的调节因素。方法：用两步酸消化法分离培养DPC,并通过免疫组化α-平滑肌肌动蛋白（Actin）染色证实。测定硫酸软骨素A,硫酸软骨素C及硫酸肝素对DPC粘附及生长的影响。结果：两步酶消化法分离培养DPC效率高,纯度高,方法简单易行。硫酸软骨素A和硫酸肝素明显促进DPC粘附及生长,而硫酸软骨素C作用不明显。结论：某些细胞外基质可调节DPC的生长,从而影响毛囊的生长发育。     

毛乳头细胞凝集性生长对诱导毛囊样结构形成能力的影响

目的　以细胞外基质成分纤维连接蛋白促进培养的人头皮毛乳头细胞凝集性生长行为 ,观察毛乳头细胞的凝集性生长对诱导毛囊形成能力的影响。方法　传代培养的人头皮毛乳头细胞经细胞外基质纤维连接蛋白预处理后 ,促进形成凝集性生长团 ,再与毛囊上皮细胞共同移植于裸鼠皮下 ,分别于 8、12周进行组织学检查 ,观察毛囊形成及分化程度。结果　 8周后纤维连接蛋白预处理的毛乳头细胞组可见有毛囊样结构形成 ,未处理组仅见松散细胞团 ;12周后两组均可见有毛囊样结构形成 ,但纤维连接蛋白预处理组较未处理组诱导形成毛囊样结构分化更成熟 ;真皮成纤维细胞组未见有毛囊样结构形成。结论　毛乳头细胞的凝集性生长特性对其诱导毛囊形成的能力有密切的关系 ,细胞呈凝集性生长后 ,其生物学功能增强。     

培养基pH值对毛乳头细胞合成细胞外基质影响的组织化学研究

目的 研究不同pH值条件下毛乳头细胞的细胞外基质的合成情况及其与毛乳头细胞凝集性生长特性之间的关系.方法 通过用不同pH值的DMEM培养基培养低代毛乳头细胞12d,并对4种培养条件下的毛乳头细胞进行阿新蓝、过碘酸雪夫氏染色,观察染色反应的强弱.结果 阿新蓝-PAS联合染色后,pH6.8培养条件下的毛乳头细胞胞浆内以红色为主,仅含有少许蓝色.pH7.2、pH7.6培养条件下,大部分毛乳头细胞胞浆内既有红色又有蓝色,一部分细胞胞浆内则完全为蓝色,还有少部分细胞胞浆内完全为红色,而且毛乳头细胞在这两种培养条件下出现凝集性生长,毛乳头细胞凝集区域内红色和蓝色明显强于非凝集区.pH8.0培养条件下的毛乳头细胞胞浆内均为红色且未发现凝集性生长出现.结论 毛乳头细胞体外培养环境的最佳pH值为pH7.2～7.6,毛乳头细胞培养环境的酸碱度能够影响毛乳头细胞的细胞外基质的酸性黏多糖的合成.毛乳共细胞合成的酸性黏多糖与毛乳头细胞的凝集性生长有密切关系.     

培养毛乳头细胞bFGF、ET-1、SCF的表达及其生物学特性

目的:观察不同传代培养人毛乳头细胞的bFGF、ET-1、SCF表达变化情况及对其诱导毛囊再生能力的影响.方法:采用细胞培养、免疫组织化学和原位杂交技术,对不同传代培养的毛乳头细胞的bFGF、ET-1、SCF的表达变化情况进行观察,同时观察其对诱导毛囊再生能力的影响.结果:低传代培养毛乳头细胞ET-1、SCF表达较强,传代＞6代后ET-1和SCF转为阴性;并发现毛乳头细胞表达ET-1和SCF越强,其诱导毛囊再生能力也越高.结论:毛乳头细胞诱导毛囊再生的能力与其表达ET-1和SCF的强度相关.     

大鼠触须毛乳头细胞的分离和培养

目的寻求一种简单有效的分离培养大鼠触须毛乳头细胞的方法。方法将大鼠触须毛囊完整拔出后,在37℃缓慢搅拌的条件下加入0.2%胶原酶Ⅰ消化3h,间断吹打使毛乳头游离,收集上清低速离心(300r/min)后收集毛乳头进行培养,计算其贴壁率,检测α-平滑肌肌动蛋白表达。结果全毛囊消化法能显著降低工作强度,减少污染机会,具有毛乳头贴壁快和细胞迁出时间短的优点。α-平滑肌肌动蛋白染色阳性。结论全毛囊消化法是一种简单有效的分离培养大鼠触须毛乳头细胞的方法。     

人毛乳头细胞在不同传代时期某些细胞因子表达的变化

目的 观察毛乳头细胞在体外培养条件下的生长特性,为毛囊重建提供参考资料.方法 采用二步酶消化法分离正常人头皮毛囊的毛乳头细胞,在体外进行传代培养,用免疫组化方法观察不同传代毛乳头细胞生长因子表达的差异.结果 高代培养毛乳头细胞逐渐丧失其凝集性生长的特性,生长因子的表达逐渐消失.结论 毛乳头细胞的生长及其特性的保持受许多因素的影响,体外培养的毛乳头细胞与体内有差异.低代毛乳头条件培养基可恢复毛乳头细胞部分生长特性.     

hTERT基因永生化人毛乳头细胞系的转化特征

目的 探讨hTERT基因永生化人毛乳头细胞系是否具有转化特征.方法 采用脂质体转染法,将hTERT基因导入体外培养的正常人毛乳头细胞,经G418筛选得到阳性克隆,连续传代培养.应用RT-PCR 法检测 hTERT mRNA 的表达.采用细胞形态学观察、染色体核型分析、软琼脂克隆形成实验和裸鼠致瘤实验分析转染细胞是否具有转化特征.结果 转染后获得1个阳性细胞克隆,扩大培养后细胞生长良好,现已连续传至50代.检测证实转染细胞稳定表达hTERT mRNA,细胞形态与未转染细胞基本相同,染色体核型正常,在软琼脂内不能生长,无裸鼠致瘤性.结论 hTERT基因永生化人毛乳头细胞系基本上是正常细胞而无明显转化特征.     

毛乳头细胞微囊诱导大鼠耳毛囊再生

目的:应用人头皮毛乳头细胞APA(alginate-polylysine-alginate,海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠)微囊诱导大鼠耳部毛囊再生。方法:以APA微囊包裹体外分离培养的人头皮毛乳头细胞;将毛乳头细胞微囊移植至大鼠耳部皮下,定时行组织学检查。结果:毛乳头细胞微囊移植3周后,组织学检查显示:移植部位皮下形成有密集的同心圆状毛囊结构形成,其数量、形态、分化程度等与正常鼠耳毛囊明显不同。结论:微囊化毛乳头细胞具备诱导大鼠耳部毛囊再生的功能。