表没食子儿茶素没食子酸酯抗流感病毒作用的研究

目的：研究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)在体内外抗甲型流感病毒的作用。方法：在体外用MTT法检测EGCG对狗肾传代MDCK细胞的毒性浓度，用CPE法观察EGCG抑制甲型流感病毒的致细胞病变作用；在体内建立流感病毒感染小鼠模型，通过观察小鼠病死率、生命延长率及肺病变程度指标判定其对小鼠肺炎的抑制作用和染毒小鼠的死亡保护作用。结果：EGCG在体外能有效抑制甲型流感病毒CPE的产生；口服EGCG能减少流感病毒A H1N1病毒株感染小鼠的病死率，延长存活时间，减轻小鼠肺组织病变程度。结论：EGCG具有很好的抗甲型流感病毒的作用，呈剂量效应关系。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对裸鼠MGC-803细胞移植瘤抑制作用及机制研究

目的:探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对人胃癌MGC-803细胞异种接种的裸鼠肿瘤的抑制作用及其可能的机制。方法:对人胃癌MGC-803细胞异种接种成功的裸鼠腹腔注射不同剂量的EGCG,每天观察裸鼠的一般状态,处死后称重法测定肿瘤抑制率;HE染色观察肿瘤组织内细胞变化;RT-PCR测定Caspase-3 mRNA表达水平;免疫组化法测定Bcl-2、Bax表达;Western blot检测Smo、Gli-1蛋白表达。结果:与模型组相比EGCG(5、10、20mg/kg)对裸鼠肿瘤的抑制率分别为20.4%、21.2%和48.7%;与模型组相比,不同剂量的EGCG不同程度上调Caspase-3 mRNA表达和Bax表达,下调Bcl-2表达,抑制Smo、Gli-1蛋白表达。结论:EGCG可能通过Hedgehog信号抑制人胃癌MGC-803细胞接种的裸鼠移植瘤生长,诱导其凋亡。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对结肠癌细胞株抑制作用的体外研究

目的探讨绿茶提取物表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对结肠癌细胞株(LoVo细胞、SW480细胞、HT29细胞、HCT-8细胞)增殖的抑制作用及对细胞凋亡和细胞周期的影响,研究其对结肠癌的抑癌机制。方法体外培养结肠癌细胞株,采用不同浓度的EGCG(10,20,35μg/ml)对其进行干预,MTT法检测EGCG对结肠癌细胞株增殖的抑制作用;用流式细胞仪检测EGCG对结肠癌细胞株凋亡和细胞周期的影响。结果 MTT法检测EGCG对结肠癌细胞株的抑制作用均具有浓度依赖性,且HT29细胞株尚具有时间依赖性。流式细胞仪检测EGCG能增强结肠癌细胞株的凋亡率,且剂量与凋亡率呈正相关。EGCG能将SW480细胞和LoVo细胞细胞周期阻滞在G0/G1期,阻碍其向S期转换,将HCT-8细胞阻滞在G2/M期,阻碍其向M期转换,将HT29细胞阻滞在S期,阻碍其向G2期转换,抑制结肠癌细胞株的增殖。结论EGCG对体外培养的结肠癌细胞株的增殖有明显抑制作用,其作用机制与增强细胞凋亡和影响细胞周期有关,具体作用机制有待进一步研究。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对缺血再灌注损伤大鼠心肌脂质过氧化及细胞凋亡的影响

目的：观察表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对缺血再灌注损伤大鼠心肌脂质过氧化及细胞凋亡的影响。方法：结扎大鼠左冠状动脉前降支30min后，松开结扎恢复灌流613min。实验结束后，取一部分左室心肌制成10％匀浆，测定SOD水平及MDA含量；另一部分心肌用4％多聚甲醛固定后切片，用TUNEL法测定凋亡细胞指数(AI)，用SABC法检测Bax和Bcl-2基因的阳性蛋白表达指数(PEI)。实验分假手术组、缺血再灌注损伤组(IRI)、EGCG治疗组(10mg/kg与20mg/kg)和丹参对照治疗组(1．0g/kg)。结果：(1)IRI组心肌组织SOD水平较假手术组明显降低，而MDA含量则明显升高。与IRI组比，EGCG和丹参能显著提高SOD水平，并显著降低MDA含量，且EGCG 20mg/kg的作用强于EGCG 10mg/kg，与丹参相当。(2)与假手术组比，IRI组的AI值显著增加，Bcl-2及Bax的PEI值亦显著增加，但Bcl-2／Bax值却显著降低。与IRI组比，EGCG组的AI值明显降低。并显著降低Bax的唧值，明显提高Bcl-2的PEI值及Bcl-2／Bax值。结论：EGCG通过抑制脂质过氧化反应及细胞凋亡。对缺血再灌注损伤心肌产生保护作用。     

表没食子儿茶素没食子酸酯全乙酰化衍生物的体内抑瘤作用研究

目的初步了解表没食子儿茶素没食子酸酯全乙酰化衍生物(AcEGCG)在体内的抑瘤作用。方法建立移植瘤模型,接种BEL-7402/5-FU的裸小鼠随机分为:对照组、5-FU组、AcEGCG组(AE组)、AcEGCG联合5-FU组(AEF组)和EGCG联合5-FU组(EF组)。接种14 d后开始给药,隔日称重、测量肿瘤的大小至给药20 d结束。处死老鼠,取瘤组织,称瘤块重量,计算抑瘤率,绘制肿瘤生长曲线。免疫组化法观察瘤块的病理切片。结果 AEF组的抑瘤率为40.53%,与EF组(30.87%)相比,具有显著性差异(P<0.05)。与5-FU组相比,AEF组裸鼠体重增加,具有显著性差异(P<0.05)。而EF组裸鼠与5-FU组相比减重较少,具有显著性差异(P<0.05)。与EF组相比,AEF组裸鼠体重变化具有显著性差异(P<0.05)。结论 AcEGCG联合5-FU的抑瘤作用比EGCG联合5-FU的增强,且毒性降低。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对Hela细胞的诱导凋亡作用及靶点蛋白质研究

目的:观察表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate,EGCG)对Hela细胞的诱导凋亡作用,寻找其可能的靶点蛋白质。方法:用50、1002、00、400μg/mL梯度浓度的EGCG孵育Hela细胞24h和48h,荧光显微镜下观察Hela细胞凋亡形态,用MTT检测其生长抑制率,用Annexin V-FITC/PI染色观察其凋亡率,鬼笔环肽染色观察其肌动蛋白聚合体(F-actin)降解程度。然后利用偶联EGCG的微球与Hela细胞裂解液孵育,结合靶点蛋白,靶点蛋白经考马斯蓝染色后,切下目标条带进行质谱鉴定。结果:EGCG能诱导Hela细胞凋亡和F-actin的破坏,并呈时间和剂量依赖性。EGCG结合的靶带蛋白为actin类蛋白。结论:直接结合于actin类蛋白并破坏细胞骨架可能是EGCG诱导Hela凋亡的途径之一。     

表没食子儿茶素没食子酸酯的药理研究进展

从绿茶中提取得到的多酚化合物称为茶多酚（green tea polyphenol），后又提取出茶多酚的有效活性成分儿茶素（catechin），它占绿茶干重的30％～42％。儿茶素中的主要活性成分为表没食子儿茶素没食子酸酯（epigallocatechin gallate，EGCG），另外还有表儿茶素（epicatechin，EC），表儿茶素酸酯（epicatechin gallate，ECG），表没食子儿茶素（epigallocatechin，EGC）等^[1]。其中以EGCG含量最高，超过50％，其生物活性也是儿茶素中最强的。对EGCG及其它绿茶提取物的研究足近年来国内外研究的热点之一，文献多达数千篇。本文主要对EGCG的药理研究作一综述。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对肝纤维化作用机制的研究进展

表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)是绿茶提取物茶多酚中量最多的一种生物活性成分,诸多研究表明EGCG具有多种药理作用,包括抗肿瘤、抗氧化、抗菌等.近年来发现EGCG具有抗纤维化作用.而目前尚无有效的针对肝纤维化的药物,预示着EGCG在抗纤维化方面具有广阔的开发前景.现针对EGCG治疗肝纤维化的作用及其机制进行综述.     

表没食子儿茶素没食子酸酯测定及其对胃癌细胞增殖的抑制作用研究

目的 分析表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)在绿茶提取物中的含量,探讨EGCG对人胃癌细胞BGC823增殖和凋亡的影响,为阐明EGCG抗肿瘤作用机制提供实验基础.方法 反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定绿茶提取物中EGCG的含量.MTT法检测EGCG对体外培养的人胃癌细胞BGC823增殖的影响;DNA ladder法检测EGCG处理各组DNA梯度的变化.所有数据均采用SPSS12.0进行统计分析,均数比较采用t-test.结果 通过绘制标准曲线确定绿茶提取物中EGCG 的含量为9%.MTT法检测结果显示EGCG能够呈现剂量(5×10~(-3),1×10~(-2),2×10~(-2),4×10~(-2))g/L依赖性地抑制人胃癌细胞BGC823的增殖;DNA ladder法显示EGCG处理组细胞DNA呈现梯状条带,而对照组则没有这种带纹.结论 绿茶提取物中EGCG的含量为9%;EGCG能够通过诱导细胞凋亡而抑制人胃癌细胞BGC823的生长和增殖.     

表没食子儿茶素没食子酸酯对人膀胱癌5637细胞株作用的研究

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对人膀胱癌5637细胞株的作用及其作用机制。方法实验分为EGCG 10 mg/L组、EGCG 20 mg/L组、EGCG 40 mg/L组和空白对照组。采用CCK-8法检测各组人膀胱癌5637细胞活性抑制情况,采用吖啶橙(AO)荧光染色观察各组人膀胱癌5637细胞形态,免疫组化法检测各组人膀胱癌5637细胞中Bcl-2、Bax蛋白表达情况。结果 EGCG 10 mg/L组、EGCG 20 mg/L组、EGCG 40 mg/L组培养24 h、48 h和EGCG各组培养72 h的细胞存活率均明显低于空白对照组(P均0.05),且呈浓度依赖性明显降低(P0.05)。AO荧光染色显示空白对照组呈均匀绿色荧光,EGCG各组随着药物浓度的增加,呈绿色荧光凋亡细胞逐渐增多。与空白对照组比较,EGCG 10 mg/L组、EGCG 20 mg/L组、EGCG 40 mg/L组人膀胱癌5637细胞中Bcl-2蛋白阳性表达细胞数明显减少而Bax蛋白阳性表达细胞数明显增多。结论 EGCG能抑制人膀胱癌5637细胞活力,其机制可能与调控Bcl-2、Bax蛋白表达有关。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对大鼠急性心肌缺血作用研究

目的:观察表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对垂体后叶素(Pit)所致大鼠急性心肌缺血的保护作用。方法:采用大鼠舌下静脉注射Pit复制急性心肌缺血模型,观察EGCG(40 mg/kg、20 mg/kg、10 mg/kg)对Ⅱ导联心电图(ECG)ST段、急性缺血性心律失常、血清心肌酶学及心肌脂质过氧化的影响。结果:EGCG(40 mg/kg、20 mg/kg)能降低Pit所致的急性心肌缺血大鼠ECGST段的抬高,对抗急性缺血性心律失常,减少心肌细胞磷酸肌酸激酶和乳酸脱氢酶的释放,提高心肌组织中超氧化物歧化酶活性,降低心肌组织丙二醛含量。结论:EGCG对大鼠急性心肌缺血具有保护作用,其机制可能与清除自由基,抑制脂质过氧化反应有关。     

(-)-儿茶素没食子酸酯和(+)-表儿茶素对心肌细胞保护作用研究

目的:观察(-)-儿茶素没食子酸酯[(-)-CG]和( )-表儿茶素[( )-EC]对心肌细胞黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶体系损伤的保护作用.方法:建立心肌细胞黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶体系损伤模型,倒置显微镜观察加入(-)-CG、( )-EC后细胞形态学变化;噻唑盐比色法测定细胞活性;测定细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量.结果:(-)-CG、( )-EC能够增加心肌细胞存活率,降低心肌细胞LDH的漏出量,增加SOD活性,降低培养液中MDA的含量.结论:(-)-CG、( )-EC具有抗体外培养大鼠乳鼠心肌细胞黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶体系损伤的作用.     

表没食子儿茶素没食子酸酯烷基化衍生物合成及其体外抗癌活性

目的:设计合成表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate,EGCG)烷基化程度较高的衍生物,对其进行简单构效分析,并对衍生物抑制肝癌细胞增殖的药理活性进行初步筛选,旨在选出结构较稳定药效较好的EGCG衍生物。方法:以EGCG,(CH_3CH_2O)_2SO_2为原料,通过乙基化反应合成EGCG衍生物,采用噻唑蓝(MTT)法,细胞密度1×10~8/m L,将EGCG衍生物3,4稀释成4个浓度,对SMMC-7721细胞其质量质量浓度分别为60,80,100,150 mg·L~(-1)和30,40,50,60 mg·L~(-1),对Hep G2细胞其质量浓度为60,80,100,150 mg·L~(-1)和20,30,40,50 mg·L~(-1),作为药物组,并设空白组,每个浓度组设4个复孔,加药后继续培养24 h,测定乙基化EGCG对肝癌细胞SMMC-7721,Hep G2的影响。结果:合成4个EGCG衍生物,其结构通过~1H-NMR,~(13)C-NMR,~2DNMR,质谱等方法进行结构鉴定,均为未见文献报道的新化合物,乙基化EGCG产物3,4对肝癌细胞SMMC-7721,Hep G2增殖均有抑制作用。结论:乙基化EGCG产物3,4对肝癌细胞SMMC-7721,Hep G2均有抑制作用,其中4的抑制作用比EGCG明显增强。     

RNA干扰抑制生存素基因对肝癌细胞凋亡的影响

目的将生存素(survivin)基因特异性小干扰性RNA(smallinterferingRNA,siRNA)直接转染肝癌hepG2细胞系,观察其对肝癌细胞survivinmRNA水平及细胞凋亡的影响。方法合成survivin特异性的siRNA序列1、序列2和对照序列,通过Lipofectamin2000进行直接转染。试验细胞随机分为4组,第1组为空白对照组,第2组以对照序列进行转染,第3组以序列1进行转染;第4组以序列2进行转染。转染后48h,通过半定量RT-PCR的方法检测survivinmRNA的水平。转染后72h,通过流式细胞仪检测各组的细胞凋亡指数。结果转染后48h,1组、2组、3组、4组survivinmRNA相对表达率(%)分别为:48.5±10.5、43.4±6.4、34.5±8.6、23.7±6.2(P1:3、P1:4、P2:4、P3:4均<0.05)。转染后72h,1组、2组、3组、4组细胞凋亡指数(%)分别为:10.7±3.1、11.8±3.5、15.9±3.5、18.6±3.2(P1:3、P1:4、P2:3、P2:4均<0.05)。结论survivin特异性siRNA直接转染肝癌细胞可抑制survivinmRNA的表达,促进肝癌细胞凋亡的发生。     

苦参碱体外诱导人肝癌细胞系Bel-7404分化及机制

目的:研究苦参碱对人肝癌细胞系体外诱导分化作用,并探讨其作用机制。方法:不同浓度苦参碱体外作用于Bel-7404细胞,噻唑蓝比色法(MTT法)绘制生长曲线,光镜下观察细胞形态变化,分别以软琼脂集落形成试验、细胞黏附试验、运动试验、侵袭试验检测细胞生物学特性变化,以流式细胞仪分析细胞周期变化。结果:0.5-1.0g/L苦参碱作用于Bel-7404细胞后,明显抑制细胞增殖,细胞形态向正常转化,克隆形成率显著降低,细胞黏附力明显上升,运动力和侵袭力则显著下降。细胞周期分析G1期细胞堆积,G2和S期细胞显著降低。结论:一定浓度的苦参碱具有抑制Bel-7404细胞生长增殖和诱导分化作用,其作用机制可能与细胞周期调节有关。     

Curcumin Combined with Oxaliplatin Effectively Suppress Colorectal Carcinoma in vivo Through Inducing Apoptosis

Studies have shown chemopreventive and/or chemotherapeutic effects of several curcumin‐based combinatorial treatments on colorectal cancer cells. However, their in vivo effects remain unclear. This study has demonstrated the therapeutic effect of curcumin and oxaliplatin, alone or in combination, on subcutaneously xenografted LoVo human colorectal cancer cells in immunodeficient (nu/nu) mice in vivo. Combinatorial administration of curcumin and oxaliplatin evidently inhibited the growth of colorectal cancer in nude mice, which was significantly more effective than either agent alone. Curcumin combined with oxaliplatin treatment induced apoptosis, accompanied by ultrastructural changes and cell cycle arrest in S and G2/M phases. Further mechanism analysis indicated that while the number of apoptotic tumor cells and the expression of Bax, caspase‐3, and poly (ADP‐ribose) polymerase (PARP) increased significantly, the expression of Bcl‐2, survivin, HSP70, pro‐caspase‐3, and pro‐PARP were dramatically suppressed in tumor cells after the treatment with combinatorial curcumin and oxaliplatin for 22 days. Taken together, the present study has demonstrated that administration of combined curcumin and oxaliplatin effectively suppressed colorectal carcinoma in vivo through inducing apoptosis and thus may provide an effective treatment for colorectal carcinoma. Copyright © 2014 John Wiley & Sons, Ltd.     

紫花牡荆素与EGCG联合应用对肺腺癌A549细胞的增殖抑制及凋亡作用

目的:研究紫花牡荆素(casticin,CAS)与表没食子儿茶素没食子酸酯[(-)-Epigallocatechin gallate,EGCG]联合用药对肺腺癌A549细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用。方法:培养肺腺癌A549细胞,取对数生长期细胞活性95%的细胞进行实验。SRB法考察CAS(0.5,1,5,10,15,20μmoL·L~(-1))联合EGCG(1,5,10,15,20,25μmoL·L~(-1))对A549细胞的增殖抑制作用;激光共聚焦显微镜观察CAS+EGCG联合用药在A549细胞中的分布行为;流式细胞仪检测CAS+EGCG联合用药对A549细胞的凋亡作用;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测CAS+EGCG用药对A549细胞中B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达的干预作用。结果:不同浓度各药物在24,48 h对肺腺癌A549细胞增殖的抑制率比较,差异有统计学意义(P0.05);各浓度CAS+EGCG用药对肺腺癌A549细胞增殖的抑制率均高于同浓度CAS或EGCG单独用药(P0.05)。培养至24 h时,5μmoL·L~(-1)CAS与10μmoL·L~(-1)EGCG联合用药对肺腺癌A549细胞的增殖抑制率呈协同作用。培养至48 h时,0.5μmoL·L~(-1)CAS与1μmoL·L~(-1)EGCG,1μmoL·L~(-1)CAS与5μmoL·L~(-1)EGCG,15μmoL·L~(-1)CAS与20μmoL·L~(-1)EGCG,20μmoL·L~(-1)CAS与25μmoL·L~(-1)EGCG联合用药对肺腺癌A549细胞的增殖抑制率呈相加作用;通过激光共聚焦显微镜观察,CAS(5μmoL·L~(-1))联合EGCG(10μmoL·L~(-1))组进入A549细胞的数量高于同浓度CAS或EGCG单独用药。流式细胞仪检测表明,给药后将细胞培养至24 h时,各浓度CAS+EGCG用药对肺腺癌A549细胞凋亡率高于相同CAS或EGCG浓度下单独用药(P0.05)。Western blot检测显示,与单用药组相比,CAS+EGCG联合用药可增强Bax蛋白的表达量以及减少Bcl-2蛋白的表达量(P0.01)。结论:与单用药相比,CAS+EGCG联合用药能够显著增强对A549细胞抑制及诱导凋亡作用,且诱导凋亡作用机制与Bcl-2和Bax蛋白相关。     

HPLC同时测定黔产红禾麻中4种儿茶素类成分含量

目的:建立HPLC同时测定红禾麻中4种儿茶素类成分含量的方法。方法:采用Diamonsil C18色谱柱(4.6mm×250 mm,5μm),流动相乙腈-0.1%磷酸水溶液梯度洗脱,流速1.0 mL·min-1,检测波长210 nm,柱温35℃。结果:(-)-没食子儿茶素、(±)-表没食子儿茶素、(+)-儿茶素、(-)-表儿茶素线性范围分别为0.050 50~1.010μg(r=0.999 9),0.050 05~1.001μg(r=0.999 9),0.025 75~0.515 0μg(r=0.999 9),0.016 65~0.333 0μg(r=0.999 9);平均加样回收率分别为97.39%,98.45%,99.17%,97.87%。结论:该方法简便、准确、重复性好,可用于红禾麻药材的质量控制。     

青蒿酯钠抗人肝癌(BEL-7402)与诱导凋亡

应用体内外抑瘤实验、细胞形态学观察、流式细胞仪、Westernblot实验进行检测和观察，探讨青蒿酯钠抗肿瘤作用及机制。结果表明，青蒿酯钠对人肝癌有体内、外抗肿瘤作用；诱导人肝癌细胞凋亡，可能是其抗肿瘤作用机制之一；诱导体外人肝癌细胞凋亡通过P53非依赖性途径。