孤啡肽联合阿霉素逆转K562/ADM细胞多药耐药及其分子机制研究

本实验室已研究证实,在细胞水平孤啡肽(OFQ)单独用药可逆转K562/ADM细胞多药耐药。本研究目的是探索OFQ联合阿霉素(ADM)逆转K562/ADM细胞多药耐药的分子机制及其与MDR1 mRNA/P-gp表达的相关性。MTT法检测OFQ和ADM单药及两者联合后对K562/ADM细胞增殖能力的影响,流式细胞术检测细胞凋亡率,实时荧光定量PCR检测MDR1 mRNA表达水平,Western blot检测P-gp的相对表达量。结果显示,OFQ(0.1μmol/L)联合ADM(15 mg/L)后细胞增殖抑制率增加,与ADM组比较,48 h数据具有统计学意义(P<0.05),细胞凋亡率显著提高(P<0.01);OFQ联合ADM作用于细胞后MDR1 mRNA/P-gp表达水平明显低于ADM单独用药组(P<0.01),且MDR1 mRNA(r=0.91)及P-gp(r=0.98)表达水平在48 h内呈时间依赖性。结论:OFQ联合ADM可时间依赖性的逆转K562/ADM细胞多药耐药性,48 h为最佳逆转时间,逆转机制与下调MDR1 mRNA和P-gp的表达量相关。     

shRNA干扰MDR1基因逆转胃癌细胞多药耐药性的研究

目的利用短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)技术沉默多药耐药基因1(multidrug resistance,MDR1),探讨其对SGC7901/L-OHP细胞株多药耐药性的逆转作用。方法采用逐步增加药物浓度法建立耐奥沙利铂(oxaliplatin,L-OHP)的胃癌细胞株SGC7901/L-OHP,用shRNA技术沉默MDR1基因在SGC7901/L-OHP细胞中的表达,以real-time PCR检测细胞中MDR1mRNA的表达,Western blot检测细胞中P糖蛋白(P-glycopmtein,P-gp)的表达,MTT法检测转染后SGC7901/L-OHP细胞对L-OHP和5-FU的敏感性。结果shRNA沉默SGC7901/L-OHP细胞株MDR1基因后,与空白组和阴性质粒组比较,MDR1mRNA表达抑制(P0.01),且P-gp表达下调(P0.05)。干扰后的SGC7901/L-OHP细胞对L-OHP和5-FU的敏感性显著升高(P0.05)。结论shRNA可有效沉默SGC7901/L-OHP胃癌耐药细胞株MDR1基因的表达,提高耐药的胃癌细胞对化疗药的敏感性。     

淫羊藿素对人多发性骨髓瘤耐药细胞株KM3/BTZ多药耐药性的逆转作用

目的:探讨淫羊藿素对人多发性骨髓瘤耐药细胞株KM3/BTZ多药耐药性的逆转作用及其可能的机制。方法:采用硼替佐米(bortezomib,BTZ)梯度诱导建立KM3/BTZ细胞株,MTT法检测KM3和KM3/BTZ对7种化疗药物的耐药性以及淫羊藿素对KM3/BTZ细胞的增殖抑制作用和耐药逆转作用,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot法检测Par-4、HSP27和P-gp蛋白表达变化。结果:KM3/BTZ对BTZ和其他6种化疗药物都产生耐药性,其中对BTZ的耐药指数(RI)最高,为17.84。淫羊藿素抑制KM3/BTZ细胞增殖并诱导其凋亡,使半致死浓度(IC50)由0.354μg/ml下调到0.149μg/ml,耐药逆转倍数为2.38倍;Par-4表达上调,HSP27和P-gp表达下调。结论:淫羊藿素能有效抑制KM3/BTZ细胞增殖,诱导其凋亡,具有逆转KM3/BTZ细胞多药耐药的作用,其作用机制可能与下调HSP27和P-gp,以及上调Par-4表达有关。     

超声造影剂联合超声介导耐药基因反义寡脱氧核苷酸转染肝癌细胞逆转多药耐药效应的研究

目的 探讨超声造影剂联合超声介导mdr1、mrp基因反义寡脱氧核苷酸(ASODN)转染QGY耐药肝癌细胞对多药耐药(MDR)的逆转.方法 分别将mdr1、mrp-ASODN+超声造影剂+超声辐照转染QGY/CDDP肝癌细胞,检测转染后细胞贴壁率、药物敏感性、耐药基因mRNA表达和相应耐药蛋白表达变化.结果 mdr1-ASODN转染后,细胞贴壁率和耐药基因mRNA表达变化大(P＜0.05),细胞药物敏感性和耐药蛋白P-gp、MRP表达变化小(P＞0.05).实验组(2组)作用更大(P＜0.05).mrp ASODN转染后,细胞贴壁率、药物敏感性、耐药基因的mRNA表达和耐药蛋白P-gp、MRP表达均变化明显(P＜0.05),实验组(2组)作用更大(P＜0.05).结论 mdr1、mrp-ASODN+超声造影剂+超声辐照能够低毒部分逆转肝癌细胞MDR,是潜在肿瘤基因治疗方法.     

肝癌多药耐药细胞系HepG2/ADM的建立及耐药机制研究

目的建立人肝癌多药耐药细胞系并研究其耐药特性及机制。方法应用人肝癌细胞株HepG2,采用阿霉素(ADM)浓度梯度递增诱导法,建立多药耐药细胞系HepG2/ADM。相差显微镜观察细胞,用MTT法检测该耐药细胞株对多种化疗药物的多药耐药性,采用流式细胞术检测该耐药细胞表面多药耐药基因(mdr)的表达产物P糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白(MRP)及谷胱甘肽硫转移系统(GSH/GST)的表达情况,应用RT-PCR检测MDR、MRP基因表达水平。结果HepG2/ADM对多种抗癌药物产生耐药,对阿霉素的耐药性提高了89.38倍。流式细胞仪分析发现(45.5±5.1)%的HepG2/ADM细胞表面P-gp表达阳性,而对照细胞HepG2表达仅为(11.3±1.2)%,二者差异有显著性(P<0.01);HepG2/ADM和HepG2细胞的MRP及GSH/GST表达无明显变化(P>0.05)。RT-PCR检测发现HepG2/ADM中MDR mRNA高表达。结论HepG2/ADM具有明确的多药耐药性,其多药耐药相关基因MDR mRNA表达升高。     

热疗对胃癌细胞株化疗敏感性的影响

目的:探讨热疗时胃癌细胞株对紫杉醇(paclitaxel,TAX)敏感性的变化。方法:用对TAX敏感的胃癌细胞株MKN-45经浓度梯度递增法建立胃癌TAX耐药细胞株,命名为MKN-45/TAX。采用免疫细胞化学染色法检测MKN-45/TAX和MKN-45细胞中多药耐药相关基因(multi-drug resistance gene,MDR1)的表达;采用CCK-8法检测不同温度和不同TAX浓度作用下2种细胞的增殖抑制率;采用实时荧光定量–聚合酶链反应(real-time polymerase chain reaction,RT-PCR)法、蛋白质印迹(Western blotting)法检测经靶向siRNA处理前后MDR1 mRNA和P糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的表达。结果:成功建立MKN-45/TAX。MDR1在MKN-45/TAX中高表达而在MKN-45中低表达。随着紫杉醇浓度的增加,其对MKN-45及MKN-45/TAX的增殖抑制率增加;42℃时紫杉醇对MKN-45/TAX的增殖抑制率降低,而对MKN-45的增殖抑制率则升高。转染MDR1 siRNA后MDR1 mRNA和P-gp的表达水平均下降。结论:热疗联合化疗可增强耐药胃癌细胞株对TAX的耐药性,而增强敏感胃癌细胞株对TAX的敏感性,其机制可能与MDR1表达有关。     

环氧合酶2抑制剂塞来昔布对结肠癌多药耐药逆转作用的研究

目的 探讨环氧合酶2(COX-2)抑制剂塞来昔布对结肠癌多药耐药(MDR)的逆转作用.方法 在结肠癌多药耐药细胞株colo320/5-FU中,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)方法检测塞来昔布时5-氟尿嘧啶(5-FU)的耐药逆转倍数;反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测耐药基因的变化;免疫组织化学法检测细胞膜跨膜蛋白p-170(P-gP)的表达.结果 MTT结果显示塞来昔布对结肠癌细胞的耐药产生明显的逆转作用(F=2285.660,P＜0.01),其逆转倍数分别为1.70,3.80,8.48,且呈浓度依赖性.RT-PCR结果显示塞来昔布明显抑制多药耐药基因1(MDR1)mRNA的表达(F=986.776,P＜0.01),且呈浓度依赖性减低,各浓度组之间差异有统计学意义(P＜0.01).免疫荧光结果显示,细胞膜P-gp荧光强度随着塞来昔布浓度的逐渐增高而减弱.结论 选择性COX-2抑制剂塞来昔布对多药耐药细胞株colo320/5-FU具有明显逆转作用,在非细胞毒剂量范围内呈现剂量依赖性,初步机制可能涉及干预多种转录因子的表达而下调MDR1,继而阻滞细胞周期及增加细胞凋亡.     

PI3K抑制剂对三阴性人乳腺癌细胞株MBA-MB-231/ADR的多药耐药逆转作用

目的探讨PI3K抑制剂对三阴性人乳腺癌细胞多药耐药的逆转作用及其与PI3K/Akt信号转导关系。方法采用MTT法测定三阴性乳腺癌细胞系MBA-MB-231及其多药耐药细胞株MBA-MB-231/ADR对经典化疗药物阿霉素的半数抑制浓度(IC50),以及MBA-MB-231/ADR细胞株在PI3K抑制剂LY294002给药前后对阿霉素的敏感性差异。Western Blot检测MDA-MB-231/ADR细胞株LY294002给药前后,P-Akt、Akt、IκBα、NF-κB、P-gp和cleaved-caspase-3表达水平差异。结果 1MBA-MB-231和耐药细胞株MBA-MB-231/ADR对阿霉素的IC50分别为(0.36±0.03)μmol/L和(16.77±1.57)μmol/L,耐药倍数为46.58倍。2LY294002给药后,耐药细胞株MBAMB-231/ADR对阿霉素的IC50降至(2.59±0.07)μmol/L,耐药倍数降至6.475,对药物敏感性显著增加。3耐药细胞株MBA-MB-231/ADR中PI3K/Akt和NF-κB通路被激活,细胞耐药相关蛋白P-gp处于高表达水平;LY294002处理之后,MBA-MB-231/ADR细胞中PI3K/Akt和NF-κB通路被抑制,P-gp表达水平下调,细胞凋亡相关的cleaved-caspase-3表达上调。结论 PI3K抑制剂LY294002能有效逆转耐药细胞株MBA-MB-231/ADR的耐药性,从而增强耐药细胞MBA-MB-231/ADR对化疗药物阿霉素的敏感性。该研究结果提示LY294002通过阻断PI3K/Akt通路抑制下游NF-κB通路的活化和P-gp表达上调,从而参与MBA-MB-231/ADR耐药性的逆转。     

干扰素α对胃癌多药耐药细胞耐药性的影响

目的:研究干扰素α对SGC7901/VCR胃癌多药耐药细胞耐药性的影响。方法:用不同浓度的干扰素α(IFN-")(0、103、104、105U/mL)以不同时间(0、12、24、48、96h)长度作用于SGC7901/VCR胃癌多药耐药细胞,收集作用后的细胞,用RT-PCR方法检测多药耐药1(MDR1)基因mRNA随IFN-α作用的不同时间和浓度变化情况,用流式细胞仪检测MDR1蛋白表达随IFN-α作用的不同时间和浓度变化情况。用MTT方法检测经IFN-α(105U/mL)作用SGC7901/VCR细胞48h后,与不经过IFN-α作用的SGC7901/VCR细胞相比耐药谱的变化。结果:随作用时间增加和IFN-α浓度增大,MDR1的mRNA和蛋白的表达都减少,在α=0.05水平均有统计学意义;在IFN-α浓度为105U/mL,作用时间为48h,MDR1的mRNA和蛋白的表达都减少最明显。SGC7901/VCR细胞被IFN-α作用后,其对各化疗药物耐药性的变化为,对长春新碱和羟喜树碱的逆转倍数最大,IC50分别减少了22倍和12倍,最明显;其次为对5-氟尿嘧啶的耐药的变化;对丝裂霉素和卡铂的耐药性的逆转倍数不是很大。结论:IFN-α对SGC7901/VCR胃癌多药耐药细胞的耐药性有部分逆转的作用,但对不同抗癌机制的化疗药物逆转效果不同。其机制可能为抑制MDR1基因RNA的合成,进而影响MDR1蛋白的合成,最终减少MDR1蛋白对化疗药物的泵出效应。     

汉防己甲素、雷洛昔芬及其联合应用逆转人肝癌耐药细胞株多药耐药性的研究

目的：探讨汉防己甲素（TTD）、雷洛昔芬及其联合应用对人肝癌多药耐药细胞株Hep-3B/ADM耐药性的逆转作用。方法：通过阿霉素（ADM）浓度梯度递增诱导法,建立人肝癌多药耐药细胞株Hep-3B/ADM。MTT法检测细胞对化学疗法药物的敏感性;流式细胞仪检测P-gp的表达及细胞内ADM强度。结果：ADM对Hep-3B和Hep-3B/ADM细胞的IC50分别为0.059μg/ml和2.131μg/ml,雷洛昔芬（4.90μmol/L）及TTD（1.00μmol/L）单用和两药联合处理Hep-3B/ADM细胞时,ADM的IC50值分别为0.234μg/ml、0.168μg/ml、0.096μg/ml。TTD及雷洛昔芬可降低耐药细胞株P-gp蛋白的表达,且联用有增强效果,同时还观察到逆转剂雷洛昔芬和TTD作用后细胞内阿霉素浓度增加,两药联合作用时效果增强。结论：TTD及雷洛昔芬均可逆转耐药,且联合作用效果增强。     

韶关市农村留守儿童孤独感状况调查

目的了解广东省韶关市农村地区留守儿童孤独感现状及其影响因素。方法对韶关市某地区两所农村小学3～6年级学生中的489名留守儿童采用儿童孤独量表和自编调查表进行问卷调查。结果17．6％留守儿童存在孤独感，不同性别孤独感发生率无差异性，不同年龄及不同年级间孤独感发生率差异均有极显著性（P〈0.01）；随年级增加，孤独感发生率呈下降趋势（X^2趋势=5．970，P〈0.05）。留守儿童孤独感与健康状况、学习成绩、学习困难程度、父母教育方式、父母间关系和老师教育方式等因素显著相关（P〈0.01～0．05）。结论农村地区留守儿童中存在一定程度的孤独感问题，老师和家长应以正确的态度和方法对待留守儿童，以减少其孤独感的发生。     

产科新生儿不同部位经皮测黄报警预值的可靠性观察

目的对比观察产科新生儿不同部位经皮胆红素（TCB）报警预值的可靠性。方法132例产科新生儿采取随机数字分组法分为正常产组和剖宫产组各66例,新生儿均于产后第4天同一时间点应用KJ8000经皮测黄仪分别测量额、胸、腹、额胸、额胸腹TCB值,TCB〉12．9mg／dl者,取得亲属同意抽取静脉血检测血清胆红素（SB）,对比分析不同部位TCB及其与sB值的差异。结果两组分别有17例或21例达到TCB报警预值。两组TCB或sB相同方法及相同部位比较,差异无统计学意义（P〉0．05）;两组TCB不同部位对比,额部值最低、胸部值最高,且与其他部位同组对比差异均有统计学意义（P〈0．01）;两组sB值对比差异无统计学意义（t=1．53,P〉0．05）,与不同部位TCB对比均以胸部数值差异无统计学意义（P〉0．05）,而与其他部位TCB两组差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论正常产与剖宫产新生儿术后sB对比差异无意义;TCB动态监测以胸部结果更接近SB。     

Determination of loss of quality of life

Physiatrists are a valuable resource in legal settings, where assessment of functional capacity to perform work and of future medical needs must be determined. Physiatrists help determine what future medical care is needed to restore and maintain an individual at the maximum level of life function. This article focuses on the use of a quality of life (QOL) rehabilitation model, rather than a medical model, for enhancing functional performance, modifying environments, and facilitating patient coping. We discuss use of the QOL model to describe and influence a patient's physical, psychological, cognitive, vocational/economic, and social/leisure domains.     

护士选择性应用静脉留置针现状分析

[目的]了解护士选择性应用留置针的现状以及主要影响因素,为指导临床留置针合理应用提供理论依据。[方法]采用自设问卷对138名护士留置针选择性使用情况及其影响因素进行调查。[结果]约1／4的护士并不知道应选择性使用留置针,近60％的护士在实际工作中选择留置针的意识较差;护士选择性应用留置针的决策受多因素影响;不同科室、职称及是否具有带教资格选择性应用留置针的影响因素不尽相同;绝大部分护士希望参加选择性应用留置针相关内容的培训。[结论]临床护士操作前考虑留置针选择的意识有待加强。建议实施有针对性的培训以提高护士选择性应用留置针的能力。     

血液透析患者家庭护理提供者的生活质量调查

目的:了解江汉油田血液透析(血液透析)患者家庭护理提供者(护理者)的生活质量。方法:对60例血液透析患者的家庭护理提供者进行一般情况和生活质量综合评定问卷(QOLI-74)调查,并进行相关性和多因素回归分析。结果:家庭护理提供者各维度的主观生活满意度与其客观指标相关,但也与其需求、年龄、文化程度、与患者的关系有关。结论:客观状态是影响主观生活满意度的重要因素,同时应考虑护理者的需求、年龄、文化程度、与患者的关系对护理者主观生活满意度的影响。