丹参素(DS-182)对大鼠心肌缺血/再灌注致线粒体变化的影响

本实验分别以ESR自旋标记法,采用两种脂肪酸自旋标记物5-DSA和16-DSA及TBA比色法测定大鼠离体心脏缺血,再灌注时心肌线粒体膜流动性及脂质过氧化物含量;同时观察丹参素对此变化的影响。发现缺血40分钟后有氧再灌注20分钟时,心肌线粒体膜深层的流动性明显低于富氧灌注组,而脂质过氧化物含量则极明显高于富氧灌注组,预先给予丹参素,对以上变化有明显的改善作用。此外,利用ESR自旋捕集技术发现丹参具有清除外源性黄嘌呤—黄嘌呤氧化酶水溶体系产生的超氧阴离子(O_2~-)的作用。我们的实验表明,丹参素可能作为一种强有力的O_2~-的清除剂保护心肌线粒体免受缺血再灌注时氧自由基引发的脂质过氧化损害。     

The role of oxygen free radicals in myocardial ischemia/reperfusion injury.

A series of experiments have been done to investigate the role of oxygen free radicals in ischemia/reperfusion injury. The following results were found: Myocardial MDA content increased significantly after post-ischemic reperfusion in vivo and in vitro. A blockade of the xanthine oxidase pathway for free radical generation could provide effective protection against ischemia/reperfusion injury. Exogenous reactive oxygen intermediates H2O2, .OH and O2- could induce changes in the contractility and electrophysiological properties of myocardial cells similar to those seen in ischemia/reperfusion. An outburst of free radical generation was detected by ESR spectroscopy at low temperature (-173 degrees C) and with the spin trapping technique during the very early phase of reperfusion. The authors emphasize the important role of free radicals in the pathogenesis of myocardial ischemia/reperfusion injury.     

参附注射液对兔心肌缺血再灌注损伤中内皮功能的影响

目的观察实验兔心肌缺血再灌注(I/R)损伤中内皮功能的改变和参附注射液(SFI)对它的影响及作用机制。方法把21只日本大耳白兔随机分为假手术对照组(A组)、心肌I/R模型组(B组)及心肌I/R SFI治疗组(C组),每组7只。检测指标:结扎前、缺血40min、再灌注40min3个时相点血清一氧化氮代谢产物(NOP)和血浆内皮素(ET)的含量;再灌注40min后心肌组织总超氧化物歧化酶(T-SOD)和丙二醛(MDA)的含量;电镜观察心肌的超微结构。结果B组与A组比较,缺血40min、再灌注40min血清NOP明显降低,血浆ET显著增高,且二者呈显著负相关;再灌注40min后心肌组织T-SOD明显降低,MDA明显增高,NOP与T-SOD、ET与MDA均呈显著正相关,NOP与MDA、ET与T-SOD均呈显著负相关;心肌的超微结构发生异常改变。C组与B组比较,缺血40min、再灌注40minNOP水平明显增高;再灌注40minET水平明显降低;再灌注40min后心肌组织T-SOD显著增高,MDA显著降低;心肌超微结构的异常改变明显减轻。结论SFI具有改善兔心肌I/R中自由基介导的内皮功能紊乱作用,可减轻心肌的I/R损伤。     

MK-801在脊髓缺血再灌注损伤中的作用

目的 研究大鼠脊髓缺血40min和再灌注4h脊髓组织兴奋性氨基酸(EAA)和细胞内Ca^2 ([Ca^2 ]i)的含量变化，及应用地卓西平马来酸盐(MK-801)对上述指标的影响。方法 SD大鼠40只，随机分为假手术组、缺血40min组、再灌注4h组、MK-801治疗组(n=10)。测定各组脊髓组织中谷氨酸(Glu)和[Ca^2 ]i含量，同时观察MK-801对上述指标的影响．结果 缺血40min组Glu含量明显降低，再灌注4h组Glu含量降低更明显；[Ca^2 ]i的含量在缺血40min组时有所升高，再灌注4h组则明显升高，MK-801组能显著升高Glu含量和降低[Ca^2 ]i的含量．结论 EAA的兴奋性神经毒性在脊髓缺血再灌注中发挥着重要的作用，MK-801对该神经毒性有明显的抑制作用。     

IH764-3对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用

目的 :探讨中药丹参提取的有效单体IH764 3对肝脏缺血再灌注 (ischemiareperfusion ,I/R)损伤的作用。方法 :通过对大鼠I/R模型腹腔注射IH764 3 ,经测定肝组织内ATP、AMP、ADP含量、肝细胞的能荷 ,血清丙氨酸转氨酶 (ALT)、门冬氨酸转氨酶 (AST)、碱性磷酸酶 (AKP)、谷氨酰转肽酶 (r GT)等指标 ,并观察肝脏超微结构。结果 :用药组较单纯I/R组肝组织内ATP含量高 ,肝脏功能损害轻 ,肝组织超微结构的损伤减轻。结论 :IH764 3对肝脏I/R造成的损伤有明显的预防作用     

沙土鼠急性脑缺血／再灌注期间脑内自由基代谢水平的变化

本实验采用沙土鼠双侧颈总动脉结扎模型观察急性脑缺血／再灌注期间脑内自由基代谢水平的变化。结果发现缺血４０ｍｉｎ时丙二醛（ＭＤＡ）含量明显增加，超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性显著下降，谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨ－Ｐｘ）活性略有降低；再灌注１ｈ后ＭＤＡ含量进一步增加，ＳＯＤ活性进一步下降，ＧＳＨ－Ｐｘ活性也明显降低，结果表明脑缺血／再灌注期间脑内出自由基代谢紊乱。     

缺血预处理对肝脏缺血再灌注所致急性肺损伤的保护作用

目的:观察全肝缺血再灌注后所致急性肺损伤的发病机制及缺血顸处理的保护作用.方法:通过脾静脉-股静脉转流建立大鼠全肝缺血再灌注模型.18只大鼠随机分3组,全肝缺血40 min再灌注3 h组(IR组);缺血预处理组(IP组),阻断肝脏血流5 min再灌注5 min后,再行全肝缺血40 mjn再灌注3 b;对照组(C组)仅行麻醉及假手术.3 h后检测各组肺泡灌洗液中总蛋白的含量、肺组织含水量以及髓过氧化物酶(MPO)含量和组织及血中丙二醛(MDA)含量.结果:与C组比较,IR组肺泡灌洗液总蛋白含量和肺组织含水量明显升高,而IP组增高不明显.IR组肺组织MPO和MDA及血清中MDA含量明显高于对照组,而预处理可以减少MPO和MDA的升高.结论:肝脏缺血再灌注通过中性粒细胞浸润和氧化应激反应导致急性肺损伤.缺血预处理可以减少粒细胞的浸润,增加抗氧化的能力,减轻肺损伤.     

大鼠肝脏短期缺血再灌注损伤早期肝细胞超微结构观察

目的　探讨大鼠肝脏缺血再灌注损伤早期肝细胞超微结构的病理变化。方法　切取肝脏局部缺血再灌注模型大鼠肝脏组织 ,观察光镜及电镜下的组织学改变。结果　肝脏局部缺血再灌注模型大鼠肝细胞在缺血 4 0min后再灌注 90min时 ,达到不可逆性破坏。结论　实验大鼠肝脏组织的缺血时间应少于 4 0min。     

乳酸镁对心肌再灌注损伤时血小板聚集的影响

目的：观察乳酸镁对心肌缺血－再灌注损伤过程中血小板聚集的影响，探讨乳酸镁心肌保护作用的机理。方法：利用整体大鼠急性心肌缺血再灌注模型，结扎冠脉左室支40min，再灌注40min,取血测定血小板聚集率，计算聚集抑制率。结果：再灌注前给乳酸镁对缺血再灌注时的血小板聚集有抑制作用，110mg/kg组较150mg/kg组抑制血小板聚集作用更明显。结论：乳酸镁对心肌再灌注损伤的保护作用与其防止血小板聚集有关。     

大鼠心肌急性缺血再灌注Fos蛋白表达及其意义

目的:探讨急性心肌缺血再灌注早期不同时间心肌细胞内Fos蛋白表达的变化,为心肌早期缺血再灌注损伤致死死后诊断提供新方法。方法:在32只SD大鼠建立心肌早期缺血再灌注损伤模型,另外40只大鼠分为正常与缺血对照组。用免疫组化SABC法结合图象分析研究心肌细胞核Fos蛋白的累积情况。结果:缺血30min再灌注30min后,再灌注区有部分心肌细胞核呈弱阳性着色,以后随缺血时间延长核阳性增强。缺血90min再灌注30min后核棕褐色染色最强,180min后又开始减弱。正常和单纯缺血组心肌细胞核未见有阳性反应。HE染色无明显病理改变。结论:Fos蛋白表达高峰在缺血90～180min之间,FosSABC染色法可诊断缺血30min再灌注30min或更长时间的损伤。免疫组化染色法检测心肌细胞核Fos蛋白的表达有望成为急性心肌缺血再灌注死后诊断的一种有意义的手段。     

丹参对肝硬化门脉高压大鼠缺血再灌注胃粘膜损伤防治作用的研究

制成肝硬化门脉高压（ＰＨＴ）大鼠胃粘膜缺血再灌注模型，用电子自旋共振技术测定缺血再灌注前后及丹参治疗后胃粘膜中氧自由基（ＯＦＲ）以及脂质过氧化物（ＬＰＯ）和超氧化物的歧化酶（ＳＯＤ）的变化，同期观察其光镜、电镜病理改变，探讨丹参对胃粘膜损伤的保护作用。结果表明：ＰＨＴ大鼠胃粘膜在缺血再灌注过程中有大量ＯＦＲ产生，粘膜损伤严重程度与ＯＦＲ、ＬＰＯ及ＳＯＤ密切相关；ＰＨＴ胃粘膜更易受缺血再灌注损伤；早期使用丹参可显著降低胃粘膜中ＯＦＲ及ＬＰＯ含量，提高ＳＯＤ活性，减轻胃粘膜的损伤，起到保护胃粘膜的作用     

大鼠肝缺血再灌注损伤过程中apoM mRNA的表达

目的探讨apoM mRNA在大鼠肝缺血再灌注损伤中的表达。方法建立大鼠肝缺血再灌注损伤模型，健康雄性SD大鼠40只随机分成5组，每组8只：假手术组（对照组）；IR1组（肝缺血30rain）；IR2组（肝缺血60min）；IR3组（肝缺血120rain）；IR4组（肝缺血180min）。IR组的再灌注时间统一为60min。观察每1组的病理变化；检测各组血浆谷丙转氨酶水平（ALT）；Realtime RT—PCR检测apoM mRNA在肝脏中的表达。结果肝缺血再灌注后，光镜下大鼠肝组织有明显的肝血窦和中央静脉瘀血，内皮细胞及肝细胞普遍水肿变性，可见肝细胞坏死，这些变化随着缺血时间的延长而逐渐加重。同样的结果见于血浆中ALT的水平。而apoM mRNA的表达有所不同，与对照组相比，IRI组的表达明显下降（P〈O．05），随着缺血时间的延长，apoM mRNA的表达开始上升，至IR4及IR5组，其表达已明显高于IR1组（P〈0．05）。结论在肝缺血再灌注损伤过程中，肝内apoM mRNA的表达有迅速、明显的变化，提示apoM可能具有急性时相反应蛋白的特性。     

心血通干预内皮素对急性心肌缺血再灌注性心律失常的预防作用

目的：探讨心血通对兔急性心肌缺血再灌注性心律的失常及其血浆内皮素浓度的影响，方法：27只兔了胡机分为对照组，治疗组和预防组，3组兔均用乙醚麻醉，开胸结扎左前降支冠状动脉（LAD）60min，然后松开LAD再灌注120min，用心电监护仪观察心律失常发生情况，在LAD结扎前，及LAD结扎后10min,20min,40min,60min，及再灌注后10min,20min,40minm,60min,120min，采血测定ET浓度，结果：预防组显著降低各相同时相点血浆ET浓度（P＜0．01），显著降低缺血再灌注性心律失常发生率，而治疗组和对照组作用不明显，。结论：心血通对再灌注心律失;常有预防作用，而无治疗作用，其机制与ET浓度下降有关。     

Electron spin resonance studies on the oxidative denaturation of hemoglobin of blood preserved at 20 degrees C]

In order to further understand the injurious change of erythrocytes during blood preservation at room temperature, we studied the denaturation of oxidative hemoglobin of blood preserved at 20 degrees C using electron spin resonance (ESR) technique. The results showed: when blood was preserved at 20 degrees C, there was ESR absorption of low spin hemichrome (g = 2) during the 204-hour preservation period; when the blood was preserved at 4 degrees C after it had been preserved at 20 degrees C for 24 hours, there were ESR absorption of the high spin methemoglobin (g = 6) and ESR absorption of low spin hemichrome (g = 2) during the 40-day preservation period. This study demonstrates that ESR absorption will increase when preservation time increases. When blood is preserved at 4 degrees C, no ESR absorption will emerge during 40 days' preservation.     

Inhibitory Effect of Allopurinol on the Generation of Free Radicals in Reperfused Rat Brain

Free radicals in ischemic and reperfused rat brain were measured by electron spinresonance(ESR) spectrometer.The inhibitory effect of allopurinol on the free radical genera-tion in reperfused rat brain was observed.The experimental results revealed that the free radi-cal content of the brain in the ischemia group was markedly higher than that in the control group(P<0.01),that in the reperfusion group was markedly higher than that in the ischemia group(P<0.01)and that in the allopurinol group was markedly lower than that in the reperfusiongroup(P<0.01).These results suggest that free radicals increase.greatly after cerebralischemia-reperfusion and that allopurinol plays a certain inhibitory role in the free radical genera-tion in the reperfused rat brain.     

小鼠全脑缺血再灌注损伤模型的研究

目的: 探讨结扎双侧颈总动脉、颈部软组织加压人工通气等方法,制作小白鼠脑缺血再灌注损伤动物模型的成功率和可靠性。方法: 结扎双侧颈总动脉,并用粗棉线在颈部血管、神经和气管下方绕颈后结扎加压,以脑电波变平作为全脑完全缺血的标志,造成全脑缺血30 min,然后解除结扎、恢复血液灌流60 min;使用微通气量小动物呼吸机进行人工通气;测大脑皮质乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸磷酸激酶(CPK)的活性;观察大脑皮质和海马的形态学变化。结果: 缺血后数秒钟内脑电波变为一条直线,缺血30 min和再灌60 min内未见恢复。LDH和CPK活性,缺血组和再灌组显著低于对照组(P<0.01);再灌组CPK活性明显低于缺血组(P<0.01)。病理检查:缺血30 min,大脑皮质和海马锥体细胞固缩,少数神经元变性,轻度充血、水肿;再灌60 min,上述损伤进一步加重。结论: 本文建立的改进模型方法简便易行,缺血和再灌注损伤显著,模型成功率高,动物死亡率低。     

岛状皮瓣缺血/再灌流时氧自由基含量和脂质过氧化关系的研究

本实验用ESR测定岛状皮瓣在缺血/再灌流后自由基总量的变化和用TBA法测定了皮瓣组织再灌流后MDA的变化。结果表明岛状皮瓣在缺血/再灌流之后,氧自由基含量明显增加,脂质过氧化物含量也明显增高,并且两者间呈直线正相关。结果提示,氧自由基是造成岛状皮瓣再灌流损伤的主要病理因素,而造成损伤的直接原因则是氧自由基增加后所引起的脂质过氧化反应。     

实验性大鼠脑缺血的病理组织学和超微结构变化

本实验观察不同时期的大鼠全脑缺血期与再灌流期神经元的选择性损害,其结果大脑皮层第Ⅲ、Ⅴ层、海马H_1段等神经元对缺血最敏感;再灌流时,膜结构改变颇为突出,还呈现严重的脑水肿等改变,讨论了发病机理。     

吡那地尔对大鼠心肌缺血/再灌注时细胞凋亡及fas基因表达的影响

目的　探讨 ATP敏感性钾通道 (KATP)开放剂吡那地尔对大鼠心肌缺血 /再灌注时心肌细胞凋亡及 fas基因蛋白表达的调节作用 .方法　 4 0只大鼠随机分成 4组 :1假手术组 (仅穿线而不结扎 ,观察 6 .5 h) ;2缺血 /再灌注组(缺血 30 min,再灌注 6 h) ;3吡那地尔组 (缺血前 10 m in静推吡那地尔 0 .2 mg· kg- 1 ,然后缺血 30 min/再灌注 6 h) ;4吡那地尔 +优降糖组 (缺血前 10 min静推吡那地尔 0 .2 m g·kg- 1 +优降糖 3mg·kg- 1 ,然后缺血 30 min/再灌注 6 h) .称质量法计算心肌梗死范围 ,以缺口末端标记法 (TUNEL)检测凋亡细胞 ,以 SABC免疫组化法检测 fas蛋白的表达 .结果　缺血 /再灌注组出现显著的心肌细胞凋亡 ,伴有 fas蛋白表达指数升高 (P<0 .0 1vs假手术组 ) ;吡那地尔可抑制心肌细胞凋亡 ,并显著下调 fas蛋白的表达 (P<0 .0 5 ) ,而优降糖可取消吡那地尔的作用 .结论　细胞凋亡及 fas基因表达改变参与了心肌缺血 /再灌注损伤过程 ,KATP开放剂 (吡那地尔 )可抑制心肌细胞凋亡、下调 fas基因的蛋白表达 .