玉竹提取物B诱导人结肠癌CL-187细胞凋亡的实验研究

目的 研究中药玉竹提取物B(EB—PAOA)诱导人结肠癌CL—187细胞凋亡的作用。方法 将体外培养的人结肠癌CL—187细胞与不同浓度的EB—PAOA共育，通过倒置显微镜和透射电镜对活细胞及固定染色后的细胞进行了观察，确认有无凋亡细胞；通过流式细胞仪检测了CL—187细胞周期的变化和凋亡率。结果 在倒置显微镜和透射电镜下，可见到大量具有典型特征的凋亡细胞；流式细胞仪DNA直方图上出现了凋亡峰，凋亡率呈时间--剂量依赖性。细胞周期分析结果显示，G0／G1期细胞减少，S期细胞减少，G2／M期细胞增多。结论 EB-PAOA能够诱导人结肠癌CL—187细胞凋亡，这可能是EB—PAOA抗肿瘤的作用机制之一。     

玉竹提取物B对Hela细胞凋亡的影响

目的 观察中药玉竹提取物B(EB—PAOA)是否能引起人宫颈癌Hela细胞的凋亡。方法 将体外培养的人宫颈癌Hela细胞与不同浓度的EB—PAOA共育，通过倒置显微镜和透射电镜进行形态学观察，确认凋亡细胞；通过流式细胞仪检测凋亡率和细胞周期的分布。结果 经过EB—PAOA处理后，在倒置显微镜和透射电镜下可观察到EB—PAOA引起的典型的凋亡形态学变化；流式细胞仪测定显示经EB—PAOA处理后的Hela细胞凋亡率呈时间-剂量依赖性，G0／G1期细胞减少，S期细胞减少，G2／M期细胞增多。结论 EB—PAOA能够诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡，EB—PAOA抑制Hela细胞生长的机制之一是诱导该细胞凋亡。     

玉竹提取物C对子宫内膜异位症在位细胞增生的作用

目的对比研究玉竹提取物C（Extraction of poly—gonaturm Odoratum,EC—PAOA）对正常妇女子宫内膜细胞（Normal Endometrium,NE）和子宫内膜异位症患者在位内膜细胞（Eutopic Endometrium,EE）增生的作用。方法对NE细胞和EE细胞进行体外分离培养,细胞免疫组化鉴定细胞类型及纯度;加入10μg／ml、100μg／ml、1000μg／ml三种浓度的EC—PAOA连续培养24h、48h和72h,应用MTT比色法观察EC—PAOA对NE和EE子宫内膜细胞增生的作用。结果EC—PAOA对NE细胞无作用（P〉0．05）,EC—PAOA对EE细胞作用48h、72h浓度为100μg/ml 1000μg/ml均能抑制细胞增生。结论由此得出ECPAOA对EM患者的子宫内膜细胞增生有抑制作用。     

华蟾素抑制人结肠癌SW-480细胞增殖及诱导凋亡的研究

目的：观察华蟾素（Cinobufacini）抑制人结肠癌（SW-480）细胞系增殖及诱导凋亡的生物学效应。方法：以人结肠癌SW-480细胞为研究对象,采用MTT法观察细胞增殖抑制的影响;采用吖啶橙（AO）/溴乙锭（EB）荧光染色法观察细胞凋亡形态,并计算凋亡率。结果：在20~120μg/mL,华蟾素能明显的抑制SW-480细胞的增殖;AO/EB荧光染色法显示：随着药物浓度的增加细胞凋亡率逐渐增加。结论：华蟾素具有抑制人结肠癌（SW-480）细胞生长增殖,促进凋亡的作用。     

消炎痛抑制人结肠癌细胞增殖和诱导凋亡的研究

探讨消炎痛对人结肠癌细胞株的抗肿瘤效应，以阐明其抗肿瘤机理。方法：分别用消炎痛（终浓度１００～８００μｍ）或消炎痛＋５－氟脲嘧啶（５－Ｆｕ）处理体外培养的人结肠癌细胞株ＲＫＯ，采用ＤＮＡ凝胶电泳，ＭＴＴ法，流式细胞仪分析技术，检测消炎痛对细胞增殖和凋亡的影响。结果：消炎痛可显著抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡，并呈剂量———时间依赖性；消炎痛可协同５－Ｆｕ抗肿瘤细胞增殖效应。结论：消炎痛抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡是其抗结肠癌作用机制的重要方面之一。     

TNF-α反义寡核苷酸对马桑内酯刺激的星形胶质细胞的影响

为进一步探讨TNF-α在星形胶质细胞激活中的作用，用TNF－α反义寡核苷酸抑制由马桑内酯（coriaria lactone,CL)诱导的星形胶质细胞TNF－α的产生，观察NFκBq65核转位和IkBa降解的变化。在应用TNF－α反义寡核苷酸后，由CL刺激引起的TNFα生成在2、4、12、24h均显著减少，NFkBp65核转位在相同的4个时间点也均受到明显抑制，相应胞浆蛋白的IkBa降解也低于对照组。实验结果表明：由CL诱导产生的TNF－α在星形胶质细胞的激活过程中发挥重要作用。     

白细胞介素-18基因修饰的胎肝细胞经脾移植对小鼠免疫功能的影响

目的：观察表达mIL-18的重组腺病毒基因修饰的胎肝细胞（AdmIL-18/BNL.CL2)经脾移植对正常小鼠免疫功能的影响。方法：实验组小鼠经脾移植AdmIL-18/BNL.CL2，同时设LacZ病毒对照组（Ad-LacZ/BNL.CL2),BNL.CL2细胞对照组及空白对照组。2周后处死，留取血清，制备腹腔巨噬细胞、脾淋巴细胞、肝组织匀浆液，提取肝组织总RNA。采用ELISA法检测各组小鼠血清、腹腔Mφ和脾细胞培养上清、肝匀浆中细胞因子的含量；采用半定量RT－PCR法，检测肝组织细胞因子mRNA相对表达量；以LDH释放法测定腹腔Mφ杀伤活性和脾NK细胞活性，用MTT还原比色法测定脾淋巴细胞的增殖活性。结果：实验组小鼠血清、细胞培养上清及肝匀浆中，IL－18、IL－2、IFN－γ、TNF-α稔均高于其它对照组，而IL－4、IL－10水平则低于对照组；半定量RT－PCR结果与ELISA检测结果一致；同时，实验组腹腔Mφ的杀伤活性和脾NK细胞活性，及脾淋巴细胞增殖活性也明显高于对照组。结论：AdmIL-18能有效转染至胎肝细胞并稳定表达mIL-18;AdmIL-18基因修饰的胎肝细胞经脾移植后，可显著提高肝脏、脾脏免疫细胞活性，活化腹腔Mφ，促进Th1类细胞因子表达，抑制Th2类细胞因子的分泌。     

草分枝杆菌制剂对人结肠癌细胞周期动力学的调控

目的：探讨草分枝杆菌制剂对人结肠癌细胞周期动力学的影响。方法：以不同浓度的草分枝杆菌制剂（商品名乌体林斯，Utilin S）体外处理人结肠癌细胞株Lovo，48h后以流式细胞仪检测细胞周期动力学指标的变化。结果：4种不同浓度的药物均能调控Lovo细胞的细胞周期，使G0－G1期细胞数率非常显著地上升（P＜0．01），G2－M期细胞数率显著地上升（P＜0．05），同时使S期细胞数率非常显著地下降（P＜0．01）。结论：乌体林斯能直接抑制结肠癌细胞株Lovo增殖，并可能通过G2－M期细胞阻滞而促进Lovo癌细胞凋亡的发生。     

苦参素诱导人结肠癌LoVo细胞凋亡及其机制的研究

目的：观察苦参素对结肠癌LoVo细胞体外生长的影响。方法：用苦参素处理结肠癌Lovo细胞，采用MTT法检测药物对细胞的抑制作用，倒置显微镜和电镜观察细胞形态学改变以及应用流式细胞仪观察细胞凋亡过程中细胞周期的变化。结果：在苦参素作用下，结肠癌LoVo细胞呈凋亡改变。细胞凋亡的同时，细胞周期发生特定的改变。结论：苦参素能抑制结肠癌细胞增殖，能诱导结肠癌细胞凋亡。     

胃泌素及其受体拮抗剂对结肠癌HT29细胞生长的调节

目的：探讨胃泌素类似物五肽胃泌素（ＰＧ）及胃泌素受体拮抗剂丙谷胺（ＰＧＬ）对体外培养的人结肠癌细胞株ＨＴ２９生长的影响。方法：采用ＭＴＴ法检测细胞增殖情况用流式细胞术（ＦＣＭ）分析细胞周期变化。结果：高浓度的ＰＧ（１０－５～１０－７Ｍ）能明显促进ＨＴ２９细胞的增殖（Ｐ＜００５），低浓度的ＰＧ（１０－８～１０－１０Ｍ）对ＨＴ２９细胞无明显促增殖作用（Ｐ＞００５）。ＰＧＬ能抑制ＰＧ对ＨＴ２９细胞的刺激作用，并对ＨＴ２９细胞的增殖有直接抑制作用（Ｐ＜００５）。细胞周期分析显示ＰＧ能缩短细胞Ｇ３／Ｇ１期，ＰＧＬ则延长细胞Ｇ０／Ｇ１期（Ｐ＜００５）。结论：胃泌素对体外培养的ＨＴ２９细胞的生长具有调节作用，胃泌素受体拮抗剂可能在结肠癌的治疗中发挥重要作用。     

玉竹提取物B对Hela细胞的抑制作用

目的 观察玉竹提取物B(EB-PAOA)对人宫颈癌Hela细胞株的抑制作用。方法 体外培养宫颈癌Hela细胞，将其与不同浓度的EB-PAOA共育，观察细胞变化并绘制EB-PAOA对Hela细胞的生长曲线；用MTT比色分析法测定EB-PAOA对Hela细胞的抑制率。结果 EB-PAOA抑制了Hela细胞的增殖，旦呈时间-剂量依赖性。结论 EB-PAOA对体外培养的Hela细胞具有明显的抑制作用。     

Detection of antigens associated with lung carcinoma in sera by monoclonal antibodies WLA-2C4 and CL-3.

The levels of tumor-associated antigens (TAAS) corresponded to monoclonal antibodies WLA-2C4 and CL-3 in sera of 57 lung cancer patients, 100 healthy adults and 50 non-tumor disease patients were assayed with SABC-ELISA of immunobinding inhibition test. The threshold values of WLA-2C4 and CL-3 (RBI) were 12% and 36%, respectively. The positive results of lung carcinomas with at least one of the two TAAS were as follows: squamous cell carcinoma 89%; adenocarcinoma 83%; small cell carcinoma 67% and their mean positive rate was 79%. Whereas the positive rate in healthy adults and non-tumor disease patients was only 6%. These results indicate that using monoclonal antibodies WLA-2C4 and CL-3 simultaneously may be helpful to the serological diagnosis of lung carcinoma.

     

刺梨提取单体CL-1对胃癌细胞系增殖的抑制作用

目的观察刺梨提取物CL-1对抗胃癌细胞系SGC-7901和MKN-45体外增殖的抑制作用.方法采用MTT检测法和生长曲线的绘制,观察CL-1对胃癌SGC-7901和MKN-45细胞增殖的影响.结果MTT法检测显示,CL-1(10-8-10-4mol·L-1)对SGC-7901和MKN-45细胞生长的抑制作用均呈现剂量依赖性和时间依赖性.细胞生长曲线显示:随CL-1剂量的增加,SGC-7901和MKN-45细胞的生长曲线逐渐右移.结论CL-1具有体外抗肿瘤作用.     

Effect of miR-296 on the Apoptosis of Androgen-independent Prostate Cancer Cells

Objective To investigate the miR-296＇s function in prostate carcinoma（PCa） cells. Methods In order to profile the miRNA expression in LNCaP cells, the cultured cells were stimulated with androgen after 48-h starvation, miRNA microarray analysis and Q-RT-PCR assay were performed. To characterize the effects of miR296 on PCa cells, CL-1 and PC-3 cells were transfected with miR-296 and antisense-miR-296, cell growth and apoptosis were then analyzed. Results The miR-296-5p expression was up-regulated by 2.22 folds in the CL-1 cells, which do not express significantly androgen receptor, than in LNCaP cells. Knockdown of miR-296-5p induced apoptosis of CL-1 cells, but not LNCaP cells. However, knockdown of miR-296-5p inhibited the growth rate of LNCaP cells cultured in absence of androgen. Conclusion MiR-296-5p could be important for development of prostate cancer from androgen dependence to androgen independence.     

血管生成抑素endostatin的表达、纯化及活性研究

目的：将从人胎肝组织克隆的血管生成抑素endostatin基因进行原核表达、纯化,检测重组endostatin的生物学活性。方法：利用原核表达载体pBV220在大肠杆菌DH5α中表达endostatin,利用肝素Sepharose亲和层析及SephacrylS-200分子筛纯化;通过体外内皮细胞（ECV304）增殖实验及体内鸡胚尿囊膜（CAM）新生血管实验检测其抑制活性。结果：Endo-statin在DH5α中的表达率为28.5%,纯化后纯度可达90.5%.En dostatin可明显抑制体外培养的内皮细胞增殖.IC50为72ug/ml;20时使细胞于48h发生明显凋亡;200ug/ml的endostatin可使CAM新生血管化率下降30%.结论:研究结果表明endostatin对内皮细胞具有明显抑制作用.提示其在肿瘤及新生血管性疾病的治疗中有潜在的应用前景。     

Thr187磷酸化p27kip1与人乳腺癌MCF-7细胞化疗敏感性的关系

目的探讨人乳腺癌MCF-7细胞中第187位苏氨酸（Thr187）磷酸化的细胞周期素依赖性激酶抑制蛋白p27kip1（P-p27Thr187）与化疗药物敏感性的关系。方法人乳腺癌MCF-7细胞常规培养,采用MTT法测定其对5种常用化疗药物[表柔比星（EPI）、多西他赛（DOC）、5-氟尿嘧啶（5-Fu）、环磷酰胺（CTX）、顺铂（CDDP）]的敏感性;采用Westernblot检测经化疗药物作用后P-p27Thr187、p27kip1表达水平;采用免疫共沉淀方法检测P-p27Thr187与S期激酶相关蛋白2（Skp2）相互结合情况。结果5种常用化疗药物对人乳腺癌MCF-7细胞均有抑制作用,5-Fu的抑制率随浓度增加而增高,而其他4种化疗药物的抑制率开始随浓度增加而增高,但达到理论最高药物浓度（PPC）后降低（均P＜0.01）;在PPC下作用48h,抑制率从大到小的化疗药物依次为EPI、DOC、5-Fu、CTX、CDDP。Westernblot结果显示化疗药物作用48h后,P-p27Thr187表达水平明显增加,以EPI、DOC增加最为明显（均P＜0.01）;p27kip1表达水平明显降低（均P＜0.01）。免疫共沉淀结果显示,经EPI0.25滋g/ml、DOC6.80滋g/ml作用48h后,P-p27Thr187与Skp2结合明显增加。结论P-p27Thr187与人乳腺癌MCF-7细胞化疗敏感性有关,可作为预测化疗敏感性及选择药物的一项新指标。     

直流电联合温热杀伤肺癌培养细胞的实验研究

目的 :研究直流电合并温热对人肺鳞癌培养细胞的生长抑制效果。方法 :采用 L78人肺鳞癌细胞以一定浓度接种于 2 4孔培养板内 ,待细胞铺满后 ,用电化学治疗装置 ,通以直流电。同时利用水浴的方法加温 30 min,处理后继续培养 48h。采用噻唑蓝 (MTT)测定每孔的光密度值 ,计算L78人肺鳞癌培养细胞的生长抑制率 ,并观察形态学改变。结果 :直流电合并 41℃以上的加温组的癌细胞生长抑制率明显高于单纯加热和单纯直流电组 (P<0 .0 1 )。结论 :直流电与温热联合可明显杀伤 L78人肺鳞癌细胞。两者具有协同作用     

miR-187在肺癌组织中的表达及其效应

目的：探讨微小RNA（microRNA,miR）-187在肺癌组织中的表达及其效应。方法：以U6为内参,采用茎环实时荧光定量PCR（RT-qPCR）方法检测32例肺癌及其癌旁正常组织标本miR-187的表达量,并分析其表达与肺癌临床病理特征间的关系。采用miR-187模拟物（mimics）上调A549肺癌细胞内miR-187表达水平,通过噻唑蓝（MTT）法检测细胞活性,通过流式细胞术检测细胞周期。结果：与癌旁正常组织比较,miR-187在肺癌组织中表达显著下调（t=5.236,P＜0.001）。临床病理特征相关性分析结果显示,肿瘤组织miR-187的表达与肺癌病理分级及临床分期相关（P＜0.05）,与年龄、性别、吸烟史、肿块大小、病理类型及淋巴结转移情况未见明显相关性（P＞0.05）。采用miR-187 mimics上调A549肺癌细胞内miR-187表达后,细胞增殖明显受到抑制,G0/G1期细胞比例增高,G2/M期细胞比例明显降低。结论：miR-187在肺癌组织中的下调表达可能参与了肺癌的发生发展过程。