镉对小鼠免疫功能的影响

采用单只动物多项免疫功能检测法,观察了小鼠在免疫后,不同时间一次灌胃30mg/kg氯化镉(CdCl_2)及反复多次灌胃不同剂量的CdCl_2,对小鼠免疫器官重量,迟发型变态反应(DTH),抗体形成细胞(IgM-PFC)及抗体滴度的影响。结果表明:反复多次灌胃4.8 mg/kg CdCl_2对小鼠DTH有明显抑制作用,提示CdCl_2对动物免疫功能有一定影响。     

Ox-LDL和MDA-LDL单克隆抗体的研制与初步应用

从鼠及人血清中用连续密度梯度超迷离心法提取LDL,进行氧化修饰(Ox-LDL)及丙二醛修饰(MDA-LDL),作为抗原。用鼠源性抗原免疫BalB/c小鼠(1次/2周)。     

STAg和霍乱毒素不同程序滴鼻免疫小鼠诱导抗弓形虫作用

目的观察弓形虫可溶性速殖子抗原(soluble tachyzoite antigen,STAg)和霍乱毒素(cholera toxin,CT)佐剂不同程序滴鼻免疫小鼠诱导的抗弓形虫感染能力,确定STAg和CT滴鼻免疫的最佳程序。方法BALB/c小鼠随机分为3组:1次、2次和3次免疫组,用20 μg STAg 1 μg CT/只分别滴鼻免疫1次,2次或3次,前2次间隔2周,末次间隔1周。末次免疫后第14天,用4×104个速殖子/只灌胃攻击所有小鼠,观察小鼠健康及死亡情况,攻击后第30天处死,ELISA法检测血清IgG和粪便IgA,计数肝、脑组织内弓形虫速殖子,分离并计数派伊尔结(Peyer′spatches,PP)和脾淋巴细胞数。结果2次和3次免疫组小鼠存活率明显高于1次免疫组(P<0.05),肝、脑组织内虫荷显著低于1次免疫组(P<0.001),血清IgG和粪便IgA高于1次免疫组,PP和脾淋巴细胞数无显著性变化。结论STAg和CT佐剂滴鼻免疫2次或3次能有效诱导小鼠抗弓形虫感染。     

人免疫重建荷人肾癌SCID小鼠模型的建立及其鉴定

目的:建立具有人免疫学特性的肾癌SCID小鼠模型.方法:SCID小鼠腹腔注射人外周血淋巴细胞,皮下接种人肾癌细胞,观察小鼠的生物学及免疫学特性.结果:(1)免疫重建荷人肾癌组小鼠成瘤率为100%,较荷瘤组成瘤潜伏期显著延长、肿瘤体积明显缩小(P＜0.01);(2)第2、4、6周时小鼠外周血中人IgG分别为(394.86±16.70)μg/ml、(629.83±35.03)μg/ml、(994.96±70.11)μg/ml;(3)第6周小鼠外周血中人CD30 T淋巴细胞为(12.31±0.86)%;(4)免疫组化检测小鼠肿瘤和脾脏中存在人CD30 T淋巴细胞.结论:成功建立免疫重建荷人肾癌SCID小鼠模型,为肾癌治疗的研究提供了理想动物模型.     

日本血吸虫重组Bb疫苗不同途径免疫BALB/c小鼠不同时间诱导的免疫应答作用

目的: 探讨日本血吸虫重组两歧双歧杆菌(rBb)疫苗不同途径免疫BALB/c小鼠后不同时间诱导的免疫应答作用,阐明该疫苗的免疫应答机制。方法: 将88只BALB/c小鼠随机分为2组,每组44只,分别经皮下注射(皮下注射组,SC组)和鼻腔黏膜(鼻腔黏膜接种组,IN组)接种免疫小鼠,在免疫后0~20周每2周每组随机取4只小鼠,无菌取脾,制备悬浮脾细胞,采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测脾细胞增殖活性,流式细胞仪(FACsort)检测T细胞亚群和脾细胞凋亡率,双抗体夹心ELISA法检测脾细胞上清液中干扰素γ(IFN-γ)、白细胞介素10(IL-10)和白细胞介素17(IL-17)的动态变化。结果: 与免疫0周时比较,SC组小鼠脾细胞增殖活性于免疫后8周达到峰值(P<0.05),IN组小鼠于免疫后4周达到峰值(P<0.05)。与免疫0周时比较,SC组和IN组小鼠CD4⁺T细胞均于免疫后8周达到峰值(P<0.05);CD8⁺T细胞分别于8周和6周达到峰值,但差异无统计学意义(P>0.05)。与免疫0周时比较,2组小鼠脾细胞上清液中IFN-γ水平均于免疫后2周达到峰值(P<0.05),SC组和IN组IL-17水平分别于免疫后14和12周达到峰值(P<0.05)。与免疫0周时比较,SC组小鼠脾细胞凋亡率于免疫后2周达到峰值(P<0.05),IN组于4周达到峰值(P<0.05)。IN组与SC组小鼠各检测指标比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论: 经皮下注射和鼻腔黏膜途径接种的日本血吸虫重组Bb疫苗早期即可诱导小鼠产生有效的免疫应答,以Th1型免疫应答为主,2种免疫途径所诱导的免疫应答无明显差异。     

小鼠2种和人4种精子抗原免疫对小鼠妊娠的影响

目的:观察用小鼠和人不同的精子抗原免疫雌小鼠对妊娠影响.方法:用小鼠2种和人4种精子抗原免疫雌小鼠,采用酶标法检测血清抗精子抗体(AsAb),观察各组小鼠妊娠率及胎仔数.结果:随着主动免疫的进行,小鼠血清AsAb显著升高( P <0.01).精子抗原免疫小鼠8周后,小鼠精子混合抗原免疫小鼠效果最好,妊娠率为零,DTT提取的人精子膜抗原和人全精子抗原免疫小鼠效果较好,妊娠率为16.7%,显著低于正常对照组的63.6%( P <0.01或 P <0.05).结论:在人精子抗原中,DTT提取的人精子膜抗原和人全精子抗原免疫雌小鼠效果最好.在小鼠精子抗原中,DTT、NP-40、Triton-100提取的小鼠精子膜混合抗原免疫雌小鼠效果最好.     

抗人绒毛膜促性腺激素McAb的制备及其特征(简报)

人绒毛膜促性腺激素(hCG)与人促黄体素(hLH),促卵泡素(hFSH)及促甲状腺素(hTSH)的结构近似,因而很难制备出与后三种糖蛋白激素无交叉反应的McAb。我们采用不同的免疫方法以及用不同分子量PEG作为融合剂,将hCG免疫的BALB/C小鼠脾细胞与SP2/O小鼠骨髓瘤细胞融合。在3次成功的融合中(融合率高于95％),从360个培养孔筛选出抗体阳性孔65个。经连续2～3次克隆化及液氮冻存后的多次再克隆化和传代,获得了12个持续分泌抗hCG McAb的杂交瘤株,并制备了抗体含量高达20～60mg/ml的大量小鼠腹水。     

非洲爪蟾TGF-β5和小鼠TRP-2联合免疫诱导产生抗肿瘤免疫应答

目的研究非洲爪蟾转化生长因子-β5(aTGF-β5)基因免疫对肿瘤治疗性质粒DNA疫苗诱导抗肿瘤免疫应答的效能的影响,探讨所诱导免疫应答的抗肿瘤机制.方法用aTGF-β5真核表达质粒和小鼠酪氨酸酶相关蛋白2(mTRP-2)真核表达质粒联合免疫野生型C57BL/6小鼠、CD4缺陷的C57BL/6小鼠和CD8缺陷的C57BL/6小鼠,于免疫前或免疫后接种黑色素瘤细胞B16F10,观测肿瘤生长和小鼠存活情况.结果两种质粒联合免疫能在野生型C57BL/6小鼠体内诱导产生保护性和治疗性抗肿瘤免疫,而mTRP-2真核表达质粒单独免疫野生型C57BL/6小鼠及两种质粒联合免疫CD4或CD8缺陷的C57BL/6小鼠均不能诱导产生抗肿瘤免疫应答.结论 aTGF-β5基因免疫能增强编码mTRP-2的肿瘤治疗性质粒DNA疫苗诱导抗肿瘤免疫应答的能力;T细胞免疫应答的诱导是抗小鼠黑色素瘤免疫应答所必需的.     

不同剂量HepG2细胞诱导小鼠胸腺产生差异性免疫应答

目的:探讨小鼠胸腺对不同剂量HepG2细胞免疫效应的差异.方法:将不同剂量DiI标记的HepG2细胞(2×103个/μL、2×105个/μL、2×107个/μL)注射到小鼠胸腺内,检测不同时间检点(3 d,5 d,7 d,14 d,21 d,28 d)小鼠胸腺出现的免疫应答变化.结果:低剂量HepG2细胞在小鼠胸腺内没有形成肿瘤组织,7 d被清除;中、高剂量HepG2细胞在小鼠胸腺内均形成肿瘤组织,其周围出现不同程度T淋巴细胞聚集,并在不同时间点(中剂量14 d,高剂量21 d)被完全清除.结论:胸腺可对异种抗原产生免疫应答,其应答程度与抗原剂量有关.     

利用α-胞衬蛋白免疫诱导建立小鼠干燥综合征模型

目的 应用α-胞衬蛋白(α-Fodrin)免疫BALB/C小鼠,以期建立干燥综合征的实验动物模型.方法 应用α-胞衬蛋白100μg(50μl)配合等体积佐剂,于0、14、35、51 d进行尾根部皮下注射给药免疫4周龄的BALB/C小鼠,以颌下腺匀浆作为阳性对照,GST及PBS作为阴性对照.小鼠每周计饮水量,每2～3周取血,检测不同时间点小鼠血清中的α-胞衬蛋白抗体、M3受体蛋白多肽(M3RP)抗体、SSA抗体、SSB抗体、类风湿因子(RF)以及抗核抗体(ANA)等自身抗体,ELISA方法测定小鼠血清中的细胞因子白介素(IL)-2,IL-10和干扰素(IFN)-γ.检测小鼠颌下腺病理改变及α-胞衬蛋白的抗原表达情况.结果 (1)免疫前小鼠血清中的自身抗体均为阴性,而自初次免疫后35 d开始,经颌下腺匀浆及α-胞衬蛋白免疫的BALB/C小鼠出现α-胞衬蛋白抗体、M3RP抗体和ANA,而上述抗体在PBS和GST对照组为阴性.(2)自初次免疫后56 d开始,予颌下腺匀浆及α-胞衬蛋白免疫的BALB/C小鼠的腺体中出现少量淋巴细胞浸润,且随时间的延长,淋巴细胞浸润逐渐加重;而应用PBS和GST免疫的小鼠腺体无明显的病理改变.应用α-胞衬蛋白多抗免疫组化的方法检测颌下腺匀浆、α-胞衬蛋白免疫的BALB/C小鼠的颌下腺组织中有α-胞衬蛋白表达,而PBS和GST组为阴性.(3)IFN-γ在予α-胞衬蛋白、颌下腺匀浆、GST及PBS免疫后分别为(81.6±7.1)、(90.5±4.9)、(30.1±5.9)、(19.3±6.4)ps/ml;IL-2在上述各组免疫后分别为(18.7±2.3)、(19.8±0.9)、(4.9±1.1)、(3.5±1.6)pg/ml,与GST及PBS组相比,α-胞衬蛋白及颌下腺匀浆免疫可明显提高小鼠血清IFN-γ和IL-2水平(P<0.05).(4)α-胞衬蛋白免疫对各组小鼠饮水量无明显影响.结论 (1)建立了应用α-胞衬蛋白诱导的SS动物模型.(2)免疫后小鼠血清中出现的多种抗体可能与抗原扩展有关.(3)干燥综合征的发病可能与Thl参与有关.     

STAg和霍乱毒素滴鼻免疫小鼠诱导的鼻相关淋巴组织细胞免疫应答

目的研究可溶性速殖子抗原(solubletachyzoiteantigen,STAg)和霍乱毒素(choleratoxin,CT)佐剂滴鼻免疫BALB/c小鼠后鼻相关淋巴组织(nasal-associatedlymphoidtissue,NALT)的免疫效应及持续时间。方法BALB/c小鼠96只随机分为实验组和对照组,实验组以免疫原性好的STAg(20μg/只)为抗原,CT(1μg/只)为佐剂滴鼻免疫,对照组以PBS滴鼻。滴鼻2次(间隔2周)后分别于第1、2、3、4、6、8、10、12周处死6只小鼠。分离NALT的淋巴细胞,计数并涂片,用免疫细胞化学法(immunocytochemistry,ICC)检测其CD4 、CD8 T细胞亚群水平。结果小鼠免疫后,NALT淋巴细胞第1、2、6、8、12(P<0.05)周显著增生,可持续至免疫后第12周;CD4 T细胞第1周至第6周(P<0.05)持续显著增高,CD8 T细胞在第1周至第4周持续增高(P<0.01),CD4 /CD8 比值第2、3周显著降低(P<0.05)。结论STAg和CT佐剂滴鼻免疫BALB/c小鼠能够有效诱导NALT的免疫效应,并可持续较长时间。     

橙皮苷衍生物Y-12对免疫低下小鼠免疫功能的影响

目的研究橙皮苷衍生物Y-12( HY-12)对免疫低下小鼠的免疫功能的影响。方法以连续2d腹腔注射给药环磷酰胺(50 mg/kg),建立小鼠免疫低下模型,同时分别用IgG和IgM测量试验、巨噬细胞吞噬碳试验和迟发性超敏反应,观测HY-12不同浓度对免疫低下小鼠免疫系统的影响。结果巨噬细胞吞噬碳试验中,环磷酰胺诱免疫低下模型小鼠的廓清指数( K )和巨噬细胞的吞噬指数(α)能被HY-12(100、200、400 mg/kg)组增加;溶血素试验中,HY-12(200、400 mg/kg)组不仅能增多免疫低下模型小鼠血清中IgG和IgM,同时脾细胞溶血素也被增多;HY-12(200、400 mg/kg)组可明显有助于免疫低下模型小鼠DTH 反应;并能提高脾淋巴细胞IL-22含量;HY-12(100、200、400 mg/kg)能提高CD4+、CD8+细胞数以及 CD4+/CD8+比值。结论 HY-12能普遍增强模型小鼠的免疫系统反应,对免疫低下模型小鼠的免疫功能有很好的提高作用。     

抗人hER单克隆抗体的制备及其应用

目的:制备抗人hER单克隆抗体。方法:用原核表达的人雌激素受体(hER)重组蛋白为抗原,免疫BalB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤SP2/0细胞,进行细胞融合。结果:通过ELISA和免疫组织化学法筛选,有限稀释克隆化,得到一株分泌抗hER单克隆抗体的杂交瘤细胞株(2B8/1C5/2C3),经鉴定2B8/1C5/2C3分泌的单克隆抗体为IgG2a,利用Western Blot分析,显示在23kU处针对hER重组蛋白位置有一特异性条带;利用乳腺癌组织进行的免疫组织化学染色结果显示该株细胞产生的单克隆抗体与细胞核呈强阳性反应。结论:该单克隆抗体适于乳腺癌组织hER的免疫组化检测。     

弓形虫可溶性速殖子抗原和霍乱毒素滴鼻免疫小鼠诱导的鼻通道细胞免疫应答

目的研究弓形虫可溶性速殖子抗原(solubletachyzoiteantigen,STAg)和霍乱毒素(choleratoxin,CT)佐剂滴鼻免疫BALB/c小鼠后鼻通道(nasalcavity,NC)的免疫效应及持续时间。方法BALB/c小鼠96只随机分为实验组和对照组,实验组以STAg(20!g/只)为抗原,CT(1!g/只)为佐剂滴鼻免疫,对照组以PBS滴鼻。滴鼻2次(间隔2周)后分别于第1、2、3、4、6、8、10、12周处死6只小鼠。分离NC的淋巴细胞,计数并涂片,用免疫细胞化学法检测其CD4 T、CD8 T细胞亚群水平。结果小鼠免疫后,NC淋巴细胞第1周至第10周持续显著增生(P<0.05);NC中CD4 T细胞水平第1周至第8周持续显著增高(P<0.05),CD8 T细胞在第1、2、3周(P<0.05)显著增高,持续至免疫后第3周,CD4 /CD8 比值无明显变化。结论STAg和CT佐剂滴鼻免疫BALB/c小鼠可有效诱导NC的免疫应答,并可持续较长时间。     

不同气味对小鼠免疫功能的影响

目的　探讨气味对小鼠免疫功能的影响。方法　将小鼠分别置于不同气味的环境中 ,3周后测定小鼠各项免疫指标。结果　柚皮组小鼠的免疫器官指数、腹腔巨噬细胞吞噬指数、脾淋巴细胞增殖功能及白细胞介素 - 2 (IL - 2 )活性明显增加 ,与对照组比较有显著差异(P <0 .0 5 ) ;甲醛组小鼠的免疫器官指数、腹腔巨噬细胞吞噬指数、脾淋巴细胞增殖功能及IL- 2活性则明显降低 ,与对照组比较有显著差异 (P <0 .0 1) ;香料组与对照组比较无显著差异(P >0 .0 5 )。结论　不同气味对小鼠免疫功能影响不同 ,柚皮香味能增强小鼠免疫功能 ,甲醛气味抑制小鼠免疫功能 ,化学合成香料对小鼠免疫功能影响不明显     

环磷酰胺诱导小鼠免疫功能低下模型建立与评价

目的建立环磷酰胺致免疫低下模型,评价不同剂量环磷酰胺对正常小鼠免疫抑制的作用效果,探究环磷酰胺免疫抑制小鼠的适宜剂量。方法采取不同时间给予正常小鼠腹腔注射不同剂量(40,80,100mg·kg^-1·d^-1)的环磷酰胺,分别建立免疫低下模型,通过免疫脏器指数、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞、CCK-8法检测淋巴细胞增殖、ELISA法检测血清中IgM的表达水平探讨环磷酰胺对小鼠免疫功能的影响。结果腹腔注射环磷酰胺3个剂量组(40,80,100mg·kg^-1·d^-1)的正常小鼠均能不同程度表现免疫脏器指数下降、单核巨噬细胞吞噬能力降低、淋巴细胞增殖能力及小鼠血清溶血素表达水平低下现象。结论正常小鼠腹腔注射不同浓度的环磷酰胺(40,80,100mg·kg^-1·d^-1),可建立免疫抑制模型,并且连续3d腹腔注射剂量为80mg·kg^-1·d^-1的环磷酰胺可以显著降低小鼠免疫功能,其效果最明显,适用于建立免疫低下模型。     

中国汉坦病毒H8205株G1-G2-人源IL-2融合基因DNA免疫的实验研究

目的评价融合基因 pcDNA3.1/HisB- IL- 2- G1- G2的 DNA免疫效果. 方法肌注免疫小鼠,分次采血,用酶联免疫法( ELISA)直接免疫酶斑减少中和试验检测小鼠体液免疫;淋巴细胞增殖试验( MTT法)检测其细胞免疫应答.免疫后第六周感染病毒.间接免疫荧光试验( IFIA)观察免疫小鼠抗病毒感染能力. 结果 pcDNA3.1/HisB- IL- 2- G1- G2可诱导小鼠产生特异性抗汉坦病毒抗体和中和抗体,其效价均高于其他对照组,差异显著( P< 0.05). MTT实验表明, pcDNA3.1/HisB- IL- 2- G1- G2诱导小鼠脾细胞对病毒抗原的增殖指数明显高于其他对照组. IFIA结果显示免疫小鼠对病毒攻击有保护性. 结论 pcDNA3.1/HisB- IL- 2- G1- G2可诱导小鼠产生特异性体液和细胞免疫应答,为新一代汉坦病毒( HTV) DNA疫苗开发提供了实验依据.     

镉,铅,锰和铬对小鼠免疫功能的影响

采用外周血淋巴细胞酸性α-醋酸萘酯酶(ANAE)和血清溶血素测定法研究了镉、铅、锰和铬对小鼠体内免疫功能的影响。结果显示,小鼠连续自由饮用不同浓度的硫酸镉(0.02,0.09,0.45mmol/L),硝酸铅(0.15,0.77,3.86mmol/L),硫酸锰(0.06,0.28,1.42mmol/L)和重铬酸钾(0.01,0.04,0.23mmol/L)溶液7d后,T淋巴细胞ANAE阳性率比对照组明显降低,而血清溶血素水平无明显影响;但连续饮用15d后,血清溶血素水平比对照组降低。表明镉、铅、锰和铬对小鼠细胞和体液免疫功能均具有不同程度的免疫毒性作用,对细胞免疫功能的抑制早于对体液免疫功能的抑制。     

T细胞免疫防治BXSB小鼠系统性红斑狼疮的实验研究

目的 :探索用自身反应性 T细胞免疫防治 BXSB雄性小鼠发生类似人系统性红斑狼疮 (SL E)的可行性。方法 :用活化的 BXSB小鼠自身反应性 T细胞克隆 (ATL 1)从小鼠尾静脉注射进行免疫 (1× 10 6 /只 ,共 3次 ) ,然后从不同角度监测病情发展情况。 结果 :在免疫后的第 1、2、4周 ,T细胞免疫组小鼠血清中抗 ds DNA抗体水平明显低于对照组 (P<0 .0 1) ,在免疫后第 4、8、12、16周 ,T细胞免疫组小鼠的死亡率明显低于对照组 (P<0 .0 5 ) ,但是两组尿蛋白的浓度在各时间段均未见显著差异。结论 :T细胞免疫能在一定程度上延缓 BXSB小鼠 SL E的进程 ,延长小鼠的生存时间。其机制可能与 T细胞免疫诱导了针对自身反应性 T细胞的调节性免疫应答有关。     

融合基因GM-CSF/IL-2转基因瘤苗在肝癌特异性免疫治疗中的应用

目的 制备人白细胞介素2(hIL-2)与鼠粒-单核细胞集落刺激因子(mGM-CSF)融合基因修饰的H22肝癌全细胞瘤苗,探索融合基因GM.CSF/IL-2转基因瘤苗,在肝癌主动免疫治疗中特异性抗肿瘤作用.方法 用含hlL-2与mGM-CSF融合基因的真核表达载体在体外转染H22肝癌细胞,制成疫苗,皮下接种Balb/c小鼠,同时建立Balb/c小鼠荷瘤模型,ELISA法检测H22/pcDNA3.1( ).GM-CSF/IL-2瘤苗免疫组小鼠与各对照组小鼠(分别接种H22/pcDNA3.1( )瘤苗、H22瘤苗、PBS)血清中IL-10、IFN- γ水平,观察小鼠存活期;同时用51Cγ释放法测定H22/pcDNA3.1( )-GM-CSF/IL-2瘤苗免疫组小鼠与各对照组小鼠(单纯荷瘤组、正常组)脾细胞对亲本H22肝癌细胞的杀伤活性.结果 成功制备了含有hIL2与mGM-CSF融合基因的H22肝癌瘤苗,转基因瘤苗免疫组小鼠的脾细胞在体外对亲本H22肝癌细胞的杀伤率为38.3%,显著高于对照组小鼠的脾细胞对亲本H22肝癌细胞的杀伤率(分别为13.6%和7.5%),也高于其对S180细胞的杀伤率(9.1%)(P＜0.05).转基因瘤苗免疫组小鼠血清IFN-γ较对照组明显升高(P＜0.01),血清IL-10较对照组明显降低(P＜0.01).同时,转基因瘤苗免疫组小鼠生存期亦有明显延长.结论 转染hIL-2与mGM-CSF融合基因的同系肿瘤细胞瘤苗可激发特异性细胞介导的免疫反应,改善抗肿瘤免疫反应,延长荷瘤小鼠生存期.