MTT方法体外应用新进展

化学治疗在恶性肿瘤的综合治疗中占有重要的地位，但是大部分恶性肿瘤患者最终都会由于对化疗药物产生耐药性而导致化疗的失败。随着化疗药物的种类和数量日益增多，肿瘤化疗的耐药和个体化用药问题备受关注。肿瘤药敏试验对肿瘤病人的合理用药、个体化治疗以及提高患者的疗效有重要意义，近年来受到国内外研究者的广泛关注。寻找有效的肿瘤药敏试验方法成为近来研究的热点之一，在一些发达国家药敏试验已经进入多中心临床试验阶段。在众多的药敏试验方法巾，四氮唑盐法（MTT Cell Proliferation Assay，MTT比色法）具有简便、快速、灵敏、重复性高、无放射污染、有较好的临床符合性等优点，成为目前最常用的体外肿瘤药敏试验方法。本文就MTT体外应用研究现状及其进展作一综述。     

ATP生物荧光肿瘤体外药物敏感性检测在口腔癌化疗中的应用

目的探讨肿瘤体外药敏实验ATP生物荧光法(ATP-TCA)在口腔癌化疗中的应用。方法应用ATP生物荧光肿瘤体外药物敏感性检测法,检测48例口腔癌组织对6种常用化疗方案的敏感性。结果组织标本的可评估率为92.0%。口腔癌对TAT DDP最敏感,体外有效率为83.3%,其次为5-Fu DDP(75.0%),BLM(54.2%),DDP(60.4%),MTX(45.8%),5-Fu(62.5%)。化疗药物对口腔癌的杀伤作用具有较强的个体差异性。结论TP生物荧光肿瘤体外药物敏感性检测法敏感性高、稳定性好、简便、快速、检测结果可靠,可用于临床制定个体化的化疗方案。     

MTT比色分析法实验条件的选择及在肿瘤药物敏感性预测中的应用

目的研究一种快速、简便、准确、稳定的化疗药敏检测方法。方法通过对现有MTT化学比色法的药物浓度,药物与瘤细胞的接触时间以及孵育和观测的方式进行精细地选择和比较。结果：①敏感的药物即使在1／100ppc时亦有较高的抑瘤率;不敏感的药物即使在10ppc时也只有较低的抑瘤率。②在药物接触4～12d小时期间,抑瘤率上升比较明显,12～48小时期间,抑瘤率变化比较平缓。③普通保温恒温箱与CO2孵箱孵育后的检测结果十分接近（P＞0．05）。④活细胞上所形成的蓝紫色放射状结晶（formazan）可用倒镜及光镜进行观测。⑤敏感药物与非敏感药物的显色结果区别明显,可用肉眼进行观测。结论本法简便、快速、经济、准确、稳定,不需昂贵仪器设备,即可定量测定,也可半定量观测,便于在中小医院推广使用。     

抗VEGF发夹状核酶基因对人鼻咽癌细胞株VEGF表达及细胞增殖的影响

目的 探讨抗血管内皮生长因子发夹状核酶基因对人鼻咽低分化鳞癌细胞株CNE—2的VEGF表达及其细胞增殖的影响。方法 采用脂质体介导法将抗VEGF发夹状核酶基因真核表达载体转染CNE-2细胞；RNA斑点杂交检测核酶基因在CNE-2细胞中的表达；免疫组化、间接免疫荧光染色及流式细胞仪结合免疫荧光检测转染前后CNE-2细胞中VEGF表达；MTT法、细胞贴壁克隆形成实验、软琼脂克隆形成实验及流式细胞仪进行细胞周期分析，观察其对CNE-2细胞增殖的影响。结果 转染后的CNE—2细胞VEGF表达明显降低；细胞生长减慢，细胞贴壁克隆形成及软琼脂克隆形成率明显降低；Go／G1期细胞显著增多，S期细胞显著减少（P〈0．01）。结论 抗VEGF发央状核酶基因可显著抑制CNE-2细胞的VEGF表达和ENE-2细胞增殖。     

MTT快速比色法在肺癌化疗药物敏感性试验的研究

本文采用改进的简便、快速、半自动的MTT比色分析法测试了31份临床肺癌标本对7种常用肿瘤化疗药物的体外敏感性。结果肺癌细胞对丝裂霉素C、鬼臼乙叉甙、表阿霉素和顺铂较敏感,对长春新碱和甲氨喋呤反应较差。不同病理类型的肺癌和同一类型的不同个体对化疗药物的敏感性差异较大。9份肺癌标本同时进行了干细胞软琼脂集落培养药敏试验。相关分析表明,MTT比色法与干细胞软琼脂集落培养试验所得的药敏结果具有较好的相关性。     

DNA甲基转移酶抑制剂5-杂氮-2’-脱氧胞苷对人鼻咽癌细胞株CNE2的影响

目的探讨DNA甲基转移酶抑制剂5-aza-2dC对人低分化鼻咽鳞癌细胞株CNE2的影响。方法应用10-7、10-6、10-5、10-4mol/L浓度的5-aza-2dC,处理人低分化鼻咽鳞癌细胞株CNE2 12、24、36、48、72 h后,应用MTT法测定CNE2细胞株的生存情况,应用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。用甲基化特异性PCR检测药物处理前后死亡相关蛋白激酶(DAPK)启动子甲基化状态。结果同一作用时间不同药物浓度组间,细胞存活率差异有统计学意义(P<0.05),且作用72 h对人低分化鼻咽鳞癌细胞株CNE2生长抑制作用最强。流式细胞仪检测结果显示:10-4mol/L 5-aza-2dC诱导细胞凋亡最明显(P<0.01)。甲基化特异性PCR显示鼻咽癌细胞株中,5-aza-2dC可成功逆转DAPK基因启动子高甲基化状态。结论 5-aza-2dC对人低分化鼻咽鳞癌细胞株CNE2生长有抑制作用,且呈浓度和时间依赖性。     

肿瘤患者外周血有核细胞对化疗药物的敏感性

目的研究恶性肿瘤患者外周血细胞对化疗药物的敏感性,为临床筛选化疗方案、实行肿瘤个体化疗提供依据。方法应用MTT法体外测定160例癌患者外周血（淋巴细胞及粒细胞）标本对临床常用化疗药物的敏感性。结果①5种癌患者外周血淋巴细胞和粒细胞对同一化疗药物敏感率呈正相关性,且均有统计学意义（P〈0.05）。②胃癌、非小细胞肺癌（NSCLC）和卵巢癌患者的外周血淋巴细胞及粒细胞对试验化疗药物敏感性差异有统计学意义（P〈0.05）,而肝癌、淋巴瘤（NHL）检测结果差异未有统计学意义（P〉0.05）。③HCPT在非小细胞肺癌和TAX、Vm-26在卵巢癌患者的外周血药敏试验中,粒细胞较淋巴细胞对化疗药物抑制率高,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论肿瘤患者外周血细胞体外药敏试验对临床肿瘤化疗用药有一定预见性,有助于临床医师筛选有效化疗药物,制定合理化疗方案,为个体化疗用药提供了重要的参考依据。     

肿瘤患者外周血有核细胞对化疗药物的敏感性

目的 研究恶性肿瘤患者外周血细胞对化疗药物的敏感性,为临床筛选化疗方案、实行肿瘤个体化疗提供依据.方法 应用MTT法体外测定160例癌患者外周血(淋巴细胞及粒细胞)标本对临床常用化疗药物的敏感性.结果 ①5种癌患者外周血淋巴细胞和粒细胞对同一化疗药物敏感率呈正相关性,且均有统计学意义(P＜0.05).②胃癌、非小细胞肺癌(NSCLC)和卵巢癌患者的外周血淋巴细胞及粒细胞对试验化疗药物敏感性差异有统计学意义(P＜0.05),而肝癌、淋巴瘤(NHL)检测结果差异未有统计学意义(P＞0.05).③HCPT在非小细胞肺癌和TAX、Vm-26在卵巢癌患者的外周血药敏试验中,粒细胞较淋巴细胞对化疗药物抑制率高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 肿瘤患者外周血细胞体外药敏试验对临床肿瘤化疗用药有一定预见性,有助于临床医师筛选有效化疗药物,制定合理化疗方案,为个体化疗用药提供了重要的参考依据.     

CPT-11在鼻咽癌裸鼠组织中时辰给药疗效观察及细胞周期分布变化的初步研究

目的:观察CPT-11(艾力)时辰给药对鼻咽癌裸鼠的疗效、毒副反应以及细胞周期分布的变化,为CPT-11时辰化疗提供实验基础和临床应用参考.方法:统一光照条件下(光照时间7:00～19:00),黑暗时间(19:00～7:00)饲养3周、50只鼻咽癌移植瘤裸鼠模型分为给药组和对照组.给药组荷瘤小鼠在3、9、15、21HALO(Hours After Light Onset设光后小时)腹腔注射CPT-11 66mg/kg;15天后处死所有小鼠,检测各组小鼠的WBC、HB、PLT,然后剥离肿瘤计算各组抑瘤率,制成单个细胞悬液,固定,染色后流式细胞仪测DNA细胞周期含量;并取盲肠组织光镜下观察肠粘膜组织结构.结果:CPT-11对鼻咽癌移植瘤裸鼠有显著性疗效(P<0.01),其中15HALO,抑瘤率最大(P<0.05);而21HALO抑瘤率最小(P<0.05).15HALO给药组WBC、HB、PLT数均高于其他各组(P<0.05),体重增加明显(P<0.05),光镜下粘膜损伤分级显著降低(P<0.05),21HALO给药组血象、体重增加最少,粘膜损伤分级较高(P<0.05).9HALO要优于3HALO(P<0.05).21HALO,3HALO细胞主要分布在G:期(54.1100±17.3374053.0300±20.79316).其中15HALO与21HALO差异最明显(P<0.01).结论:CPT-11对鼻咽癌移植瘤裸鼠有明显的抑制作用且疗效及毒副作用呈现时辰节律变化(15HALO最优,21HALO最差),为CPT-11时辰化疗的临床应用提供了参考.     

MTT比色分析法实验条件的选择及在肿瘤药物敏感性预测中的应用

目的：研究一种快速、简便、准确、稳定的化疗药敏检测方法。方法：通过对现有MTT化学比色法的药物浓度,药物与瘤细胞的接触时间以及孵育和观测的方式进行精细地选择和比较。结果：①敏感的药物即使在1／00ppc时亦有较高的抑瘤率;不能敏感的药物即在10ppc时也只有较低的抑瘤率。②在药物接触4－12小时期间,抑瘤率上升比较明显,12－48小时期间,抑瘤率变化比较平缓。③普通保湿恒温箱与CO2孵育后的检测结果十分接近（P＞0．05）④活细胞上所形成的蓝紫色放射状结晶（formazan)可用倒镜及光镜进行观测。⑤敏感药物与非敏感药物的显色结果区别明显,可用肉眼进行观测。结论：本法简便、快速、经济、准确、稳定、不需昂贵仪器设备,即可定量测定,也可半定量,于在中小医院推广使用。     

ATP生物荧光法在中晚期胃癌化疗药物筛选中的应用

[目的]探讨三磷酸腺苷生物荧光肿瘤抗癌药物敏感性分析（ATP-TCA）在胃癌患者化疗方案中的指导价值。[方法]应用ATP-TCA法,体外检测53例胃癌细胞对7种（组）常用抗癌药物的敏感性。[结果]ATP-TCA法对胃癌标本的可评估率为96.23%。胃癌细胞对5-Fu联合铂类药物方案（5-Fu＋DDP、5-Fu＋CBP、5-Fu＋LOHP）与5-Fu、DDP、CBP、LOHP等单药相比敏感度有显著性差异（χ2=11.47,P〈0.01）。应用ATP-TCA结果指导胃癌临床化疗的有效率为66.67%,总预测准确率为74.51%,敏感度为72.34%,特异性为100.00%。[结论]ATP-TCA法是一种有效的肿瘤化疗药物药敏性分析实验,对指导胃癌患者个体化化疗有着重要作用。