壳聚糖及其衍生物在固定化酶中的应用进展

综述了壳聚糖及其衍生物在固定化酶中的应用进展，重点介绍了以各种形态的壳聚糖及其衍生物作栽体通过多种固定化方法制备固定化酶的研究及应用；指出了壳聚糖及其衍生物作为固定化酶的载体具有固定化方法多样、简单易行、生物相容性好、来源丰富等优点。     

三角酵母D-氨基酸氧化酶的固定化研究

通过共价结合的方法把三角酵母D—氨基酸氧化酶(DAO)分别固定在三种大孔高聚物和二种多糖的载体上，结果表明多糖类载体壳聚糖和Sepharose 4B比高聚物更能有效地固定化DA0。经过固定化后，壳聚糖和环氧载体Epecust固定化酶对温度和pH的稳定性提高，表现米氏常数增大。在分批式头孢菌素C氧化脱氨的反应中，固定化酶表现出良好的操作稳定性，戊二酸单酰基—7—氨基头孢霉烷酸的得率为93％。     

固定化酵母细胞的增殖和应用

本文综述了几种常见方法固定化的酵母细胞在固定化颗粒内部的增殖和代谢的变化情况,讨论了酵母细胞固定化在应用过程中的意义及不利因素.     

固定化酵母不对称水解布洛芬乙酯制备S（＋）—布洛芬

用多种固定化载体对含有不对称水解布洛芬酯的脂肪酶的丝孢酵母进行了固定化，海藻酸钙，卡拉胶，聚丙烯酰胺凝胶和ＰＶＡ固定化酵母后，酶活力回收分别为６％，１６％，１８％和７％用自制的高脱乙酰度，高分子量的壳聚糖，通过成囊装置地母细胞，并用戊二醛交联，制得直径１．０ｍｍ左右的固定化酵母细胞壳聚糖多孔微球，酶活力回收达８０％以上，操作半衰期７５天以上，而且每次反应所产生的布洛芬的比旋光度均为（α）＾２０ｂ＝     

单宁酶的固定化及性质研究

比较几种固定化载体，确定以壳聚糖为载体，用戊二醛作交联剂制得固定化单宁酶。壳聚糖用量0．1g，用3％戊二醛5ml交联4h，然后加入酶58．4u，于4℃反应4h，固定化酶活回收率可达73％。单宁酶经固定化后，热稳定性、pH稳定性及最适温度均有所提高，最适pH降低。     

壳聚糖珠固定化乳糖酶的条件及特性研究

目的研究乳糖酶的固定化。方法以壳聚糖珠(2.0 g)为载体,0.02%戊二醛为交联剂,考察固定化乳糖酶的条件及其特性。结果固定化条件:室温状态下,在pH 6.0、酶量0.2 mg/mL的酶液中固定12 h,固定化乳糖酶活力回收率为31.5%。乳糖酶、固定化乳糖酶的最适pH值分别为5.0~5.5,5.5~6.5;最适温度分别为40℃,50℃。结论固定化乳糖酶最适温度和pH值比溶乳糖高。     

化学改性与修饰壳聚糖固定化酶制备高比活抑肽酶新工艺

研究一步层析制备高比活抑肽酶新工艺。方法：将化学改性与修饰壳聚糖体,共价偶联配基牛胰蛋白酶,制成固定化酶为抑肽酶亲和吸附剂,直接对黄牛肺提取液一步层析纯化,再超滤脱盐、浓缩、去热原,冻干即抑肽酶。结果：抑肽酶比活５７００ｋｉｕ／ｍｇ,收率２２×１０~4ｋｉｕ／ｋｇ（牛肺）;固定化酶单位活力２５９５０ｋｉｕ／ｇ（干）,酶活性回收率５５％,非特异性吸附较小,机械强度高,可反复使用。结论：工艺过程简便,样品比活较高,质量稳定,成本低,适合工业化大生产。     

腺嘌呤用固定化酵母生产三磷腺苷的初步研究

采用固定化酵母由腺嘌呤产生三磷腺苷(ATP)。在含腺嘌呤2．2g／L、葡萄糖60g／L、氯化镁6．4g／L的pH7．0、200mmol／L磷酸缓冲液中，加入固定化酵母1000g／L(反应液体积)，33℃、转化反应2h可生成2．32g／L的ATP，比游离酵母转化反应时间缩短一半，ATP生成率提高68％左右。     

壳聚糖固定化胰蛋白酶亲和层析抑肽酶的条件及影响因素

利用壳聚糖固定化胰蛋白酶作为亲和吸附剂从牛肺中直接分离纯化抑防酶。该方法在适当的温度（35℃）、pH值（pH1．5）、离子强度（1．0mol／LKCI）以及吸附条件（176FIP／g）下，纯化的抑肽酶活性回收率达83％，比活可达5000kIU／mg以上。     

凝血酶的固定化及其稳定性研究

目的研制稳定性较高的固定化凝血酶。方法以壳聚糖 (0 .6g)为载体 ,0 .1%戊二醛 0 .3ml为交联剂 ,考察 0 .15g(10 0 0u)凝血酶的固定化条件及固定化凝血酶的稳定性。结果所制固定化凝血酶回收率达 87%以上 ,稳定性明显提高 ,制备工艺可行。结论固定化条件正确合理 ,固定化凝血酶在光照、高温、低温和室温留样观察条件下显示较好的稳定性。     

酵母RNA的药效学研究

目的：探讨酵母RNA的肝脏保护、免疫调节以及延缓衰老的作用。方法：①小鼠四氯化碳腹腔注射，建立急性肝损伤模型。行ALT、AST检测及肝组织学检查；②用5-氟尿嘧啶建立免疫抑制模型，行巨噬细胞吞噬率、血清TNF-α、IL-2检测，计算脾脏指数、胸腺指数；③30只22月龄Wister大鼠随机分为正常组、酵母RNA组和VitE组，检测脑匀浆的SOD、MDA。结果：酵母RNA组小鼠血清ALT、AST明显低于模型组（P〈0．01-P〈0．05），肝组织中炎症细胞浸润、肝细胞坏死和变性损害也显著轻于模型组；与5-氟尿嘧啶组相比，酵母RNA可显著提高巨噬细胞吞噬率、脾脏指数、胸腺指数（P〈0．01）、血清TNF—α和IL．2（P〈0．05）；和正常组相比，酵母RNA可显著提高老年大鼠脑匀浆的SOD，降低MDA（P〈0．01）。结论：酵母RNA对急性肝损伤有一定保护作用，对免疫低下小鼠有免疫增强作用，对老年大鼠有延缓衰老的作用。     

酵母多糖脂质体的免疫增强作用

本文比较了酵母多糖脂质体、酵母多糖及脂质体对小鼠免疫功能的影响。结果表明,前两者对小鼠免疫功能均有促进作用,但经脂质体包封后的酵母多糖(多糖脂质体)表现出更强的促进能力,其差异有显著性(P＜0.01)。单纯脂质体的免疫增强作用不明显。     

多柔比星壳聚糖微球的制备及其特性研究

目的 以壳聚糖为载体材料,多柔比星为模型药物, 制备脑内局部给药缓释微球。方法 以液体石蜡为油相,L-抗坏血酸棕榈酸酯为交联剂,司盘-80为乳化剂,采用乳化化学交联技术制备多柔比星脑用微球。用动态透析法检测微球的体外释放特性。结果 多柔比星/壳聚糖的质量比为1：9的载药微球形态良好,粒径分布较为均匀,平均粒径为（9.41±2.43） μm,载药量为（8.49±0.37）%,包封率为（70.56±4.23）%。体外释放具有良好的缓释效果。结论 所优化的制备工艺稳定,适用于多柔比星壳聚糖脑用微球的制备.     

酵母菌中海藻糖的几种提取方法的比较

报道了从酵母菌中提取海藻糖的几种方法;三氯乙酸提取法、冷乙醇提取法、热乙醇提取法和热蒸馏水提取法,产率分别为１３．３８％、９．６８％、９．７５％和９．５５％。结果表明,热蒸馏水提取法适于工业化生产。     

改良甜菊苷不良味质生物酶的固定化研究

目的优选环糊精葡糖基转移酶的最佳固定化工艺,并对固定化酶的性质进行考察。方法以生物酶活力为指标,对影响生物酶活性的海藻酸钠、明胶、固定化酶液量、固定化时间、氯化钙及戊二醛进行了考查,并对固定化前后酶液的性质进行了比较。结果海藻酸钠浓度5%,明胶浓度4%,固定化酶液量占海藻酸钠、明胶总量的1%,固定化时间1h,氯化钙浓度5%,戊二醛浓度0.5%时固定化酶活力最强,固定化酶的适宜作用温度范围、pH值范围均比游离酶宽,固定化酶的热稳定性高于游离酶,重复使用时批次操作也显示出较好的稳定性。结论该方法简单、准确、可行,具有实用价值。     

磺化羟乙基壳聚糖的研制

研究了磺化羟乙基壳聚糖的制备方法。以片状壳聚糖为原料，先制成羟乙基壳聚糖；再以氯磷酸一甲酸胺为磺化试剂，在适当条件下进行磺化，成功地获得了水溶性良好的磺化羟乙基壳聚糖。硫含量为9．88％。红外光谱分析表明，该衍生物具有类肝素结构，是一种非常有潜力的新型类肝素物质，可望进一步研制成新型类肝素药物。     

酵母单一亚单位NADH-泛醌氧化还原酶定点突变对酶活性及泛醌结合部位的影响

目的采用定点突变方法探讨突变体对酵母Ndil的NADH一泛醌氧化还原酶活性及泛醌结合部位的影响。方法定点突变方法将Ndil的His残基（His^193His^252、His^301）突变为丙氨酸,转染大肠杆菌后表述蛋白,测定光谱特性,NADH-泛醌氧化还原酶活性和米氏常数Km及最大反应速度Vmax。结果各突变体蛋白H193A、H252A、H301A吸收光谱显示均在383nm和448nm处出现两个FAD峰与野生型一甄各突变体酶活性显示,突变体对UQ。的Vmax均明显减小,但仅H301A对UQ1的Km增加约3倍,对UQ亲和力明显减小。各突变体蛋白对NADH的Km未见明显增大,但Vmax均出现明显减小。结论酵母NdiI中H301点突变可能是参与形成UQ结合位点所需的氨基酸残基之一,该位点突变影响了UQ与酶的结合及电子向UQ的传递。     

星点设计-效应面法优化壳聚糖微球对凝血酶的固定化作用研究

目的 考察壳聚糖微球对凝血酶的固定化作用。方法 本研究以壳聚糖微球为载体,以戊二醛为交联剂将凝血酶固定于空白微球上,以固定化凝血酶的活性回收率为指标,采用星点设计-效应面法优化固定凝血酶的条件。结果 试验结果表明,壳聚糖微球固定凝血酶的最优条件是：凝血酶浓度69.32 U·mL^-1、戊二醛浓度0.18%、固定化时间1.88 h、固定化pH 7.08,凝血酶的活性回收率为81.55 %。结论 壳聚糖微球对凝血酶的固定化效果良好。     

胞红蛋白酵母表达载体构建与表达纯化

胞红蛋白是脊椎动物珠蛋白超家族的一员,具有重要的生物学功能,已在大肠杆菌中成功表达。酵母表达系统作为常用的真核表达系统,具有外源蛋白表达蛋白量大且活性高等优点。该研究通过PCR扩增技术获得胞红蛋白编码基因并通过DNA重组技术构建并鉴定了胞红蛋白毕赤酵母分泌型表达载体CYGB-pGAPZαA。将重组载体经单酶切线性化后通过电转化法转入毕赤酵母GS115,利用梯度浓度的Zeocin抗生素和PCR技术筛选得到阳性转化子。工程菌经发酵培养后,发酵上清液经镍柱分离得到较高纯度的目的蛋白,并经电泳等方法验证鉴定。