MT1-MMP对人肝癌细胞株HepG2生物学行为的影响

目的 观察膜型基质金属蛋白酶-1(MT1-MMP)对人肝癌细胞株HepG2生物学行为的影响.方法 将稳定表达MT1-MMP基因转染至HepG2细胞中,应用RT-PCR、Ⅰ型胶原黏附和Matrigel侵袭小室实验,检测细胞MT1-MMP mRNA水平,体外黏附、侵袭和迁移能力的变化.结果 重组质粒转染株MT1-MMP mRNA表达水平明显高于空质粒组和对照组(P<0.01).MT1-MMP明显提高细胞Ⅰ型胶原黏附、迁移和Matrigel侵袭能力(P<0.01).结论 MT1-MMP过表达可促进HepG2细胞体外侵袭和转移,提示其可作为人肝癌抗侵袭治疗的分子靶点.     

TIMP-2、MMP-2和MT1-MMP在活化肝星状细胞中的表达及对细胞外基质合成分泌的影响

目的 研究金属蛋白酶组织抑制剂-2(TIMP-2)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和膜型基质金属蛋白酶-1(MT1-MMP)在活化肝星状细胞(HSCs)中的表达,观察其对细胞外基质(ECM)合成分泌的影响.方法 原代分离培养大鼠HSCs活化后,分别给予40～160 pmol化学合成经修饰抗TIMP-2 siRNA进行干预,检测培养细胞上清液透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)和羟脯氨酸(Hyp)的含量,采用荧光实时定量PCR法检测TIMP-2、MMP-2、MT1-MMP、MMP-13、COL Ⅰ和COL Ⅲ mRNA的表达,western印迹检测TIMP-2、MT1-MMP和MMP-13蛋白表达及明胶酶谱法检测MMP-2蛋白表达.结果 应用化学合成经修饰抗TIMP-2 siRNA后,TIMP-2、MMP-2、MT1-MMP、COL Ⅰ和COL Ⅲ的表达明显降低,而MMP-13的表达则明显增加,培养细胞上清液中HA、PCⅢ和Hyp的含量也明显减少.结论 TIMP-2通过MT1-MMP介导MMP-2的活化,抑制TIMP-2的表达,MT1-MMP和MMP-2的表达随之降低,而HSCs合成分泌ECM也相应减少.     

EMMPRIN和MT1-MMP在肝细胞肝癌中的表达及临床意义

目的 研究基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN)和模型金属蛋白酶1(MT1-MMP)在肝细胞肝癌中的表达及其与肝癌临床病理生物学行为之间的关系.方法 采用免疫组化方法检测40例肝癌手术切除标本的EMMPRIN及MT1-MMP的表达情况.结果 ①MT1-MMP和EMMPRIN在肝癌组织中阳性表达率分别为62.5%和52.5%,明显高于在正常肝组织中的阳性表达率(P均<0.01);②EMMPRIN与肿瘤的转移、肝癌组织分化程度、肿瘤的大小有关;③MT1-MMP与肿瘤的转移、肿瘤的大小有关,与分化程度无关;④MT1-MMP蛋白与EMMPRIN蛋白在肝癌中的表达呈正相关(r=0.608, P<0.05).结论 MT1-MMP和EMMPRIN的表达均与肝癌的浸润转移有关,MT1-MMP和EMMPRIN的检测对于评估肝癌的预后有一定意义.     

EMMPRIN、MT1-MMP蛋白在原发胃癌和胃癌转移淋巴结中的表达及意义

目的:探讨细胞外基质金属蛋白酶诱导因子-EMMPRIN(extracellular matrix metalloproteinase inducer,EMMPRIN)、膜型基质金属蛋白酶-1(membrane-type matrix metalloproteinase-1,MT1-MMP)蛋白在原发胃癌和胃癌转移淋巴结中的表达差异及与人胃癌临床病理特征的关系,以及二者之间是否有协同作用.方法:应用量子点免疫荧光组织化学技术检测人胃癌组织芯片(包括204例胃癌组织,21例非癌性胃黏膜组织)和20例胃癌转移淋巴结组织中EMMPRIN和MT1-MMP的蛋白表达并评分.结果:在正常胃黏膜组织、慢性萎缩性胃炎伴肠上皮化生、胃癌和胃癌转移淋巴结组织中,EMMPRIN和MT1-MMP蛋白表达呈逐渐递增的趋势,正常胃黏膜组分别与胃癌组、胃癌转移淋巴结组相比,2种蛋白表达的差异均有显著性.EMMPRIN蛋白表达与浸润深度、高TNM分期和淋巴结转移之间均呈显著正相关,而与其他临床病理参数均无关.MT1-MMP蛋白表达仅与高TNM分期和伴有淋巴结转移呈显著正相关.EMMPRIN和MT1-MMP蛋白表达之间呈显著正相关(r=0.584,P=0.001).结论:EMMPRIN与MT1-MMP蛋白在胃癌的发生与进展中有协同作用;在胃癌转移淋巴结中的表达高于原发胃癌,但差异无显著性.     

重组人结缔组织生长因子对人成骨细胞膜型基质金属蛋白酶1及基质金属蛋白酶2表达的影响

使用重组人结缔组织生长因子(recombinant human connective tissue growth factor,rCTGF)干预体外培养的人成骨细胞,发现rCTGF可呈时间-剂量依赖性地促进人成骨细胞膜型基质金属蛋白酶1及基质金属蛋白酶2的表达,200 ng/ml CTGF作用24～48 h达最大效果.rCTGF可明显增强p38丝裂原活化的蛋白激酶(p38-MAPK)磷酸化,p38-MAPK阻断剂SB 23058可阻断rCTGF上调膜型基质金属蛋白酶1及基质金属蛋白酶2的效应.

Abstract：

Human osteoblast was treated with recombinant human connective tissue growth factor (rCTGF). This experiment showed that rCTGF increased membrane type-1 matrix metalloproteinase and matrix metalloproteinase-2 protein expression in a dose- and time-depentent manner in human osteoblasts. rCTGF induced activation of p38 MAPK in human osteoblasts. p38 MAPK inhibitor SB23058 abrogated the effect of rCTGF on the expressions of membrane type-1 matrix metalloproteinase and matrix metalloproteinase-2 in human osteoblasts.     

MT1-MMP基因单核苷酸多态性与广西壮族绝经后女性骨质疏松的相关性

目的 研究膜型基质金属蛋白酶-1(MT1-MMP)基因单核苷酸多态性与广西壮族绝经后女性骨质疏松的关系。方法 用超声骨密度仪测量广西地区518例壮族绝经后女性左侧跟骨超声振幅衰减(BUA),并根据中国人骨质疏松建议诊断标准分骨量正常、骨量减少和骨质疏松组；MT1-MMP基因的4个单核苷酸多态性(SNP)位点(rs1003349、rs3751488、rs2236303和rs743257)的分型采用多重单碱基延伸SNP分型技术(Multiplex SNaPshot)。结果 4个位点单核苷酸多态性与BUA变异无相关性(P>0.05)。rs743257位点TT基因型在骨量减少组和骨质疏松组中的分布频率明显比骨量正常组低，CT基因型则相反；在对骨质疏松危险因素的有序Logistic回归分析显示，壮族绝经后女性个体携带rs2236303 CT基因型发生骨质疏松的风险比TT基因型的低(OR=0.532,95%CI:0.308～0.917,P=0.023),携带rs743257 CT基因型发生骨质疏松的风险比TT基因型的高(OR=1.873,95%CI:1.159～3.027,P=0.010)。...     

非类固醇类抗炎药NS398对肺癌H460细胞RECK及MT1-MMP表达的影响

目的 探讨非类固醇类抗炎药NS398对肺癌H460细胞增殖及其Kazal基序逆向诱导半胱氨酸丰富蛋白(RECK)及膜型基质金属蛋白酶1(MT1-MMP)表达的影响.方法 应用MTT方法检测H460细胞生长的抑制率,用免疫荧光法、Western blot法检测RECK及MT1-MMP蛋白的表达.结果 NS398可抑制H460细胞的增殖,促进RECK蛋白的表达,减少MT1-MMP蛋白的含量,并呈剂量依赖关系.结论 NS398可通过促进肺癌细胞RECK的表达并减少MT1-MMP的含量,进而抑制肺癌H460细胞的生长,这可能是肺癌侵袭转移的一个重要机制.     

CD44v6、MT1-MMP和VEGF在肝细胞肝癌中的表达及意义

采用免疫组化法检测40例肝细胞肝癌(简称肝癌)及10例正常肝组织手术切除标本的血管内皮生长因子(VEGF)、黏附分子(CD44v6)和膜型金属蛋白酶-1(MT1-MMP)的表达情况.结果MT1-MMP、CD44v6和VEGF在肝癌组织中阳性表达明显高于正常肝组织(P均＜0.01);MT1-MMP和VEGF与肿瘤的转移、大小有关,与组织分化程度无关;CD44v6与肿瘤的转移、分化程度有关,与大小肿瘤无关;MT1-MMP与CD44v6、CD44v6与VEGF、MT1-MMP与VEGF在肝癌组织中的表达均呈明显正相关(r=0.506、0.701、0.566,P均＜0.01).提示MT1-MMP、CDd4v6、VEGF联合检测有助于肝癌的生物学行为判断和预后评估.     

成纤维细胞与肺癌细胞相互作用对膜型基质金属蛋白酶-1及基质金属蛋白酶-2表达的影响

目的 研究胚肺成纤维细胞对肺癌H460细胞膜型基质金属蛋白酶-1(MTl-MMP)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达的影响.方法 采用Western blot方法检测各组MT1-MMP的表达.取其上清,采用酶联免疫吸附法检测各组细胞培养液中活性MMP-2的浓度.结果 H460细胞、胚肺成纤维细胞单独培养时均有MT1-MMP表达,但混合培养后MT1-MMP表达增强(P＜0.05).H460细胞、胚肺成纤维细胞单独培养时MMP-2均有分泌,混合培养MMP-2分泌增强(P＜0.05).结论 胚肺成纤维细胞和肺癌H460细胞相互作用能通过上调MT1-MMP、MMP-2的表达从而促进肺癌的侵袭和转移,这可能为肺癌侵袭转移的一个重要机制.     

川芎嗪对人肝癌HepG-2细胞体外侵袭和迁移的影响

目的 探讨中药川芎有效成分川芎嗪（TMP）对人肝癌HepG-2细胞体外侵袭和转移的影响。方法 取对数生长期的HepG-2细胞,分别给予50 mg/L、100 mg/L、200 mg/L TMP和未加药物的阴性对照处理,采用基质粘附实验、Transwell小室迁移和侵袭实验测定HepG-2细胞活动能力,使用流式细胞仪检测HepG-2细胞基质金属蛋白酶-2（MMP-2）和基质金属蛋白酶组织抑制因子-2（TIMP2）蛋白表达情况,并计算MMP-2/TIMP2比值。结果 随着TMP浓度的加大,HepG-2细胞的粘附、侵袭和迁移数逐渐降低, 50 mg/L、100 mg/L、200 mg/L TMP处理组HepG-2细胞粘附率分别为（56.2±5.1）%、（36.9±4.2）%、（22.1±3.2）%,明显低于阴性对照组的【（89.4±4.6）%,P<0.05】; 100 mg/L和200 mg/L TMP 处理组HepG-2细胞迁移细胞数分别为（196.6±10.6）个/视野、（182.2±12.4）个/视野,明显低于阴性对照组的（234.6±8.7）个/视野（P<0.05）;100 mg/L和200 mg/L TMP组HepG-2细胞侵袭细胞数分别为（145.9±9.8）个/视野和（123.5±9.3）个/视野,明显低于阴性对照组的（166.3±10.2）个/视野（P<0.05）;随着TMP浓度的加大,细胞MMP-2蛋白表达量逐渐降低,而TIMP2蛋白表达量逐渐升高,与阴性对照组比,实验组细胞MMP-2蛋白表达量和MMP-2/TIMP2比值明显降低,而TIMP2蛋白表达量明显升高（P<0.05）。结论 TMP可有效抑制肝癌HepG-2细胞的粘附、侵袭和迁移能力,其作用机制可能与其能明显下调细胞MMP-2而上调TIMP2蛋白表达有关。     

白细胞介素-1β促进人肝癌MHCC97-H细胞侵袭性的体外研究

肿瘤转移前存在微环境变化,炎症因子起着重要作用[1].白细胞介素-1(IL-1)在影响肿瘤微环境、促进残癌侵袭性中起重要作用[2].本研究对肝细胞癌(简称肝癌)能否分泌IL-1β以及IL-1β对肝癌侵袭性的影响及其可能机制进行了探讨.     

Overexpression of MT3-MMP in hepatocellular carcinoma correlates with capsular invasion

BACKGROUND/AIMS: Extracellular matrix-degrading matrix metalloproteinases (MMPs) are invariably up-regulated in epithelial cancers and are key agonists of angiogenesis, invasion and metastasis. Recent studies have shown high levels of various MMPs, including MT1-MMP, MMP-1, MMP-2 and MMP-9, and their involvement in tumor progression in human hepatocellular carcinoma (HCC). However, the expression and role of MT3-MMP in HCC remains unclear. METHODOLOGY: We examined the immunohistochemical expression of MT3-MMP in surgically resected HCCs (n=58), hepatitis C virus (HCV) and hepatitis B virus (HBV)-related chronic hepatitis (n=34) and cirrhosis (n=24). RESULTS: MT3-MMP expression was observed in all non-cancerous liver tissues. In HCCs, 52% (30/58) of patients showed high MT3-MMP expression while the remaining 48% (28/58) of patients showed low expression. A clinicopathological survey demonstrated a significant correlation between high MT3-MMP expression and capsular invasion of carcinoma (p = 0.034) although there was no correlation between high MT3-MMP expression in HCC and overall survival or disease-free survival. CONCLUSIONS: MT3-MMP was expressed not only in chronic hepatitis and liver cirrhosis, but also in HCC, and high MT3-MMP expression correlated significantly with capsular invasion of carcinoma.     

VEGF-A对人肝癌细胞体外形成血管生成拟态能力的影响

目的探讨血管内皮生长因子（VEGF）对人肝癌细胞体外形成血管生成拟态（VM）能力的影响。方法采用不同浓度的VEGF-A诱导人肝癌PLC细胞,分别用划痕实验、明胶酶谱法分析不同浓度VEGF-A对PLC细胞迁移性和侵袭性的影响;三维培养观察VEGF-A对PLC细胞形成VM能力的影响;Western blot法检测VEGF-A处理后的血管内皮钙黏附素（VE-cadherin）表达。结果 VEGF-A呈剂量依赖性增强肝癌PLC细胞的迁移率和侵袭相关蛋白MMP-9的活性,促进管道样结构形成及VE-cadherin表达（P均〈0.05）。VEGF-A水平与管道数量呈正相关（r=0.929,P〈0.05）。结论 VEGF-A可增强肝癌PLC细胞的迁移和侵袭能力,促进其VM形成,使肿瘤组织血供丰富,促进肿瘤浸润和转移。     

VEGF-C、MT1-MMP在乳腺癌淋巴管生成过程中的共表达机制

目的探讨乳腺癌淋巴管生成过程中血管内皮生长因子C(VEGF-C)和膜型基质金属蛋白酶-1(MT1-MMP)共表达的机制。方法将乳腺癌细胞株MCF-7分为4组,空白对照组不干预、转染组转入表皮生长因子受体2(ErbB2)基因、空白质粒组加入空白质粒、加药组于转染ErbB2后加入曲妥珠单抗。采用Western印迹法和RT-PCR法分别检测各组VEGF-C和MT1-MMP蛋白、mRNA表达情况。结果空白对照组、空白质粒组仅检测到少量的VEGF-C和MT1-MMP蛋白、mRNA的表达;转染组VEGF-C和MT1-MMP蛋白、mRNA表达明显增强;加药组VEGF-C和MT1-MMP蛋白表达明显低于转染组。结论 VEGF-C和MT1-MMP在乳腺癌中存在共同表达的机制,即均受ErbB2基因的调控;MT1-MMP可能参与乳腺癌的淋巴管生成。     

MT1M and MT1G promoter methylation as biomarkers for hepatocellular carcinoma

AIM:To investigate the potential of promoter methylation of two tumor suppressor genes(TSGs)as biomarkers for hepatocellular carcinoma(HCC).METHODS:A total of 189 subjects were included in this retrospective cohort,which contained 121 HCC patients without any history of curative treatment,37 patients with chronic hepatitis B(CHB),and 31 normal controls(NCs).DNA samples were extracted from 400μL of serum of each subject and then modified using bisulfite treatment.Methylation of the promoters of the TSGs(metallothionein1M,MT1M;and metallothionein 1G,MT1G)was determined using methylation-specific polymerase chain reaction.The diagnostic value of combined MT1M and MT1G promoter methylation was evaluated using the area under the receiver operating characteristic curves.RESULTS:Our results indicated that the methylation status of serum MT1M(48.8%,59/121)and MT1G(70.2%,85/121)promoters in the HCC group was significantly higher than that in the CHB group(MT1M 5.4%,2/37,P<0.001;MT1G 16.2%,6/37,P<0.001)and NC group(MT1M 6.5%,2/31,P<0.001;MT1G 12.9%,4/27,P<0.001).Aberrant serum MT1M promoter methylation gave higher specificity to discriminate HCC from CHB(94.6%)and NCs(93.5%),whereas combined methylation of serum MT1M and MT1G promoters showed higher diagnostic sensitivity(90.9%),suggesting that they are potential markers for noninvasive detection of HCC.Furthermore,MT1M promoter methylation was positively correlated with tumor size(rs=0.321,P<0.001),and HCC patients with both MT1M and MT1G promoter methylation tended to show a higher incidence of vascular invasion or metastasis(P=0.018).CONCLUSION:MT1M and MT1G promoter methylation may be used as serum biomarkers for noninvasive detection of HCC.