己酮可可碱对人肝癌HepG2细胞的放射增敏作用及其作用机制

目的 研究己酮可可碱(pentoxifylline, PTX)对人肝癌HepG₂细胞的放射增敏作用并初步探讨其作用机制。方法 应用MTT法检测PTX药物毒性实验,用克隆形成实验观察PTX对放射敏感性的影响,用流式细胞仪(FCM)技术分析X射线照射对HepG₂细胞周期分布和PTX对放射引起的细胞周期阻滞的影响。结果 不同浓度的PTX作用于肝癌HepG₂细胞24 h后,其细胞毒性呈剂量依赖性,最适浓度为2 mmol/L。PTX能显著降低放射后HepG₂细胞的克隆形成率,其放射增敏比为1.31±0.16。单纯照射组照射可以导致HepG₂细胞G₂期阻滞,单纯照射组及照射6 Gy加2 mmol/L PTX组的细胞20 h G₂-M期比例分别为32.15%和19.52%,PTX能够去除放射引起的HepG₂细胞G₂期阻滞。结论 PTX对HepG₂细胞有放射增敏作用,其机制可能与PTX去除放射引起的G₂期阻滞等因素有关。     

冬凌草甲素对人鼻咽癌细胞株CNE-2细胞的放射增敏作用

目的:观察冬凌草甲素对人鼻咽癌细胞株CNE-2细胞的放射增敏作用,并探讨其可能机制。方法:用克隆形成实验计算药物的放射增敏比,流式细胞仪法分别检测、比较单纯药物组、单纯照射组、联合治疗组各组的细胞周期变化。结果:冬凌草甲素的放射增敏比为1.227,流式细胞仪法分析显示,联合治疗组的细胞周期变化以G2/M期阻滞为主(45.2%),与单纯药物组、单纯照射组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:冬凌草甲素对人鼻咽癌细胞株CNE-2细胞具有一定的放射增敏作用,其机制可能与改变细胞周期有关。     

三氧化二砷对人宫颈癌Hela细胞的放射增敏作用

目的:探讨三氧化二砷(As2O3)对人宫颈癌Hela细胞的放射增敏作用及其机制。方法:MTT法确定As2O3对Hela细胞的半数致死浓度(ID50);克隆形成法观察20%ID50的As2O3对Hela细胞的放射增敏作用;流式细胞仪测定细胞周期。结果:细胞生长抑制率随As2O3浓度增加而增高;As2O3+照射组的细胞存活率、D0值和Dq值均小于单纯照射组(P<0.05);存活曲线肩区(Dq)变小,放射增敏比(SER)为1.39;As2O3和γ-射线均能使细胞阻滞在G2/M期,联合应用比单独应用抑制作用显著(P<0.01)。结论:As2O3对宫颈癌Hela细胞株有明显的放射增敏作用;可能与As2O3改变细胞周期有关。     

吉非替尼对鼻咽癌细胞株CNE2放疗增敏作用

目的应用吉非替尼作用于鼻咽癌细胞株CNE2,观察其放疗增敏作用。方法体外培养鼻咽癌细胞株CNE2,以MTT实验检测细胞增殖抑制情况及吉非替尼对细胞放射敏感性的影响;用克隆形成法绘制细胞存活曲线,获得不同处理条件下的放射增敏比。以流式细胞术(FCM)分析细胞周期变化和凋亡情况。结果 MTT显示与单纯照射组比较,联合吉非替尼照射组细胞生存率显著降低(0.582±0.012vs0.398±0.016,P=0.0020);FCM显示吉非替尼联合放射组S期细胞显著下降(P=0.000),而G2/M期细胞比值显著增加(P=0.000),吉非替尼和放射线可协同作用,使CNE2细胞的周期再分布显著变化。结论吉非替尼可增强鼻咽癌细胞株CNE2放射敏感性,其机制可能与改变细胞周期的分布相关。     

对乙酰氨基酚联合外照射对脑胶质瘤细胞照射后代增殖的影响

目的 观察对乙酰氨基酚联合外照射对脑胶质瘤SHG-44细胞株照射存活后代增殖的影响,探讨对乙酰氨基酚作为复发性恶性脑胶质瘤放射治疗增敏剂的可能性.方法 培养人脑胶质瘤SHG-44细胞株经6 MV X线DT10 Gy照射后的存活后代细胞(SHG-44-10细胞),测定其群体倍增时间;在培养SHG-44-10细胞中加入对乙酰氨基酚,进行集落形成实验和流式细胞仪检测,分析其放射敏感性和细胞周期的变化.结果 与SHG-44细胞相比较,SHG-44照射后代细胞克隆形成率降低,倍增时间延长,对放射的敏感性明显降低.而加入对乙酰氨基酚培养后,SHG-44照射后代细胞对放射的敏感性可增加.SHG-44照射后代细胞再次照射后12 h,G2/M相细胞比例增高,24 h比例下降,而加入对乙酰氨基酚培养后G2/M相细胞12 h、24 h均维持较高的比例.结论 (1)SHG-44细胞照射后存活后代细胞增殖延缓,放射敏感性下降.(2)小剂量对乙酰氨基酚可提高SHG-44细胞照射后存活后代细胞的放射敏感性,其可能的机制为诱导细胞阻滞在对放射敏感的G2/M期并能诱导它的凋亡.(3)对乙酰氨基酚有可能成为治疗复发性脑胶质瘤的放射增敏剂.     

吉西他滨增强肝癌HepG2细胞体外辐射敏感性的机制研究

目的探讨吉西他滨对肝癌HepG2细胞辐射增敏作用的影响及机制的初步研究。方法采用克隆形成实验计算不同剂量照射后L-Q模型放射生物学参数比和放射增敏比;应用流式细胞技术检测Gemcitabine(GEM)和辐射前后细胞周期及凋亡率的变化。结果经GEM处理后的HepG2细胞组,Survival fraction at 2 Gy(SF2)较未处理组显著偏低,α值显著增高,GEM处理后增加了辐射诱导的G0/G1期细胞阻滞和细胞凋亡。结论 GEM可显著增强HepG2细胞的辐射敏感性,这种作用是通过增强辐射诱导的G0/G1期细胞阻滞和细胞凋亡来实现的。     

塞来昔布对宫颈癌HeLa细胞放射增敏效应的观察

目的探讨环氧合酶2(COX-2)抑制剂塞来昔布对人宫颈癌HeLa细胞株的放射增敏作用及其机制。方法MTT实验测定塞来昔布对宫颈癌HeLa细胞的毒性,筛选出塞来昔布的半数抑制浓度(IC50),实验分为不同浓度药物组(10、20、40、80μmol/L)、对照组和空白组。克隆形成实验检测20%IC50浓度的塞来昔布对He-La细胞的放射增敏作用,实验分为空白对照组、单纯放射组(2、4、68、Gy)、单纯加药组(药物浓度为20%IC50)、放射加药组(20%IC50药物浓度+2、4、68、Gy放射剂量),根据各组的克隆形成率,计算放射敏感性相关参数;流式细胞仪(FCM)分析细胞周期的分布情况,实验分为对照组和药物组(药物浓度为20%IC50)。结果MTT实验显示塞来昔布对HeLa细胞毒性呈现出浓度和时间依赖性,72 h的IC50是44μmol/L;克隆形成实验显示,放射加药组与单纯放射组相比,反映放射敏感性的指标平均致死剂量(D0)、准域剂量(Dq)、2 Gy照射的存活分数(SF2)均下降,放射增敏比(SER)升高。流式细胞术检测细胞周期S期细胞明显减少,G0~G1期细胞增多,细胞阻滞于G1期。结论塞来昔布能增强宫颈癌HeLa细胞的放射敏感性,其机制可能与促进细胞凋亡、抑制肿瘤细胞亚致死性损伤修复和促进肿瘤细胞周期再分布有关。     

Glu-GNPs对人肺腺癌细胞株A549放射增敏的初步探讨

目的探讨偶联葡萄糖的纳米金颗粒(Glu-GNPs)对人A549细胞的放射增敏作用及其机制。方法噻唑蓝(MTT)法检测低浓度(≤20 nmol/L)Glu-GNPs联合放射对A549细胞存活的影响,克隆形成检测Glu-GNPs对A549细胞的放射增敏作用,流式细胞仪(FCM)检测细胞周期及其凋亡。结果低浓度Glu-GNPs对A549细胞生长无明显抑制,联合X射线后具有抑制作用,在15 nmol/L范围内,随浓度增大,抑制作用增强;15 nmol/LGlu-GNPs对A549细胞有放射增敏作用,由Dq、Do计算放射增敏比(SER)分别为1.93、1.10;Glu-GNPs、单纯放射均可诱导细胞凋亡,凋亡率分别为(7.64±1.43)%、(13.46±1.99)%,联合放射组凋亡率为(21.43±1.04)%,显著高于前两组(P<0.01);Glu-GNPs作用后,细胞周期发生变化,表现为S期减少,G2/M期增加(P<0.05)。结论 Glu-GNPs对人肺腺癌细胞株A549具有放射增敏作用,其机制可能为抑制细胞亚致死损伤修复,阻滞细胞于G2/M期,并诱导细胞凋亡。     

细胞周期与鼻咽癌的放射增敏

目的探讨放射抵抗人低分化鼻咽癌的放射增敏。方法用流式细胞仪检测肿瘤坏死因子(TNFα)对CNE-2Z-S1细胞株的细胞周期同步化,应用克隆形成实验及裸鼠实验,于体外体内测定对S1细胞的放射增敏。结果TNFα使S1细胞的50%～80%阻滞在S期,并且呈剂量依赖性。S1细胞不加TNFα处理而直接于不同时间段去照射,其克隆存活率基本维持在35%～44%左右;而用TNFα处理12h后再照射,14～18h段的克隆存活率达最高峰,20～24h段的克隆存活率达最低峰。单次剂量单用TNFα治疗裸鼠移植瘤无效果,而TNFα+放射组的治疗效果却优于联合生理盐水+放射组(但无统计学意义)。结论TNFα能阻滞鼻咽癌细胞周期,达到细胞周期同步化的作用,从而使癌细胞放射敏感性显著增高。     

PI3K抑制剂对食管癌Eca-109细胞株放射增敏作用及机制

目的:研究PI3K抑制剂对食管癌细胞株Eca-109放射增敏作用及机制.方法:以食管癌细胞株Eca-109为实验对象,MTT法观察PI3K抑制剂LY294002对Eca-109细胞增殖抑制;克隆形成实验分析细胞放射敏感性;RT-PCR检测DNA双链断裂修复基因DNA-PKcs mRNA表达;流式细胞技术检测细胞周期.结果:PI3K抑制剂LY294002对Eca-109细胞有生长抑制作用,且呈剂量依赖性,在较低浓度(10μmol/L)时即可降低Eca-109细胞的克隆形成率,其放射增敏比为1.58.药物LY294002组DNA-PKcs mRNA表达受抑,但与对照组比较差异无统计学意义;照射组表达较对照组明显升高(P<0.05);药物LY294002+照射组的表达较照射组下降(P<0.05).药物LY294002组G2期细胞比例与对照组比较差异无统计学意义,照射组较对照组升高(P<0.01),药物LY294002+照射组G2期细胞比例较照射组下降(P<0.05).结论:PI3K抑制剂LY294002对Eca-109细胞有放射增敏作用,其机制可能与抑制肿瘤细胞DNA双链断裂修复基因DNA-PKcs及减少G2期细胞...     

辣根过氧化物酶/吲哚乙酸自杀基因系统联合放射对Hep-2细胞的生长抑制作用

目的:研究辣根过氧化物酶(HRP)/吲哚乙酸(IAA)自杀基因系统联合放射对人喉鳞癌Hep-2细胞株的生长抑制作用,观察HRP/IAA系统是否具有放射增敏性。方法:将构建成功的pcDNA3.1-HRP转染Hep-2细胞,RT-PCR及Western blotting分别在mRNA和蛋白质两个水平检测其表达;分别以0.5 mmol/L IAA、2 Gyγ-射线及两者联合作用于转染HRP后的Hep-2细胞,实验分为4组:A、对照组;B、加药组;C、放射组;D、加药及放射组。克隆形成实验观察HRP/IAA系统对细胞存活分数的影响,通过拟合生存曲线计算放射增敏比SERSF2;流式细胞仪分析各组细胞周期时相的变化;AnnexinV-FITC试剂盒比较各组细胞凋亡率。结果:转染pcDNA3.1-HRP的Hep-2细胞,RT-PCR和Western blotting能检测到HRP的表达;加药及放射组比单纯放射组细胞存活分数降低,SERSF2为1.302;与A组相比,B、C、D组G2/M期细胞比例升高,S期细胞比例降低,细胞凋亡率均显著增高(P<0.01);D组与B组相比,G2/M期细胞比例升高,S期细胞比例百分比降低,凋亡率增高(P<0.01);D组与C组比较,G0/G1期、G2/M期细胞比例升高(P<0.05),S期细胞比例百分比降低,凋亡率增高(P<0.01)。结论:HRP/IAA系统与放射联合应用能更有效地抑制Hep-2细胞生长、诱导其凋亡,HRP/IAA系统具有放射增敏性。     

塞来昔布对人肝癌细胞株HepG2的放射增敏作用研究

目的探讨COX-2抑制剂塞来昔布对体外培养的HepG2细胞放射增敏作用及其可能的机制,为提高肝癌的放疗效果提供实验依据。方法集落形成法绘制细胞存活曲线,计算增敏比;流式胞仪检测塞来昔布对细胞周期及凋亡的影响;免疫细胞化学染色法检测塞来昔布作用后HepG2细胞的Bcl-2、Casepase-3的表达情况。结果集落形成实验计算得单纯照射组D0=2.57Gy、Dq=2.62Gy,药物＋照射组D0=2.18Gy、Dq=1.89Gy,增敏比SER=1.18。塞来昔布作用48h后,流式细胞仪检测发现细胞周期时相分布发生明显变化,G0/G1期细胞比例增加,S期细胞减少,细胞凋亡率增加。免疫细胞化学染色法观察塞来昔布对凋亡蛋白Bcl-2、Caspase-3表达的影响,发现塞来昔布作用48h后Bcl-2的表达无明显变化,Caspase-3的表达增强。结论塞来昔布具有较强的放射增敏作用,作用机制可能与塞来昔布影响细胞周期的分布,促进细胞凋亡,抑制细胞亚致死性损伤修复有关。     

Flow cytometric analysis of the toxicity of nitrofen in cultured keratinocytes

INTRODUCTlONNitrofeniswidelyusedasaherbicideinChinasincel968.rFhereissufficientevidenceofcarcinogenecityinexperimentalanimal(IARC,l983;Hurtetal.,l983).Nitrofenhasbeenreportedtohaveitritatingeffectonskinandeyeinoccupationallyexposedsubjects(Suga,l972;Yuetal.,l993).Asapar-tofeffoIttoidentifytheceIlularandmolecularmechanismofnitrofeninducedtoxicityinskin,thepresentstudywasundeItakentodeter-drinethedose-responseeffectofnitrofenontheculturedkeratinocyteswithlactatedehydro-genasereleasetest…     

双氯芬酸抑制肝癌细胞增殖和促进环氧合酶-2 mRNA作用的表达

目的 观察环氧合酶抑制剂双氯芬酸钠对体外培养的肝癌细胞HepG2、Hep3B和正常肝细胞系QSG-7701增殖的作用以及药物对环氧合酶-2（COX-2）mRNA表达的影响,探讨COX-2与肝癌细胞增殖的关系。方法 采用Cell Counting Kit-8（CCK-8）细胞计数法测定药物作用24、48、72h后细胞增殖活性,半定量逆转录聚合酶链反应检测各种细胞系COX-2 mRNA的表达水平以及药物作用对基因表达的影响。结果双氯芬酸在10～200μmol/L浓度依赖性地抑制HepG2和Hep3B细胞的增殖,50μmol／L作用48h后抑制率分别为40．47％和54．49％,半数抑制浓度分别为70．54和48．39μmol／L。双氯芬酸对正常肝细胞株QSG-7701的抑制作用较弱,作用48h的半数抑制浓度为189．91μmol／L。HepG2、Hep3B细胞均表达COX-2 mRNA,QSG-7701细胞几乎不表达COX-2 mRNA。双氯芬酸和化疗药5-氟尿嘧啶均可增强HepG2和Hep3B细胞COX-2 mRNA的表达。结论 双氯芬酸特异性地抑制表达COX-2的肝癌细胞HepG2和Hep3B的增殖,并且诱导COX-2 mRNA表达上调,提示COX-2在肝癌细胞增殖中具有重要意义。     

API通过耗竭GSH抑制人肝癌Hep G2细胞活性和诱导凋亡

目的:研究芹菜素(apigenin,API)是否通过耗竭谷胱甘肽(glutathione,GSH)诱导人肝癌Hep G2细胞活性抑制和凋亡。方法:体外培养Hep G2细胞。分光光度法测定细胞GSH水平。MTS比色法测定细胞活力。PI染色FCM分析细胞凋亡率。结果:API降低Hep G2细胞GSH水平(P<0.05),呈浓度依赖性。API以浓度依赖方式抑制Hep G2细胞活性(P<0.05),同时,诱导Hep G2细胞Sub G1百分率增高(P<0.05);500μM GSH预孵育30min,能有效阻断API降低细胞GSH水平、抑制细胞活性和诱导细胞凋亡作用(P<0.05)。结论:API通过耗竭细胞GSH抑制Hep G2细胞活性和诱导细胞凋亡。     

青蒿琥酯增加人脑胶质瘤细胞CHG-5对β射线的敏感性

目的从青蒿素及其衍生物中筛选出对人脑胶质瘤细胞CHG-5及U87具有较好放射增敏效果的药物,并初步探讨其放射增敏机制。方法①采用MTT法测定上述青蒿素衍生物对2株胶质瘤细胞的IC50,观察以20%IC50浓度的青蒿素衍生物联合β射线对CHG-5及U87的放射增敏效果,从中筛选出放射增敏效果最好的药物;②通过克隆形成法计算目标药物的放射增敏比;③划痕法观察它对β射线照射后CHG-5细胞迁移的影响;④检测胞内还原型GSH水平;⑤流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期分布情况。结果青蒿素(artemisinin,ART)、双氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)、青蒿琥酯(artesunate,AS)对CHG-5的IC50分别为:1.47、0.20、0.29mmol/L;对U87,则分别为1.61、0.25、0.46mmol/L。以20%IC50为β射线的协同给药浓度,仅有AS可以同时抑制经β射线照射后的CHG-5及U87细胞的增殖。且0.06mmol/L的AS对CHG-5细胞的放射增敏比为1.25,该浓度的AS可以明显地抑制CHG-5细胞的迁移。GSH结果表明0.06mmol/LAS处理组较未处理组细...     

17-AAG联合紫杉醇对Eca-109食管癌细胞增殖的抑制作用

目的研究17-AAG联合紫杉醇（PTX）对食管癌细胞Eca-109增殖和凋亡的影响。方法予以PTX和17-AAG单独或联合
使用作用于Eca-109细胞株,采用MTT法检测其细胞增殖的变化,应用流式细胞仪检测细胞周期、凋亡的变化。结果与对照组
相比,单独使用17-AAG、PTX均能够抑制Eca-109细胞的增殖;0.5 μmol/L PTX联合0.625 μmol/L 17-AAG可抑制Eca-109的生
长,且联合效应明显强于各自单药组（P<0.01）;流式细胞仪检测结果显示：17-AAG将Eca-109 细胞阻滞于G2/M 期,PTX将
Eca-109 细胞阻滞于S 期。17-AAG与PTX 联合用药使Eca-109 细胞阻滞于G2/M 期和S。17-AAG组、PTX组及联合组作用
Eca-109细胞株24 h后其凋亡率分别为4.52%、10.91%、29.88%,显著高于对照组（1.32%）;联合用药后,可形成明显凋亡峰,明显高
于单药组。结论PTX和17-AAG均可抑制食管癌细胞增殖,诱导癌细胞凋亡,两者联合可增强上述作用。
     

p27kip1过表达对肝细胞癌细胞株细胞周期的影响

目的探讨肿瘤抑制基因p27^kip1编码的P27蛋白过表达与HCC细胞株细胞周期的关系。方法本研究从野生型p27^kip1基因真核表达质粒pEYFP-P27（WT）出发,采用定点诱变技术构建了突变型p27^kip1基因表达载体pEYFP-P27（S10A）、pEYFP-P27（T157A）和pEYFP-P27（T187A）,然后用脂质体法将上述质粒转染HCC细胞株HepG2和Hep3B,Western Blotting检测内源和转入的P27蛋白表达,流式细胞仪检测P27蛋白过表达对HCC细胞株细胞周期的影响。结果野生型和3种突变型的P27融合蛋白在HepG2和Hep3B中的过表达都能增强G0／G1期阻抑;同时,对HepG2细胞,核定位位点突变体P27（T157A）比野生型P27蛋白及其他两个突变体具有更强的细胞周期阻抑活性,而对Hep3B细胞,3个突变体和野生型p27蛋白对细胞周期的影响无明显差异。结论P27蛋白过表达能够显著增强HCC细胞株的G0／G1期阻抑。     

早期非小细胞肺癌体部立体定向放疗基础和临床研究——不同照射剂量联合吉非替尼对肺癌细胞系H358的影响

目的：探讨不同剂量单纯照射及照射联合吉非替尼对非小细胞肺癌细胞系 H358存活率、增敏比及细胞凋亡、细胞周期的影响。方法体外培养肺腺癌细胞 H358分为空白对照组、单纯照射组、单纯吉非替尼（Iressa）组、照射＋Iressa组,照射剂量为0、2、4、6、8、12、16、20 Gy,药物浓度为1μmol/L。通过细胞克隆形成实验,观察4组 H358细胞存活情况,描绘细胞存活曲线;采用四噻唑比色试验（MTT）观察两组细胞生长受抑制情况,计算增敏比（SER）;运用流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期。结果（1）随着照射剂量增加细胞存活分数减小,单纯照射组单次剂量达到20 Gy时,细胞克隆集落形成率为0,照射＋Iressa组单次剂量达到16 Gy时克隆集落形成率为0;（2）照射＋Iressa 组与单纯照射组相比,两组 OD 值差异有统计学意义（F剂量＝62．644,P ＜0．001,F药物＝233．572,P ＜0．001）,两组 OD值随着照射剂量的增高而减小,不同剂量之间 OD值差异有统计学意义（F未加药＝354．972,P＜0．001;F加药＝231．740,P ＜0．001）,两组细胞放射增敏比（SER）与药物显著相关（P ＜0．001）,照射＋Iressa组SER较单纯照射组明显增高;（3）随着照射剂量的增加,凋亡率增高（P ＜0．001）,H358细胞凋亡率与Iressa药物作用相关（P ＜0．001）,单纯Iressa作用后细胞周期阻滞主要出现在G0/G1期,照射＋Iressa组及单纯照射组主要出现G2/M期阻滞。结论增加单次照射剂量可降低 H358细胞存活率,细胞凋亡与 Iressa药物之间存在相关性,照射＋Iressa能够增加细胞凋亡率,照射前使用Iressa能够增强照射对细胞的放射敏感性。