牛珀至宝微丸对骨髓间充质干细胞移植后转分化为神经元的影响

目的:观察牛珀至宝微丸对骨髓间充质干细胞(MSC)在脑缺血移植后的增殖与分化.方法:分离成年大鼠MSC并扩增,植入局灶性脑缺血大鼠纹状体内,并用牛珀至宝微丸干预治疗.于移植后1、2、3、4、6周取脑纹状体,用Brdu、NF免疫组化检测MSC移植后的增殖与分化.结果:移植后l周,移植区内可见Brdu、NF阳性表达,移植后2周达到高峰,移植后4周Brdu和NF表达减少,牛珀至宝微丸组(实验组)Brdu和NF表达不但增强,而且表达持续至移植后6周,与模型组比较差别有非常显著意义(P＜0.01).结论:牛珀至宝微丸不但能促进脑缺血移植MSC增殖,并且还能促进其分化为神经元.     

牛珀至宝微丸对内毒素急性肺损伤胶原纤维表达的影响

目的 观察牛珀至宝微丸对内毒素急性肺损伤时胶原纤维表达的影响。方法 静脉注射内毒素(LPS)1．5mg／kg、腹腔注射D-氨基半乳糖(D-GalN)100mg／kg造成内毒素休克模型，用牛珀至宝微丸和AG作对照干预处理，Van Gieson法染色检测胶原纤维在肺组织内的表达。结果 内毒素造成严重的急性肺损伤，肺组织胶原纤维染色显著增强；牛珀至宝微丸能减轻肺损伤，肺组织胶原纤维染色明显减弱。结论 牛珀至宝微丸能减轻内毒素急性肺损伤和纤维化，可能有治疗急性肺损伤纤维化的作用。     

骨髓间充质干细胞体内定向分化为神经元样细胞的研究

虽然骨髓MSC具有广阔的应用前景,但是还有许多问题没有解决。进一步探索决定其分化的关键基因,发现影响其向其他谱系细胞分化的细胞、免疫、分子学机制,找到调控移植细胞迁移和整和的方法等,是在真正临床应用之前所必须要做的工作     

牛珀至宝微丸对内毒素肺损伤纤维化大鼠信号转导蛋白smads表达的影响

目的:观察牛珀至宝微丸对内毒素肺损伤纤维化大鼠中转化生长因子-β下游胞内信号转导蛋白Smads表达的影响.方法:气管内两次滴注脂多糖内毒素(1.5mg/kg,3.0mg/kg)、腹腔注射脂多糖内毒素(3.0mg/kg)造成内毒素大鼠急性肺损伤纤维化模型,设正常组对照,用牛珀至宝微丸作干预处理,以HE染色法观察肺组织损伤的形态学改变,Van Gieson法染色检测胶原纤维在肺组织内的表达,并用Western Blot、免疫组化方法检测在肺组织内TGF-β下游胞内信号转导蛋白Smads的表达.结果:内毒素造成严重的急性肺损伤,牛珀至宝微丸可以使内毒素肺损伤纤维化大鼠的smad2/3表达得到抑制,smad4和smad7表达得到不同程度的增强.结论:牛珀至宝微丸减轻内毒素肺纤维化的机理可能与其对TGF-β下游smads通路的调节表达相关.     

牛珀至宝微丸的研制

将犀珀至宝丹研制成牛珀至宝微丸,建立本品的质量控制方法,运用ＲＰ－ＨＰＬＣ法制定了本品中大黄素的含量。     

牛珀至宝微丸对热应激反应内毒素休克大鼠TNF-α的影响

目的：研究牛珀室 宝微丸对热应激反应内毒素休克大鼠影响。方法：将雄性Wistar大鼠45只随机分成3组：a：热应激＋牛珀至宝微丸＋内毒素组;b：热应激＋NS＋内毒素组;C：NS＋内毒素对照组。分别予以热应急处理或热应激处理后灌注牛珀至宝微丸或单独灌注生理盐水后,静脉注射内毒素（LPS）然后取注射LPS前和后2h的动脉血分离血浆测定TNF－α,同时用二导生理仪记录血压等。结果：动物注射LPS后血压明显降低,TNF－α浓度明显升高,热激反应能降低其家度（P＜0．05）,而牛至宝微丸能加强其作用（P＜0．05）。结论：牛珀至社微丸能加强大鼠对热应激反应。     

牛珀至宝微丸对内毒素急性肺损伤MDA和SOD的影响

目的观察牛珀至宝微丸对内毒素急性肺损伤时MDA和SOD的影响。方法静脉注射内毒素(LPS)1.5mg/kg、腹腔注射D-氨基半乳糖100mg/kg造成内毒素休克模型,牛珀至宝微丸作对照干预处理,用HE染色观察肺损伤,用硫代巴比妥酸法测定MDA,用黄嘌呤氧化酶法测定SOD活力,观察内毒素急性肺损伤时肺组织与血清的MDA和SOD变化。结果内毒素造成严重的急性肺损伤,肺组织及血浆中MDA含量增多,SOD活性减弱,牛珀至宝微丸能减轻肺损伤,并能减低MDA含量和增加SOD活性。结论牛珀至宝微丸能减轻内毒素急性肺损伤,其机理与MDA和SOD有关。     

牛珀至宝微丸对内毒素肺损伤纤维化大鼠信号转导蛋smads表达的影响

目的：观察牛珀至宝微丸对内毒素肺损伤纤维化大鼠中转化生长因子-β下游胞内信号转导蛋白Smads表达的影响。方法：气管内两次滴注脂多糖内毒素（1．5mg／kg,3．0mg／kg）、腹腔注射脂多糖内毒素（3．0mg/kg）造成内毒素大鼠急性肺损伤纤维化模型,设正常组对照,用牛珀至宝微丸作干预处理,以HE染色法观察肺组织损伤的形态学改变,Van Gieson法染色检测胶原纤维在肺组织内的表达,并用Western Blot、免疫组化方法检测在肺组织内TGF-β下游胞内信号转导蛋白Smads的表达。结果：内毒素造成严重的急性肺损伤,牛珀至宝微丸可以使内毒素肺损伤纤维化大鼠的smad2／3表达得到抑制,smad4和smad7表达得到不同程度的增强。结论：牛珀至宝微丸减轻内毒素肺纤维化的机理可能与其对TGF—β下游smads通路的调节表达相关。     

阿魏酸钠诱导骨髓间充质干细胞向神经细胞分化的初步研究

目的 探讨阿魏酸钠诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞分化的可能作用。方法 分离培养大鼠骨髓间充质干细胞，采用阿魏酸钠对其进行诱导培养，倒置显微镜下观察诱导培养不同时间后细胞的形态变化，并应用免疫细胞化学方法鉴定诱导培养后细胞表面神经细胞特异性标志物神经丝蛋白(NF)及神经元特异性烯醇化酶(NSE)的表达。结果 阿魏酸钠诱导培养6h后即可见细胞形态发生明显变化，24h后表现为典型的神经细胞样形态，NF和NSE神经细胞特异性标志物呈阳性表达。结论 初步证实阿魏酸钠具有诱导体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞分化的作用。     

骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化的研究进展

骨髓间充质干细胞（BoneMarrowMesenchymalstemcells,BMSCs）又称骨髓基质千细胞,是骨髓细胞中除去造血干细胞（非粘附细胞）之外的细胞部分,作为成体干细胞之一,具有多项分化潜能,能向骨、软骨、肌肉、神经、角膜上皮细胞等中胚层或外胚层组织细胞分化,是组织工程中重要的种子细胞之一,并且具有取材方便,扩增迅速,可自体移植等特点,因此,具有广泛的应用前景。     

淫羊藿苷对骨髓间充质干细胞骨向诱导的实验研究

目的通过研究淫羊藿苷(icariin,ICA)对骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BM-SCs)增殖和骨向分化能力的影响,并观察其促BMSCs骨向分化过程中对细胞因子转化生长因子β1(TGF-β1)、骨形成蛋白-2(BMP-2)表达的影响,分析可能的作用途径,为阐释其防治骨质疏松(osteoporosis,OP)的作用机理提供实验依据,并为以TGF-β1、BMP-2作为筛选防治OP药物进行实验研究。方法以碱性磷酸酶(ALP)等指标确定干预药物不同浓度梯度中最佳促BMSCs骨向分化剂量;分组实验,通过检测诱导分化过程中ALP和钙化结节等指标的表达,来观察其对BMSCs骨向分化能力的影响;采用ELISA法检测骨向分化过程中TGF-β1、BMP-2的表达。结果(1)ICA最佳促BMSCs骨向分化浓度为1×10-9mol/L。ICA10-9组能促进成骨指标的表达和TGF-β1和BMP-2分泌增加;(2)能促BMSCs骨向分化能力的ICA各诱导组均伴随TGF-β1和BMP-2分泌增加。结论ICA能促进BMSCs骨向分化;在BMSCs骨向分化过程中,上调TGF-β、BMP-2的表达量可能是各干预药物促进BMSCs骨向分化的作用机制之一。     

兔骨髓间充质干细胞的分离培养及诱导分化

目的:分离培养兔骨髓间充质干细胞并成骨诱导分化。方法:从兔骨髓中分离培养原代MSCs并进行传代培养,绘制生长曲线。取第3代细胞进行成骨诱导分化,进行Vonkossa染色,碱性磷酸酶染色,碱性磷酸酶(ALP)活性测定,总蛋白检测,提取细胞总RNA及RT-PCR法检测Collagen I,osteocalcin及osteopontin基因表达情况。结果:MSCs贴壁生长,呈放射样、爆花样或漩涡样,可传20代以上。未经成骨诱导的MSCs不发生矿化沉积,而经成骨诱导分化后,细胞可发生显著的矿质沉积。未经成骨诱导的MSCs可微量表达CollagenI,但不表达osteocalcin和osteopontin,而经成骨诱导分化后,细胞表达CollagenI增强,并出现osteocalcin和osteopontin等成骨标志物的表达。结论:本实验成功分离培养MSCs并成骨诱导分化。     

通络生骨胶囊对骨髓基质干细胞成骨和成脂肪双向分化的影响

目的:研究通络生骨胶囊对体外培养糖皮质激素诱导骨髓基质干细胞(MSCs)成骨和成脂肪双向分化的影响.方法:使用地塞米松浓度10-8M诱导MSCs成脂肪和成骨双向分化,以通络生骨胶囊治疗,采用逆转录聚合酶链反应法检测脂蛋白脂酶,骨桥蛋白基因的表达水平,观察MSCs成骨和成脂肪分化的改变.结果:地塞米松10-8M可诱导MSCs成骨和成脂肪双向分化;通络生骨胶囊具有明显的抑制成脂肪分化,促进成骨分化的作用.结论:通络生骨胶囊治疗激素性股骨头坏死药效机制,可能是通过对MSCs成脂肪和成骨分化调控的影响而产生作用.     

丹参诱导成年小鼠骨髓基质干细胞分化为神经细胞研究

应用复方丹参注射液诱导体外培养的成年小鼠骨髓基质干细胞,观察诱导过程中的形态学变化,并于诱导后5h、24h、72h分别应用抗Nestin、抗βⅢ-tubulin、抗MBP及抗GFAP抗体进行免疫细胞化学染色．RT-PCR检测mRNA表达,Western Blot检测蛋白表达,应用2-巯基乙醇作为诱导对照组。研究发现,复方丹参注射液和2－巯基乙醇均可诱导骨髓基质干细胞分化为神经样细胞,但复方丹参注射液诱导怍用更为缓和,细胞死亡率远低于2-巯基乙醇诱导组。免疫细胞化学示Nestin和βⅢ-tubulin阳性表达,MBP及GFAP为阴性表达。RT-PCR可见Nestin和βⅢ-tubulin mRNA阳性表达,Western Blot检测证实Nestin和βⅢ-tubulin蛋白呈阳性表达。提示,复方丹参注射液可在体外诱导成年小鼠骨髓基质干细胞向神经细胞发育,是较为理想的诱导剂。     

隐丹参酮诱导骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞的实验研究

目的：观察隐丹参酮体外定向诱导成人骨髓间质干细胞（MSC）分化为神经元样细胞。方法：采用Ficoll-Paque液分离成人MSC，体外扩增，FACScan流式细胞仪检测表面抗原表达，采用含隐丹参酮的无血清DMEM诱导MSC分化为神经元样细胞。免疫组化鉴定神经元特异性烯醇化酶（NSE）、神经丝蛋白（NF－M，NF－H）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、巢蛋白（Nestin)的表达。结果：成人骨髓间质干细胞在体外扩增原代可获得0.5×10^6个细胞，15代可获得（2－3）×10^12个细胞，流式细胞仪检测显示CD29、CD44、CD90、CD105、CD166表达阳性，CD11a、CD14、CD34、CD38、CD45、CD80、CD86为阴性。加入隐丹参酮诱导后，MSC胞体收缩，突起伸出；免疫组化显示诱导出的神经元样细胞NSE、NF－M，NF－H、Nestin表达阳性，GFAP阴性。结论：隐丹参酮在体外可诱导成人骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞。     

止颤汤对神经干细胞向多巴胺能神经元诱导分化作用的研究

目的:探讨止颤汤对体外培养的神经干细胞向多巴胺能神经元分化的作用.方法:实验细胞分为三组,正常组用常规培养基培养,止颤汤组用止颤汤含药血清处理,对照组用正常血清处理,在处理后21天免疫细胞化学法检测酪氨酸羟化酶TH、多巴转运子DAT蛋白表达;RT-PCR法检测Shh、Ptx3、Nurrl基因表达,比较各组差异.结果:各组TH及DAT蛋白均无明显表达,止颤汤组Shh、Ptx3、Nurrl基因表达较其他组显著增高.结论:止颤汤含药血清可改善微环境中神经干细胞向多巴胺能神经元分化的相关因子,有可能促进神经干细胞向多巴胺能神经元分化.     

止颤汤对神经干细胞向多巴胺能神经元诱导分化作用的研究

目的：探讨止颤汤对体外培养的神经干细胞向多巴胺能神经元分化的作用。方法：实验细胞分为三组,正常组用常规培养基培养,止颤汤组用止颤汤含药血清处理,对照组用正常血清处理,在处理后21天免疫细胞化学法检测酪氨酸羟化酶TH、多巴转运子DAT蛋白表达;RT-PCR法检测Shh、Ptx3、Nurrl基因表达,比较各组差异。结果：各组TH及DAT蛋白均无明显表达,止颤汤组Shh、Ptx3、Nurrl基因表达较其他组显著增高。结论：止颤汤含药血清可改善微环境中神经干细胞向多巴胺能神经元分化的相关因子,有可能促进神经干细胞向多巴胺能神经元分化。     

三七总皂苷在骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞中的调解作用研究

目的:探讨三七总皂苷在骨髓间质干细胞(MSCs)分化为神经元样细胞中的调解作用。方法:①实验材料:成年健康Wister大鼠(雌雄不限),SRF级,体质量(150±30)g;②实验方法:无菌的条件下从大鼠的股骨中分离并继代培养MSCs细胞,当传至第5代时,先用完全培养液[含10μg/L碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)]进行预诱导,再更换无血清培养液(含三七总皂苷0.25g/L)进行诱导,采用免疫组织化学SABC法检测神经丝蛋白(NF-M)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、巢蛋白(nestin)、微管联合蛋白-2(MAP-2)、生长相关蛋白43(GAP-43)以及胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。结果:①采用三七总皂苷诱导后,大多数MSCs呈神经元样细胞分化。经免疫组织化学鉴定,上述细胞表现为NSE、MAP-2和NF染色阳性,呈棕黄色,而GFAP染色阴性。②采用三七总皂苷进行诱导时,MSCs的胞体逐渐增大,并伸出细长的突起,在突起的末端出现分支,有些相邻细胞的突起还成网状连接。③三七总皂苷诱导MSCs转变为类似于神经元样的形态,经免疫组织化学鉴定,大多数细胞表现为NF-M、NSE、nestin、MAP-2和GAP-43染色阳性,并在胞质和突起中有棕黄色的物质,而GFAP染色均为阴性。SABC法显示NSE和MAP-2阳性细胞数分别为(72.64±2.04)%和(73.5±2.17)%。结论:三七总皂苷在体外能使MSCs向神经元样细胞转化,且具有神经元样细胞的特性,这为MSCs治疗相关疾病提供了理论基础。     

中药诱导骨髓间充质干细胞向神经样细胞分化研究进展

用计算机检索中国知网、万方数据库和PubMed中近10年相关文献,检索词分别为“中药、骨髓间充质干细胞、神经样细胞、分化”和“Traditional Chinese medicine,Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells,neural cells,differentiation”,检索式分别为“并”和“and”。共检索到中文文献630篇,英文文献363篇,根据文献筛选标准剔除重复及不规范的文献,共纳入39篇文献。发现中药诱导骨髓间充质干细胞（MSCs）向神经样细胞分化的研究以中药复方制剂、单味中药、中药有效成分或部位的内容为多,这表明目前此方面研究为热点。中药有效成分或部位作用机制的解释更符合现代医学药理理论,而且更易结合并体现现代实验方法和技术的运用。用现代医学药理实验方法与技术研究中药诱导MSCs向神经元样细胞分化的同时,应当深化并体现传统中医药学药性法则、中药炮制方法、辨证论治理论等特色。为用中药作为诱导剂来防治缺血性脑疾病等神经系统疾病提供了一定理论依据。