益肾胶囊对糖尿病肾病大鼠足细胞podocin表达的影响

目的：观察益肾胶囊对糖尿病肾病（DN）大鼠足细胞Podocin表达的影响。方法：采用切除右侧肾脏后腹腔一次性注射STZ的方法建立DN模型,实验分组为：正常对照组、DN模型组、益肾胶囊组、贝那普利组,每组各10只,益肾胶囊组每只大鼠灌胃益肾胶囊625g·kg-1·d-1,贝那普利组每只大鼠灌胃贝那普利10mg·kg-1·d-1,正常对照组及DN模型组每日给予等量的蒸溜水。经过治疗12周后,采用PT-PCR及Westernblot检测肾组织中Podocin表达的情况。结果：实验12周末,DN模型组足细胞Podocin蛋白表达明显低子正常对照组（P〈0.05）。经过益肾胶囊治疗后Podocin表达明显增加,与DN模型组比较（P〈0.05）,与贝那普利组比较两治疗组之间差异无统计学意义。结论：益肾胶囊明显改善DN模型大鼠足细胞Podocin的表达,可能具有一定的足细胞损伤保护作用。     

通络益肾方对高糖诱导肾小球系膜细胞GRP78、Caspase-12表达的影响

目的:观察通络益肾方含药血清对高糖培养下大鼠系膜细胞(MC)增殖及GRP78、Caspase-12 mRNA表达的影响,从内质网应激角度探讨该方的肾保护机制。方法:肾小球MC随机分为6组:正常组、模型组、通络益肾方大、中、小剂量组及西药组,分别培养12 h、24 h、48 h和72 h后,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测MC增殖情况,RT-PCR检测各组MC、GRP78、Caspase-12 mRNA的表达水平。结果:(1)模型组MC在各时间点均明显增殖(P0.05或P0.01);与模型组比较,中药大、中、小剂量组在24 h、48 h、72 h均能抑制MC增殖(均P0.01),其中以大剂量组效果最佳(P0.01);西药组MC增殖在12 h、24 h低于中药大剂量组(均P0.05),而在48 h、72 h两组之间差异无统计学意义(P0.05)。(2)与正常组比较,模型组GRP78 mRNA在24 h、48 h持续升高,而72 h明显下降(P0.05,P0.01)。四个给药组之间GRP78 mRNA比较,48 h时呈西药组中药小剂量组中剂量组大剂量组,72 h时呈西药组中药小剂量组大剂量组(均P0.05,P0.01)。同时各给药组GRP78 mRNA表达呈现出从24 h、48 h到72 h持续缓慢增加的趋势,表明药物可延缓GRP78增幅、延缓ERS而持续发挥其保护细胞的作用。(3)Caspase-12 mRNA结果显示:与正常组比较,模型组48 h、72 h时Caspase-12mRNA明显增加(P0.01),而各给药组Caspase-12 mRNA均较模型组明显下降(P0.05或P0.01),48 h时三个中药组Caspase-12 mRNA表达明显低于西药组(P0.05);72 h时三个中药组呈小剂量组中剂量组大剂量组(P0.01或P0.05),提示casspase-12 mRNA表达与给药剂量呈负相关。结论:高糖条件下大鼠肾小球MC内质网应激明显,通络益肾方可明显抑制MC的增殖,推测其作用机制与延缓GRP78增幅、下调Caspase-12 mRNA的表达有关。     

通络泄浊方对糖尿病肾病大鼠Nephrin和Podocin表达的影响

目的：观察通络泄浊方对糖尿病肾病（DN）大鼠肾组织Nephrin和PodocinmRNA的影响。方法：采用链脲佐菌素（STZ）法制作DN大鼠模型,随机分为正常组、模型组、通络泄浊方组（中药组）、氯沙坦组（西药组）和通络泄浊方＋氯沙坦组（中西药组）。采用荧光定量PCR法检测肾组织Nephrin和Podocin mRNA表达。结果：与模型组比较,3个治疗组Nephrin和Podocin mRNA表达明显升高（P〈0.01）,且中西药组Nephrin和Podocin mRNA水平高于中药组和西药组（P〈0.01）。结论：通络泄浊方通过促进DN大鼠肾组织Nephrin和Podocin mRNA表达而对肾脏起保护作用。     

血竭生肌膏对糖尿病大鼠基质金属蛋白酶类表达的影响

目的:研究血竭生肌膏对糖尿病模型大鼠干预作用,研究其促进糖尿病创面愈合的机制。方法:应用链脲佐菌素腹腔注射法制作糖尿病大鼠模型,通过手术损伤和50%冰醋酸刺激法制作糖尿病性溃疡模型。将大鼠随机分为假手术组、糖尿病性溃疡模型组、中药治疗组、西药对照组,分别给予不同的干预措施,通过免疫组织化学方法检测治疗前后创面基质金属蛋白酶(MMPs)及其抑制物(TIMP)变化。结果:MMP-2在假手术组、模型组、西药组、中药组的表达分别为(0.068 17±0.021198)、(0.139 33±0.012 094)、(0.081 50±0.011 203)、(0.078 83±0.012 073);而MMP-9的表达分别为(0.074 83±0.006 969)、(0.13850±0.028 452)、(0.081 50±0.011 962)、(0.074 83±0.009 663)。假手术组大鼠溃疡创面MMP-2、MMP-9的表达明显低于其它3组(P0.01);模型组大鼠溃疡创面MMP-2、MMP-9的表达明显高于西药组、中药组(P0.01),中药组大鼠溃疡创面MMP-2、MMP-9的表达明显低于西药组(P0.01)。TIMP-1在假手术组、模型组、西药组、中药组的表达分别为(0.081 33±0.013 307)、(0.069 67±0.008 524)、(0.079 17±0.011 974)、(0.132 50±0.011 415)。假手术组大鼠溃疡创面TIMP-1的表达明显高于模型组、西药组、中药组(P0.01),模型组大鼠溃疡创面TIMP-1的表达明显低于西药组和中药组(P0.01),中药组大鼠溃疡创面TIMP-1的表达明显高于西药组(P0.01)。结论:血竭生肌膏通过抑制糖尿病大鼠溃疡创面MMP-2、MMP-9的表达,提高TIMP-1的表达,从而促进糖尿病溃疡创面的愈合。     

温阳活血利水法对足细胞骨架及相关蛋白影响

目的:观察温阳活血利水方含药血清对嘌呤霉素损伤小鼠永生系足细胞组织蛋白酶L(cathepsin L,Cat L)的转录因子Dendrin、膜相关鸟苷酸激酶转化蛋白2(membrane-associated guanylate kinase inverted2,MAGI-2)、下游底物synaptopodin、Rho A mRNA与蛋白表达变化以及足细胞骨架蛋白actin、中间丝分布情况的影响,探讨温阳活血利水方的作用改善肾病综合征蛋白尿及足突融合的机制。方法:体外培养小鼠足细胞,采用嘌呤霉素45 mg/L、中药含药血清或地塞米松与足细胞孵育12 h,荧光定量PCR检测Cat L、synaptopodinmRNA表达变化; western blotting测定MAGI-2、synaptopodin、Cat L、Rho A的蛋白表达;细胞免疫荧光观察Dendrin的分布以及细胞骨架蛋白微丝和中间丝的荧光分布变化。结果:嘌呤霉素作用足细胞12 h后,Dendrin转核比例增多(与正常组对比P 0. 01),MAGI-2、Rho A、synaptopodin蛋白的表达显著性下降(与正常组对比,均P 0. 01),Cat L mRNA与蛋白的表达显著性升高(与正常组对比,均P 0. 01),synaptopodin mRNA表达没有变化(与模型组比较P 0. 05),足细胞伪突回缩变短,中间丝和微丝结构紊乱,杂乱无章排列,结构不清晰。地塞米松、10%与20%含药血清干预后Cat L mRNA与蛋白表达减少,MAGI-2、Rho A、synaptopodin蛋白的表达有所增多,Dendrin转核比例减少(与模型组对比,均P 0. 01),均改善了足细胞骨架结构。结论:温阳活血利水方能减少足细胞受损后Dendrin核内转移,降低胞质cat L水平,从而减少synaptopodin降解,使Rho A表达增加,改善微丝(F-actin)和中间丝的重构,稳定细胞骨架结构,减少足突融合,从而减少蛋白尿。     

益肾泻浊方对慢性肾衰竭大鼠肾细胞凋亡的影响

目的 :研究益肾泻浊方对 5 /6肾切除慢性肾衰竭 (CRF)大鼠肾细胞凋亡的影响。方法 :改良肾大部分切除术建立大鼠 (Wistar)大鼠CRF模型 ,随机分为模型组、西药依那普利组、中药益肾泻浊方组和假手术正常组。运用ClinicalSystem 70 0自动生化分析仪检测大鼠血清尿素氮 (BUN)、肌酐 (Cr) ;末端脱氧核苷酸转移酶介导的生物化的dNTP切口末端标记法 (TUNEL)检测细胞凋亡。结果 :CRF大鼠血清BUN、Cr升高 (P <0 .0 1) ,中药组和西药组血清BUN、Cr均可降低 (P <0 .0 1,P <0 .0 5 ) ;结果提示模型组大鼠肾小球和肾小管 -间质区细胞凋亡增加 (P <0 .0 1) ,西药和中药可减少肾小球和肾小管 -间质细胞凋亡 (P <0 .0 1) ,中药组肾小球细胞凋亡少于西药组 (P <0 .0 5 )。结论 :益肾泻浊方延缓CRF进展的作用机理部分与抑制肾细胞凋亡有关。     

STZ诱导联合高脂饮食及右肾切除糖尿病肾病模型大鼠病程早、中、晚期的界定

目的:探索糖尿病肾病(DN)模型大鼠不同病程阶段(早、中、晚期)的造模时间。方法:采用右肾切除+腹腔注射链脲佐菌素+高脂饮食建立DN大鼠模型(DN模型组),对照组予假手术及普通饲料喂养。观察26周。定期检测大鼠体重、尿微量白蛋白(m Alb)、24 h尿蛋白定量(24 h U-Pr)、血糖、Scr、BUN、肾脏病理等,观察模型大鼠进入DN早、中、晚期的时间。结果:DN模型组大鼠在右肾切除、STZ腹腔注射3天后测尿m Alb升高,24 h U-Pr 30 mg,此时为DN早期阶段(记为0周)。第9周末,DN模型大鼠24 h U-Pr(123. 40±22. 15) mg/24 h,显著高于对照组(9. 05±1. 92) mg/24 h(P 0. 01);电镜下见肾小球GBM增厚(0. 28μm),足细胞结构不清,数目减少,此时进入DN中期阶段。第22周末,DN模型大鼠血BUN(13. 52±1. 26) mmol/L,Scr(73. 42±3. 51)μmol/L,较对照组[BUN(6. 31±1. 44) mmol/L,Scr(39. 25±2. 92)μmol/L]显著升高(P 0. 01)。光镜下见DN大鼠肾小球荒废,毛细血管节段性硬化;电镜下测GBM厚约0. 35μm,足细胞数目明显减少,足突排列紊乱、大片融合。此时进入DN晚期阶段。结论:右肾切除+高脂饲料+STZ腹腔注射3天后大鼠DN造模成功,此时为DN早期。DN成模9周后进入DN中期,22周后进入DN晚期。     

活性维生素D_3对阿霉素诱导的足细胞转分化的干预作用

目的:探讨活性维生素D3对阿霉素诱导的足细胞上皮-间充质细胞转分化(EMT)的干预作用。方法:以体外培养的小鼠足细胞系为研究对象,分六组:正常组(C组)、阿霉素组(即模型组,ADR组)、缬沙坦组(ARB组)、低剂量活性维生素D3组(LVD组)、高剂量活性维生素D3组(HVD组)、缬沙坦+高剂量活性维生素D3组(AHVD组)。干预24 h、48 h后采用RT-PCR检测synaptopodin、P-cadherin、desmin、FSP-1 mRNA的表达。Western Bolt检测synaptopodin、P-cadherin、desmin蛋白的表达。结果:与C组相比,24 h及48 h ADR组synaptopodin、P-cadherin mRNA及蛋白表达均下降(P0.01)、desmin mRNA及蛋白表达上调(P0.01)和FSP-1 mRNA表达上调(P0.01)。与ADR组相比,24 h时ARB组、LVD组、HVD组、AHVD组synaptopodin mRNA表达均升高(P0.01)但四组之间差异无统计学意义。48 h时与ADR组相比,LVD组及HVD组synaptopodin mRNA及蛋白表达均升高(P0.05)。48 h四个药物干预组P-cadherin mRNA及蛋白表达均升高(P0.05)。24 h及48 h四个药物干预组desmin mRNA及蛋白表达均下调(P0.01),FSP-1 mRNA表达均下调(P0.05),但四组之间差异无统计学意义。结论:阿霉素可诱导小鼠足细胞发生EMT,活性维生素D3可通过修复足细胞synaptopodin、P-cadherin及抑制desmin、FSP-1的表达来拮抗足细胞EMT而起到保护足细胞的作用。缬沙坦和活性维生素D3在抑制足细胞EMT方面无协同作用。     

丹参酮ⅡA对嘌呤霉素诱导肾足细胞损伤的保护作用

目的:探讨丹参酮ⅡA对嘌呤霉素诱导肾足细胞骨架蛋白F-actin、synaptopodin损伤的作用及其可能的作用机制。方法:条件永生性人肾足细胞株AB8/13随机分为对照(control)组、嘌呤霉素氨基核苷(puromycin aminonucleoside,PAN)组、不同剂量(10,20,40,80μmol)丹参酮ⅡA干预(tanshinoneⅡA,TⅡA)组。采用细胞免疫荧光法检测各组细胞骨架蛋白F-actin、synaptopodin在足细胞内的分布及形态;通过DAPI染色法观察各组细胞核的变化;免疫印迹法检测各组细胞p-Rac1/Cdc42蛋白的表达量。结果:(1)F-actin、synaptopodin细胞免疫荧光染色:较control组,PAN组F-actin、synaptopodin结构紊乱,胞质回缩,细胞边缘褶皱,凋亡小体增多。各浓度TⅡA组上述情况较PAN组显著改善。(2)p-Rac1/Cdc42蛋白表达量,与对照组相比,PAN组p-Rac1/Cdc42蛋白表达量显著上调。与PAN组相比,TⅡA组p-Rac1/Cdc42蛋白表达量显著下调,且呈浓度依赖方式。结论:TⅡA可改善PAN诱导的足细胞骨架蛋白F-actin、synaptopodin的重排及结构紊乱,对足细胞具有一定保护作用,其机制可能与下调Rac1/Cdc42磷酸化水平,减少足细胞丝状伪足、层状伪足形成,从而稳定PAN诱导的细胞骨架变构有关。     

益肾胶囊对糖尿病肾病模型肾小球足细胞的影响

目的：观察益肾胶囊对糖尿病肾病（DN）大鼠肾组织病理改变及足细胞超微结构的影响。方法：将60只Wis-tar大鼠随机分为4组：正常对照组（对照组）、DN模型组（模型组）、苯那普利组、益肾胶囊组。于注射链脲佐菌素（STZ）后3d起,苯那普利组每日每只灌胃苯那普利3.125mg.kg-1.d-1,益肾胶囊组每日每只灌胃益肾胶囊625mg.kg-1.d-1,对照组及模型组每日给予等量的蒸镏水。各组分别干预12周,观察24h尿蛋白定量、血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）的变化,同时行肾脏病理检查。结果：12周末,模型组大鼠24h尿蛋白定量、Scr、BUN均高于对照组（P〈0.05）。苯那普利组及益肾胶囊组24h尿蛋白定量、Scr、BUN均低于模型组（P〈0.05）。光镜下模型组大鼠肾小球系膜基质增多,系膜区增宽;电镜下模型组大鼠肾小球基底膜增厚,足细胞排列紊乱,数目减少,足突增宽、融合。苯那普利组及益肾胶囊组肾小球基底膜病变减轻,细胞外基质减少,足细胞数目增多,足突融合减轻。结论：益肾胶囊能降低尿蛋白排泄,改善肾功能,并对足细胞有一定的保护作用,从而延缓大鼠糖尿病大鼠肾脏损害。     

益肾汤对糖尿病肾病模型大鼠疗效的实验研究

目的:观察益肾汤对链脲佐菌素诱导的DN大鼠的疗效。方法:将43只健康雄性SD大鼠随机分为正常组10只,行左肾假摘除术,剩余33只,采用左肾摘除+STZ诱导DN大鼠模型。给药干预6周后,观察大鼠的一般情况、24 h尿微量白蛋白(UMA)、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)的变化,光镜下观察肾脏病理变化。结果:与模型组相比,益肾汤组大鼠一般情况明显改善,血糖逐渐降低(P0.05),血清UMA、Scr、BUN显著降低(P0.01),肾组织的病理变化改善。益肾汤组与西药组比较各项指标均差异无统计学意义。结论:益肾汤可以改善DN大鼠肾组织损伤,改善其肾功能,延缓DN发展进程。     

益肾胶囊对高糖环境下小鼠足细胞nephrin、podocin表达的影响

目的:通过探讨益肾胶囊含药血清干预高糖环境下培养的小鼠足细胞nephrin、podocin的表达,以期为益肾胶囊防治糖尿病肾病提供理论依据。方法:将体外培养的小鼠足细胞随机分为7组:正常组、高糖组、等渗组、益肾低剂量组、益肾中剂量组、益肾高剂量组、贝那普利组;按照上述分组培养48 h后,用CCK-8法检测足细胞的增殖;免疫荧光方法检测足细胞nephrin、podocin的表达;用Western blot检测足细胞nephrin、podocin的表达。结果:与正常组相比,高糖组足细胞的增殖明显降低(P0.01),nephrin及podocin的蛋白表达明显下调(P0.01);与高糖组相比,益肾高剂量组与贝那普利组足细胞的增殖显著升高(P0.01),nephrin及podocin的蛋白表达明显上调(P0.01);与贝那普利组相比,益肾高剂量组足细胞的增殖、nephrin及podocin的蛋白表达无明显变化(P0.05)。结论:高糖环境下足细胞nephrin、podocin的表达明显减少;益肾胶囊含药血清可能是通过上调nephrin、podocin的表达,从而保护了肾小球足细胞,其具体机制有待进一步研究。     

法舒地尔对血管紧张素Ⅱ诱导足细胞骨架重构的干预作用

目的 观察ROCK抑制剂法舒地尔对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导小鼠足细胞骨架重构的影响,探讨法舒地尔在足细胞病变中的保护机制.方法 体外采用AngⅡ(]0-7 mol/L)致足细胞损伤模型.不同浓度法舒地尔(10-8、10-7、10-6mol/L)与足细胞预孵育30 min或60 min后,再加入含AngⅡ(10-7 mol/L)的培养基,继续作用24 h.异硫氰酸荧光素(FITC)-鬼笔环肽荧光染色和Western印迹法分析足细胞骨架相关蛋白F-actin和synaptopodin 的变化,并进一步观察细胞内调节骨架装配的Rho-ROCK信号通路的活性,即采用Western印迹法检测Rho激酶1(ROCK-1)及磷酸化肌球蛋白磷酸酯酶靶点亚单位1(MYPT1)表达,代表ROCK的表达及活性.结果 与对照组相比,AngⅡ可明显降低足细胞synaptopodin的表达(P＜0.05),使F-actin重构,而法舒地尔预处理可减轻AngⅡ介导的synaptopodin的下调(P＜0.05)和F-actin的重构.法舒地尔可下调AngⅡ诱导的足细胞ROCK-1 (P＜ 0.05)及MYPT1蛋白表达(P＜0.05).结论 法舒地尔可稳定足细胞的细胞骨架,拮抗AngⅡ对足细胞的损伤.法舒地尔的上述作用可能与细胞内Rho-ROCK信号通路有关.     

益肾胶囊对糖尿病肾病大鼠足细胞损伤的影响

目的：观察益肾胶囊对糖尿病肾病大鼠足细胞损伤的影响。方法：32只大鼠随机分为正常对照组、糖尿病肾病模型组（模型组）、益肾胶囊组、苯那普利组,每组各8只。益肾胶囊组每日每只灌胃益肾胶囊（2.5g·kg^-1·d^-1）,苯那普利组每日每只灌胃苯那普利（2.5g·kg^-1·d^-1）,正常对照组及模型组每日给予等量的蒸镏水。测定血压、24h尿蛋白定量、血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）,并计算内生肌酐清除率（Ccr）;光镜检查肾组织病理变化,电镜及免疫荧光法检测肾组织及尿液中足细胞变化等。结果：实验24周后,模型组大鼠血压、24h尿蛋白定量、BUN、Scr较正常对照组明显增高（均P〈0.05）,益肾胶囊组和苯那普利组可降低糖尿病肾病大鼠血压、24h尿蛋白定量、BUN、Scr（均P〈0.05）等;模型组足细胞podocalyxin蛋白表达明显低于正常对照组（P〈0.05）,益肾胶囊组及苯那普利组大鼠足细胞podocalyxin蛋白表达较模型组显著增加（P〈0.05）;两治疗组之间比较无统计学差异。正常对照组尿液偶见podocalyxin阳性足细胞,模型组尿液足细胞排泄较正常对照组明显增多（P〈0.05）,益肾胶囊组及苯那普利组,大鼠尿液足细胞排泄减少（P〈0.05）。结论：益肾胶囊可通过减轻糖尿病肾病大鼠足细胞损伤而具有一定的肾保护作用。     

中药“消渴汤”对糖尿病肾病大鼠的肾组织中COX-2和LDLr表达的影响

目的:探究中药"消渴汤"对糖尿病肾病(DN)大鼠的肾组织中环氧化酶2(COX-2)和低密度脂蛋白受体(LDLr)表达的影响。方法:选取6周龄健康雄性Wistar大鼠,采用高糖高脂饲料饲养联合一次性腹腔注射STZ方法制备DN大鼠模型,随机分为模型组、缬沙坦组(0.04 g·kg-1·d-1灌胃)、消渴汤低(1.5 g·kg-1·d-1灌胃)、中(3.0 g·kg-1·d-1灌胃)、高剂量(6.0 g·kg-1·d-1灌胃)组,另取正常大鼠为对照组,每组10只,模型组与对照组给予等量生理盐水灌胃,连续灌药12周。12周末,检测空腹血糖(FPG)、收集24 h尿液检测尿微量白蛋白(Um ALB)、尿总蛋白(UTP),采集血清标本检测三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、血肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)水平,采集肾组织光镜下观察肾脏HE染色病理变化,电镜下观察肾小球足细胞病理结构变化,采用免疫印迹(WB)检测肾组织中COX-2、LDLr蛋白表达。结果:与对照组比较,模型组大鼠Um ALB、UTP、FPG、血清TG、Scr、BUN水平、肾组织COX-2和LDLr蛋白表达水平均显著增加(P 0.05);与模型组比较,缬沙坦组、消渴汤低、中、高剂量组大鼠Um ALB、UTP、FPG、血清TG、Scr、BUN水平、肾组织COX-2和LDLr蛋白表达水平均降低(P 0.05);与模型组比较,消渴汤呈剂量依赖性下调大鼠尿Um ALB、UTP、FPG、血清TG、Scr、BUN水平、肾组织COX-2和LDLr蛋白表达水平,肾小球系膜病变及足细胞损伤明显减轻,且高剂量组优于缬沙坦组(P 0.05)。结论:中药"消渴汤"可减轻DN大鼠肾小球足细胞损伤,改善糖尿病肾病大鼠糖脂代谢及提高肾功能情况,这可能与下调肾组织COX-2、LDLr蛋白表达有关。     

滋肾通络方对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞TGF-β1、MMP-2、MMP-9mRNA表达影响的实验研究

目的:观察滋肾通络方含药血清对高糖环境下LPS刺激大鼠肾小球系膜细胞(GMCs)TGF-β1、MMP-2、MMP-9mRNA的影响,并探讨其在防治糖尿病肾病(DN)中的机制。方法:以高糖环境下LPS刺激大鼠肾小球系膜细胞生长建立模型,分为以下8组:(1)正常组;(2)高糖组;(3)高糖+LPS组;(4)苯那普利组;(5)滋肾通络方小剂量组;(6)滋肾通络方中剂量组;(7)滋肾通络方大剂量组。采用RT-PCR技术从分子生物学水平检测各组系膜细胞中TGF-β1、MMP-2及MMP-9mRNA表达。结果:与正常组相比,高糖组、高糖+LPS组TGF-β1mRNA的表达明显升高(P<0.01),MMP-2及MMP-9mRNA的表达明显降低(P<0.01);与模型组相比较,滋肾通络方大、中、小剂量组对大鼠肾小球GMCs TGF-β1mRNA表达显著降低(P<0.05),MMP-2、MMP-9mRNA表达明显升高(P<0.05)。结论:滋肾通络方含药血清能够抑制大鼠肾小球GMCs TGF-β1mRNA的表达,增加MMP-2、MMP-9mRNA的表达,从而通过增加肾小球系膜细胞细胞外基质的降解以延缓DN进展。     

陈氏益气活血化湿方通过调控足细胞自噬减轻PAN诱导的足细胞损伤

目的:本研究旨在观察陈氏益气活血化湿方水溶剂对氨基核苷嘌呤霉素(puromycin aminonucleoside,PAN)诱导足细胞损伤的保护作用,并探讨这一作用与足细胞自噬(autophagy)的关系。方法:体外培养永生化小鼠足细胞系作为研究对象,采用细胞增殖检测试剂盒(CCK-8法)、western bloting法检测不同浓度PAN对足细胞的存活率的影响,建立PAN诱导的足细胞损伤模型。后将足细胞分为:正常组、PAN组、PAN+中药低剂量组、PAN+中药高剂量组,采用western bloting法检测足细胞p-mTOR、mTOR、LC3、synaptopodin蛋白的表达情况。结果:(1) CCK-8、western bloting检测结果显示50μg/ml浓度时P-mTOR表达最明显(P 0. 001),确定为造模浓度;(2) PAN造成足细胞p-mTOR表达升高,LC3II、synaptopodin蛋白表达降低(P 0. 05),mTOR磷酸化水平升高,足细胞自噬功能受到抑制,足细胞骨架蛋白表达降低(P 0. 01),足细胞受损;(3)陈氏益气活血化湿方水溶剂处理细胞后p-mTOR表达降低,LC3II、synaptopodin蛋白表达升高(P 0. 05),且高剂量组效果优于低剂量组。结论:陈氏益气活血化湿方水溶剂可能是通过上调足细胞自噬功能,发挥足细胞保护作用。     

知柏地黄汤对解脲脲原体感染模型大鼠精子线粒体NADH脱氢酶mRNA、ATP合成酶mRNA表达的影响

目的研究知柏地黄汤对解脲脲原体(UU)感染模型大鼠精子线粒体NADH脱氢酶mRNA、ATP合成酶mRNA表达的影响。方法取体质量为(220±10)g雄性SD大鼠80只,随机分成假手术组、模型组、中药组(知柏地黄汤)、西药组(强力霉素)、中西药组(知柏地黄汤+强力霉素),造模成功后,假手术组与模型组给予等量的生理盐水灌胃,治疗组(中药组、西药组和中西药组)给予相应的药物灌胃,连续用药21d。末次给药24h后取标本,采用常规精液检测法检测精液质量,RT-PCR法检测精子NADH脱氢酶mRNA、ATP合成酶mRNA表达。结果假手术组、模型组、中药组、西药组、中西药组大鼠精子NADH脱氢酶mRNA表达水平分别为0.44750±0.017078、0.24750±0.015000、0.34250±0.017078、0.36500±0.012910、0.39400±0.012100;ATP合成酶mRNA表达水平分别为0.36500±0.012910、0.27250±0.009574、0.35250±0.018930、0.34750±0.017078、0.39500±0.012910;直线速度分别为(12.93±1.08)μm/s、(6.24±1.13)μm/s、(12.78±0.92)μm/s、(10.43±1.32)μm/s、(13.54±1.16)μm/s;平均速度分别为(20.32±2.08)μm/s、(12.48±3.54)μm/s、(20.48±2.16)μm/s、(17.12±3.15)μm/s、(21.72±1.83)μm/s。中西药组NADH脱氢酶mRNA、ATP合成酶mRNA表达水平与模型组、中药组、西药组比较均有上升,差异均有统计学意义(P0.01),中西药组精子运动速度与模型组、中药组、西药组比较均上升,差异均有统计学意义(P0.01)。结论 UU感染大鼠模型精子运动速度及NADH脱氢酶mRNA、ATP合成酶mRNA表达水平变化,提示其可能是UU感染所致不育症的机制之一。     

N-乙酰半胱氨酸对糖尿病肾病大鼠足细胞的保护作用

目的：探讨N-乙酰半胱氨酸（NAC）对糖尿病肾病（DN）大鼠足细胞的保护作用。方法：制备DN大鼠模型,将动物随机分为正常对照组、DN组和NAC组。8周后观察尿蛋白排泄量,免疫荧光方法和Western blotting检测肾皮质nephrin和podocin蛋白表达,透射电镜检测足细胞超微结构变化。结果：（1）与正常对照组比较,DN组和NAC组尿白蛋白排泄率增多（P〈0.01）,nephrin和podocin蛋白表达减少（P〈0.01或P〈0.05）和肾脏病理病变明显;（2）与DN组比较,NAC组尿蛋白排泄减少（P〈0.01）,nephrin和podocin蛋白表达较高（P〈0.01或P〈0.05）和足细胞的病变较轻。结论：NAC对DN大鼠肾脏保护作用,其部分机制与上调nephrin和podocin蛋白表达及改善足细胞病变有关。     

益肾通络方对膜性肾病大鼠肾组织中乙酰肝素酶、转化生长因子β_1表达的影响

目的:观察益肾通络方对膜性肾病(MN)大鼠肾组织中乙酰肝素(Hpa)、转化生长因子β1(TGF-β1)的影响。方法:将SD大鼠随机分为正常组、模型组、贝那普利组、中药组,各组按相应剂量灌胃,于第9周末观察24 h尿蛋白定量、血清总蛋白(TP)、白蛋白(Alb);免疫荧光、电镜及免疫组化法检测各组大鼠Hpa、TGF-β1在肾组织的表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠出现大量蛋白尿,血清TP、Alb均明显降低,血清TC、TG均明显升高,肾脏病理出现损害,肾小球内Hpa、TGF-β1表达显著增强(P0.05);与模型组相比较,各治疗组24 h尿蛋白定量,总胆固醇(TC)及三酰甘油(TG)均明显降低,血清TP、Alb均明显升高,肾脏病理损害较轻,肾小球内Hpa、TGF-β1表达减少(P0.05)。中药组与贝那普利组比较差异有统计学意义(P0.05),中药组优于西药组。结论:益肾通络方可显著降低MN大鼠尿蛋白、提高血浆蛋白,改善血脂代谢,能够抑制Hpa、TGF-β1在肾组织中的表达,抑制膜性肾病大鼠肾小球基底膜(GBM)免疫复合物的沉积以及基底膜的增厚,促进受损的肾小球基底膜修复,从而减轻肾脏损伤,延缓肾脏慢性病理进展。