萝卜硫素通过Traf6/TAK1通路调节肾小管上皮细胞间充质转分化

目的探讨萝卜硫素对脂多糖(LPS)诱导的肾小管上皮细胞(HK-2)间充质转分化的影响及其对Traf6/TAK1信号通路活化的作用。方法体外培养HK-2细胞,并将其分为正常组、LPS诱导组(100 ng/mL)、LPS+萝卜硫素低剂量组(10μmol/L)、LPS+萝卜硫素中剂量组(20μmol/L)、LPS+萝卜硫素高剂量组(40μmol/L)。培养12、24、48 h后,采用CCK8法检测细胞增殖情况,ELISA法检测细胞上清中IL-6、IL-1β及TNF-α含量,Western blot方法检测E-cadherin、α-SMA、Traf6、TAK1及p-TAK1蛋白的表达量。结果LPS诱导组相对于正常组HK-2细胞增殖能力、炎症因子(IL-6、IL-1β和TNF-α)水平、蛋白(α-SMA、Traf6及p-TAK1)表达量均升高,而E-cadherin蛋白表达水平降低;然而不同浓度萝卜硫素处理细胞后细胞增殖能力、炎症因子分泌量、蛋白(α-SMA、Traf6及p-TAK1)表达量均降低,E-cadherin蛋白表达水平升高,表现一定剂量依赖性,差异有统计学意义(P<0.05)。结论萝卜硫素能够抑制LPS诱导的HK-2细胞增殖能力及炎症因子的产生,发挥抑制肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转变的纤维化过程,其机制可能与抑制Traf6/TAK1信号通路活化有关。     

萝卜硫素改善LPS诱导肾小管上皮细胞损伤的作用机制研究

目的:探讨萝卜硫素对脓毒症肾损伤的影响和可能机制。方法:体外培养肾小管上皮细胞HK-2，用不同剂量(5、10、20μmol/L)萝卜硫素孵育24 h后，再用LPS干预8 h。酶联免疫吸附法检测IL-6、IL-1β和TNF-α表达，流式细胞术检测凋亡，蛋白质印迹法检测cleaved-caspase3和cleaved-caspase9蛋白表达，qRT-PCR检测miR-22-3p表达。转染miR-22-3p模拟物或抑制剂至HK-2细胞后，用LPS干预8 h或用20μmol/L萝卜硫素孵育24 h后再用LPS干预8 h，上述相同方法检测IL-6、IL-1β和TNF-α表达、细胞凋亡及cleaved-caspase3和cleaved-caspase9蛋白表达。结果:与LPS组比较，萝卜硫素降低LPS诱导的HK-2细胞中IL-6、IL-1β和TNF-α水平、细胞凋亡率及cleaved-caspase3和cleaved-caspase9蛋白表达，增加miR-22-3p表达。上调miR-22-3p降低LPS诱导的HK-2细胞IL-6、IL-1β和TNF-α水平、细胞凋亡率及cleaved-caspa...     

党参多糖抑制高糖诱导的人肾小管上皮细胞中炎性和纤维化成分的表达

目的:探讨党参多糖对高糖诱导的人肾小管上皮细胞中炎性和纤维化成分表达的影响。方法:采用MTT法检测不同剂量党参多糖对人肾小管上皮细胞(HK-2)的影响,筛选加药剂量,HK-2细胞随机分为对照(Mock)组、高糖(HG)组、高渗(OSM)组和高糖+党参多糖(HG+CPP)组。采用ELISA分析IL-1β和IL-6的含量,Western blot检测ColⅣ、FN、α-SMA、E-cadherin、Vimentin、PI3K、p-PI3K、AKT和p-AKT的表达水平。结果:当党参多糖剂量大于150μg/ml时对HK-2细胞具有毒性作用,选择100μg/ml的党参多糖作为后续研究加药标准剂量。与Mock组比较,HG组IL-1β和IL-6的含量明显增多(P<0.05),ColⅣ、FN、α-SMA、Vimentin、p-PI3K和p-AKT的表达水平明显上调(P<0.05),而E-cadherin的表达明显下调(P<0.05);党参多糖干预能够逆转高糖诱导的以上各指标;与Mock组比较,OSM组中以上指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论:党参多糖能够抑制高糖诱导的...     

异丙酚对LPS诱导BV-2小胶质细胞IL-1β和TNF-α释放的影响及TLR4在其中的作用

目的 评价异丙酚对LPS诱导BV-2小胶质细胞IL-1β和TNF-α释放的影响及Toll样受体4(TLR4)在其中的作用.方法 将体外培养的BV-2小胶质细胞接种于96孔培养板中,采用随机数字表法,将其随机分为4(n=12):对照组、LPS组、异丙酚组和LPS+异丙酚组.LPS组加入LPS1μg/ml孵育24h;异丙酚组加入异丙酚30 μmol/L孵育24 h;LPS+异丙酚组同时加入LPS 1 μg/ml和异丙酚30 μmol/L孵育24h.于孵育6h时,采用ELISA法检测细胞上清液TNF-α浓度,以此反映TNF-α的释放量,采用RT-PCR法测定TLR4 mRNA表达;于孵育24h时,采用ELISA法检测细胞上清液IL-1β浓度,以此反映IL-1β的释放量,采用Western Blot法检测TLR4蛋白表达.结果 与C组比较,LPS组和LPS+异丙酚组IL-1β和TNF-α的释放量升高,TLR4 mRNA及其蛋白表达上调(P＜0.05);与LPS组比较,LPS+异丙酚组IL-1β和TNF-α的释放量降低,TLR4 mRNA及其蛋白表达下调(P＜0.05).结论 异丙酚可抑制LPS诱导BV-2小胶质细胞IL-1β和TNF-α的释放,其机制与抑制TLR4的表达有关.     

miR-204-5p对高糖诱导的人肾小管上皮细胞炎性因子和纤维化因子表达影响及机制研究

目的:探讨miR-204-5p对高糖(HG)诱导的人肾小管上皮细胞HK-2炎性因子和纤维化因子表达影响及可能机制。方法:体外培养HK-2细胞,分为对照组(Con组)、高糖组(HG组)、HG+NC-mimics组、HG+miR-204-5p mimics组、HG+anti-NC组、HG+anti-miR-204-5p组、HG+pcDNA-LDLR组和HG+miR-204-5p-mimics+pcDNA-LDLR组,RT-qPCR法检测细胞中miR-204-5p表达水平,试剂盒检测IL-6和TNF-α水平,Western Blot法检测细胞中LDLR、α-SMA和Fibronectin蛋白表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证miR-204-5p与LDLR靶向调控关系。结果:与Con组比较,HG组HK-2细胞中miR-204-5p表达降低(P<0.05),IL-6和TNF-α水平升高(P<0.05),LDLR、α-SMA和Fibronectin的蛋白表达升高(P<0.05)。与HG+NC-mimics组比较,HG+miR-204-5p mimics组HK-2细胞中IL-6和...     

脂多糖诱导的ATDC5细胞中MicroRNA表达

[目的]探索脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导ATDC5细胞中miRNA表达的影响。[方法]在含有0μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、15μg/ml的LPS培养液处理ATDC5细胞24h。采用CCK-8试剂检测细胞的增殖活力,RT-qPCR检测炎症因子和miRNA的表达,Western Blot检测炎症因子蛋白表达。[结果]随LPS剂量增加,细胞增殖活力显著下降,差异具有统计学意义(P0.05)。随LPS剂量增加,IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α的mRNA和蛋白表达水平均显著增加,差异具有统计学意义(P0.05)。随LPS剂量增加,ATDC5细胞中miRNA-23、miRNA-145、miRNA-148、miRNA-183、miRNA-192表达明显升高,与LPS剂量呈正相关(P0.05),而miRNA-191表达显著下降,与LPS剂量呈负相关(P0.05)。[结论] LPS处理显著抑制ATDC5细胞增殖活力,增加炎性因子表达,改变miRNA表达。     

异丙酚对脂多糖诱导大鼠腹腔巨噬细胞Toll样受体-4 mRNA表达的影响

目的 观察异丙酚对脂多糖（LPS）诱导大鼠腹腔巨噬细胞Toll样受体-4（TLR-4）mRNA表达的影响，探讨异丙酚抑制LPS诱导白细胞介素-6（IL-6）和肿瘤坏死因子-α（TNF—α）产生的机制。方法 雄性Wistar大鼠32只，处死后分离腹腔巨噬细胞，随机分为4组（n=8）：A组（阴性对照组）；B组LPS（终浓度为1μg／ml）／加入巨噬细胞中；C组LPS（终浓度为1μg／ml）＋异丙酚（终浓度为1μg／ml）加入巨噬细胞中；D组LPS（终浓度为1μg／ml）＋异丙酚（终浓度为5μg／ml）加入巨噬细胞中。细胞培养12h后。用ELISA方法检测培养上清液中IL-6、TNF-α的浓度，用RT-PCR方法检测TLR-4mRNA的表达水平。结果 与A组相比，B组IL-6、TNF-α和TLR-4m RNA水平均增加，C组IL-6、TLR-4m RNA水平升高（P〈0．01）；与B组相比，C组、D组IL-6、TNF-α和TLR-4m RNA水平降低（P〈0．05或〈0．01）。结论 异丙酚通过下调TLR-4m RNA的表达水平，从而一定程度上抑制了LPS诱导大鼠腹腔巨噬细胞，TNF-α和IL-6的产生。     

普罗布考抑制氧化低密度脂蛋白诱导的人肾近曲小管上皮细胞转分化的作用及机制研究

目的研究普罗布考对氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,Ox-LDL)诱导的人肾近曲小管上皮细胞HK-2转分化的保护作用,并探讨凝集素样氧化低密度脂蛋白受体1(lectin-like oxidized low-density lipoprotein receptor-1,LOX-1)及氧化应激在其中的作用和相互关系。方法采用不同浓度Ox-LDL(0~100μg/ml)孵育HK-2细胞,并予普罗布考(20μmol/L)和LOX-1抑制剂多聚肌苷酸(250μg/ml)干预。采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法检测细胞增殖情况,用DCFH-DA法检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)活性,生化比色法检测一氧化氮(nitric oxide,NO)浓度,Western blot检测E-钙粘素(cadherin)、α平滑肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、LOX-1、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(Nicotinamide adenine dinucleotide 2-phosphate reduced tetrasodium salt,NADPH)氧化酶4(NOX4)表达。结果 12.5~200μg/ml浓度范围内的Ox-LDL对HK-2细胞的增殖无明显影响,25~100μg/ml的Ox-LDL以浓度依赖方式促进HK-2细胞LOX-1、α-SMA蛋白表达上升,E-cadherin下降。而多聚肌苷酸、普罗布考能使LOX-1、α-SMA蛋白表达抑制,E-cadherin表达上调。50μg/ml的Ox-LDL能促进NOX4表达上调,ROS活性增加(451.5μg/ml比839.8μg/ml,P0.05),NO含量略增加(46.0μmol/L比46.2μmol/L),但无统计学意义(P0.05)。而多聚肌苷酸、普罗布考能使NOX4表达下调,ROS活性下降,但对NO浓度无明显影响。结论Ox-LDL可诱导HK-2细胞转分化,其机制可能与其结合LOX-1促进氧化应激有关,而普罗布考可以通过降低LOX-1,抑制氧化应激损伤,从而延缓HK-2细胞转分化的进程。     

异丙酚对LPS诱导中性粒细胞Toll样受体2和Toll样受体4表达的影响

目的 探讨异丙酚对内毒素(LPS)诱导中性粒细胞Toll样受体2(TLR2)和TLR4表达的影响.方法 健康志愿者6名,年龄20～35岁,各采集外周静脉血样50 ml,加入20 U/ml肝素抗凝,分离提纯中性粒细胞,制备细胞悬液,然后随机分为6组,每组6皿:对照组(C组)不给予任何药物,置于37℃、5%CO_2培养箱中培养12 h;异丙酚脂质溶剂intralipid组(I组)、异丙酚组(P组)和LPS组(L组):分别加入intralipid(终浓度为5 μg/ml)、异丙酚(终浓度为5 μg/ml)或LPS(终浓度为1μg/ml),置于37℃、5%CO_2培养箱中孵育12 h;intralipid+LPS组(IL组)和异丙酚+LPS组(PL组)先分别加入intralipid(终浓度为5 μg/ml)或异丙酚(终浓度为5 μg/ml)后,置于37℃、5%CO_2培养箱中孵育20 min,然后加入LPS(终浓度为1μg/ml),置于37℃、5%CO_2培养箱孵育12 h.采用流式细胞仪测定中性粒细胞膜TLR2和TLR4的表达;采用荧光定量PGR检测中性粒细胞膜TLR2 mRNA和TLR4 mRNA的表达;采用ELISA法测定培养上清液TNF-α和IL-8的浓度.结果 与C组比较,I组和P组TLB2和TLR4的表达、1NF-α和IL-8L-8的浓度差异无统计学意义(P>0.05),L组和IL组TLR2和TLR4的表达上调,L组TNF-α和IL-8L-8的浓度升高,IL组IL-8浓度升高(P<0.05);与L组比较,IL组TLR2和TLR4的表达、TNF-α和IL-8L-8的浓度差异无统计学意义(P>0.05),PL组TLR2和TLR4的表达下调,TNF-α和IL-8L-8的浓度降低(P<0.05).各组TLR2 mRNA和TLR4 mRNA的表达差异无统计学意义(P>0.05).结论 异丙酚可下调LPS诱导的中性粒细胞TLR2和TLR4的表达,从而抑制炎性反应.     

LINC00667调控NF-κB信号通路对高糖诱导的人近端肾小管上皮细胞EMT的影响

目的:探讨LINC00667对高糖诱导的人近端肾小管上皮细胞间充质转化(EMT)及核因子κB(NF-κB)信号通路的影响。方法:将人肾小管上皮细胞HK-2分为正常对照(NC)组、高糖(HG)组、HG+si-con组、HG+si-LINC00667组、HG+si-LINC00667+PBS组、HG+si-LINC00667+TNF-α组。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测LINC00667的表达;酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒检测白细胞介素1β(IL-1β)和转化生长因子(TGF-β_1)含量;蛋白质印记(Western blot)检测钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)以及NF-κB信号通路相关蛋白的表达。结果:与NC组比较,HG组HK-2细胞LINC00667、Vimentin和α-SMA表达升高,E-cadherin表达降低,细胞培养液上清中IL-1β和TGF-β_1含量升高,NF-κB信号通路激活(P0.05)。与HG+si-con组比较,HG+si-LINC00667组HK-2细胞Vimentin和α-SMA表达降低,E-cadherin表达升高,细胞培养液上清中IL-1β和TGF-β_1含量降低,NF-κB信号通路受到抑制(P0.05)。与HG+si-LINC00667+PBS组比较,HG+si-LINC00667+TNF-α组HK-2细胞NF-κB信号通路激活,Vimentin和α-SMA表达升高,E-cadherin表达降低,细胞培养液上清中IL-1β和TGF-β_1含量升高(P0.05)。结论:沉默LINC00667可抑制高糖诱导的人近端肾小管上皮细胞EMT,抑制炎症反应,其机制与抑制NF-κB信号通路有关。     

右美托咪啶对脂多糖诱导大鼠外周血单核细胞Toll样受体4mRNA表达的影响

目的 探讨右美托咪啶对脂多糖(LPS)诱导大鼠外周血单核细胞Toll样受体4(TLR4)mRNA表达的影响.方法 健康雄性Wistar大鼠40只,取外周血分离培养单核细胞,采用随机数字表法,将其随机分为5组(n=8),A组:阴性对照;B组:单核细胞中加入LPS(终浓度为1μg/ml);C组:单核细胞中加入LPS(终浓度为1μg/ml)+右美托咪啶(终浓度为0.5 ng/ml);D组:单核细胞中加入LPS(终浓度为1μg/ml)+右美托咪啶(终浓度为5.0 ng/ml);E组:单核细胞中加入LPS(终浓度为1μg/ml)+右美托咪啶(终浓度为50.0 ng/ml).孵育24 h后,收集上清液,采用ELISA法测定TNF-α、IL-1β和IL-6的浓度,采用RT-PCR法测定TLR4 mRNA的表达.结果 与A组比较,B组TNF-α、IL-1p、IL-6的浓度升高,TLR4 mRNA表达上调(P＜0.01);与B组比较,C组、D组和E组TNF-α、IL-1β、IL-6的浓度降低,TLR4 mRNA表达下调(P＜0.05或0.01);与C组比较,D组和E组TNF-α、IL-1β、IL-6的浓度降低(P＜0.01),TLR4 mRNA表达差异无统计学意义(P＞0.05);D组和E组各指标比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 右美托咪啶可通过下调TLR4 mRNA表达,抑制TLR4的合成,从而抑制LPS诱导大鼠外周血单核细胞TNF-α、IL-1β和IL-6的生成与释放.

Abstract：

Objective To investigate the effects of different concentrations of dexmedetomidine on the expression of Toll-like receptor 4 (TLR4) mRNA in rat peripheral blood monocytes exposed to lipopolysaccharide ( LPS ). Methods Peripheral blood monocytes isolated from male Wistar rats were seeded in 24-well plate in RPMI 1640 liquid culture medium in CO2 incubator at 37 ℃ and 5% CO2 for 2 h, and were randomly divided into 5 groups ( n = 8 each): group A negative control; group B was exposed to LPS 1 μg/ml and C, D and E groups were exposed to LPS 1 μg/ml + dexmetomidine 0.5, 5.0 and 50.0 ng/ml respectively. The monocytes were then incubated for 24 h. The concentrations of TNF-α, IL-1β and IL-6 in the supernatant of the cultured monocytes were detected by ELISA. The expression of TLR4 mRNA in the monocytes was detected by RT-PCR.Results Exposure to LPS significantly increased the expression of TLR4 mRNA and the concentrations of TNF-α, IL-1β and IL -6 in group B as compared with group A ( P ＜ 0.01 ). Dexmedetomidine attenuated the LPS-induced increase in the expression of TLR 4 mRNA and the concentrations of TNF-α, IL-1β and IL-6 in a dose-dependent manner ( P ＜0.05or 0.01 ). Conclusion Dexmedetomidine can inhibit the synthesis of TLR4 and inhibit the secretion and dilivery of TNF-α, IL-1β and IL-6 by down-regulating the gene expression of TLR4 in rat peripheral blood monocytes exposed to LPS.     

右美托咪定对脓毒症大鼠脑组织炎性反应的影响

目的 评价右美托咪定对脓毒症大鼠脑组织炎性反应的影响.方法 健康雄性SD大鼠72只,10周龄,体重250 ～ 280 g,采用随机数字表法,将其分为4组(n=18):对照组(C组)、脓毒症组(LPS组)、注射用水组(DW组)和右美托咪定组(DEX组).LPS组、DW组和DEX组腹腔注射LPS5mg/kg(溶于1 ml生理盐水中)制备大鼠脓毒症模型;C组腹腔注射生理盐水1ml.DW组侧脑室注射注射用水20μl,DEX组侧脑室注射右美托咪定3μg/kg(溶于20μl注射用水中).分别于开始给药后1、2和6h时处死6只大鼠,取海马组织,采用ELISA法测定TNF-α和IL-6的含量,采用RT-PCR法测定TLR4 mRNA的表达.结果 与C组比较,LPS组开始给药后各时点海马组织IL-6和TNF-α的含量升高(P＜0.05);与LPS组比较,DW组开始给药后各时点海马组织IL-6和TNF-α的含量差异无统计学意义(P＞0.05),TLR4mRNA表达上调(P＜0.05);与DW组比较,DEX组开始给药后各时点海马组织IL-6和TNF-α的含量降低,开始给药后2和6h时海马组织TLR4 mRNA表达下调(P＜0.05).结论 右美托咪定可减轻脓毒症大鼠脑组织炎性反应,可能与下调TLR4 mRNA的表达有关.     

二十碳五烯酸对白蛋白诱导肾小管上皮细胞转分化的影响

目的 探讨二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid,EPA)对人白蛋白诱导的人近端肾小管上皮细胞(HK-2)发生转分化的干预作用.方法 体外培养人HK-2细胞,随机分为6组:A组,空白对照组(未加任何刺激物);B组,单纯EPA组(加入30 μmol/L EPA);C组,血白蛋白(albumin,Alb)诱导组(加入5 mg/ml Alb);D组,低剂量EPA干预组(5mg/ml Alb+ 10 μmol/L EPA);E组,中剂量EPA干预组(5mg/ml Alb+ 30 μmol/L EPA);F组,高剂量EPA干预组(5 mg/ml Alb+ 50μmol/L EPA).细胞免疫荧光检测E钙黏蛋白(E-cadherin)、α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle ac-tin,α-SMA)的表达;ELISA法检测纤维连接蛋白(fibronectin,FN)的水平;采用RT-PCR检测转化生长因子β1(transforming growth factor β1,TGF-β1)的mRNA表达.结果 与A组比较,B组TGF-β1mRNA、α-SMA、FN、E-cadherin表达均无统计学差异(P＞0.05);C组TGF-β1 mRNA、α-SMA、FN较其他各组表达明显增高(P＜0.05),而E-cadherin表达明显下降(P＜0.05).与C组比较,D组、E组、F组TGF-β1 mRNA、α-SMA、FN表达逐渐下降,两组间比较差异有统计学意义(P＜0.05);E-cadherin的表达逐渐增高,各组间比较差异有统计学意义(P＜0.05).提示EPA可显著抑制Alb刺激人肾小管上皮细胞表达E-cadherin、α-SMA,同时下调上清液中FN水平,且其抑制作用的强弱与EPA浓度密切相关.EPA还明显下调了Alb刺激后TGF-β1的表达.结论 一定浓度的人白蛋白可以诱导体外培养的HK-2细胞发生转分化;EPA可一定程度上抑制白蛋白诱导HK-2发生转分化过程,且呈剂量依赖性.     

丙泊酚对脂多糖引起的Ana-1巨噬细胞炎症损伤的影响

目的研究丙泊酚对脂多糖(LPS)引起的小鼠巨噬细胞Ana-1炎症损伤的影响。方法用脂多糖处理Ana-1细胞作为细胞损伤模型,将培养的Ana-1细胞分成六组:对照组(C组)、LPS处理组(L组)、LPS+丙泊酚10μmol/L处理组(LP1组)、LPS+丙泊酚20μmol/L处理组(LP2组)、LPS+丙泊酚40μmol/L处理组(LP3组)、LPS+丙泊酚80μmol/L处理组(LP4组)。采用MTT法测定细胞的存活率,并测定丙泊酚作用前后IL-1β、IL-6、TNF-α含量。结果 L组Ana-1细胞的存活率明显低于C组,而LP1、LP2、LP3、LP4组可明显提高Ana-1细胞的存活率,且对细胞存活率的提高程度呈剂量递增的效应关系(P0.01);L组IL-1β、IL-6、TNF-α的含量明显高于C组,而LP1、LP2、LP3、LP4组可明显降低损伤细胞IL-1β、IL-6、TNF-α的含量(P0.01),且其降低的程度呈剂量效应关系(P0.01)。在本实验所选择剂量范围内,LP4组的保护效果最佳。结论丙泊酚通过降低炎症损伤来减轻LPS诱导的Ana-1细胞损伤。     

不同静压力下脂多糖刺激牙周膜成纤维细胞对炎症相关因子表达的影响

目的:探讨牙周炎中牙龈卟啉单胞菌LPS(Porphyromonas gingivalis Lipopolysaccharide,Pg.LPS)和人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblast,HPDLF)与正畸炎症相关的牙根吸收作用机制。方法:取4~6代体外培养的HPDLF,MTT法检测1~10μg/ml Pg.LPS对HPDLF增殖活性的影响,再选择最佳浓度作用于HPDLF,加载0~5g/cm^2静压力24h,实验组分为静压力组和Pg.LPS+静压力组,通过qRT-PCR和ELISA检测HPDLF白细胞介素17(interleukin 17,IL-17)及白细胞介素6(interleukin 6,IL-6)的mRNA和蛋白表达水平。结果:①HPDLF增殖在1~4μg/ml Pg.LPS刺激时随浓度增加而增加,在5~7μg/ml随浓度增加而减少,8~10μg/ml细胞增殖明显受到抑制;②两组中IL-17、IL-6的表达量随静压力值增加而增强,相同力值下对照组的IL-17、IL-6表达量高于实验组,差异有统计学意义。结论:Pg.LPS浓度过高能抑制HPDLF增殖,而适当的浓度则促进其增殖;Pg.LPS和静压力均能刺激HPDLF产生炎症相关因子,参与正畸炎症相关牙根吸收发生发展的过程。     

脂多糖、TNFα、IL-6、地塞米松和胰岛素对人乳腺癌MCF7细胞GPR54表达的影响

目的:GPR54是下丘脑神经元调控下丘脑-垂体-性腺轴功能的门控,本文研究不同浓度脂多糖(LPS)、肿瘤坏死因子α(TNFα)、白细胞介素6(IL-6)、地塞米松和胰岛素对人乳腺癌MCF7细胞GPR54 mRNA及蛋白表达的影响。方法:培养MCF7细胞,用LPS(10μg/ml和20μg/ml)、TNFα(20 ng/ml和100 ng/ml)、IL-6(10 ng/ml和20 ng/ml)、地塞米松(10-6mol/L和10-7mol/L)和胰岛素(0.01 IU/L和0.1 IU/L)干预72 h,评价干预6、24、48、72 h后GPR54 mRNA(实时荧光定量PCR)和蛋白表达量(Western印迹)的变化。结果:和对照组相比,LPS(10μg/ml和20μg/ml)、TNFα(20 ng/ml和100 ng/ml)、IL-6(10 ng/ml和20 ng/ml)、地塞米松(10-6mol/L和10-7mol/L)和胰岛素(0.01 IU/L和0.1 IU/L)均显著增加GPR54 mRNA(P均0.05)和蛋白表达。结论:LPS、TNFα、IL-6、地塞米松和胰岛素显著增加MCF7细胞GPR54的表达,提示这些炎症因子和激素可能通过调节GPR54水平变化进而影响性腺轴功能。     

白细胞介素6刺激人近端肾小管上皮细胞-α-平滑肌肌动蛋白的表达的机制研究

目的观察白细胞介素6（IL-6）在体外对人近曲肾小管上皮细胞株（HK-2）信号转导因子和转录活化因子1（STAT1）酪氨酸磷酸化的影响,探讨IL-6刺激人近端肾小管上皮细胞α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达的分子机制。方法采用流式细胞仪检测10、25、50 ng/mL浓度的IL-6刺激48 h后α-SMA阳性细胞表达百分数;采用Western blot方法检测0、5、10、25、50 ng/mL的IL-6刺激30 min以及IL-6（25 ng/mL）刺激0、15min、30min、60min、120min后P-STAT1蛋白的表达水平;同样方法检测,AG490预处理细胞4 h,IL-6（25 ng/mL）分别刺激30 min后及48 h后P-STAT1和α-SMA蛋白表达水平。结果与刺激前比较,IL-6以剂量依赖方式上调α-SMA阳性细胞表达百分数;与刺激前比较,IL-6以时间和剂量依赖方式上调HK-2细胞P-STAT1的表达,高峰发生在30 min;AG490部分抑制STAT1激活,下调α-SMA蛋白的表达。结论HK-2细胞中,信号蛋白STAT1酪氨酸磷酸化介导了IL-6诱导的α-SMA的表达,参与了肾间质纤维化的发病过程。     

水飞蓟宾对脂多糖作用下大鼠腹膜间皮细胞整合素连接激酶、TGF-β1及α-SMA表达的影响

目的:研究水飞蓟宾(SB)对脂多糖(LPS)作用下大鼠腹膜间皮细胞(RPMC)整合素连接激酶(ILK)、转化生长因子β1(TGF-β1)及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响。方法:胰蛋白酶消化法原代及传代培养RPMC,经鉴定后第2代用于实验。细胞随机分组:(1)正常对照组;(2)不同浓度的LPS(1mg/L、10mg/L、100mg/L)作用24h组;(3)不同时间LPS组:10mg/LLPS分别作用于RPMC12h、24h、48h、72h;(4)水飞蓟宾组:不同浓度的SB(5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml)分别预孵育2h,加入10mg/LLPS再作用24h。实时定量PCR检测ILK及α-SMAmRNA的表达;Western印迹法检测ILK蛋白表达;ELISA法检测细胞培养上清液中TGF-β1的表达。结果:与正常对照组相比,LPS可刺激RPMCILKmRNA和蛋白的表达增高,且在一定范围内呈时间和剂量依赖性(P<0.05);LPS诱导RPMCα-SMAmRNA呈时间和剂量依赖性表达增高(P<0.05);LPS诱导RPMCTGF-β1蛋白表达升高,呈现时间和剂量依赖性(P<0.01);水飞蓟宾组能浓度依赖性地降低LPS所致的RPMCILK、TGF-β1及α-SMA的表达(P<0.05),随水飞蓟宾浓度的增加,抑制作用越强。结论:LPS可以上调RPMCILK、TGF-β1及α-SMA的表达;水飞蓟宾可以抑制LPS所致的RPMCILK、TGF-β1及α-SMA的过度表达。ILK参与了腹膜透析相关性腹膜炎腹膜纤维化的病理过程,水飞蓟宾对腹膜透析相关性腹膜炎具有一定的抑制作用,并具有抑制腹膜纤维化的作用。     

右美托咪定对脂多糖诱导的脓毒症大鼠全身炎症反应和肺损伤的影响

目的观察脂多糖(LPS)对大鼠血浆和肺组织中的炎性因子和Toll样受体4(TLR4)表达的影响及右美托咪定的干预作用。方法雄性SD大鼠40只,250~300g,随机分为四组。Control组(n=10)生理盐水1ml·kg~(-1)·h~(-1)大鼠尾静脉泵注6h;DEX组(n=10)右美托咪定(负荷量6.5μg·kg~(-1)·h~(-1),10min;5μg·kg~(-1)·h~(-1)维持)大鼠尾静脉泵注6h;LPS组(n=10)经大鼠尾静脉注射7.5mg/kg的LPS后继续生理盐水泵注6h;LPS+DEX组(n=10)经大鼠尾静脉注射7.5mg/kg的LPS后泵注右美托咪定6h。以6h为实验终结点,并于此时行右心室取血和肺组织标本的制备。采用ELISA法检测血浆IL-1、IL-6、TNF-α浓度,Western blot法检测肺组织TLR4、髓样分化因子88(MyD88)、NF-κB蛋白含量;检测大鼠肺组织湿/干比(W/D);并用Murakami法评测肺损伤程度。结果与Control组比较,LPS组大鼠血浆IL-1、IL-6和TNF-α浓度明显升高,肺组织中的TLR4、MyD88、NF-κB蛋白含量明显升高(P0.01),肺W/D明显升高;LPS+DEX组上述指标差异均无统计学意义。Control组和DEX组未见明显肺损伤,LPS组肺间质水肿、炎性细胞浸润明显,LPS+DEX组肺损伤程度明显减轻(P0.01)。结论 LPS的刺激可以明显升高大鼠血浆中炎性因子以及肺组织中TLR4的表达水平,右美托咪定的干预可以减轻这一趋势,缓解大鼠的全身炎症和肺水肿的程度。     

脂联素预先给药对内毒素血症大鼠肝损伤的影响

目的 评价脂联素预先给药对内毒素血症大鼠肝损伤的影响.方法 雄性Wistar大鼠80只,10～ 14周龄,体重250 ～ 300 g,采用随机数字表法,将其分为4组(n=20):对照组(C组)、内毒素血症组(LPS组)、脂联素预先给药组(APN组)和白细胞介素-10(IL-10)中和抗体干预组(IL-10抗体组).LPS组、APN组和IL-10抗体组腹腔注射脂多糖(LPS)20 mg/kg,APN组和IL-10抗体组于给予LPS前12 h腹腔注射基因重组脂联素6 mg/kg,IL-10抗体组于给予基因重组脂联素前30 min腹腔注射IL-10中和抗体3 mg.每组于注射LPS后2h时取10只大鼠,采集心脏全血,检测血清谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-10(IL-10)水平;每组于注射LPS后2h另取10只大鼠,取肝组织,检测丙二醛(MDA)含量、髓过氧化物酶(MPO)活性、IL-10 mRNA以及血红素氧化酶-1(HO-1) mRNA表达.结果 与C组比较,LPS组、APN组和IL-10抗体组血清AST、ALT及TNF-α、IL-1β、IL-10水平、肝组织MDA含量和MPO活性升高,肝组织HO-1 mRNA表达上调,LPS组和APN组IL-10 mRNA表达上调(P＜0.05);与LPS组比较,APN组和IL-10抗体组血清AST、ALT及TNF-α 、IL-1β水平、肝组织MDA含量和MPO活性降低,肝组织HO-l mRNA表达上调,APN组肝组织IL-10 mRNA表达上调(P＜0.05);与APN组比较,IL-10抗体组血清AST、ALT及TNF-α、IL-1β水平、肝组织MDA含量和MPO活性升高,血清IL-10浓度降低,肝组织HO-1 mRNA表达下调(P＜0.05).结论 脂联素预先给药可减轻内毒素血症大鼠肝损伤,其机制与诱导IL-10生成有关.