创伤愈合前后不同时期增生性瘢痕组织中p16基因的多态性分析

目的：了解深Ⅱ度烧伤愈合前及愈合后不同时期增生性瘢痕基因组中抑癌基因p16第2外显子(exon2)有无缺失及突变。方法：深Ⅱ度烧伤临床标本取材时间：愈合早期为17，21，28d及愈后4，8，18，32个月增生性瘢痕组织，每组5例，用聚合酶链反应(PCR)单链构象多态性(SSCR)分析方法，动态观察p16exon2有无缺失及突变发生。结果：PCR结果显示，基因组中p16 exon2无缺失发生，SSCP分析显示各时间点p16 exon2无突变发生。结论：基因组中p16 exon2在烧伤愈合早期及不同时期增生性瘢痕基因组中未发生缺失与突变，在肿瘤中多见的抑癌基因p16 exon2缺失及突变不是烧伤瘢痕增生的发生机制。     

胃癌p16基因缺失与突变的研究

目的探讨p16抑癌基因外显子 2缺失、突变与胃癌发生发展及组织学类型的关系。方法采用聚合酶链反应(PCR)、聚合酶链反应—单链构象多态性 (PCR -SSCP)分析分别检测胃癌中 p16基因外显子 2的缺失及突变。结果5 5例胃癌样本中PCR扩增 ,8例无扩增产物 ,2例产物明显减少 ,10例均可能为p16基因缺失 ,缺失率为 18.18%(10 /5 5 ) ,其余 45例胃癌、癌旁及正常胃组织均有PCR扩增产物出现 ;但所有胃癌标本SSCP分析均未见异常泳动带 ,无 p16基因突变。结论p16基因外显子 2缺失可能与胃癌发生发展有关 ;而 p16基因突变可能与胃癌发生无关     

抑癌基因p16在子宫颈癌中的检测研究

本通过幢测宫颈癌组织中的p16抑癌基因的突变，来探讨p16抑癌基因在宫颈癌发生、发展中的作用，选取20例正常宫颈组织、20列慢性宫炎组织、30例官颈癌组织，其中宫颈癌Ⅰ期7例、Ⅱ期11例、Ⅲ期8例、Ⅳ期4例．在细胞分化程度上Ⅰ级6例，Ⅱ级13例．Ⅲ级11例，应用PCR—SSCP技术检测抑癌基因p16外显因子α的突变。研究结果：正常宫颈组织和慢性宫颈炎组织均无p16基网突变．30倒原发宫颈癌组织有2例p16基困突变，分别为Ⅲ期1例．Ⅳ期1例，且细胞分化程度均为Ⅲ级。在宫颈癌中p16基因突变发生率为67％(2／30)。提示p16基因突变率可能随着宫颈癌的进展而增高与细胞分化程度呈负相关．说明P16抑癌基因失活在宫颈癌发展中起着一定的作用．     

乳腺增生病p53基因第7外显子突变检测

目的：探讨p53基因在乳腺癌发生早期的作用及早期诊断乳腺癌的分子病理指标。方法：用PCR－SSCP法检测36例乳腺单纯性增生、31例不典型增生、14例原位癌和16例浸润癌中p53基因第7外显子突变，并用DNA直接测序技术确定突变的碱基及其所在的密码子。结果：乳腺单纯性增生、不典型增生、原位癌、浸润癌中p53基因第7外显子的突变率分别为0％、6．5％（2／31）、21．4％（3／14）、18．8％（3／16）。8例突变中，3例发生于251密码子，4例发生于248密码子，1例发生于236密码子。表现为碱基替换（5例）、缺失（2例）、插入（1例）共三种突变方式。并在1例原位癌中首次发现了251密码子的同义突变（ATC→ATT,异亮氨酸→异亮氨酸）。结论：乳腺癌不典型增生中存在p53基因第7外显子突变，该突变可能在乳腺不典型增生发展到乳腺癌的过程中起重要作用，可作为早期诊断乳腺癌的辅助指标。     

胃癌、胃黏膜异型增生和肠上皮化生p16和p53蛋白的表达

目的 检测p16、p53突变蛋白在胃癌、胃黏膜异型增生和肠上皮化生病变中的表达，探讨抑癌基因与胃癌发生的关系及在胃癌早期诊断中的价值。方法 采用免疫组化SP法。结果 p16、p53蛋白在胃癌、胃黏膜异型增生和肠上皮化生组织中的表达差异显著。结论 p16蛋白缺失和p53蛋白突变与细胞异型性和生物学行为改变有密切关系。     

人恶性淋巴瘤细胞系p53,p16与bcl-2/JH基因的研究

抑癌基因p53,p16的缺失和突变以及癌基因bcl-2/JH融合基因的出现是恶性淋巴瘤发生的分子生物学原因,p53和p16基因亦是诱导淋巴瘤细胞凋亡的重要基因,而bcl-2基因是抑制淋巴瘤细胞凋亡的重要基因。为研究这3种基因结构的变化,用PCR和PCR-SSCP,以及PCR扩增产物序列测定的方法测定了人9种恶性淋巴瘤细胞系,发现SU-DHL-1,SU-DHL-4,SU-DHL-6,SU-DHL-8,SU-DHL-10,Daudi,8392 7种恶性淋巴瘤细胞系有p53基因的点突变,分别在第五、六、七外显子;SU-DHL-9有p16基因的纯合缺失,而SU-DHL-1和Daudi细胞系有p16基因的第二外显子的突变,SU-DHL-1的测序结果为密码子30的GAC突变为AAC,密码子35的GCT突变为ACT,密码子40与41之间插入了一个C;SU-DHL-4和SU-DHL-6有bcl-2/JH基因的重排,讨论了基因结构的变化在恶性淋巴瘤细胞系发生发展中的意义。     

原发性肝细胞肝癌发生发展中p16基因的遗传学改变

目的研究人原发性肝细胞肝癌中pl6基因DNA水平上发生的遗传学改变。方法采用聚合酶链反应(PCR)和全自动序列分析的方法,研究84例肝癌和癌旁肝组织中pl6基因第1、2外显子纯合缺失和点突变的情况。结果84例肝癌标本中p16基因第1外显子缺失9例,第2外显子缺失23例,其中有3例第1、2外显子共同缺失,总缺失率为34.5%。未发生基因缺失的病例,经过全自动序列分析,未发现点突变。结论原发性肝细胞肝癌中p16基因失活的主要机制是基因纯合缺失,点突变发生率可能非常低。而未发生基因缺失和突变的肝癌,以及发生p16蛋白阴性表达的癌旁肝组织,p16基因失活的原因可能是包括基因甲基化在内的其他遗传学改变引起的。     

大鼠烫伤后不同时间、不同厚度皮片移植对p53基因表达的影响

目的:了解大鼠深Ⅱ度烧伤后不同时间、不同厚度皮片移植对细胞增殖的抑制因子-抑癌基因p53基因表达影响。方法:实验于2002-07/2003-08在第四军医大学西京医院烧伤外科实验室及基础部生物化学实验室完成。每只大鼠背部两处1%深Ⅱ度烫伤,行自体刃厚、全厚皮片移植,移植时间分别为:伤后即刻、伤后1周、伤后2周,在皮片移植术后的1,2,3,4周时间点取材,每个时间点5个标本。提取标本组织总mRNA,行p53基因及内参照PCR扩增,电泳后比较各时间点总光密度值。结果:在伤后即刻、伤后1周及伤后2周皮肤移植p53基因表达量为0.82±0.12,0.72±0.09,0.65±0.07,刃厚、全厚皮片移植后p53基因表达量为0.63±0.06,0.85±0.11,在不同移植时间组及刃厚与全厚皮片组间比较差异均有非常显著性意义(P<0.01),p53基因在大鼠的创伤愈合中表现出了与尽早皮片移植及移植物厚度上的正相关性。结论:p53参与了大鼠烧伤后皮肤移植后的创伤愈合,尽快及尽可能厚的皮肤移植有助于p53表达的增高,可能与减少瘢痕形成有关。     

胰腺良恶性组织p16基因缺失突变和蛋白表达

目的:旨在从分子水平探讨p16基因在胰腺组织中缺失突变和蛋白表达情况及其与临床病理的联系。方法:利用免疫组织化学染色ABC法及聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)分析技术分别检测29例胰腺良性组织和54例胰腺癌组织中p16蛋白表达和基因缺失突变情况。结果:正常胰腺及良性病变组织中p16蛋白表达率为75.86％,显著高于胰腺癌组织p16蛋白表达率(40.74％)(P<0.005),临床分期中Ⅰ、Ⅱ期p16蛋白表达率(68.18％)高于Ⅲ、Ⅳ期病例(21.88％)(P<0.05)。p16基因缺失突变率良性组织(10.34％)低于胰腺癌组织(42.59％)(P<0.005)。Ⅰ、Ⅱ期癌组织(18.18％)低于Ⅲ、Ⅳ期癌组织(59.38％)(P<0.05)。在胰腺癌不同病理类型及不同组织学分化程度中p16蛋白表达和基因缺失突变无明显差别。结论:p16基因缺失突变和蛋白表达的检测可作为胰腺癌预后评定的一个分子生物学指标。     

髓母细胞瘤分子病理学研究:PTEN抑癌基因单链构型多态性分析

目的 探讨PTEN抑癌基因突变在髓母细胞瘤发病中的作用.方法 用PCR-DNA单链构型多态性分析（PCR-SSCP）方法,对34例髓母细胞瘤、10例小脑星形细胞瘤和5例正常脑组织进行PTEN基因第5、8重要功能外显子突变检测.结果 10例小脑星形细胞瘤中exon5和exon8均无点突变的发生;髓母细胞瘤PTEN基因纯合性缺失率为2.9%;exon5-1突变者3例;exon5-2突变者4例;exon-8突变者3例;PTEN基因总变异率为32.4%.结论 髓母细胞瘤中PTEN基因高变异率可能与髓母细胞瘤的发生相关.