YAP调控肺癌A549/DDP细胞顺铂耐药性的机制分析

目的探讨Yse相关蛋白(Yes-associated protein, YAP)对A549/DDP细胞顺铂耐药性的影响及其机制。 方法采用MTS检测顺铂对肺腺癌A549细胞以及肺腺癌耐顺铂A549/DDP细胞的50%抑制浓度(IC₅₀)。使用qPCR以及Western blot检测A549和A549/DDP细胞中YAP mRNA以及蛋白的表达。Western blot检测维替泊芬(Verteporfin, VP)处理A549/DDP后YAP蛋白表达变化。将A549/DDP细胞设置为DMSO对照组、顺铂组(DDP组)、维替泊芬组(VP组)、顺铂联合维替泊芬组(DDP+VP组),采用MTS检测0、24和48 h各处理组细胞活力的变化。采用qPCR检测VP处理A549/DDP后干细胞标志物ALDHA1、CD133、OCT4、NANOG、SOX2的mRNA表达变化。 结果顺铂对A549和A549/DDP细胞的IC50分别为(4.07±0.03)μg/ml、(23.44±0.98)μg/ml,耐药指数为5.76。A549/DDP细胞中YAP显著高于A549细胞(P<0.05)。VP处理A549/DDP细胞后YAP蛋白表达水平较DMSO组明显降低。DDP+VP组较单独DDP组,其细胞活力在24 h和48 h均明显降低(P<0.05)。qPCR检测发现A549/DDP细胞经VP处理后,干细胞标志物ALDHA1、CD133、OCT4、NANOG、SOX2的mRNA均较DMSO组明显降低(P<0.05)。 结论YAP可能参与了肺癌细胞的顺铂耐药。抑制YAP可通过抑制肿瘤干细胞特性,进而发挥逆转耐药的作用。     

补中益气汤对肺腺癌顺铂耐药细胞株与顺铂敏感细胞株荷瘤BALB/c小鼠移植瘤P-gp蛋白表达的影响

目的探讨补中益气汤对肺腺癌顺铂(DDP)耐药与敏感细胞株荷瘤BALB/c小鼠移植瘤P-gp蛋白表达的影响。方法体外培养肺腺癌顺铂耐药株A549/DDP及敏感细胞株A549,接种于BALB/c小鼠腋窝皮下,荷瘤成功后给予顺铂或顺铂联合低、中、高剂量补中益气汤治疗。实验共分为10组:A549/DDP或A549荷瘤对照组、A549/DDP或A549荷瘤+顺铂组、A549/DDP或A549荷瘤+顺铂+低剂量补中益气汤组、A549/DDP或A549荷瘤+顺铂+中剂量补中益气汤组、A549/DDP或A549荷瘤+顺铂+高剂量补中益气汤组。给药结束后,测量移植瘤体积并计算药物抑瘤率及抑瘤作用提高率,蛋白质印迹法检测移植瘤组织P-gp蛋白的表达。结果顺铂对A549/DDP移植瘤体积无显著影响(P0.05),而使A549移植瘤体积显著缩小(P0.05);联合低、中、高剂量补中益气汤的A549/DDP及A549移植瘤体积均缩小(P0.05),抑瘤率均增加(P0.05),随着中药剂量的增加,移植瘤体积随之缩小,抑瘤率随之增加,抑瘤作用提高率也随之增加;单独顺铂可上调A549/DDP移植瘤组织中P-gp蛋白表达(P0.05),下调A549移植瘤组织中P-gp蛋白表达(P0.05);联合低剂量补中益气汤并未显著下调A549/DDP及A549移植瘤组织中P-gp蛋白表达(P0.05);联合中、高剂量补中益气汤的A549/DDP及A549移植瘤组织中P-gp蛋白表达均显著下调(P0.05),两剂量间无差异(P0.05)。结论在顺铂耐药与顺铂敏感的肺腺癌移植瘤组织中,补中益气汤均有缩小移植瘤体积、提高顺铂抑瘤率、下调P-gp蛋白表达的作用,尤以中、高剂量作用最显著。     

槲皮素通过抑制核因子-κB表达诱导A549细胞凋亡

目的观察槲皮素对人肺腺癌A549细胞核因子(NF)-κB信号通路的影响,探讨其诱导非小细胞肺癌(NSCLC)细胞凋亡的作用机制。方法体外培养A549细胞,实验分为槲皮素组(给予终浓度为30μg/ml槲皮素)、顺铂组(给予终浓度为3μg/ml顺铂)及对照组〔给予等体积二甲基亚砜(DMSO)〕。采用ELISA法检测Caspase-3浓度;采用免疫组化荧光染色检测PARP裂解片段阳性细胞荧光强度;采用Western印迹分析检测NF-κB蛋白的相对表达强度。结果槲皮素可明显升高Caspase-3浓度、增强多聚ADP-核糖聚合酶(PARP)裂解片段阳性细胞荧光强度、抑制NF-κB的表达,与对照组差异显著(P0.05,P0.01)。结论槲皮素可通过抑制NF-κB表达而诱导A549细胞凋亡,可能是其抗NSCLC的机制之一。     

补中益气汤与siRNA对肺腺癌A549/DDP细胞耐药逆转作用的比较

目的比较补中益气汤含药血清与siRNA技术(RNA)对人肺腺癌耐顺铂细胞A549/DDP的耐药效果及对多药耐药蛋白P-gp表达的影响。方法制备补中益气汤含药血清,设计并合成针对P-gp基因对应序列的siRNA,转染A549/DDP细胞;实验分组为空白对照组、补中益气汤含药血清处理组、siRNA处理组,利用RT-PCR检测P-gp mRNA,Western印迹及免疫细胞化学法检测P-gp蛋白质的表达;MTT法检测A549/DDP细胞耐药逆转效果。结果补中益气汤含药血清和siRNA均能降低P-gp mRNA和蛋白质表达,恢复顺铂敏感性,耐药倍数分别降至2.01、2.73,具有统计学意义(P<0.05)。结论补中益气汤含药血清和siRNA均能有效逆转人肺腺癌耐药细胞A549/DDP的多药耐药。     

顺铂通过抑制RIP活性增强rhTRAIL杀伤肺癌A549细胞

目的探讨顺铂(DDP)通过抑制受体相互作用蛋白(RIP)增强肺癌细胞A549对肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)敏感性的分子机制。方法 Western印迹检测顺铂、Nec-1作用A549细胞后RIP的蛋白表达。MTT法检测联合应用DDP+rh TRAIL和Nec-1+rh TRAIL作用后A549细胞的生长抑制率。Western印迹检测DDP+rh TRAIL和Nec-1+rh TRAIL对A549凋亡相关蛋白caspase-8的活化情况。流式细胞仪检测DDP+rh TRAIL和Nec-1+rh TRAIL作用后对A549细胞凋亡的影响。结果 DDP和Nec-1能显著降低A549细胞中RIP的蛋白水平,DDP、Nec-1联合rh TRAIL可以实现caspase-8的活化,促进rh TRAIL对A549细胞的杀伤作用,凋亡率从(5.9±4.93)%提高到(60.5±4.93)%和(64.1±5.17)%(P0.01)。抑制率分别提高到(65.5±4.93)%和(76.3±9.52)%(P0.01)。结论抑制RIP蛋白活性能增加A549细胞对rh TRAIL诱导细胞凋亡的敏感性,有利于促进rh TRAIL蛋白在治疗NSCLC方面的应用。     

EZH2抑制剂联合顺铂对非小细胞肺癌A549细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨EZH2抑制剂UNC1999联合顺铂对肺癌A549细胞增殖、凋亡的影响。方法传代培养人肺癌A549细胞系,取生长良好的传代细胞分为对照组、联合用药组、顺铂组和UNC1999组。所有组均给予RPMI 1640培养液及10%的胎牛血清培养,对照组不加药液,联合用药组分别加入10、20、40、80、160 nmol/L UNC1999药液及2.5、5、10、20、40μg/ml顺铂药液;顺铂组分别加入2.5、5、10、20、40μg/ml顺铂药液;UNC1999组分别加入10、20、40、80、160 nmol/L的UNC1999药液;采用MTT比色法检测各组细胞增殖抑制率中IC50及联合指数(CI)。Western印迹法检测各组相关凋亡蛋白及细胞外调节蛋白激酶(ERK)及p-ERK的表达水平。流式细胞术检测各组细胞凋亡情况。结果与对照组相比,UNC1999组、顺铂组、联合用药组细胞增殖均受到不同程度抑制(P0.05)。各组细胞增殖抑制作用存在剂量-时间依赖关系,且UNC1999与顺铂存在协同作用。UNC1999组、顺铂组、联合用药组与对照组比较细胞凋亡差异显著(P0.05)。UNC1999组、顺铂组、联合用药组中凋亡蛋白Bax、Caspase-3表达明显升高,p-ERK蛋白表达明显降低,联合用药组Bcl-2表达低于对照组(P0.05)。结论 EZH2特异性抑制剂UNC199可能通过抑制MAPK-ERK细胞通路起到抑制肺癌A549细胞增殖,促进其凋亡,与顺铂单药或联合均具有协同效应。     

姜黄素抗人肺腺癌A549/DDP细胞增殖及诱导凋亡的作用

目的 研究姜黄素对人肺腺癌A549/DDP细胞增殖的抑制作用及其对细胞凋亡的影响.方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)测定细胞对顺铂的敏感性和姜黄素对细胞增殖的抑制作用;倒置相差显微镜和荧光显微镜下观察细胞形态学的变化;应用原位末端标记(TUNEL)染色及流式细胞仪检测细胞凋亡情况;以Western blot分析凋亡相关蛋白表达变化.结果 实验中所用的A549/DDP细胞对顺铂耐药,耐药指数为10.82.姜黄素对A549及A549/DDP细胞增殖均有抑制作用,并且呈时间、浓度依赖性(P＜0.05),对两细胞株的半数抑制浓度分别为16.28/μmol/L和18.06μmol/L,差异无统计学意义(P＞0.05).姜黄素处理A549/DDP细胞后,细胞变形、缩小、脱落.Hoechst染色显示A549/DDP细胞核缩小、变形,致密浓染,荧光成团块分布.TUNEL法以及流式细胞仪分析结果示细胞凋亡率呈明显剂量依赖关系(P＜0.05).Western blot结果显示,随姜黄素浓度的增加,天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶8(cysteinyl aspartate-specific protease-8,caspase-8)p10蛋白水平增加.结论 A549/DDP细胞对姜黄素无抗药性,姜黄素对人肺腺癌A549/DDP细胞增殖具有抑制作用,并能诱导细胞凋亡.caspase-8的活化是其中的机制之一.     

内质网应激激活剂通过上调GRP78增加肺癌A549细胞对顺铂的敏感性

目的探讨内质网应激激活剂(TM)增加肺癌A549细胞对顺铂(DDP)敏感性的机制。方法 DDP和TM处理肺癌A549细胞,MTT法检测肺癌A549细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡水平,Western印迹检测凋亡相关蛋白Cleaved Caspase-7表达。结果不同浓度的DDP(0,10,20,50μmol/L)作用于肺癌A549细胞24 h,细胞存活率以剂量依赖的方式下降;TM诱导内质网应激后,提高了DDP(20μmol/L)诱导的细胞凋亡率(55.23%±2.31%,P0.05);同时检测到凋亡相关蛋白Caspase-7表达增加。结论 DDP能够诱导肺癌A549细胞凋亡,但是TM通过上调GRP78增加了肺癌A549细胞对DDP敏感性,联合应用TM和DDP有望成为治疗肺癌的新策略。     

3-BrPA对肺癌A549/DDP细胞耐药的逆转作用研究

目的探究3-Br PA对肺癌A549/DDP细胞耐药的逆转作用及其机制。方法 1细胞培养:RPMI1640培养基培养肺癌A549细胞及人肺腺癌耐顺铂细胞株A549/DDP细胞;2采用CCK8及Western blot法观察3-Br PA对A549/DDP细胞的耐药逆转作用和P-糖蛋白(P-glycoprote,P-gp)的表达水平;采用流式细胞术检测不同浓度3-Br PA作用A549/DDP细胞后细胞内罗丹明-123(Rhodamine-123,Rh123)的蓄积情况。结果顺铂对A549细胞、A549/DDP细胞及3-Br PA作用后的A549/DDP细胞的IC50分别为6.714μg/ml、38.99μg/ml及12.86μg/ml,逆转倍数为3.03,相对逆转效率为81%。3-Br PA可使A549/DDP细胞的P-gp表达下调。3-Br PA可使A549/DDP细胞内的Rh123蓄积增多并呈剂量依赖性。结论 3-Br PA可逆转A549/DDP细胞对顺铂耐药,作用机制可能与其抑制P-gp的功能和表达有关。     

蛋白激酶C抑制剂联合顺铂治疗非小细胞肺癌的实验研究

目的 初步探讨蛋白激酶C(PKC)抑制剂白屈菜红碱(CH)与化疗药物顺铂联合应用在非小细胞肺癌(NSCLC)治疗中的作用及其可能的机制.方法 应用四甲基偶氮唑蓝试验及流式细胞术分别检测CH、顺铂以及CH与顺铂联用对人NSCLC细胞株A549增殖和凋亡的影响.用裸鼠移植瘤实验检测CH、顺铂以及CH与顺铂联用对A549细胞成瘤性的影响.应用人肺腺癌细胞株A549细胞构建裸鼠皮下移植瘤模型,用随机数字表法将24只倚瘤裸鼠分为CH组、顺铂组、CH+顺铂组及生理盐水对照组,每组5只,裸鼠分别腹腔注射CH、顺铂、CH+顺铂和生理盐水(共3周,顺铂及生理盐水每周注射1次,CH每周注射2次),观察移植瘤的生长情况.结果 CH可抑制NSCLC细胞株A549增殖,浓度增加其细胞毒作用亦增强,CH与顺铂联用呈协同或相加作用;CH组、顺铂组及CH+顺铂组A549细胞的凋亡率分别为(5.36±0.70)%、(5.23±0.55)%及(17.28±2.17)%,均高于对照组的(2.75±0.35)%(t=7.88,P＜0.05),CH+顺铂组A549细胞的凋亡率分别高于CH组及顺铂组(t=5.62,P＜0.05);裸鼠移植瘤体内实验结果表明,CH及顺铂均町抑制移植瘤的生长,CH+顺铂组的抑瘤率(80.5%)高于CH组(72.4%)及顺铂(64.3%)组(t=11.34,P＜0.01).结论 CH与顺铂联用对A549细胞及裸鼠移植瘤有显著的协同抗肿瘤作用,其作用机制可能是通过增强对A549细胞增殖的抑制以及诱导其凋亡而实现.     

去甲斑蝥酸钠对耐顺铂肺腺癌A549/DDP细胞的逆转作用及机制

目的 探讨去甲斑蝥酸钠(SNCTD)对耐顺铂人肺腺癌细胞系A549/DDP的逆转作用及可能分子机制.方法 (1)采用CCK法筛选出SNCTD对A549/DDP的无毒浓度(即对细胞抑制率＜10%的药物浓度),并检测出顺铂及与无毒浓度SNCTD联合对耐药细胞株的IC50;(2)采用流式细胞仪检测无毒浓度SNCTD对细胞内罗丹明123的蓄积情况;(3)采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测1、2倍无毒浓度SNCTD处理细胞48h后耐药相关基因mdrlmRNA,MRP1 mRNA的表达.结果 (1)SNCTD对A549/DDP的无毒浓度为5μg/ml,与顺铂联合用药降低A549/DDP的耐药性,逆转倍数为1.97;(2)无毒浓度SNCTD处理耐药细胞48h后细胞内罗丹明123荧光强度明显增强(F=36.99,P＜0.05);(3)1、2倍无毒浓度SNCTD处理耐药细胞后mdr1,MRP1mRNA表达明显减低,并具有浓度依赖性.结论 SNCTD对A549/DDP具有耐药逆转作用,其作用机制可能与下调耐药相关基因mdr1,MRP1的表达,影响膜蛋白外排泵功能有关.     

Tumstatin185～191对人肺腺癌细胞的抑制作用及其与蛋白激酶B和细胞外调节蛋白激酶活性的关系

目的 观察Tumstatin185～191对肺腺癌细胞增生与凋亡的影响,探讨其与蛋白激酶B(Akt)及细胞外调节蛋白激酶(ERK)活性的关系.方法 以人肺腺癌细胞株A549为研究对象,分别给予不同浓度的Tumstatin185～191、顺铂及Tumstatin185～191联合顺铂进行干预,以四唑盐比色法测定A549细胞的增殖情况;流式细胞仪检测分析A549细胞凋亡的变化;Western blot检测细胞内磷酸化的Akt(p-Akt)及磷酸化的ERK(p-ERK)蛋白表达水平.结果 Tumstatin185～191对A549细胞的半数抑制浓度(IC_(50))为73.7μmol/L,顺铂对A549细胞的IC_(50)为5.2μmol/L,当顺铂与20μmol/L或40μmol/L的Tumstatin185～191联合应用时,顺铂对A549细胞的IC_(50)分别下降为3.5 μmol/L和1.4μmol/L;两药联合使用时,A549细胞的早期凋亡率为(19.34±0.97)%,较顺铂[(12.5±2.1)%]和Tumstatin185～191单用[(9.6±1.6)%]的早期凋亡率显著增加(F=5.74,P<0.01);Western blot检测显示p-Akt及p-ERK在未经干预的A549细胞内均呈高表达状态,Tumstatin185～191可显著抑制p-Akt及p-ERK的表达,顺铂则无明显影响;Tumstatin185～191与顺铂联合使用并不增加Tumstatin185～191对p-Akt及p-ERK的抑制效应.结论 Tumstatin185～191单药或联合顺铂对于A549细胞均有显著抑制作用,Tumstatin185～191能够增加A549细胞对顺铂的敏感性;Tumstatin185～191可能通过下调A549细胞内p-Akt及p-ERK水平发挥其抑制细胞生长、促进细胞凋亡的作用.     

PI3K/Akt抑制剂联合顺铂治疗肺癌的实验研究

目的 探讨PI3K/Akt抑制剂LY294002[2-(4-吗啉基)-8-苯基-4氢-1-苯并吡喃-4-酮]联合化疗药物顺铂(DDP)治疗肺癌的效应及可能机制,以期为肺癌的临床治疗提供新的理论依据.方法 培养肺腺癌A549细胞,采用MTT方法及流式细胞仪检测LY294002联合DDP对A549细胞增殖及凋亡的影响;通过裸鼠移植瘤实验检测LY294002联合DDP对A549细胞成瘤性的影响.结果 在一定剂量范围内,LY294002与DDP均可抑制A549细胞的生长,其抑制作用呈量-效关系.LY294002与DDP联合作用可增强对A549细胞的抑制作用.LY294002与DDP均可有效的诱导A549细胞凋亡,联用后凋亡率显著增加.裸鼠移植瘤实验显示,LY294002与DDP均可抑制移植瘤的生长,联用后抑瘤率增加.结论 LY294002可增强DDP对A549细胞、裸鼠移植瘤的抗肿瘤作用,该作用可能是通过增强对A549细胞增殖的抑制以及诱导其凋亡来实现的.     

VEGFR-1抗体对肺癌A549细胞顺铂药物敏感性的影响

目的观察血管内皮生长因子受体-1(VEGFR-1)抗体影响人肺腺癌A549细胞对顺铂(CDDP)的药物敏感性。方法将VEGFR-1抗体与顺铂单独及联合作用于A549细胞,72 h后用MTT法,克隆形成法检验化疗药物的敏感性。结果VEGFR-1抗体(30μmol/L)和顺铂(10μg/mL)联用组抑制A549细胞生长均显著强于VEGFR-1抗体与顺铂单独用药组。结论VEGFR-1抗体能显著增强顺铂抑制人肺癌细胞A549细胞生长的作用,可能是很有潜力化疗增敏剂。     

A549细胞三维立体培养模型的建立及耐药机制

目的探讨肺腺癌A549细胞三维立体(3D)培养模型对顺铂(DDP)的耐药性及其黏附耐药机制。方法胶原培养条件下建立A549三维立体培养模型,MTT法检测平面(2D)培养和3D培养A549细胞敏感性。采用整合素β1激动剂(TSF)和抑制剂(MAB)干预,对其相关机制进行研究。结果 A549细胞3D培养模型中可见细胞生长良好,细胞之间黏附形成典型的多细胞球。2D培养模型中A549细胞对DDP的IC50值为12.84μg/ml;3D培养A549细胞对DDP的IC50是31.74μg/ml,为2D培养的2.47倍。与空白对照组比较,DDP干预组及MAB+DDP组的抑制率明显升高(P0.01),TSF+DDP组有较显著差别(P0.05);与DDP干预组相比较,TSF+DDP组细胞抑制率明显降低(P0.05),MAB+DDP组明显升高(P0.05)。结论胶原法成功建立A549细胞的3D培养模型。与2D培养相比,该细胞模型具有耐药的特性,其机制可能与促进整合素β1对细胞的黏附作用有关。     

蛋白酶体抑制剂MG132联合顺铂诱导肺癌A549细胞凋亡的机制

目的探讨蛋白酶体抑制剂(MG132)与顺铂(DDP)联合诱导肺癌A549细胞凋亡的机制及作用。方法采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测不同浓度MG132、DDP对肺癌A549细胞的最适作用时间以及抑制率;通过Hochest33342染色法检测细胞形态变化;应用流式细胞术(FCW)检测MG132、DDP及两药联合作用于肺癌A549细胞的凋亡率;采用Western印迹检测药物干预前后细胞中促凋亡蛋白半胱氨酸蛋白酶(caspase)9、核转录因子(NF-κB)的表达情况。结果 MTT结果显示MG132、DDP能有效抑制细胞的增殖,呈浓度及时间依赖性;FCW结果显示MG132与DDP联合用药组作用于肺癌A549细胞凋亡率为(68.27±0.31)%,与MG132(22.13±0.36)%、DDP(25.76±0.25)%单用药组相比,细胞凋亡率明显提高(P<0.05)。Western印迹结果显示,与单用药组相比较,联合用药组凋亡相关蛋白caspase9表达明显增强,NF-κB表达显著减少。结论 MG132与DDP联合应用可明显提高细胞凋亡率,其机制可能是通过提高促凋亡蛋白caspase9的表达,并降低细胞NF-κB的表达而实现的。     

人肺腺癌A549细胞系培美曲塞耐药细胞株模型的建立

目的建立人肺腺癌A549细胞培美曲塞耐药细胞株模型。方法以人肺腺癌A549细胞为亲本株,应用高浓度反复间歇法模拟临床给药模式建立人肺腺癌A549细胞培美曲塞耐药细胞株。MTT法绘制生长曲线、计算倍增时间,同时检测耐药株细胞对顺铂、依托泊苷、紫杉醇、长春新碱的药物敏感性。结果亲本株IC_50为(181.75±12.56)ng/ml,耐药株IC_50为(4930.40±129.71)ng/ml,最终获得耐药指数为27.18±1.16的人肺腺癌A549细胞培美曲塞耐药细胞株,命名为A549/PEM。A549和A549/PEM增殖速度接近,倍增时间分别为(62.78±1.06)h和(62.35±0.89)h(P=0.773)。A549/PEM同时对顺铂、依托泊苷耐药,耐药指数分别为(1.93±0.02)、(8.26±1.55);对紫杉醇、长春新碱敏感,耐药指数分别为(0.89±0.10)、(0.95±0.11)。结论本研究成功建立的人肺腺癌A549细胞培美曲塞耐药细胞株模型。     

非诺贝特联用顺铂对人肺癌A549细胞抑制和凋亡的实验研究

目的探讨过氧化物酶体增殖因子激活受体仪激动剂非诺贝特联用顺铂对体外培养的人肺癌A549细胞增殖和凋广的影响及可能机制。方法采用MTF法分别检测单用非诺贝特、顺铂和非诺贝特联用顺铂对肺癌A549细胞的生长抑制情况。采用Hoechest染色观察非诺贝特联用顺铂对肺癌A549细胞的生长抑制作用。流式细胞术检测联合用药对A549细胞的凋亡诱导作用。RT—PCR法检测联合用药对A549细胞中caspase－3、survivinmRNA的表达变化情况。结果非诺贝特对肺癌A549细胞有抑制作用,呈现时间剂量关系。联合用药组作用肺癌A549细胞48h后比单用药组的细胞抑制作用强（P〈0．05）。形态学观察及流式细胞术结果显示联合用药组A549凋亡细胞数目多于单药组,RT—PCR结果提示联合用药组较单用药组上调caspase－3mRNA的表达,下调stirvivin mRNA的表达。结论非诺贝特与顺铂联用可以增强顺铂杀伤肺癌A549细胞作用,其机制可能与上调caspase－3的表达和下调survivin的表达有关。     

自噬相关基因Beclin 1沉默对人肺癌A549细胞顺铂耐药性的影响

目的探讨应用RNAi技术沉默Beclin 1基因对人肺癌A549细胞顺铂(DDP)耐药性的影响。方法应用真核细胞转染技术将Psilencer 3.1-siRNA-Beclin 1重组质粒转入人肺癌DDP耐药A549/DDP细胞,通过RT-PCR和Western印迹检测Beclin-1基因表达,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞对DDP的耐药性及细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果与空白对照组及空质粒对照组相比,重组质粒组Beclin 1mRNA及蛋白表达下降,凋亡率增加,对DDP的敏感性增加(均P<0.05)。结论 Psilencer 3.1-siRNA-Beclin 1转染人肺癌A549细胞后,可有效抑制Beclin-1基因的表达,增加人肺癌A549细胞对DDP的敏感性,促进细胞凋亡。     

miR-34a逆转非小细胞肺癌A549/DDP细胞对顺铂的耐药性及其机制

目的探讨过表达miR-34a对非小细胞肺癌A549/DDP细胞顺铂(DDP)耐药性的影响及可能机制。方法成功构建过表达miR-34a的真核载体p CDNA3.1+miR-34a后,将A549/DDP细胞分为对照组(无转染)、空转染组(转染空质粒)和过表达组(转染p CDNA3.1+miR-34a),采用实时荧光定量PCR(q PCR)法检测转染24、48、72及96 h后各组miR-34a水平;给予不同浓度DDP(2、4、8、16、32和64μg/ml)处理48 h后采用CCK-8法比较各组对DDP的敏感性,流式细胞仪PI/Annexin V双染法检测各组转染48、96 h后的凋亡率,分别采用Western印迹检测各组转染48、96 h后常见耐药基因的表达情况。结果 A549/DDP细胞的miR-34a水平均低于其亲本细胞A549和正常支气管上皮细胞系HBE(P0.05);与其余两组相比,过表达组转染后的miR-34a水平升高,且对A549/DDP细胞的增殖抑制率升高(P0.05);过表达组的半数抑制浓度均低于其余两组,过表达组转染48、96 h后的凋亡率高于其余两组,而转染48 h后的P-糖蛋白、多药耐药相关蛋白1及肺耐药相关蛋白的水平低于其余两组(P0.05);对照组和空转染组以上指标的差异均无统计学意义(P0.05)。结论 A549/DDP细胞中miR-34a水平较低,通过真核载体将其过表达后可抑制增殖率并提高其对DDP的敏感性,可能与其诱导凋亡及降低耐药基因的表达有关。