色素上皮衍生因子对高糖环境下大鼠视网膜Müller细胞的影响

目的 探讨高糖环境下色素上皮衍生因子(PEDF)对大鼠视网膜Müller细胞的影响.方法将体外25 mmoL/L葡萄糖培养的大鼠Müller细胞以100 ng/ml PEDF或10 ng/ml白细胞介素-1β(IL-1β)孵育24 h,采用间接免疫荧光、Western印迹和实时定量PCR检测相关蛋白和mRNA表达,采用MTT检测Müller细胞活性.结果细胞免疫荧光组化、Western印迹和实时定量PCR检测显示在高糖环境下PEDF可以下调Müller细胞IL-1β蛋白和mRNA的表达,同样IL-1β也可以下调Müller细胞PEDF蛋白和mRNA的表达(P＜0.05);PEDF明显提高视网膜Müller细胞活性(0.48±0.09对0.64±0.17,P＜0.05).结论模拟糖尿病状态下,PEDF可以下调Müller细胞中IL-1β的表达,提高Müller细胞活性,可能对糖尿病炎症引起的病理改变起到一定抑制作用.     

高糖对培养的大鼠视网膜Müller细胞的影响

目的 探讨高糖对体外培养的大鼠视网膜Müller细胞的活力和谷氨酸代谢功能有否改变及其可能机制.方法 将体外培养的大鼠视网膜Müller细胞随机分为正常葡萄糖组(5 mmol/L)和高糖组(25 mmol/L),培养24 h后MTT自动比色法测定两组细胞的活力,采用间接荧光免疫组化法和Western蛋白印迹法检测两组细胞胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和磷酸化的信号转导及转录活化因子3(pSTAT3)的表达情况;采用间接荧光免疫组化法实时PCR检测两组细胞谷氨酰胺合成酶(GS)和c-Jun的蛋白和mRNA表达变化.结果 MTT结果显示高糖状态下细胞活力提高,与对照组相比差异有统计学意义;与对照组相比,高糖组细胞GFAP、pSTAT3、c-Jun蛋白和mRNA的表达均升高,而GS蛋白和mRNA的表达降低.结论 经高糖处理的Müller细胞活力提高,其机制可能与GFAP和pSTAT3的表达升高有关;GS表达下降的可能机制为高糖激活了c-Jun基因.Müller细胞由于谷氨酸循环中的关键酶GS的表达减少而代谢谷氨酸的能力下降,这可能是糖尿病视网膜病变中导致神经节细胞死亡的机制之一.     

高糖对体外培养的视网膜Müller细胞增殖及细胞信号传导网络的影响

目的以体外培养的大鼠视网膜Müller细胞的变化入手探讨糖尿病性视网膜病变(DR)新生血管的成因。方法原代培养的大鼠视网膜Müller细胞在不同葡萄糖浓度的培养液中培养,培养72 h后,MTT法检测细胞增殖,利用Protein Pathway Array(PPA)技术检测细胞内146磷酸化和非磷酸化蛋白质的表达情况。结果 Müller细胞的增长呈葡萄糖浓度依赖性(50 mmol/L葡萄糖浓度是增殖最强)。50 mmol/L高糖条件下,在视网膜Müller细胞中检测出47种磷酸化和非磷酸化差异表达蛋白质(如XIAP,VEGF,HIF1α,NF-κB等),这些蛋白质涉及细胞生存、增殖、凋亡等几个重要信号传导通路。结论高糖能够刺激视网膜Müller细胞增殖,这种增殖作用是Müller细胞中多条重要信号传导通路共同参与的结果。     

硒多糖抗肝细胞癌效应与硫氧还蛋白1的关系

目的探讨硒多糖抗肝细胞癌(HCC)效应与硫氧还蛋白(Trx)-1的关系。方法设置0、50、100、200和400μg/ml共计5组浓度梯度,利用MTT细胞毒活性检测法在细胞水平研究硒多糖对HepG2细胞活力的影响;在分子水平,使用Western印迹检测硒多糖对HepG2细胞内Trx-1表达的影响,并进一步检测凋亡相关蛋白Caspase-3和Caspase-9的表达。结果硒多糖200μg/ml、400μg/ml组的细胞活力较其他浓度显著下降(P0.05),显著抑制HepG2细胞活性;200μg/ml、400μg/ml组的硒多糖处理使HepG2细胞Trx-1表达量显著降低(P0.01);凋亡相关蛋白Caspase-3、Caspase-9的表达量分别在200μg/ml及100μg/ml时开始显著变化(P0.05)。结论硒多糖可能是通过下调Trx-1的表达诱导HepG2细胞发生凋亡从而抑制HepG2细胞的生长。     

低氧对大鼠视网膜Müller细胞低氧诱导因子1α和促红细胞生成素蛋白表达的影响

目的探讨低氧对大鼠视网膜Müller细胞低氧诱导因子(HIF)-1α和促红细胞生成素(EPO)蛋白表达的影响。方法体外传代培养大鼠视网膜Müller细胞,分为正常对照组(N组)、氯化钴浓度:50,100,150,200,300μmol/L(C50、C100、C150、C200、C300组),MTT检测不同浓度氯化钴对Müller细胞活力的影响。免疫细胞化学、细胞免疫荧光检测、Western印迹和酶联免疫吸附试验检测HIF-1α、EPO蛋白表达的情况。结果氯化钴浓度低于200μmol/L时,细胞活力不受氯化钴浓度的影响。从200μmol/L开始,细胞活力随氯化钴浓度增高而下降。氯化钴浓度高于50μmol/L时,HIF-1α、EPO蛋白免疫染色可见阳性表达。酶联免疫吸附试验检测,从50μmol/L开始HIF-1α蛋白的表达随氯化钴浓度升高而增加。Western印迹检测,EPO蛋白表达从50μmol/L开始增高,在150μmol/L时达到高峰,以后逐渐下降。结论低氧可引起细胞活性改变并诱导视网膜Müller细胞HIF-1α和EPO蛋白表达的变化。     

高糖培养的视网膜Muller细胞中embelin对VEGF蛋白质表达的抑制作用

目的研究高糖培养的视网膜Müller细胞中embelin对血管内皮生长因子(VEGF)蛋白质表达的调控作用。方法原代培养的大鼠视网膜Müller细胞在不同糖浓度的培养液中培养,加入X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)的特异性抑制剂emblin培养72 h后,利用Western印迹技术检测细胞内VEGF蛋白质的表达情况。结果高糖条件下,在视网膜Müller细胞中VEGF蛋白质表达上调。并且,XIAP的抑制剂emblin加入高糖培养环境后VEGF蛋白质表达下降。结论 XIAP的特异性抑制剂emblin对糖尿病性视网膜病变中VEGF引起的新生血管具有潜在治疗作用。     

五味子多糖诱导裸鼠胶质瘤细胞凋亡过程中Caspase-3的表达

目的探讨五味子多糖对裸鼠胶质瘤细胞的诱导凋亡作用及其诱导凋亡的机制。方法体外提取和原代培养裸鼠胶质瘤细胞,将质量浓度为0、200、400、800μg/ml的五味子多糖作用于裸鼠胶质瘤细胞中培养48 h后,采用酶联免疫吸附试验法(ELISA)和细胞免疫组织化学方法观察五味子多糖作用后裸鼠胶质瘤细胞Caspase-3蛋白表达情况。结果不同浓度(200、400、800μg/ml)五味子多糖作用裸鼠胶质瘤细胞48 h后,与对照组相比较,五味子多糖组培养上清中Caspase-3蛋白表达水显著升高(P<0.01);细胞免疫组化结果显示,200、400、800μg/ml多糖组Caspase-3蛋白表达阳性率均明显升高(P<0.01)。结论五味子多糖诱导裸鼠胶质瘤细胞凋亡的机制可能是通过激活Caspase-3而使胶质瘤细胞发生凋亡。     

高糖上调肺泡上皮细胞大麻素受体1表达加重结核分枝杆菌感染引起的细胞损伤

目的 探讨大麻素受体(CB)1对高糖环境下结核分枝杆菌(M.tb)感染的肺泡上皮细胞损伤模型细胞生物学的调节作用。方法 使用0、5、10、25、50 mmol/L葡萄糖分组培养肺泡Ⅱ型上皮细胞A549,检测CB1在高糖环境下的表达变化。将A549细胞进行分组：空白对照(NC)组、高糖(HG)组、M.tb组、高糖M.tb(HG+M.tb)组、CB1激动剂处理(HG+M.tb+WIN)组及拮抗剂处理(HG+M.tb+LM)组，构建高糖环境下M.tb感染的肺泡上皮细胞损伤模型，对细胞活力、凋亡、乳酸脱氢酶(LDH)及炎症因子水平等进行检测，探讨CB1在高糖环境下对M.tb感染细胞的生物学特性的影响。结果 A549细胞中CB1受体的表达随葡萄糖浓度的升高发生上调。与对照组相比，高糖环境或者M.tb感染均导致A549细胞活力显著下降，炎性分子水平显著升高(P<0.05);而与单独高糖处理或者M.tb感染相比，高糖共M.tb感染导致细胞活力显著下降，炎性因子水平显著升高(P<0.05)。CB1受体激动剂共处理能显著降低A549细胞活力(P<0.05),提高凋亡率及炎症因子水平[肿...     

黄芪甲苷对高糖诱导视网膜神经节细胞保护作用的机制

目的研究黄芪甲苷对人视网膜神经节细胞RGC-5增殖、凋亡的影响及其机制。方法将黄芪甲苷(0、25、50、100μmol/L)与50 mmol/L葡萄糖共处理RGC-5细胞,标记为高糖组、高糖+黄芪甲苷1组、高糖+黄芪甲苷2组、高糖+黄芪甲苷3组;运用噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞活力;流式细胞术检测各组细胞凋亡;Western印迹检测各组细胞中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-3、磷酸化(p)-氨基端激酶(JNK)、JNK的蛋白表达。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷氨酸(Glu)含量。结果与正常组相比,高糖组RGC-5细胞增殖显著降低,细胞凋亡显著升高,Caspase-3蛋白表达显著升高,氧化水平显著升高,兴奋性毒性显著升高,p-JNK蛋白表达显著升高(P<0.05);与高糖组相比,高糖+黄芪甲苷1、2、3组细胞凋亡显著降低,Caspase-3蛋白表达显著降低,氧化水平显著降低,兴奋性毒性显著降低,p-JNK蛋白表达显著降低(P<0.05);与高糖+黄芪甲苷1组相比,高糖+黄芪甲苷2、3组细胞凋亡显著降低,Caspase-3蛋白表达显著降低,氧化水平显著降低,兴奋性毒性显著降低,p-JNK蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论黄芪甲苷可通过对高糖诱导RGC-5细胞的增殖促进、凋亡抑制、抗氧化能力增强、兴奋性毒性减弱的作用,保护人视网膜神经节细胞免受损伤,其机制可能与黄芪甲苷失活JNK信号通路有关。     

五味子多糖诱导裸鼠胶质瘤细胞凋亡的作用及机制

目的探讨五味子多糖对裸鼠胶质瘤细胞的诱导凋亡作用的机制。方法体外提取和原代培养裸鼠胶质瘤细胞,将浓度为0、200、400和800μg/ml的五味子多糖作用于裸鼠胶质瘤细胞中培养48 h后,采用酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测其上清液中Bax和Bcl-2的蛋白表达;细胞免疫组织化学法观察五味子多糖作用后裸鼠胶质瘤细胞Bax和Bcl-2阳性表达率。结果不同浓度五味子多糖作用细胞后,细胞培养上清中Bcl-2蛋白表达水平均下降,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01),Bax/Bcl-2值均升高(P<0.01)。细胞免疫组化结果显示,400和800μg/ml多糖组Bax阳性表达率明显升高,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。400和800μg/ml多糖组Bcl-2阳性表达率下降,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论五味子多糖诱导裸鼠胶质瘤细胞凋亡的机制可能是通过上调Bax/Bcl-2比值,使促凋亡因素占优势,从而使胶质瘤细胞发生凋亡。     

视网膜Müller细胞在糖尿病视网膜病变中的作用

糖尿病视网膜病变(DR)是糖尿病(DM)最为常见和严重的微血管并发症之一,发病率随DM病程的延长而增加,致盲率占眼科双眼盲的第一位.目前越来越多的研究表明Müller细胞在DM早期发生的一系列改变可能是视网膜血管改变的一个主要因素.近年来的临床和基础研究已证实动物模型和DM患者中Müller细胞超微结构和生理功能发生了变化,这种变化早于视网膜血管损伤.DM患者眼底尚未出现改变时,图形视网膜电图(P-ERG)的 b波已有所下降[1],而P-ERG b波起源与Müller细胞关系密切,反映了DM早期Müller细胞已发生功能障碍.     

枸杞多糖对糖尿病大鼠视网膜caspase-3、Bcl-2和Bax表达的影响

目的探讨枸杞多糖对糖尿病大鼠视网膜病变的保护作用及作用机制。方法采用链脲佐菌素(STZ)建立糖尿病大鼠动物模型。将60只大鼠随机分为对照组、模型组、枸杞多糖低、中、高浓度组。枸杞多糖低、中、高浓度组分别灌胃给予枸杞多糖50、100、200 mg/kg,干预12 w后观察大鼠视网膜病理学变化情况,采用TUNEL法检测大鼠视网膜神经细胞凋亡情况。采用RT-PCR检测视网膜caspase-3、Bcl-2、Bax mRNA,采用Western印迹法检测视网膜caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白表达水平。结果与对照组比较,模型组视网膜细胞出现水肿,排列稀疏紊乱,膜盘间隙出现空泡样,视网膜细胞凋亡指数明显升高(P<0.05),视网膜caspase-3和Bax mRNA和蛋白表达水平均明显升高(P<0.05),视网膜Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。与模型组比较,枸杞多糖低、中、高浓度组视网膜细胞水肿减轻,细胞层次清晰,排列整齐,视网膜细胞凋亡指数明显下降(P<0.05),视网膜caspase-3和Bax mRNA和蛋白表达水平均明显下降(P<0.05),视网膜Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。结论枸杞多糖可通过升高视网膜Bcl-2 mRNA和蛋白的表达水平,降低视网膜caspase-3和Bax mRNA和蛋白表达水平减少视网膜神经节细胞凋亡,有效防治糖尿病视网膜病变。     

谷氧还蛋白1在高糖诱导的血管内皮细胞凋亡中的作用及其机制

目的: 观察谷氧还蛋白1(glutaredoxin1, Grx1)在高糖诱导的血管内皮细胞凋亡中的作用及机制.方法: 在高糖环境中培养人脐静脉内皮细胞,制备人脐静脉内皮细胞损伤模型. 细胞分为正常对照组、损伤组、Grx1预保护组. 倒置显微镜下观察细胞形态. MTT比色法检测细胞活力以初步观察Grx1对细胞损伤的作用;采用Annexin V-FITC/PI 双染法, 流式细胞仪检测Grx1对人脐静脉内皮细胞凋亡的影响;利用Western blot法分析Grx1对Akt、JNK蛋白水平表达的影响.结果: Grx1预保护组与损伤组比较, 细胞状态明显改善. 与高糖损伤组比较, Grx1预保护组的细胞存活率显著提高(78%±3% vs 59%±2%, P<0.05), 早期凋亡率(0.2360%±0.0156%vs 0.4156%±0.0374%, P<0.05)和晚期凋亡率(0.2433%±0.0278% vs 0.3689%±0.0083%,P<0.05)均明显降低. 与正常对照组相比, 高糖组p-JNK相对含量明显增多(0.64±0.07 vs0.48±0.03, P<0.05), 而高糖组p-Akt水平较正常对照组显著降低(1.29±0.035 vs 0.69±0.11,P<0.01). 同时, hGrx1保护后p-JNK蛋白水平较高糖组显著降低(0.39±0.05 vs 0.64±0.07,P<0.05);而p-Akt蛋白水平较高糖组显著增高(0.69±0.11 vs 1.07±0.13, P<0.01).结论: Grx1可通过抑制JNK激活及激活Akt通路来拮抗高糖诱导的内皮细胞凋亡.     

胰腺星状细胞对高糖诱导的胰岛β细胞凋亡的影响

目的 观察胰腺星状细胞对高糖诱导的大鼠胰岛β细胞株Ins-1细胞活力及凋亡的影响,探索胰腺星状细胞在糖尿病胰岛功能衰竭进程中的作用.方法 构建Ins-1及胰腺星状细胞共培养系统,细胞分为Ins-1对照组、Ins-1高糖组(25 mmol/L葡萄糖)、Ins-1高渗组(25 mmol/L甘露醇)、共培养对照组、共培养高糖组(25 mmol/L葡萄糖)、共培养高渗组(25 mmol/L甘露醇).24 h后采用流式细胞法分析Ins-1细胞早期凋亡水平,48 h后分别采用嚷唑蓝(MTT)法和4,6-二氨基-2-苯基吲哚(DAPI)染色法检测细胞活力及凋亡细胞形态.使用单因素方差分析进行数据统计.结果 Ins-1高糖组与Ins-1对照组比较,Ins-1细胞凋亡率显著增加(分别为7.93%±0.41%、3.73%±0.35%,F=55.68,P<0.05);共培养高糖组与共培养对照组比较,Ins-1细胞凋亡率显著增加(分别为11.73%±1.20%、5.03%±0.41%,F=55.68,P<0.05).Ins-1高糖组与Ins-1对照组比较,细胞活力明显下降(分别为2.28±0.13、2.85±0.31,F=97.75,P<0.05);共培养高糖组与共培养对照组比较,细胞活力明显下降(分别为0.62±0.06、1.29±0.19,F=97.75,P<0.05).共培养对照组、共培养高糖组、共培养高渗组与Ins-1对照组、Ins-1高糖组、Ins-1高渗组比较,Ins-1细胞凋亡率显著增加(分别为5.03%±0.41%、3.73%±0.35%;11.73%±1.20%、7.93%±0.41%;7.60%±0.72%、5.60%±0.40%;F=55.68,P<0.05),细胞活力明显下降(分别为1.29±0.19、2.85±0.31;0.62±0.06、2.28±0.13;0.65±0.07、2.35±0.12;F=97.75,P<0.05),并可见凋亡细胞典型形态特征.结论 高糖、胰腺星状细胞可致大鼠胰岛β细胞Ins-1活力下降,凋亡增加;胰腺星状细胞可促进高糖诱导的胰岛β细胞凋亡.     

石斛多糖对人Burkitt淋巴瘤Raji细胞增殖、凋亡的影响及机制

目的观察石斛多糖对人Burkitt淋巴瘤Raji细胞增殖和凋亡的影响,探讨其作用机制。方法用水提醇沉淀法从铁皮石斛中提取石斛多糖。取体外培养对数生长期Raji细胞,加入终浓度为0、100、200、400、800mg/L的石斛多糖溶液,用MTT法检测石斛多糖对Raji细胞增殖的抑制率、流式细胞术检测Raji细胞凋亡率、RT-PCR检测Raji细胞中Caspase-3 mRNA。结果随着石斛多糖浓度的提高和作用时间延长,各组Raji细胞增殖抑制率、凋亡率、Caspase-3 mRNA表达量升高,P均〈0.05。结论石斛多糖可以抑制Raji细胞增殖并诱导其凋亡,效果随着作用剂量和时间的增加而增强,其抑瘤机制可能与促进Raji细胞Caspase-3蛋白的表达上调有关。     

高浓度葡萄糖对视网膜Müller细胞超微结构和低氧诱导因子-1α表达的影响

目的 探讨高浓度葡萄糖对大鼠视网膜Müller细胞超微结构和低氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达的影响.方法 体外传代培养大鼠视网膜Müller细胞,分正常对照组、葡萄糖25 mmol/L组和50 mmol/L组,电镜观察不同组Müller细胞超微结构的改变,Western印迹检测不同组Müller细胞中HIF-1α的表达.结果 葡萄糖25 mmol/L组Müller细胞超微结构发生了明显的改变:细胞核缩小、不规则,核內染色质呈凝集边聚;胞质浓染,线粒体肿胀,可见空泡结构.葡萄糖50 mmol/L组,胞质内可见残余体,细胞表面绒毛减少变钝.Western印迹结果示正常对照组无HIF-1α蛋白的表达,葡萄糖25 mmol/L组和50 mmol/L组均有低氧诱导因子-1α蛋白的表达,50 mmol/L组蛋白表达量低于25 mmol/L组.结论 高浓度葡萄糖可以引起Müller细胞超微结构的改变,并引起HIF-1α的表达.     

左乙拉西坦对白细胞介素-1β诱导的PC12细胞损伤的抑制作用

目的探讨左乙拉西坦对白细胞介素(IL)-1β诱导的PC12细胞损伤的抑制作用。方法将PC12细胞随机分为正常对照组,IL-1β组(10 ng/ml IL-1β),左乙拉西坦低、中、高浓度组(10,30,100μmol/L左乙拉西坦+10 ng/ml IL-1β),并培养48 h。MTT法检测各组细胞活力,流式双染检测细胞凋亡,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-6含量,比色法检测一氧化氮(NO)含量,RT-PCR和Western印迹分别检测髓样分化蛋白88/核因子-κB(MyD88/NF-κB)信号通路相关蛋白mRNA及蛋白表达量。结果 10,30,100μmol/L左乙拉西坦能显著提高PC12细胞活力(P<0.01),3μmol/L左乙拉西坦显著对PC12细胞活力无影响,300μmol/L的左乙拉西坦降低PC12细胞活力(P<0.01)。与正常对照组比较,IL-1β组细胞活力显著降低(P<0.01),细胞凋亡率、TNF-α、IL-6及NO含量显著提高(P<0.01),MyD88及p-NF-κB p65表达量显著上调(P<0.01)。与IL-1β组比较,左乙拉西坦低、中、高浓度组细胞活力显著提高(P<0.01),细胞凋亡率、TNF-α、IL-6及NO含量显著降低(P<0.01),MyD88 mRNA、p-NF-κB p65蛋白及mRNA表达量显著下调(P<0.01),左乙拉西坦中、高浓度组MyD88蛋白表达量显著下调(P<0.01)。结论左乙拉西坦可能通过抑制MyD88/NF-κB信号通路抵抗IL-1β诱导的PC12细胞炎症反应。     

虫草多糖对肿瘤坏死因子α诱导肝细胞凋亡的影响

目的探讨虫草多糖对肝细胞凋亡的影响和作用机制。方法以人正常肝细胞L02作为研究对象,将不经任何药物处理的人正常肝细胞L02作为正常组;利用不同浓度的TNFα(5、10、20、40 ng/ml)进行干预24 h后筛选肝细胞凋亡模型的造模条件并作为模型组;根据实验设计,使用3种不同浓度的虫草多糖(50、100、200μg/ml)预作用12 h后给予或者不给予筛选后的TNFα模型浓度24 h作为实验组,收取样本进行检测,采用CCK8法检测细胞增殖活力;采用Annexin V/PI双染法检测肝细胞凋亡数;采用RT-PCR法检测细胞凋亡(Bax、caspase3、caspase8、caspase9、死亡受体Fas)的mRNA表达;采用蛋白免疫印迹法检测cleaved-caspase3、cleaved-caspase8蛋白表达。计量资料多组间比较采用单因素方差分析或Kruskal-Wallis H检验,进一步两两比较采用LSD-t检验或Dunnett-t检验。结果 CCK8法检测结果显示,40 ng/ml的TNFα诱导L02肝细胞24 h后,L02肝细胞增殖较正常组显著降低(73.54%±14.19%vs 100.00%±23.61%,P 0.01),3种不同浓度的虫草多糖在对肝细胞无明显细胞毒性的前提下,较模型组(93.02%±7.21%),细胞增殖均显著升高(P值均0.01),分别为108.10%±9.05%、114.30%±8.79%、117.70%±9.66%。Annexin V/PI双染法检测结果显示,与正常组细胞凋亡数量比较,模型组细胞凋亡数量显著升高(7.71%±1.20%vs 11.57%±1.41%,P 0.05),3种不同浓度的虫草多糖较模型组(18.91%±0.80%)均明显降低细胞凋亡数量,分别为15.16%±0.16%、13.28%±1.57%、16.91%±0.21%(P值均0.05)。RT-PCR法和蛋白免疫印迹检测结果显示,40 ng/ml TNFα造模后细胞凋亡相关的Bax、死亡受体Fas的mRNA表达较正常组均增强,差异均有统计学意义(P值均0.05),并且激活形式的cleaved-caspase3、cleaved-caspase8的蛋白表达显著增强(P值均0.05),与模型组比较,50μg/ml的虫草多糖可显著降低Bax、caspase3、caspase9的mRNA表达和cleaved-caspase8蛋白表达,100μg/ml的虫草多糖可显著降低Bax、caspase3、caspase8、Fas、caspase9 mRNA和cleaved-caspase8蛋白表达,200μg/ml的虫草多糖可显著降低caspase3、caspase8、Fas、caspase9 mRNA和cleaved-caspase3、cleaved-caspase8蛋白表达,3种虫草多糖浓度作用具有一定量效趋势。结论虫草多糖可以有效抑制TNFα诱导的L02正常肝细胞凋亡。     

体外培养的视网膜Müller细胞的形态学特性及细胞内信号传导通路

目的研究体外培养的视网膜Müller细胞中存在的信号传导通路。方法观察从大鼠视网膜分离出的Müller细胞在体外培养过程中的形态变化、生长特性等,利用Protein Pathway Array(PPA)技术检测细胞内146种磷酸化和非磷酸化蛋白质的表达情况,通过信号传导通路分析软件分析Müller细胞内的信号传导通路。结果发现有108种磷酸化和非磷酸化蛋白质在体外培养的大鼠视网膜Müller中表达,这些蛋白质参与了几条重要的信号传导通路,包括XIAP/Apoptosis信号通路,PI3K/AKT信号通路,ILK信号通路,PTEN信号通路,细胞周期:G1/S节点调控信号通路,HIF-1α信号通路,细胞周期:G2/M节点调控信号通路,HGF信号通路,糖尿病信号通路,NFκB信号通路,VEGF信号通路,ERK/MAPK信号通路和胰岛素受体信号通路。结论 Müller细胞中存在多种信号传导通路,这些信号通路相互关联,共同影响Müller细胞生物学特性。     

远志皂苷调控miR-325-5p/GADD45B对高糖诱导小鼠足细胞损伤的影响及其机制

目的 探讨远志皂苷(TEN)对高糖诱导的小鼠肾脏足细胞MPC5损伤的影响及分子作用机制。方法 将MPC5细胞分为正常对照(NG)组、高糖刺激(HG)组、TEN低中高3个浓度实验组,NG组用5 mmol/L D-葡萄糖处理,HG组用30 mmol/L D-葡萄糖处理,实验组用低中高(50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L)TEN进行处理,实时荧光定量(qRT)-聚合酶链反应(PCR)检测MPC5细胞中miR-325-3p和GADD45BmRNA的表达,Western印迹检测GADD45B、podocin和nephrin蛋白表达,流式细胞术测定细胞凋亡率,双荧光素酶报告系统验证miR-325-3p与GADD45B的关系。结果 TEN可使高糖诱导的小鼠足细胞MPC5中miR-325-3p、podocin、nephrin和B细胞淋巴瘤(Bcl)-2含量显著升高(P<0.05),GADD45B、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达量及细胞凋亡率显著降低(P<0.05),抑制高糖诱导的小鼠足细胞MPC5损伤和凋亡;miR-325-3p靶向负调控GADD45B的表达;...