RNAi沉默VEGF-C对A549细胞VEGF家族因子及其受体和下游信号通路的影响

目的研究沉默血管内皮生长因子(VEGF)-C对人非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞VEGF家族因子及其受体和下游信号通路的影响。方法构建靶向VEGF-C基因的重组慢病毒Lv-siRNA-VEGF-C,将其感染A549细胞,建立VEGF-C基因低表达的A549细胞。ELISA法检测肿瘤细胞VEGF-C蛋白的分泌,Western印迹检测Lv-siRNA-VEGF-C细胞组、空载体Lv-Con对照组及空白A549细胞中VEGF家族因子VEGF-C、VEGF-A、VEGFR-2和VEGFR-3蛋白的表达,及下游ERK、AKT和p38信号通路的磷酸化活性。结果成功构建靶VEGF-C基因的干扰表达载体PSIH1-VEGF-C-siRNA,包装形成重组慢病毒Lv-siRNA-VEGF-C,以慢病毒转染A549建立VEGF-C基因低表达细胞。与对照组相比,VEGF-C低表达组细胞中VEGF-C蛋白的表达和分泌显著降低,VEGF-A、VEGFR-2和VEGFR-3的表达也显著降低。同时,VEGFR-2和VEGFR-3的磷酸化水平显著降低,并且VEGFR-2和VEGFR-3介导的下游信号分子ERK、AKT和p38的磷酸化水平亦明显降低(P<0.01)。结论慢病毒介导的VEGF-C基因沉默能抑制人非小细胞肺癌A549细胞VEGF家族因子VEGF-C、VEGF-A、VEGFR-2和VEGFR-3蛋白的表达及下游ERK、AKT和p38信号通路的磷酸化活性。     

RNAi沉默HMGN5基因对肺癌A549细胞增殖的影响

目的构建HMGN5基因的shRNA慢病毒载体,并在肺癌A549细胞上鉴定其沉默效率,观察其对细胞增殖能力的影响。方法筛选HMGN5基因特异性siRNA靶点,合成短发卡结构shRNA,与LentiLox3.7慢病毒载体重组形成shRNA表达载体,包装shRNA慢病毒颗粒,感染肺癌A549细胞,设阴性组及干涉组,应用Real-time PCR和Western印迹的方法检测HMGN5在mRNA和蛋白水平的沉默效率,MTT和克隆形成实验观察HMGN5基因沉默对A549细胞增殖的影响。结果构建的shRNA慢病毒颗粒感染A549细胞后,干涉组HMGN5基因的mRNA表达量较阴性对照载体慢病毒感染组下降了71.7%,显著抑制其蛋白表达;MTT结果表明细胞增殖能力明显降低,干涉组克隆形成能力较阴性组明显减弱。结论成功构建了HMGN5基因的shRNA慢病毒表达载体,其能够在肺癌A549细胞上有效沉默靶基因。HMGN5基因具有影响肺癌细胞恶性增殖的能力,为肺癌的基因治疗奠定了实验基础。     

GRHL2沉默对肺癌A549细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨GRHL2沉默对肺癌A549细胞的增殖、凋亡的影响。方法利用RNA干扰技术,构建GRHL2沉默慢病毒表达载体,将肺癌A549细胞分为3个组,实验组:GRHL2沉默慢病毒感染的A549细胞系;阴性对照组:空载慢病毒感染的A549细胞系;空白对照组:不给予任何处理的A549细胞系。采用倒置荧光显微镜观察细胞绿色荧光蛋白的强度,通过实时定量聚合酶链式反应和蛋白质印迹法检测肺癌A549细胞中GRHL2 mRNA和蛋白质表达水平。采用细胞计数试剂盒检测GRHL2沉默对A549细胞增殖的影响。采用Annexin V-APC/PI细胞凋亡检测试剂盒及流式细胞术分析GRHL2沉默对A549细胞凋亡的影响。结果实验组中GRHL2 mRNA及蛋白质表达水平均较空白对照组及阴性对照组显著降低(F=48.13、42.57,P值均<0.05),A549细胞的增殖能力明显下降(F=65.64,P<0.05),凋亡显著增强(F=56.76,P<0.05)。结论靶向沉默GRHL2能显著抑制肺癌A549细胞的增殖并促进其凋亡,GRHL2有望成为临床肺癌靶向治疗的新靶点。     

慢病毒介导的IGF1R基因干扰对A549细胞对紫杉醇敏感性的影响

目的 探讨慢病毒介导的RNA干扰技术沉默人肺腺癌A549细胞胰岛素样生长因子1受体(IGF1R)表达,并观察其对萦杉醇化疗敏感性的影响.方法 构建IGF1R重组慢病毒,感染A549细胞,建立稳定低表达IGF1R细胞株;应用RT-PCR及蛋白免疫印迹法检测IGF1R沉默效率;CCK8比色法检测IGF1R沉默后A549细胞对紫杉醇敏感性的影响.构建裸鼠移植瘤模型,检测紫杉醇对低表达IGF1R的A549细胞移植瘤生长的抑制作用.结果 成功构建IGF1R重组慢病毒,并建立了稳定低表达IGF1R的A549细胞株;紫杉醇对低表达IGF1R的A549细胞的半数抑制剂量由38.52 μg/L降至16.27 μg/L,敏感性提高2.37倍;低表达IGF1R的A549细胞移植瘤生长缓慢,与紫杉醇联合应用后,移植瘤生长显著抑制,体积抑瘤率达87.5％,重量抑瘤率达88.2％.结论 慢病毒介导的IGF1R基因沉默能抑制人肺腺癌细胞增殖,并显著提高腺癌细胞对紫杉醇的敏感性.     

沉默HIF-1α调控MAPK/ERK信号通路抑制NSCLC转移的分析

目的探讨HIF-1α在体内及体外对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞转移的影响及其作用机制。 方法采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测HIF-1α在癌旁正常组织、肺鳞癌组织(LUSC)、肺腺癌组织(LUAD)、A549细胞和HEB细胞中的表达量。上调HIF-1α表达后,通过MTT、细胞侵袭和Western blot实验检测过表达HIF-1α对A549细胞增殖、侵袭和EMT的影响。下调HIF-1α表达后,Western blot检测A549细胞ERK和p-ERK蛋白的表达量。THBQ激活MAPK/ERK通路后,分析A549细胞增殖、侵袭和EMT能力。将细胞株植入裸鼠体内,构建移植瘤模型,最后测量裸鼠移植瘤的体积和重量。 结果HIF-1α在NSCLC组织的表达水平明显高于癌旁正常组织(P<0.05)。A549细胞中HIF-1α表达水平明显高于HEB细胞(P<0.01),过能够促进A549细胞的增殖和侵袭,N-cadherin蛋白表达量明显上升,E-cadherin蛋白表达量明显下降。下调HIF-1α能够抑制A549细胞内MAPK/ERK通路,且抑制了A549细胞的增殖、侵袭和EMT。下调HIF-1α使裸鼠移植瘤的重量和体积明显减小。 结论沉默HIF-1α通过MAPK/ERK信号通路在体内及体外抑制NSCLC转移。     

蛋白激酶抑制剂B对卵巢癌细胞增殖、侵袭、迁移能力的影响

目的 探讨蛋白激酶抑制剂(PKI)B低表达对卵巢癌A2780细胞的增殖、迁移和侵袭能力的影响.方法 用PKIB shRNA慢病毒载体和shRNA control慢病毒载体分别转染A2780细胞构建PKIB低表达A2780细胞株(PKIB shRNA)及其对照细胞株(NC),用CCK-8细胞增殖实验研究低表达PKIB对A2780细胞增殖、侵袭的影响,细胞划痕实验检测细胞迁移能力.结果 PKIB低表达可显著加强细胞增殖,促进卵巢癌细胞侵袭和迁移能力(P<0.05).结论 卵巢癌细胞的增殖和侵袭能力与PKIB表达相关,为卵巢癌治疗寻找新的基因靶位提供可靠理论依据.     

microRNA-21在非小细胞肺癌患者体内外周血和癌组织中的表达水平及其通过调节PTEN蛋白参与抑癌的机制

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者外周血清和癌组织中microRNA-21表达水平及其对肺癌细胞的侵袭和增殖影响。方法 32例NSCLC患者为研究组,30例同期肺部良性病变患者为对照组,采用Real-time RCR检测研究组肿瘤组织、癌旁组织及两组血清中microRNA-21的表达水平;此外,对肺癌细胞株A549转染microRNA-21的抑制物(inhibitor)或模拟物(mimics)后,采用transwell及CCK-8法观察microRNA-21对肺癌细胞株的侵袭及增殖的变化,并采用Western印迹检测A549中张力蛋白同源基因(PTEN)蛋白水平。结果研究组血清及肿瘤组织中microRNA-21的表达水平显著高于对照组及癌旁组织(均P<0.05);A549转染microRNA-21 mimics后细胞的侵袭和增殖能力显著增加(P<0.05),转染microRNA-21 inhibitor后,细胞的侵袭和增殖能力显著降低(P<0.05),而PTEN蛋白转染后,表达水平与上述结果相反。结论 NSCLC患者肿瘤组织和血清中高表达的microRNA-21可能通过抑制PTEN蛋白参与癌细胞侵袭和增殖能力的调节。     

RNA 干扰沉默 IGF1R 表达对 A549细胞放射增敏作用的研究

目的：构建靶向胰岛素样生长因子1受体(IGF1R)-siRNA 重组慢病毒表达载体,观察其对人肺腺癌 A549细胞放疗增敏作用并探讨其机制。方法构建 IGF1R-siRNA 重组慢病毒,感染 A549细胞,蛋白免疫印迹法检测 IGF1R 沉默效率;荧光实时定量 PCR 法及 ELISA 法分别检测缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)和 Bad 基因及蛋白表达情况。克隆形成实验检测放射增敏作用。结果 IGF1R-siRNA 重组慢病毒使 A549细 胞 IGFlR 蛋白沉默效率达70.53%;HIF-1α、VEGF和 Bad 基因及蛋白表达量均显著降低;A549细胞对放射治疗的敏感性增加,平均致死剂量由1.20 Gy 下降至0.94 Gy,放射增敏比达1.28。结论沉默 IGF1R 对人肺腺癌 A549细胞具有放疗增敏效应,其机制可能与 HIF-1α、VEGF 和 Bad 表达下调相关。     

LMO4基因沉默对Snail诱导的非小细胞肺癌A549细胞上皮—间质转化的影响研究

目的探讨LMO4基因沉默对Snail诱导的非小细胞肺癌A549细胞上皮-间质转化(EMT)的影响。方法体外培养非小细胞肺癌A549细胞,取对数生长期细胞进行实验,根据转染慢病毒分为sh-NC组(转染sh-NC慢病毒)、sh-LMO4组(转染sh-LMO4慢病毒)、Snail组(转染Snail慢病毒)和Snail+sh-LMO4组(转染Snail慢病毒和sh-LMO4慢病毒)。采用实时定量RT-PCR检测sh-NC组和sh-LMO4组LMO4 mRNA相对表达量,采用Western Bloting法检测sh-NC组和sh-LMO4组LMO4蛋白相对表达量及4组N-cadherin、Vimentin、E-cadherin蛋白相对表达量,采用Transwell实验检测4组细胞侵袭个数,采用细胞划痕实验检测4组细胞迁移距离。结果 sh-LMO4组LMO4 mRNA相对表达量和LMO4蛋白相对表达量均低于sh-NC组(P0.05)。Snail组侵袭细胞个数多于sh-NC组,sh-LMO4组侵袭细胞个数少于sh-NC组,Snail+sh-LMO4组侵袭细胞个数少于Snail组、多于sh-LMO4组(P0.05)。培养24 h后Snail组细胞迁移距离长于sh-NC组,sh-LMO4组细胞迁移距离短于sh-NC组,而Snail+sh-LMO4组细胞迁移距离短于Snail组、长于sh-LMO4组(P0.05)。Snail组N-cadherin和Vimentin蛋白相对表达量高于sh-NC组,E-cadherin蛋白相对表达量低于sh-NC组(P0.05);sh-LMO4组N-cadherin和Vimentin蛋白相对表达量低于sh-NC组,E-cadherin蛋白相对表达量高于sh-NC组(P0.05);Snail+sh-LMO4组N-cadherin和Vimentin蛋白相对表达量低于Snail组,E-cadherin蛋白相对表达量高于Snail组(P0.05);Snail+sh-LMO4组N-cadherin和Vimentin蛋白相对表达量高于sh-LMO4组,E-cadherin蛋白相对表达量低于sh-LMO4组(P0.05)。结论 LMO4基因沉默可逆转Snail诱导的非小细胞肺癌A549细胞EMT。     

Frat1通过Wnt/β-catenin信号通路对非小细胞肺癌A549细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨Frat1能否通过Wnt/β-catenin信号通路对非小细胞肺癌A549细胞的增殖、凋亡产生影响。方法 RT-PCR检测非小细胞肺癌组织及正常肺组织中Frat1、β-catenin的表达;CCK-8试验检测Frat1沉默组和Frat1正常表达组非小细胞肺癌A549细胞的增殖;TUNEL免疫荧光法检测Frat1沉默组和Frat1正常表达组非小细胞肺癌A549细胞的凋亡;Western Blot检测Frat1沉默组和Frat1正常表达组非小细胞肺癌A549细胞β-catenin蛋白的表达。结果非小细胞肺癌组织中Frat1、β-catenin基因的表达显著高于正常肺组织(P0.05);Frat1沉默组细胞的增殖能力显著弱于Frat1正常表达组(P0.05);Frat1沉默组细胞的凋亡显著高于Frat1正常表达组(P0.05);Frat1正常表达组细胞β-catenin蛋白的表达显著高于Frat1沉默组(P0.05)。结论 Frat1与β-catenin在非小细胞肺癌的表达被激活;Frat1能促进非小细胞肺癌A549细胞的增殖,抑制其凋亡,这种作用可能是通过激活Wnt/β-catenin信号通路而实现的。     

State of knowledge of helminth fauna of freshwater fishes of Poland

A total 89 fish and lamprey species has been recorded from Polish freshwater habitats. Twenty-seven of them (30.3%) have not been surveyed for parasitic helminthes. Some of the latter fishes are either rare or not easily accessible. Other live only in specific habitats in scattered localities. An important obstacle for studying parasite faunas of some fishes may be their status on an endangered species. Among the non-surveyed fishes, are those which have been relatively recently introduced to Poland or migrated there on their own. The present paper attempts to review all hitherto not studied helminthologically fish species, their habitats, localities and current protection status.     

高血压降压治疗目标的再认识

根据传统的高血压水平的定义,1993年WHO高血压治疗指南提出血压控制目标为<140/90mm Hg(1mm Hg=0.133kPa),但是并非所有患者都必须将血压降至同一水平,而应根据患者情况进行个体化治疗。Framingham进行的一项长达10～12年的心血管事件研究发现,第5年后,正常上限血压[收缩压(SBP     

Lack of correlation of degree of villous atrophy with severity of clinical presentation of coeliac disease

BACKGROUND AND AIM: Both the clinical presentation and the degree of mucosal damage in coeliac disease vary greatly. In view of conflicting information as to whether the mode of presentation correlates with the degree of villous atrophy, we reviewed a large cohort of patients with coeliac disease. PATIENTS AND METHODS: We correlated mode of presentation (classical, diarrhoea predominant or atypical/silent) with histology of duodenal biopsies and examined their trends over time. RESULTS: The cohort consisted of 499 adults, mean age 44.1 years, 68% females. The majority had silent coeliac disease (56%) and total villous atrophy (65%). There was no correlation of mode of presentation with the degree of villous atrophy (p=0.25). Sixty-eight percent of females and 58% of males had a severe villous atrophy (p=0.052). There was a significant trend over time for a greater proportion of patients presenting as atypical/silent coeliac disease and having partial villous atrophy, though the majority still had total villous atrophy. CONCLUSIONS: Among our patients the degree of villous atrophy in duodenal biopsies did not correlate with the mode of presentation, indicating that factors other than the degree of villous atrophy must account for diarrhoea in coeliac disease.