三氧化二砷通过PI3K/Akt信号通路抑制胃癌细胞的增殖并促进其凋亡的实验研究

<正>胃癌是一种消化系统恶性肿瘤,在我国恶性肿瘤的发病率中位居第二位~([1])。由于胃癌没有典型的临床症状,很多患者确诊时已是晚期,只能采取放化疗,而放化疗较强的毒副作用对患者的身体造成严重的影响~([2,3])。目前寻找毒副作用小、疗效好的抗肿瘤药物是当务之急。研究显示,三氧化二砷(As2O3)对卵巢癌、肺癌、骨肉瘤等多种实体肿瘤具有抑制作用,主要是通过改变肿瘤细胞的信号传导、基因的表达等来诱     

乳香通过PTEN/Akt/COX-2通路诱导胃癌细胞SGC7901凋亡

目的研究乳香对人胃癌细胞SGC7901增殖、凋亡和迁移的影响及其可能的作用机制。方法不同浓度乳香处理SGC7901细胞不同时间,噻唑兰比色法检测乳香对SGC7901细胞增殖的影响,流式细胞术分析乳香对SGC7901细胞凋亡的影响,蛋白质印迹法(Western blotting)分析乳香对SGC7901细胞中同源性磷酸张力蛋白(PTEN)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、蛋白激酶B(PKB,亦称Akt)和环氧化酶2(COX-2)蛋白表达影响,划痕实验检测细胞迁移能力,裸鼠移植瘤实验验证乳香在裸鼠体内抑制肿瘤的效果。采用Graphpad Prism 6.0统计软件对数据进行分析。结果乳香能够抑制SGC7901细胞的增殖和迁移能力,呈现剂量依赖和时间依赖性。乳香诱导SGC7901细胞的凋亡,呈现剂量依赖性。乳香能够诱导SGC7901细胞中PTEN的表达,抑制p-Akt和COX-2的蛋白表达。此外,乳香能够抑制裸鼠体内胃癌移植瘤的生长。结论乳香可以抑制胃癌细胞SGC7901的增殖和迁移,诱导细胞凋亡,这可能与PTEN/Akt/COX-2信号通路相关。     

结肠癌患者前列腺素E_2介导的细胞免疫抑制作用

本文研究57例结肠癌患者体内产生前列腺素(PG)的抑制性单核细胞对植物血凝素(PHA)和刀豆素A(Con A)诱导的增殖反应,并用55名正常人作为对照。研究目的为确定结肠癌患者的T细胞对有丝分裂素的增殖反应是否降低,及该反应降低与PG介导的抑制作用是否有关。实验以患者外周血单核细胞(PBMC)为材料。将PBMC加入1μg/ml浓度的消炎痛或0.01%浓度的乙醇后放在微滴定平板上,再加入25μg/ml PHA或5μg/ml ConA孵育72小时。另外,用一定浓度的MCPB培养48小时后,离心取得上清液,用竞争性抑制放射免疫法测定其PGE_2含量。     

Fas信号通路通过诱导EMT促进胃癌细胞的侵袭转移

目的探讨Fas信号通路促进胃癌细胞侵袭转移的可能相关机制。方法以低浓度FasL处理胃癌细胞株AGS,免疫印迹及ELISA检测上皮间质转化(epithelial-mesenehymal transition,EMT)的分子生物学标记改变;稳定沉默Snail及Twist转录因子,transwell小室侵袭实验检测FasL处理后胃癌细胞的侵袭能力;免疫印迹检测信号通路激活状态及相应的抑制效应。结果 FasL可以诱导AGS细胞株出现EMT表型,并可促进胃癌细胞的侵袭转移能力。同时该过程中出现ERK1/2信号通路的激活,而抑制ERK1/2信号通路,可以抑制FasL诱导EMT及提高肿瘤侵袭能力的作用。胃癌组织中相应分子生物学标记的表达变化符合EMT的发生。结论 Fas信号通路能够激活ERK1/2通路诱导EMT的发生,并且能通过该机制增强胃癌细胞AGS的活动能力。     

FAM198B通过激活PI3K-AKT信号通路促进胃癌细胞的恶性增殖及转移

目的筛选胃癌中具有临床意义的潜在药物靶点并研究此靶点蛋白在胃癌发生、发展中的功能和潜在分子机制。方法通过临床数据库GEPIA分别找到在胃癌中高表达的基因(tumor/normal2)以及在胃癌中具有显著临床预后相关性的基因(P0.05),将这两部分基因进行重合分析找到具有显著临床意义的靶基因,进一步通过高表达预后差原则筛选到目的靶基因;通过30组临床样品研究FAM198B在胃癌以及临近正常组织中的表达特征;通过siRNA介导敲低目的基因的表达,利用细胞增殖实验和划痕迁移实验验证目的基因在胃癌发生、发展中的重要性;最后通过分析与目的基因共表达基因参与的信号通路,探索目的基因在胃癌中发挥功能的潜在分子机制,进一步通过蛋白免疫印迹实验进行验证。结果共有46个基因在胃癌中高表达且具有显著临床预后相关性;FAM198B在胃癌中显著高表达,且高表达的患者具有不良预后,FAM198B在30组临床胃癌组织中较正常组织显著高表达;敲低FAM198B抑制胃癌细胞的生长增殖和迁移;敲低FAM198B降低PI3K、AKT的磷酸化,但本底表达保持不变,可能通过PI3K-AKT信号通路参与胃癌的发生、发展。结论 FAM198B高表达诱导PI3K、AKT的磷酸化,可能通过参与PI3K-AKT信号通路促进胃癌细胞生长增殖和迁移。     

三氧化二砷通过Akt信号通路抑制HGC-27细胞的增殖并促进其凋亡

目的探讨三氧化二砷对HGC-27细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法用1μmol/L、2μmol/L、4μmol/L、8μmol/L、16μmol/L的三氧化二砷作用于胃癌细胞HGC-27、MKM28、SGC7901,同时以只加入二甲基亚砜(DMSO)溶液的细胞作为对照组,噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖情况,筛选出受到抑制作用最大的细胞继续研究,并计算三氧化二砷半数抑制浓度。用三氧化二砷半数抑制浓度作用于人胃癌细胞,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blotting检测细胞中活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)表达水平。用50 ng/ml的Akt信号通路激活剂胰岛素样生长因子-1(IGF-1)及半数抑制浓度的三氧化二砷联合作用于人胃癌细胞作为联合组,以半数抑制浓度的三氧化二砷作用组作为对照,MTT检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blotting检测Cleaved Caspase-3、Akt、p-Akt表达水平。结果 1μmol/L、2μmol/L、4μmol/L、8μmol/L、16μmol/L的三氧化二砷能够抑制胃癌细胞HGC-27、MKM28、SGC7901的生长,抑制作用从强到弱依次为:HGC-27、MKM28、SGC7901,半数抑制浓度依次为:(9.34±1.57)μmol/L、(12.92±1.08)μmol/L、(13.24±1.34)μmol/L,后续实验选用9μmol/L的三氧化二砷作用于HGC-27细胞。9μmol/L的三氧化二砷作用后细胞凋亡率从(6.35±2.14)%提高到(39.32±6.54)%,细胞中Cleaved Caspase-3升高,p-Akt水平降低。联合组细胞较单用三氧化二砷组细胞增殖能力增强,细胞凋亡数量减少,细胞中Cleaved Caspase-3水平降低,p-Akt水平升高。结论三氧化二砷能够抑制胃癌细胞增殖,促进胃癌细胞凋亡,激活Akt信号通路能够部分逆转三氧化二砷对胃癌细胞增殖、凋亡的影响。     

miR-577通过介导Notch信号通路抑制肺癌细胞的增殖、侵袭和耐药性

目的研究miR-577通过介导Notch信号通路抑制肺癌细胞的增殖、侵袭和耐药性。方法RT-PCR检测肺癌组织和细胞以及配对的正常组织和细胞中miR-577的表达量;CCK-8测定miR-577对肺癌细胞A549增殖的影响;荧光素酶报告实验验证miR-577和Notch是否结合;Western blot检测A549细胞中Notch、DSL以及耐药蛋白P-gp和MRP1的蛋白表达水平。结果RT-PCR结果显示,miR-577在肺癌组织和细胞中的表达量显著低于正常组织和细胞中的表达量;过表达miR-577能够显著抑制肺癌细胞A549的增殖和侵袭,并降低细胞的耐药性;荧光素酶报告实验结果表明miR-577能够靶向结合Notch的启动子序列;Western blot结果显示miR-577能够抑制Notch和DSL的蛋白表达水平;进一步的机制探究结果表明miR-577可通过下调Notch和DSL的蛋白表达抑制A549细胞增殖、侵袭以及耐药性。结论miR-577能够抑制肺癌细胞A549增殖、侵袭以及耐药性的产生,其作用机制是通过介导Notch信号通路来实现的。     

前列腺素E_2预防乙酰水杨酸所致的胃微量出血

前列腺素E_2(PGE_2)及其它多种前列腺素能防止各种有害物质对胃粘膜的损害。作者用Fisher及Hunt方法测定口服PGE_2对防止乙酰水杨酸所致胃微量出血的作用。 6名健康志愿受试者年龄18～42(平均27)岁。经禁食一夜后于次日上午9时从口腔插入一外径为6mm的薄氯乙烯导管直至齿下55cm处,此时,导管前端已进入胃。通过导管向胃内滴入蒸馏水100ml,令受试者收缩腹肌,使身体沿纵轴转动,然后将水排出。检查分3次进行,每次历时10分钟,在每次试验后均再次滴入100ml蒸馏水,洗胃后将液体排出,接     

胃溃灵对大鼠胃粘液量及前列腺素E_2的影响

胃溃灵对大鼠胃粘液量及前列腺素E_2的影响@叶松$湖北中医学院附属医院!430061 @甘爱萍$湖北中医学院附属医院!430061     

PI3K/Akt和MAPK/ERK信号通路在胃癌细胞来源的Exosome促进同源肿瘤细胞增殖中的作用

目的:研究胃癌细胞来源的Exosome对同源肿瘤细胞增殖的影响,初步探讨PI3K/Akt和MAPK/ERK信号转导通路在此过程中的作用.方法:采用离心超滤和蔗糖密度梯度离心的方法从胃癌MGC803细胞的上清液中分离出胃癌细胞来源的Exosome.应用透射电子显微镜观察Exosome的形态,MTT检测细胞活力,Weste...     

过/降表达miR-92a的食管鳞癌细胞增殖、迁移、侵袭能力及PTEN/PI3K/Akt通路蛋白表达变化

目的 观察过/降表达miR-92a的食管鳞癌（ESCC）细胞增殖、迁移、侵袭能力及磷酸酯酶与张力蛋白同源物（PTEN）/磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）/Akt通路蛋白表达变化。方法 将人ESCC细胞系Eca-109随机分为miR-92a过表达组、miR-92a降表达组、过表达阴性对照组、降表达阴性对照组,分别转染miR-92a mimics、miR-92a inhibitor、mimic-NC、inhibitor-NC 24 h。采用CCK-8法检测各组培养24、48、72、96 h的的吸光度（A）值,划痕愈合实验检测细胞迁移能力,Transwell小室检测细胞侵袭能力。采用Westen blotting法检测细胞PTEN/PI3K/Akt通路蛋白PTEN、PI3K、Akt、磷酸化PTEN(p-PTEN)、p-PI3K、p-Akt。结果 各时点细胞A值、细胞迁移距离、穿膜细胞数比较,miR-92a过表达组>过表达阴性对照组、降表达阴性对照组>miR-92a降表达组（P均<0.05）。p-PTEN蛋白miR-92a降表达组>过表达阴性对照组、降表达阴性对照组>...     

miR-21通过调节PTEN及Wnt信号通路介导Huh7细胞对顺铂的耐药性

目的探讨microRNAs(miRNAs)介导肝细胞癌(HCC)对顺铂的耐药机制。方法采用miR-21 mimics及miR-21抑制剂来调节Huh7细胞miR-21表达量。人DKK-1与bpv(phen)分别是Wnt信号通路抑制剂及PTEN抑制剂。相关mRNA及蛋白水平采用RT-PCR及蛋白质免疫检测。结果 miR-21过表达将减弱顺铂(5和10μg/mL)对Huh7细胞增殖的抑制作用。当Huh7细胞经miR-21 mimics处理后,Wnt4的mRNA及蛋白质表达均显著上升,且miR-21过表达可逆转DKK-1对Wnt4和细胞增殖的抑制作用。另外,miR-21过表达还上调了PTEN的mRNA及蛋白表达,并可提升经bpv(100和200nmol/L)抑制的Huh7细胞增殖速率。结论 miR-21在Huh7细胞对顺铂的耐药中发挥作用,且通过活化Wnt信号通路及PTEN调节Huh7细胞增殖。     

苦参素对肝癌细胞HepG2细胞增殖和MicroRNA-122、MicroRNA-21表达的影响

目的探讨苦参素对人肝癌细胞株HepG2细胞增殖和MicroRNA-122、MicroRNA-21表达的影响。方法体外培养人肝癌细胞株HepG2细胞;采用MTT法观察不同浓度和不同作用时间的苦参素对HepG2细胞增殖的影响;实时荧光定量PCR法检测IC50苦参素作用72 h对HepG2细胞中MicroRNA-122、MicroRNA-21表达的影响。结果苦参素能显著抑制人肝癌细胞株HepG2细胞增殖,且呈时间与剂量依赖性(P<0.05);经IC50苦参素处理后的HepG2细胞株MicroRNA-122的表达上调,MicroRNA-122的表达下调,其比率分别为2.79倍和0.44倍。结论苦参素能显著抑制人肝癌细胞株HepG2细胞增殖,且具有时间-浓度依赖性。苦参素作用于microRNA水平,可使MicroRNA-122表达上调,MicroRNA-21表达下调。     

Fas信号通路促进胃癌细胞的侵袭及转移

目的探讨Fas通路的非凋亡信号在胃癌细胞株AGS中促进增殖转移的作用。方法流式细胞仪检测AGS细胞表面Fas及FasL表达情况;根据FasL不同作用浓度梯度,绘制细胞生长曲线;shRNA沉默AGS的Fas表达后,或NOK-1拮抗FasL后,利用transwell实验检测AGS的侵袭能力;免疫组化检测FasL表达与E-cadherin关系。结果低浓度的FasL（12.5ng/ml）刺激对细胞增殖无明显抑制作用,反而能提高肿瘤细胞的侵袭能力。在沉默Fas受体或经NOK-1拮抗FasL后,该效应减弱。FasL和E-cadherin在胃癌组织中的表达呈负性相关。结论低剂量的FasL不能诱导AGS产生凋亡效应,反而通过Fas信号通路促进其侵袭转移能力。     

基于PI3K/Akt信号通路探讨槲皮素对肝癌细胞增殖、凋亡的影响

目的 研究槲皮素的抗肝癌作用,并进一步探究其与磷酸肌醇3-激酶/苏氨酸蛋白激酶(PI3K/Akt)信号通路的关系。方法 肝癌细胞BEL-7402分为对照组、槲皮素低、中、高剂量组,分别用不同浓度的槲皮素处理(0、80、160、320μmol/L)。采用噻唑蓝(MTT)实验比较细胞24、48、72 h的增殖抑制率,采用平板克隆实验比较各组细胞克隆形成率,流式细胞术实验比较各组细胞的凋亡率及细胞周期分布情况,Western印迹实验比较细胞周期蛋白(Cyclin)D1、裂解的半胱氨酸蛋白酶(Cleaved Caspase)-3、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、磷酸酶及张力蛋白同系物(PTEN)、磷酸化(p)-PI3K、p-Akt蛋白含量情况;采用分子对接学分析槲皮素与Akt、PI3K的结合。结果 与对照组比较,经不同剂量槲皮素处理组肝癌细胞增殖抑制率、细胞凋亡率明显增加,细胞克隆形成率明显降低,S期细胞数明显减少,G0/G1期细胞数明显增加,细胞内Cleaved Caspase-3、Bax、PTEN蛋白含量明显增加,CyclinD1、Bcl-2、p-PI3K及p-...     

酰基甘油激酶通过影响PTEN/PI3K/Akt/Gsk3β信号通路调控血小板活化

目的：探究酰基甘油激酶（AGK）在血小板活化中的作用及可能的调控机制。方法：分别提取野生型小鼠（WT）和AgkG126E点突变（AGK激酶活性丧失）小鼠（PM）的血小板。将等体积、等浓度的WT或PM小鼠的血小板放入聚集仪,分别利用3种刺激剂（α-Thrombin、ADP、U46619）刺激,检测每种刺激剂作用下相应的血小板聚集水平;每管聚集曲线达到最大稳定值后,加入等体积的ATP荧光检测剂,检测相应血小板活化过程中释放的ATP水平。分别在静息态WT或PM小鼠血小板（不加α-Thrombin刺激）、活化态WT或PM小鼠血小板（加入α-Thrombin刺激）中加入等量荧光偶联的纤维蛋白原（Fg）,利用流式细胞仪检测血小板的Fg结合水平。Western blot法分别检测静息态（不加刺激剂）和活化态（加入α-Thrombin、ADP、U46619刺激）WT或PM小鼠血小板中关键信号通路蛋白的磷酸化水平。结果：在刺激剂作用于血小板后,PM小鼠血小板的聚集程度、ATP释放水平及Fg结合能力均明显低于WT小鼠的血小板（P均<0.01）。与WT小鼠相比,PM小鼠的血小板在活化过程中张力蛋白同源...     

Akt介导VEGF信号通路在促进胃癌淋巴管新生中的作用

随着研究的深入,肿瘤淋巴管新生已被证实在实体肿瘤淋巴转移途径中起着至关重要的作用,并可作为一个评价肿瘤预后的重要指标.但长期以来由于缺乏对淋巴管内皮特异因子和淋巴管检测技术的认识,对淋巴管转移具体机制与肿瘤淋巴管新生分子途径尚未完全明确.Akt信号通路是细胞内一条重要的信号传导通路,与肿瘤发生、增殖、抗凋亡、转移等密切相关.近年来发现Akt在介导VEGF信号通路与肿瘤淋巴管转移或肿瘤淋巴管新生的也存在着密切关系.本文对Akt信号通路在胃癌淋巴管新生中重要作用与研究进展作一综述.     

TMEM106C通过抑制P53信号通路促进肝癌细胞的恶性增殖及转移

目的筛选肝癌中具有临床意义的潜在药物靶点,研究其在肝癌发生发展中的生物学功能和潜在分子机制。方法通过临床数据库GEPIA找到在肝癌中具有显著临床意义的靶基因,进一步通过高表达预后差原则筛选目的靶基因;通过siRNA介导敲低目的基因的表达,利用细胞增殖实验、克隆形成实验和细胞周期实验验证目的基因在肝癌发生发展中的作用;探索目的基因在肝癌中发挥功能的潜在分子机制,并通过蛋白免疫印迹实验进行验证。结果通过高表达预后差原则我们筛选到目的靶基因TMEM106C;与正常组织相比,TMEM106C在肝癌中显著高表达(P0.001);qRT-PCR实验显示,在肝癌细胞中TMEM106C的表达被明显敲低(P0.001),细胞增殖实验发现,在敲低TMEM106C表达的肝癌细胞中,与对照组siCTL相比,细胞增殖速率显著减慢(P0.001);克隆形成实验同样发现,在敲低TMEM106C表达的肝癌细胞中,与对照组siCTL相比,克隆形成速率显著减慢(P0.001);同时细胞周期实验发现,相比于对照组siCTL,敲低TMEM106C表达的肝癌细胞周期被显著阻滞在G1期(P0.001);发现在敲低TMEM106C的肝癌细胞中,p53的磷酸化和p21均显著升高(P0.001)。结论 TMEM106C高表达降低抑癌基因p53的磷酸化和p21的表达,从而参与P53信号通路促进肝癌细胞生长增殖和克隆形成,敲低其表达可将细胞周期阻滞在G1期。