白藜芦醇对酒精诱导的HepG2细胞氧化损伤的保护作用及相关基因表达的变化

目的:探讨白藜芦醇在酒精诱导的HepG2细胞氧化应激中的抗氧化作用,揭示白藜芦醇抗酒精性肝损伤的作用机制.方法:白藜芦醇预处理HepG2细胞24 h后,用酒精诱导氧化应激的产生.MTT方法检测白藜芦醇处理组与对照组HepG2细胞活力;用ELISA试剂盒检测不同实验组的超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和细胞内总活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量;采用RTPCR方法检测抗氧化通路中关键基因SOD1、SOD2和过氧化氢酶的mRNA表达水平.结果:MTT结果显示,与对照组比较,白藜芦醇(12.5、25、50、100μmol/L)对HepG2细胞的细胞毒性均在20%以下,300 mmol/L酒精可致近50%HepG2细胞死亡;25-100μmol/L白藜芦醇可有效对抗300 mmol/L酒精对HepG2引起的细胞毒性作用;SOD活性显示100μmol/L白藜芦醇预处理组SOD含量(0.391±0.011)明显高于非处理组(0.286±0.019),而ROS结果显示酒精诱导组(29234.79±2288)明显高于白藜芦醇25、50、100μmol/L预处理组(18023.26±1359.66;13528.44±1078.99;8219.87±635.99);RT-PCR结果显示,与300mmol/L酒精比较,25、50和100μmol/L白藜芦醇可上调SOD1 mRNA表达量(0.5535±0.0035;0.586±0.0113;0.623±0.0127);12.5、25、50、100μmol/L白藜芦醇均可上调SOD2mRNA表达量(1.249±0.011;1.369±0.028;1.377±0.021;1.401±0.0578);50和100μmol/L白藜芦醇均可上调过氧化氢酶(0.1955±0.004;0.2275±0.00707)mRNA的表达量.结论:本研究提示酒精可诱导氧化应激的产生,而白藜芦醇通过调节抗氧化通路中基因的表达发挥抗氧化功能,从而削弱酒精的细胞损伤作用.     

对乙酰氨基酚对过氧化氢诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用

目的 探讨对乙酰氨基酚对体外过氧化氢诱导人脐静脉内皮细胞损伤及凋亡的保护作用及机制.方法 用体外培养的人脐静脉内皮细胞株传代后进行实验,分为正常对照组、过氧化氢损伤组(0.1 mmol/L)、药物处理加对乙酰氨基酚低浓度(25 μmol/L)、中浓度(50 μmol/L)和高浓度(100 μmol/L)预处理1 h组.用噻唑蓝比色法检测内皮细胞活力,用试剂盒检测丙二醛含量和超氧化物歧化酶活性,用蛋白免疫印迹法检测Caspase-3的表达,用流式细胞仪分析细胞凋亡率.结果 与正常对照组比较,过氧化氢能明显造成内皮细胞损伤(P<0.05),表现为细胞活力降低,丙二醛含量增加,超氧化物歧化酶活性下降,Caspase-3表达增加,细胞凋亡率增加.对乙酰氨基酚可干扰过氧化氢对内皮细胞的损伤作用,使内皮细胞活力增加,丙二醛含量减少,超氧化物歧化酶活性升高,Caspase-3表达降低,细胞凋亡率减少(P<0.05).结论 对乙酰氨基酚可降低过氧化氢对人脐静脉内皮细胞的损伤作用,抑制过氧化氢引起的内皮细胞凋亡,其保护作用可能与抗氧化及抑制Caspase-3有关.     

表没食子儿茶素没食子酸酯抗消化道肿瘤作用的实验研究

背景：表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)具有抗肿瘤作用，但是其有效浓度和可能作用机制尚不十分清楚。目的：研究EGCG对不同消化道肿瘤细胞株的杀伤作用及其抗肿瘤作用的靶位点，为其应用于临床肿瘤治疗奠定理论基础。方法：采用四唑蓝(MTT)比色法检测8株消化道肿瘤细胞株对EGCG敏感性的差异；采用流式细胞仪检测EGCG对敏感肿瘤细胞株细胞周期分布的影响；采用聚合酶链反应(PCR)-酶联免疫吸附测定(ELISA)检测EGCG对敏感肿瘤细胞株端粒酶活性的影响。结果：EGCG对8株消化道肿瘤细胞株均具有剂量依赖性杀伤作用。SW1116和MKN45细胞对EGCG最敏感，半数抑制浓度(IC50)分别为51．7μmol／L和55．9μmol／L；BGC823和SGC7901细胞次之，IC50分别为68．5μmol／L和79．1μmol／L；AGS细胞对低浓度EGCG不敏感，对高浓度EGCG敏感，IC50为83．8μmol／L；MKN28细胞对EGCG中等敏感，IC50为119．8μmol／L；HGC27和LoVo细胞对EGCG不敏感，IC50分别为183μmol／L和194．6μmol／L。3种不同浓度的EGCG作用48h后，敏感肿瘤细胞株MKN45的细胞周期分布与对照组相比均无明显改变。EGCG可抑制MKN45细胞的端粒酶活性，其作用呈剂量和时间依赖性。结论：EGCG对不同消化道肿瘤细胞株具有不同程度、呈剂量依赖性的杀伤作用；对敏感肿瘤细胞株MKN45的细胞周期分布无明显影响。EGCG的抗肿瘤作用可能与其抑制肿瘤细胞的端粒酶活性有关。     

叔丁基对苯二酚对亚砷酸钠致细胞毒性和氧化损伤的拮抗作用

目的 探讨叔丁基对苯二酚(tBHQ)对亚砷酸钠(NaAsO2)致细胞毒性和氧化损伤的拮抗作用。方法 Chang肝细胞用tBHQ[0(对照)、5、25μmol/L]预处理24h,再用5 μmol/L tBHQ和NaAsO2[0(对照)、30、40、50、60 μmol/L]共同作用24h,采用刃天青钠(Alamar blue)还原法检测细胞活力,结果用实验组Alamar blue还原率与对照组Alamar blue还原率的相对比值表示;Chang肝细胞用tBHQ[0(对照)、5、25 μmol/L]预处理24h,再用5μmol/L tBHQ和NaAso2[0(对照)、40、50 μmol/L]共同作用24h,采用荧光探针2′,7′-二乙酰二氯荧光素(DCFH-DA)检测细胞内活性氧(ROS)的生成,结果用实验组平均荧光强度与对照组平均荧光强度的相对比值表示。结果 30、40、50、60 μmol/L的NaAsO2暴露能够显著降低细胞活力,而tBHQ预处理(5、25 μmol/L)则可明显恢复细胞活力,NaAsO2和tBHQ两因素的主效应及其交互作用均有统计学意义（F值分别为566.57、55.09、14.50,P均＜0.05）;5、25 μmol/L tBHQ预处理的30、40、50、60 μmol/LNaAsO2组细胞活力(0.75±0.02、0.70±0.04、0.59±0.03、0.43±0.03和0.75±0.02、0.73±0.03、0.65±0.02、0.50±0.02)较相应NaAsO2单独作用组(0.70±0.03、0.64±0.03、0.43±0.03、0.33±0.01)显著升高（P均＜0.05）,25 μmol/L tBHQ 预处理的50、60μmol/L NaAsO2组细胞活力高于相应5μmol/L tBHQ预处理组（P均＜0.05）。40、50 μmol/L的NaAsO2能显著诱导Chang肝细胞内ROS的产生,而tBHQ预处理(5、25 μmol/L)则可使NaAsO2诱导产生的细胞内ROS水平显著下降,NaAsO2和tBHQ两因素的主效应及其交互作用均有统计学意义（F值分别为181.78、60.55、4.93,P均＜0.05）;5、25 μmol/L tBHQ预处理的40、50 μmol/L NaAsO2组细胞内ROS水平(1.87±0.09、1.80±0.07和1.36±0.11、1.44±0.12)较相应NaAsO2单独作用组(2.30±0.18、2.18±0.17)显著降低(P 均＜ 0.05),25 μmol/L tBHQ预处理的40、50 μmol/L NaAsO2组细胞内ROS水平低于相应5μmol/L tBHQ预处理组（P均＜ 0.05）。结论 tBHQ对NaAsO2诱导的细胞毒性和氧化损伤具有一定的拮抗作用。     

环孢素A对β淀粉样蛋白_(25~35)诱导PC12细胞损伤的保护作用

目的探讨环孢素A对β淀粉样蛋白(Aβ)25³5诱导PC12细胞损伤有无保护作用及其可能机制。方法使用0.1、0.5、1.0μmol/L环孢素A(CsA)对PC12细胞预处理24 h后,给予20μmol/L的Aβ2535诱导PC12细胞损伤有无保护作用及其可能机制。方法使用0.1、0.5、1.0μmol/L环孢素A(CsA)对PC12细胞预处理24 h后,给予20μmol/L的Aβ25³5继续培养24 h。采用MTT法检测细胞活力及代谢状态,Hoechst33258/碘化丙啶(PI)双染法检测细胞存活率,免疫荧光染色法检测细胞自噬活性的变化。结果以20μmol/L Aβ2535继续培养24 h。采用MTT法检测细胞活力及代谢状态,Hoechst33258/碘化丙啶(PI)双染法检测细胞存活率,免疫荧光染色法检测细胞自噬活性的变化。结果以20μmol/L Aβ25³5处理24 h可对PC12细胞产生明显的损伤作用,细胞状态明显变差,部分细胞死亡;用0.5μmol/L环孢素A预处理24 h可以明显减轻Aβ2535处理24 h可对PC12细胞产生明显的损伤作用,细胞状态明显变差,部分细胞死亡;用0.5μmol/L环孢素A预处理24 h可以明显减轻Aβ25³5诱导的PC12细胞损伤,与仅以Aβ2535诱导的PC12细胞损伤,与仅以Aβ25³5处理组相比,CsA预处理组PC12细胞的死亡率明显降低。结论环孢素A可提高PC12细胞的自噬水平,对Aβ2535处理组相比,CsA预处理组PC12细胞的死亡率明显降低。结论环孢素A可提高PC12细胞的自噬水平,对Aβ25³5诱导的PC12细胞损伤具有保护作用,其机制可能与环孢素A能提高PC12细胞的自噬活性有关。     

不同砷化物对原代培养星型胶质细胞毒性作用的研究

目的 观察不同砷化物对原代培养星型胶质细胞的毒性作用。方法 细胞活力检测与形态学观察。结果 暴露40、60、80、100μmol／L3价和200、300、400、500μmol／L 5价无机砷的星型胶质细胞的AlamarBlue还原力与对照组比较差异有显著意义，且呈剂量-效应关系。体外24h暴露iAs^v和iAs^Ⅲ对原代培养星形胶质细胞的半数细胞活力抑制浓度分别为260．3μmol／L和50．8μmol／L。同时，暴露最低25μmol／L3价和100μmol／L5价无机砷的星型胶质细胞的细胞形态有明显的改变。另一方面，暴露最高1000μmol／L5价甲基砷和二甲基砷的星型胶质细胞的AlamarBlue还原力及细胞形态与对照组比较未见明显差异。结论 接触最少25μmol／L的3价无机砷或100μmol／L的5价无机砷对星型胶质细胞可产生明显的毒性损伤作用。3价无机砷的毒性明显大于5价无机砷。在微摩尔浓度范围内的5价甲基砷和二甲基砷对原代培养的星型胶质细胞无明显的直接毒性作用。     

黄芪甲苷对高糖诱导视网膜神经节细胞保护作用的机制

目的研究黄芪甲苷对人视网膜神经节细胞RGC-5增殖、凋亡的影响及其机制。方法将黄芪甲苷(0、25、50、100μmol/L)与50 mmol/L葡萄糖共处理RGC-5细胞,标记为高糖组、高糖+黄芪甲苷1组、高糖+黄芪甲苷2组、高糖+黄芪甲苷3组;运用噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞活力;流式细胞术检测各组细胞凋亡;Western印迹检测各组细胞中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-3、磷酸化(p)-氨基端激酶(JNK)、JNK的蛋白表达。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷氨酸(Glu)含量。结果与正常组相比,高糖组RGC-5细胞增殖显著降低,细胞凋亡显著升高,Caspase-3蛋白表达显著升高,氧化水平显著升高,兴奋性毒性显著升高,p-JNK蛋白表达显著升高(P<0.05);与高糖组相比,高糖+黄芪甲苷1、2、3组细胞凋亡显著降低,Caspase-3蛋白表达显著降低,氧化水平显著降低,兴奋性毒性显著降低,p-JNK蛋白表达显著降低(P<0.05);与高糖+黄芪甲苷1组相比,高糖+黄芪甲苷2、3组细胞凋亡显著降低,Caspase-3蛋白表达显著降低,氧化水平显著降低,兴奋性毒性显著降低,p-JNK蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论黄芪甲苷可通过对高糖诱导RGC-5细胞的增殖促进、凋亡抑制、抗氧化能力增强、兴奋性毒性减弱的作用,保护人视网膜神经节细胞免受损伤,其机制可能与黄芪甲苷失活JNK信号通路有关。     

葡萄内脂对PC12神经细胞损伤的保护作用研究

目的探讨葡萄内脂对过氧化氢(H2O2)诱导的肾上腺嗜铬瘤细胞(PC12)神经细胞损伤的保护作用。方法体外培养PC12细胞,建立PC12细胞过氧化氢损伤模型。将处于对数生长期的PC12细胞分为正常对照组、模型组、阳性对照组、5μmol/L葡萄内脂组、25μmol/L葡萄内脂组、50μmol/L葡萄内脂组。采用不同浓度(5μm/L,25μm/L和50μm/L)葡萄内脂对PC12细胞进行干预,通过测定细胞存活率、细胞上清液中乳酸脱氢酶水平和细胞内氧化活性物质(ROS)水平评价干预效果。结果模型组PC12细胞存活率显著低于正常对照组及阳性对照组; 25μmol/L、和50μmol/L葡萄内脂组PC12细胞存活率(与阳性对照组相当)显著高于模型组,随着葡萄内脂浓度的增加,H2O2诱导损伤的PC12细胞的存活率呈升高趋势,组间比较差异有统计学意义(P 0. 05)。模型组PC12细胞上清液乳酸脱氢酶水平明显高于正常组及阳性对照组,5μmol/L、25μmol/L和50μmol/L葡萄内脂组细胞上清液乳酸脱氢酶水平(与阳性对照组相当)均显著低于模型组,且随着葡萄内脂浓度的增加,乳酸脱氢酶水平呈降低趋势,组间比较差异有统计学意义(P 0. 05)。模型组PC12细胞ROS水平显著高于正常对照组及阳性对照组,5μmol/L、25μmol/L和50μmol/L葡萄内脂组PC12细胞ROS水平(与阳性对照组相当)均显著低于模型组,且随着葡萄内脂浓度的增加,ROS水平呈降低趋势,差异有统计学意义(P 0. 05)。结论葡萄内脂对H2O2诱导损伤的PC12神经细胞具有明显的保护作用,可能与其能维持细胞膜的完整性、发挥抗氧化作用有关。     

柚皮苷通过调控p38MAPK通路保护H9c2心肌细胞对抗多柔比星引起的炎症反应

目的 探讨柚皮苷（naringin,NRG）能否通过调控p38丝裂原激活蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase,MAPK）通路保护H9c2心肌细胞对抗多柔比星（doxorubicin,DOX）引起的炎症反应.方法 应用5μmol·L-1 DOX处理H9c2心肌细胞建立DOX心肌毒性损伤模型.CCK-8比色法检测细胞存活率;Westem blot法测定p38MAPK蛋白表达水平;酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂盒检测肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）和白细胞介素-6（IL-6）浓度.结果 在5μmol·L-1 DOX处理H9c2心肌细胞前,应用1μmol·L-1 NRG预处理150 min能明显抑制DOX引起的心肌细胞毒性,使细胞存活率升高,并能抑制5μmol·L-1 DOX对磷酸化（p）p38MAPK表达的上调作用;5μmol· L-1 DOX能引起H9c2心肌细胞产生炎症反应,表现为肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-1β和白细胞介素-6水平明显升高;1μmol· L-1 NRG预处理150 min或3μmol·L-1 SB203580（为p38MAPK抑制剂）预处理60 min均能抑制DOX对肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-1β和白细胞介素-6水平的升高作用及抑制DOX诱发的心肌细胞毒性.结论 NRG通过抑制p38MAPK通路保护H9c2心肌细胞对抗DOX引起的炎症反应及细胞毒性.     

表没食子儿茶素没食子酸酯逆转人白血病细胞多药耐药性及机制研究

目的：探讨表没食子儿茶素没食子酸酯[(-)epigallocatechin-3-gallate(EGCG）对人自血病细胞K562／A02多药耐药性的逆转作用及相关机制。方法：采用MTT法确定EGCG的非细胞毒性剂量。以及对K562／A02细胞药物敏感性的影响。以流式细胞仪测定细胞内化疗药物浓度的改变，同时于逆转前后采用免疫细胞化学方法检测凋亡相关蛋白bcl-2和bax表达水平的变化。结果：EGCG在低于103．2μmol/L时对K562/A02细胞的生长抑制率小于10％。40μmol/L、60μmol/L及80μmol/L EGCG均可增加K562／A02细胞对阿霉素的敏感性，使阿霉素对K562／A02细胞的IC50由原来的113．34mg／L降低至9．66mg／L、7．67mg/L和4．68mg／L，其逆转倍数分别为11．73、14．77和24．23倍。同时，不同浓度EGCG均可增加细胞内阿霉素浓度，并呈剂量依赖性。在40μmol/L、60μmol/L及80μmol/L EGCG作用后，细胞bcl-2和bax的表达水平均增加，并且bax/bcl-2比值升高。结论：EGCG可部分逆转人白血病细胞K562／A02对阿霉素的耐药性，其逆转机制与增加细胞内化疗药物浓度，升高细胞bax／bcl-2比值从而诱导细胞凋亡有关。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对晚期糖基化终产物诱导HUVEC凋亡的影响及可能的作用机制

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对晚期糖基化终产物(AGE)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡的影响及可能的作用机制。方法用200 mg/L AGE培养HUVEC 24 h;以50、100μmol/L EGCG预处理8 h后再用200 mg/L AGE作用于HUVEC;对照组用200 mg/L牛血清白蛋白作用于HUVEC 24 h。噻唑蓝比色法测定细胞活性,Hoechst-33258染色观察HUVEC形态变化,Annexin V-FITC/PI双标记法流式细胞仪检测细胞凋亡,活性氧检测以反映HUVEC内氧化应激水平。结果与对照组相比,AGE组HUVEC发生染色质固缩、核碎裂等细胞凋亡的形态学改变,细胞活性降低(P0.01),细胞凋亡率升高(P0.01),细胞内活性氧水平增加(P0.01)。EGCG预处理后能够使细胞凋亡的形态学改变明显减轻,细胞活性升高(P0.01),细胞凋亡率减低(P0.01),活性氧水平降低(P0.01);EGCG作用呈浓度依赖性。结论 EGCG呈浓度依赖性抑制AGE诱导的HUVEC凋亡,这一作用可能通过抑制HUVEC内氧化应激反应而实现。     

活性氧不参与二氯化钴诱导的人肺动脉平滑肌细胞增殖

目的 探讨活性氧是否参与二氯化钴诱导的人肺动脉平滑肌细胞(HPASMC)过度增殖.方法 用化学性缺氧模拟剂二氯化钴处理HPASMC,建立缺氧性肺动脉高压血管重塑的细胞模型 用外源性活性氧供体过氧化氢处理HPASMC,观察活性氧对细胞增殖的影响;活性氧清除剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)预处理HPASMC,观察其对二氯化钴或过氧化氢诱导的细胞增殖的改善作用;应用细胞计数试剂盒8检测细胞增殖,Western blot检测缺氧诱导因子1α(HIF-1α)蛋白的表达,双氯荧光素染色和荧光照相术检测细胞内活性氧的含量.结果 在25 ～ 50μmol/L浓度范围内,二氯化钴处理24 h可诱导HPASMC增殖,50 μmol/L二氯化钴处理24 h可使细胞内HIF-1α的水平明显增加;与二氯化钴的作用类似,过氧化氢在12 ～ 25μmol/L浓度范围内处理24 h也可引起细胞增殖,但不改变HIF-1α的水平;在二氯化钴或过氧化氢处理前,用不同浓度的NAC预处理,在1 500 μmol/L浓度时,NAC预处理可明显抑制过氧化氢诱导的HPASMC过度增殖(P＜0.05),而对二氯化钴诱导的细胞增殖则无明显影响(P＞0.05);另外,50 μmol/L二氯化钴处理6～24 h对细胞内活性氧的含量无明显影响(P＞0.05).结论 化学性缺氧可诱导HPASMC过度增殖,其机制可能不依赖于活性氧.     

砷致大鼠淋巴细胞毒性及硒的拮抗作用

目的研究不同浓度的亚砷酸钠对体外培养的大鼠淋巴细胞活力的影响及亚硒酸钠的拮抗作用.方法大鼠外周血淋巴细胞分离后,施加处理因素,在37℃条件下恒温培养,用AlamarBlueTM摄入法定量检测淋巴细胞活力.结果亚砷酸钠浓度大于5μmol时,AlamarBlue的还原率显著低于对照组,且呈剂量反应关系;用5 μmol的亚硒酸钠预处理24 h后,亚砷酸钠为10μmol时AlamarBlue的还原率与对照组相比差异无显著意义.结论亚砷酸钠可抑制淋巴细胞活力,亚硒酸钠可拮抗3价砷的细胞毒性作用.     

淫羊藿苷对S-亚硝基化谷胱甘肽诱导损伤的内皮细胞的保护作用

目的探讨淫羊藿苷对S-亚硝基化谷胱甘肽诱导损伤的内皮细胞的保护作用。方法内皮细胞(EA.hy926)预先给予不同浓度ICA(高浓度:10μmol/L,中浓度:1μmol/L,低浓度:0.1μmol/L),之后给予S-亚硝基化谷胱甘肽(1mmol/L)损伤,建立模型。采用:噻唑兰染色法检测细胞存活率,通过对乳酸脱氢酶、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、活性氧、细胞色素C、Caspase-3等相关指标的测定进行分析。结果淫羊藿苷可明显提高内皮细胞内超氧化物歧化酶以及谷胱甘肽过氧化物酶的活性,抑制活性氧的产生,降低细胞色素C的释放以及Caspase-3的活性,从而减少细胞的凋亡,差异有统计学意义(P<0.01),对S-亚硝基化谷胱甘肽诱导损伤的内皮细胞起到保护作用。结论淫羊藿苷对S-亚硝基化谷胱甘肽诱导损伤的内皮细胞具有保护作用,其机制可能与淫羊藿苷可提高细胞内超氧化物歧化酶以及谷胱甘肽过氧化物酶的活性,抑制活性氧的产生和减少细胞色素C的释放有关。     

奈必洛尔对非对称性二甲基精氨酸诱导损伤人脐静脉内皮细胞的保护作用研究

目的观察奈必洛尔对非对称性二甲基精氨酸(ADMA)诱导损伤人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的保护作用。方法用ADMA16μmol/L培养HUVECs 24 h,不加或加入阿替洛尔20μmol/L、奈比洛尔(5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L)预处理1 h。0.25%胰酶消化细胞,获取细胞悬液,离心收集细胞上清液,检测一氧化氮(NO)水平、一氧化氮合酶(NOS)活性。提取HUVECs总RNA,用RT-PCR分析内皮型一氧化氮合酶(eNOS)mRNA表达。结果 ADMA16μmol/L刺激HUVECs 24 h后,上清液NO含量和NOS活性降低,eNOS mRNA表达下调。奈比洛尔可剂量依赖性抑制ADMA所致的上述损伤。阿替洛尔对ADMA诱导的损伤无显著改善。结论奈必洛尔可保护ADMA诱导损伤HUVECs。     

不同浓度姜黄素对脂肪变性L02细胞凋亡的影响

目的探讨不同浓度的姜黄素对肝脏细胞的影响。方法利用不同浓度的姜黄素诱导L02细胞检测细胞的活力,探索合适的有效姜黄素实验浓度。将脂肪变性的L02细胞分为24 h组和48 h组,分别用姜黄素不同实验浓度干预,流式检测脂肪变性的L02细胞的凋亡比例和caspase-3的活化情况。结果当姜黄素的浓度小于25μmol/L的时候,细胞的活力在80%以上,可以选择1、5、12.5、25μmol/L做为后续干预浓度。1μmol/L的姜黄素能显著降低脂肪变性L02细胞的凋亡比例。5μmol/L的姜黄素干预组对正常和脂肪变性的L02细胞凋亡和坏死均比例和对照组相当,而12.5、25μmol/L组对正常和脂肪变性L02细胞发生凋亡和坏死的比例显著升高。结论低浓度的姜黄素对脂肪变L02细胞有保护作用,而高浓度的姜黄素能激活L02细胞的凋亡途径,并且进一步引起脂肪变性的L02细胞的坏死,而不是发挥保护作用。这种诱导作用随着时间的延长而愈加明显。     

丹参酮ⅡA对N-甲基-D-天冬氨酸诱导的视网膜神经节细胞损伤的保护作用

目的探讨丹参酮ⅡA对N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyl-D-aspartic acid,NMDA)诱导的视网膜神经节细胞系RGC-5细胞损伤的保护作用。方法体外培养RGC-5细胞,分为NMDA损伤组、正常对照组、地卓西平阳性对照组、丹参酮ⅡA预保护组,丹参酮ⅡA预保护组又分为3个亚组(0.4μg/mL、4μg/mL、40μg/mL)。除正常对照组外,其余各组加入NMDA(100μmol/L)诱导损伤,观察细胞形态;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞存活率; Hoechst染色检测细胞凋亡;逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)测定Bax和Bcl-2的mRNA变化。结果与正常对照组相比,NMDA损伤组RGC-5细胞损伤,细胞存活率降低,细胞凋亡增加,Bcl-2 mRNA表达降低,Bax mRNA表达升高(P0.05)。与NMDA损伤组相比,4μg/mL、40μg/mL丹参酮ⅡA预保护亚组RGC-5细胞存活率提高,细胞凋亡减少(P0.05),另外4μg/mL丹参酮ⅡA预保护亚组Bax mRNA的表达水平降低,Bcl-2mRNA表达水平增加(P0.05)。结论丹参酮ⅡA可抑制NMDA诱导的视网膜神经节细胞凋亡,保护视网膜神经元,其机制可能与下调Bax mRNA和上调Bcl-2 mRNA的表达有关。     

EGCG对胃癌BGC-823细胞增殖及其VEGF表达的影响

目的观察表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对胃癌BGC-823细胞增殖和VEGF表达的影响。方法用5、10、20、40、80μmol/L的EGCG培养BGC-823细胞48 h,采用MTT法测定BGC-823细胞增殖抑制率,并计算IC50。用12、24、48μmol/L EGCG处理BGC-823细胞24 h,用Trizol法提取RNA,采用实时定量PCR法检测VEGFmRNA;同时收集细胞上清液,用ELISA法检测VEGF蛋白。结果 BGC-823细胞增殖抑制率与EGCG浓度呈正相关（r=0.977、P〈0.05）。EGCG抑制BGC-823细胞增殖的IC50为（47.94±3.26）μmol/L。以12、24、48μmol/LEGCG处理BGC-823细胞24 h,BGC-823细胞中VEGF mRNA相对表达量分别为0.63±0.05、0.25±0.02、0.16±0.01,BGC-823细胞中VEGF mRNA相对表达量与EGCG浓度呈负相关（r=-0.855、P〈0.05）;上清液中VEGF水平为（677.32±41.08）、（545.16±28.17）、（256.06±11.02）ng/L,上清液中VEGF水平与EGCG浓度呈负相关（r=-0.991、P〈0.05）。结论 EGCG可以抑制胃癌细胞的增殖,并且可以下调VEGF mRNA的表达,减少VEGF的分泌。     

谷氨酸对原代培养的SD大鼠皮层神经元毒性作用量效关系研究

目的 探讨谷氨酸（Glu）对体外培养的大鼠皮层神经细胞作用的量效关系及其毒性损害作用。方法 原代培养新生SD大鼠（1d）大脑皮层神经细胞，分别加入不同浓度的Glu作用20min，24h后测定细胞存活率，比较不同浓度的Glu对细胞的毒性作用并对其进行形态学观察。结果 大鼠皮层神经细胞在20μmol／LGlu作用20min后，细胞存活率开始降低，胆碱乙酰转移酶（CHAT）活性降低。随着Glu浓度的增加，上述变化更明显。结论 体外Glu引起神经元损伤的亚毒性浓度为20μmol／L，随着Glu浓度的增加，神经细胞受损伤程度加重。     

穿心莲内酯调控Nrf2/HO-1通路减轻百草枯诱导的Ⅱ型肺泡上皮细胞氧化损伤

目的 探讨穿心莲内酯(Andrographolide)减轻百草枯(PQ)诱导的小鼠Ⅱ型肺泡细胞(MLE-12)氧化应激损伤。方法 常规培养MLE-12细胞，分为对照组、PQ组、0.1%DMSO+PQ组和穿心莲内酯+PQ组；给予25μmol·L^-1穿心莲内酯预处理6 h,后给予800μmol·L^-1 PQ干预24 h。CCK-8检测细胞活性；RT-qPCR和Western blot检测Nrf2和HO-1 mRNA和蛋白水平；试剂盒检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和过氧化氢酶(CAT)水平；流式细胞仪和荧光显微镜检测细胞内的活性氧(ROS)水平。结果 PQ能够降低MLE-12细胞活性，并呈剂量依赖性；PQ为200μmol·L^-1、400μmol·L^-1、800μmol·L^-1、1200μmol·L^-1和2000μmol·L^-1对应细胞活性为89.5%、74.27%、58.65%、37.65%和26.83%。浓度为25μ...