基于质量标志物的三七粉质量标准提升研究＊

目的 基于三七粉质量标志物的研究结果，完善三七粉质量标准，为其质量标准的修订提供科学依据。方法 利用高效液相色谱技术，结合“一测多评”等分析方法，对三七粉质量标志物进行含量测定，对不同厂家三七粉及不同商品规格原料药材进行质量标志物差异分析。建立指纹图谱，采用新的相似度计算模型-等同系数法和模式识别对三七粉及原料药材进行质量一致性评价。结果 不同厂家三七粉中三七素含量存在差异，收集到的白云山和黄中药三七粉中三七素含量均高于其余厂家，提示三七素可能为白云山和黄中药三七粉的优势指标。原料药材中三七素和皂苷含量与头数不具相关性，但与季节、部位具有相关性。皂苷方面表现为冬三七＞春三七，芦头＞主根＞须根＞筋条；三七素方面表现为冬三七＞春三七，须根＞芦头＞筋条＞主根。应用等同系数法计算指纹图谱相似度实现了不同厂家三七粉的区分，进一步结合化学模式识别实现了不同规格原料药材的区分。结论 建立的含量测定及指纹图谱方法稳定可行，专属性强，对于控制三七粉质量具有显著意义。与2020年版《中国药典》相比，该文修订了三七粉含量测定项，增加了HPLC指纹图谱项，可为三七粉的质量标准提升及其原料药材的选择提供科学依据。     

基于止血作用的三七粉质量标志物研究＊

目的 探索三七粉活血作用的质量标志物。方法 采集家兔血浆，采用体外凝血酶时间（TT）、活化部分凝血活酶时间（APTT）、凝血酶原时间（PT）、纤维蛋白原（FIB）检测试剂盒观察三七粉主要成分对凝血系统的影响；收集家兔富含血小板血浆，以二磷酸腺苷（ADP）诱导血小板聚集，观察三七粉主要成分对血小板聚集率的影响；取家兔主动脉条，置于体外组织灌流系统中，以去氧肾上腺素诱导血管条收缩，观察三七粉主要成分对血管平滑肌收缩功能的影响。结果 以蒸馏水溶解的三七总皂苷（PNS），与水溶剂组比较，可显著延长TT、APTT、PT，降低FIB含量（P<0.05、P<0.01），降低ADP诱导的血小板聚集率（P<0.01）。以5%二甲基亚砜（DMSO）溶解的单体成分，与5%DMSO溶剂组比较，人参皂苷F₂、人参皂苷Rb₂、人参皂苷Rb₃、人参皂苷Rk₁、三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₂，可显著延长TT（P<0.05，P<0.01）；人参皂苷F₂、人参皂苷Rd、人参皂苷Rb₂、人参皂苷Rg₂、人参皂苷Rb₁、槲皮素可延长APTT（P<0.05）；人参皂苷Re、槲皮素、人参皂苷F₂、人参皂苷Rb₃，可显著延长PT（P<0.05）；槲皮素、人参皂苷F₂、人参皂苷Rg₁、人参皂苷Rg₃、人参皂苷Rb₂、人参皂苷Rb₁、人参皂苷Rb₃、三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₂可显著降低血浆FIB含量（P<0.05）；人参皂苷Rg₁、人参皂苷Rh₁、人参皂苷Rb₂、人参皂苷Rg₂、三七皂苷R₁、人参皂苷F₂、人参皂苷Rg₃、人参皂苷Rd和人参皂苷Rb₁可显著降低ADP诱导的血小板聚集（P<0.05）；人参皂苷Rg₃、人参皂苷Rh₁、人参皂苷Rd、三七皂苷R₁、人参皂苷Rk₁和人参皂苷Rg₂可明显扩张血管动脉条（P<0.05，P<0.01）。结论 三七粉活血作用表现在抗凝、抗血小板聚集、扩血管等方面，人参皂苷F₂、人参皂苷Rg₂、人参皂苷Rg₃、三七皂苷R₁、人参皂苷Rb₁、人参皂苷Rb₂、人参皂苷Rb₃、人参皂苷Rd、人参皂苷Rg₁、槲皮素等可能为三七活血作用的物质基础，可作为三七粉活血作用的质量标志物进一步研究。     

三七粉血清药物化学研究＊

目的 采用超高效色谱-电喷雾/四级杆飞行时间串联质谱联用（UPLC-ESI-Q-TOF-MS/MS）技术对三七粉中主要化学成分和血中移行成分进行准确快速鉴定。方法 采用Waters Xevo G2 Q-Tof高分辨质谱、Waters Acquity UPLC液相色谱系统、Waters Acquity UPLC? BEH C₁₈色谱柱（2.1×100 mm， 1.7 μm），以0.1%甲酸乙腈-0.1%甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱，采用电喷雾（ESI）离子源，在正、负离子模式下采集数据，通过与对照品的保留时间及质谱信息对比，并结合文献报道及质谱数据库中相同成分或同类成分的精确分子质量、质谱裂解规律进行匹配，对三七粉中化学成分和血中移行成分进行快速准确识别。结果 三七粉中共鉴定得到54个化学成分，包括原人参二醇皂苷类36个，原人参三醇皂苷类14个，黄酮类1个，糖类1个，氨基酸类1个和酯类化合物1个。在给药大鼠血浆中共鉴定得到18个三七粉相关的外源性化合物，包括14个吸收原型药物成分和4个代谢物。结论 利用建立的定性分析方法快速准确地识别三七粉中主要化学成分和血中移行成分。明确了三七粉体外化学成分组-体内血行成分组的药效物质基础传递-转化过程，为三七粉的质量标志物确定与质量控制提供依据，也为其深入分子作用机制研究奠定基础。     

基于消肿定痛功效的三七粉质量标志物研究＊

目的 探究三七粉发挥消肿定痛功效的质量标志物。方法 首先，采用小鼠醋酸扭体实验，将ICR小鼠随机分成模型对照组、阳性对照阿司匹林组（0.12 g·kg^-1）、三七粉低（1.1 g·kg^-1）、中（2.2 g·kg^-1）、高（4.4 g·kg^-1）剂量组、三七总皂苷低（0.25 g·kg^-1）、中（0.5 g·kg^-1）、高（1.0 g·kg^-1）剂量组，连续给药3天每日1次，第3天给药1 h后腹腔注射1%醋酸溶液，记录15 min内扭体次数。进一步采用LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞RAW264.7炎症模型，探讨三七粉中的三七总皂苷及14个代表性单体成分对细胞上清液中NO、TNF-α和IL-6的含量影响。结果 实验表明，与模型组比较，三七粉及三七总皂苷中、高剂量组均能显著减少扭体反应次数（P<0.05，P<0.01）；三七总皂苷及14个化合物均能显著降低细胞上清液中NO、TNF-α、IL-6含量（P<0.05）。结论 三七粉具有良好的抗炎、镇痛作用，其发挥消肿定痛的药效物质基础可能为三七皂苷R1、人参皂苷Re、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rg2、人参皂苷Rh1、人参皂苷Rd、人参皂苷Rg3、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rb2、人参皂苷Rb3、人参皂苷F2、人参皂苷Rk1、槲皮素、三七素。     

基于心血管保护作用的三七粉质量标志物研究＊

目的 探索三七粉心血管保护作用的质量标志物。方法 采用CoCl₂制备心肌细胞（H9C2）损伤模型，观察三七粉主要成分对心肌细胞成活率、LDH、MDA、SOD的影响；采用H₂O₂制备人脐静脉内皮细胞（HUVEC）损伤模型，观察三七粉中主要成分对内皮细胞存活率、LDH、ACP的影响。结果 人参皂苷Rb₂、人参皂苷Rb₃、人参皂苷Rg₁、人参皂苷Rg₃、人参皂苷Re、人参皂苷Rd、槲皮素、人参皂苷F₂、人参皂苷Rk₁、人参皂苷Rh₁、三七素能够显著增加H9C2细胞存活率（P<0.05，P<0.01），多个成分能够减少LDH、MDA，增加SOD；三七皂苷R₁、人参皂苷Rb₂、人参皂苷Rb₃、槲皮素、人参皂苷F₂、人参皂苷Rk₁、人参皂苷Rh₁、三七素可显著提高HUVEC细胞存活率（P<0.05，P<0.01），多个成分能够减少LDH、ACP。结论 三七粉发挥心血管保护作用的药效物质基础包括多种皂苷类成分、三七素，以及黄酮类成分槲皮素。     

安息香药材化学成分、药理作用研究进展及质量标志物预测分析＊

安息香为安息香科白花树Styrax tonkinensis （Pierre） Craib ex Hart.的干燥树脂，主要化学成分为香脂酸类和三萜类物质，及少数木脂素类物质，其中香脂酸类化合物是其主要活性成分。安息香主要药理活性有抗炎解热、抗肿瘤、血脑屏障保护等。本文对安息香药材的化学成分和药理作用进行了综述，并从多角度分析预测了安息香可能的质量标志物，为安息香药材的质量控制、合理开发与利用提供参考。     

脑小血管病生物标志物的研究进展＊

脑小血管病（Cerebral small vessel disease，CSVD）是指各种病因导致脑穿通动脉、小静脉、小动脉、毛细血管病变而引起的临床、影像、病理改变的综合征。近些年，CSVD的检出率与发病率有所增高，找寻CSVD的特异性生物标志物成为其临床诊疗的重要议题。为了梳理CSVD的生物标志物的研究现况，本文简析CSVD发病机制，并从炎性标志物、凝血和纤溶标志物、内皮功能障碍相关标志物、脑脊液相关标志物、基因相关标志物等5个方面阐述CSVD生物标志物的相关进展，以期为其诊断分类、疗效判断与疾病预后提供参考。     

急性脑出血瘀热病机生物标志物的血浆差异代谢组学研究＊

目的 采用血浆差异代谢组学的方法筛选和评价急性脑出血瘀热病机的特征代谢物，并确立生物标志物。方法 根据《中医脑出血瘀热评分量表》，采用匹配的方法收集临床瘀热型与非瘀热型急性ICH患者各40例，健康对照40例，应用液相色谱-质谱联用技术(LC-MS)检测瘀热组(YP)、非瘀热组(FP)及健康组(JP)之间血浆差异代谢物。采用主成分分析(PCA)、偏最小二乘法判别分析(PLS-DA)和正交偏最小二乘法判别分析(OPLS-DA)对代谢组学数据进行多维统计分析，筛选急性脑出血瘀热病机单元的特征代谢物。结果 YP/JP检测出27个差异代谢物；FP/JP检测出23个差异代谢物；FP/YP检测出14种差异代谢物，主要涉及类固醇激素合成、组氨酸代谢、半乳糖代谢等9个通路。结论 可的松21-乙酸酯、酸甲酯和甘油三酯可作为一组急性脑出血瘀热病机的潜在生物标志物。     

包装对三七粉和熟三七粉稳定性的影响研究

目的:通过考察不同包装下三七粉和熟三七粉外观性状、水分及有效成分含量等变化情况,确定包装对三七粉和熟三七粉稳定性的影响。方法:在恒温恒湿箱中对三七粉和熟三七粉进行加速试验,于0、1、2、3、6月对三七粉和熟三七粉外观性状及含水量进行考察,同时以皂苷类成分的含量作为检测指标,利用本课题组前期建立的高效液相色谱法,对三七粉和熟三七粉中的皂苷类有效成分含量进行检测,并统计分析。结果:所有样品经6个月加速试验后观察未见霉变、虫蛀等现象,外观性状基本一致,水分含量增高但其含量仍符合《中华人民共和国药典》（2015版）规定（水分含量≤14%）。三七粉中人参皂苷Rg1、Rb1、三七皂苷R1含量的总和及熟三七粉中人参皂苷Rk1、Rh4含量的总和无显著减少。真空与非真空2种包装状态对饮片有效成分含量的影响较小,但对饮片的吸湿性有影响。结论:PTE/PE复合而成的食品级铝塑复合膜是较理想的包材,能保证三七粉和熟三七粉质量的稳定,真空包装可以显著降低样品的吸湿程度。     

基于偏最小二乘判别分析建立熟三七粉的质量评价方法

目的 建立熟三七粉的HPLC特征图谱,并对其8种稀有皂苷的含量进行测定,结合偏最小二乘法判别分析（PLS-DA）和聚类分析,为熟三七粉质量的科学评价提供方法。方法 采用Agilent Zorbax SB-C₁₈（250 mm×4.6 mm,5 μm）色谱柱,以乙腈（A）-水（B）为流动相洗脱梯度：0~10 min,19%~33% A;10~30 min,33%~38% A;30~45 min,38%~50% A;45~60 min,50%~60% A,体积流量1.0 mL/min,检测波长203 nm,柱温40℃,进样量10 μL,建立熟三七粉的HPLC特征图谱,并对其人参皂苷20（S）-Rh₁、20（R）-Rh₁、Rk₃、Rh₄、20（S）-Rg₃、20（R）-Rg₃、Rk₁和Rg₅共8种指标性成分定量测定方法进行方法学考察,对63批熟三七粉进行含量测定。结果 建立了熟三七粉的HPLC特征图谱,共标定19个共有峰。同时测定8种稀有皂苷成分含量,色谱峰达到了较好的分离,且线性关系良好,8种皂苷线性回归方程的相关系数分别为0.999 9、0.999 5、0.999 4、0.999 3、0.999 1、0.999 3、0.999 1、0.999 3;平均加样回收率为95%~105%;RSD值均低于2%。63批样品按色泽分为棕红色与淡黄色2组,棕红色组质量明显优于淡黄色组。结论 熟三七粉的质量优劣与色泽有关,该方法灵敏、准确、重现性好,可为熟三七粉的质量评价提供参考。     

三七生长年限对5个皂苷及其抗血栓作用的影响

目的 通过比较分析不同生长年限对三七质量、皂苷含量及抗血栓作用的影响,为确定三七药材适宜的采收年限提供数据支持。方法 建立高效液相色谱法（HPLC）同时测定三七中人参皂苷Rg₁、人参皂苷Rb₁、人参皂苷Rd、人参皂苷Re、三七皂苷R₁ 5个主要皂苷,比较1—6年不同生长年限的三七有效成分的积累情况。同时,利用斑马鱼血栓模型比较1、2、3年生三七的抗血栓作用。结果 1—3年生三七质量、5个皂苷含量均随生长年限的增加逐渐累积,其中人参皂苷Rg₁和人参皂苷Rb₁的含量均较高,随年限变化最显著;而4—6年生三七中质量、皂苷含量受批次个体等影响较大,皂苷含量波动较大,与3年生三七相比差异无统计学意义。1—3年生三七抗血栓作用比较中发现,在相同剂量下,生长年限越长,疗效越好;在相同生长年限下,剂量越大,疗效越好。结论 综合品质、产量、种植成本及活性等因素,结合目前产地种植三七的实际情况,3年生三七整体品质较高且趋于稳定,可为三七标准化采收提供依据。     

反相离子对色谱法测定三七中三七素含量

建立反相离子对色谱法测定三七中三七素含量。通过超声提取样品中的三七素,并采用四丁基氢氧化铵离子对试剂与反相高效液相色谱法结合直接测定三七素含量。确定超声提取优化条件为物液比为1:20,连续超声提取2次,每次15 min,3500 r·min^-1,离心15 min。三七不同生长年限、产地、部位、以及同属植株中三七素含量均有差异:一年生三七茎叶三七素含量最高;红河州样品三七素含量高于文山州;真空冷冻干燥方式优于其他加工方式;三七高于其他同属植株。该检测方法操作简便,分离度好,稳定性好,适用于三七素含量直接测定,为三七中三七素的质量标准控制提供参考。     

熟三七饮片HPLC指纹图谱的建立及多成分定量测定

目的建立不同产地熟三七饮片的HPLC指纹图谱,并同时测定其中11种皂苷类成分含量。方法采用Agilent Zorbax SB-C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-水为流动相(洗脱程序:0~30 min,20%乙腈;30~60 min,20%~45%乙腈;60~88 min,45%~75%乙腈;88~98 min,75%乙腈;98~100 min,75%~20%乙腈),体积流量1.0 m L/min,检测波长203 nm,柱温35℃,建立熟三七饮片的HPLC指纹图谱,并对三七皂苷R1及人参皂苷Rg1、Re、Rb1、20S-Rh1、20R-Rh1、Rd、Rk3、Rh4、20S-Rg3、20R-Rg3等指标成分的定量测定方法进行方法学考察,对10批(S1~S10)熟三七饮片进行含量测定。结果建立了熟三七饮片的HPLC指纹图谱,共标定30个共有峰,S1~S10指纹图谱的相似度分别为0.941、0.938、0.945、0.951、0.913、0.909、0.920、0.928、0.917、0.919;在所建立的定量测定方法条件下,同时测定11个皂苷成分,三七皂苷R1及人参皂苷Rg1、Re、Rb1、20S-Rh1、20R-Rh1、Rd、Rk3、Rh4、20S-Rg3、20R-Rg3平均质量分数分别为5.274、20.515、2.838、23.651、3.476、1.407、5.239、1.784、1.580、0.904、0.294 mg/g;色谱峰均达到了较好地分离,且在线性范围内线性关系良好,11种皂苷的线性回归方程相关系数分别为0.999 7、0.999 5、0.999 5、0.999 7、0.999 7、0.999 6、0.999 7、0.999 6、0.999 7、0.999 7、0.999 6;平均加样回收率分别为101.23%、98.52%、97.67%、99.62%、98.17%、98.92%、99.44%、99.14%、100.25%、98.23%、96.89%;RSD值分别为1.35%、1.58%、2.44%、1.05%、1.48%、1.56%、0.85%、2.34%、2.85%、1.25%、1.08%。结论该方法灵敏、准确、重复性好,可为熟三七饮片的质量评价提供参考。     

不同部位三七粉显微特征及质量标准

目的:建立三七主根、剪口、筋条不同部位加工成的三七粉质量标准。方法:采用感官、色度测定、显微、理化、含量测定检验方法。结果:不同药用部位加工成的三七粉在外观颜色、显微特征、灰分、含量测定几个方面有明显区别,感官和显微特征不能区分三七的商品规格。颜色可以区分三七主根、剪口和筋条制成的三七粉,主根加工成的三七粉颜色最浅,呈黄白色,剪口与筋条加工成的三七粉颜色略深,呈现棕黄色和浅棕色,使用色差仪并结果经过SPSS分析结果与观察一致,剪口的颜色最深,筋条次之,主根颜色最浅;显微特征能够区分剪口和主根、筋条加工成的三七粉,剪口加工成的三七粉中可见纤维,主根与筋条加工成的三七粉中均未检出有纤维,剪口可见簇晶,主根中簇晶未检出;主根灰分全部合格,剪口和筋条有部分不合格,酸不溶性灰分全部合格。测定三七不同部位人参皂苷Rg1,人参皂苷Rb1及三七皂苷R1的含量,主根和筋条与剪口成分有明显差异。结论:颜色差异、显微特征区别、灰分数据、人参皂苷Rg1,人参皂苷Rb1及三七皂苷R1的含量为三七粉提供质量依据。