胰腺腺泡细胞凋亡在大鼠急性胰腺炎病程中的作用及凋亡调控基因的表达

目的: 探讨胰腺腺泡细胞凋亡及凋亡调控基因--Bax的表达情况及其与急性胰腺炎严重度的关系. 方法: 在胰胆管共同通道内逆行注射不同浓度的脱氧胆酸钠,制备不同重症程度的急性胰腺炎模型.24只SD大鼠随机分为对照组(假手术组)、APⅠ组(0.75%剂量组)和APⅡ组(1.5%剂量组).分别于造模后6小时处死各组存活大鼠.用TUNEL法分析腺泡细胞凋亡情况,用免疫组化及WesternBlotting检测Bax的表达情况. 结果: APⅠ组大鼠较APⅡ组胰腺坏死减少、出血减轻,血清淀粉酶、IL-6和IL-8水平明显下降;病变程度轻的APⅠ组大鼠腺泡细胞凋亡指数比病变程度重的APⅡ组高(6.36±2.41vs2.34±1.15,P<0.05);正常腺泡细胞Bax的表达弱;产生急性胰腺炎时,腺泡细胞Bax的表达增强,病变程度轻的大鼠腺泡细胞Bax表达水平较病变程度重的强,与二者凋亡指数的差别相一致. 结论: 产生急性胰腺炎时,腺泡细胞凋亡与其病情严重程度呈负相关,腺泡细胞凋亡在急性期是一种保护现象;Bax的表达水平与腺泡细胞凋亡指数呈正相关,与胰腺炎的病变程度呈负相关.     

紫杉醇诱导急性胰腺炎大鼠胰腺腺泡细胞凋亡机制的研究

目的研究急性胰腺炎时紫杉醇诱导大鼠胰腺腺泡细胞凋亡的机制。方法利用胆胰管内注射脱氧胆酸钠的方法建立急性胰腺炎大鼠模型 ,并向腹腔内注射紫杉醇以诱导胰腺腺泡细胞凋亡。利用免疫组化法研究胰腺腺泡细胞凋亡相关蛋白Bcl 2、Bax、Fas、FasL及 p5 3表达的变化。结果急性胰腺炎时大鼠胰腺腺泡细胞中Bax(2 5 0 6± 94 2 )、Fas(2 79± 15 0 )和 p5 3(180± 5 6 )的表达增加 ,Bcl 2 (79± 4 2 )表达无明显变化 ,而FasL只表达于急性胰腺炎时胰腺间质浸润的炎性细胞中。结论急性胰腺炎时紫杉醇诱导的大鼠胰腺腺泡细胞凋亡与Bax、Fas/FasL系统以及p5 3蛋白有关。     

急性胰腺炎与胰腺腺泡细胞凋亡的关系

目的：研究急性胰腺炎严重程度与胰腺泡细胞凋亡的关系。方法：建立不同严重程度的急性胰腺炎大鼠模型，通过原位末端标记法定量检测胰腺腺泡细胞凋亡率。结果：单纯水肿性胰腺炎时极少有腺泡细胞凋亡。出血坏死性胰腺炎时有腺泡细胞凋亡，且随着出血坏死程度的加重，腺泡细胞的凋亡先较快地增加后逐渐减少，细胞坏死则逐渐增多。结论：在急性单纯水肿性胰腺炎时极少有腺泡细胞凋亡。急性胰腺炎的严重程度与腺泡细胞的凋亡率在程度较轻的急性出血坏死性胰腺炎时呈正相关，而在程度较重的急性出血坏死性胰腺炎时则呈负相关。     

青蒿素诱导急性胰腺炎胰腺腺泡细胞凋亡的实验研究

目的探讨青蒿素（artemisinin）对急性胰腺炎胰腺腺泡细胞凋亡的影响,并了解是否减轻急性胰腺炎严重程度。方法腹腔内注射雨蛙素（cerulein）诱导大鼠胰腺炎模型建立,设正常对照组、胰腺炎组及青蒿素组,通过原位末端标记（TUNEL）法检测各组胰腺组织中腺泡细胞的凋亡指数,并用分光光度法检测髓过氧化物酶（MPO）活性。采用两步酶消化法分离正常大鼠胰腺腺泡细胞,离体分组培养,采用丫碇橙（AO）染色及caspase-3活性的检测,评估青蒿素对胰腺腺泡细胞凋亡的影响,并检测各组培养液中的乳酸脱氢酶（LDH）及淀粉酶（AMS）活性,评估胰腺腺泡细胞酶的释放。结果在体实验中,青蒿素组与胰腺炎组比较,胰腺腺泡细胞凋亡指数明显增高（P〈0.05）,MPO活性明显减低（P〈0.05）。体外实验中,青蒿素组胰腺腺泡细胞凋亡指数及caspase-3活性较胰腺炎组明显增高（P〈0.05）,培养液中的LDH和AMS活性也明显降低（P〈0.05）。结论青蒿素可促进大鼠急性胰腺炎胰腺腺泡细胞凋亡,减少胰酶释放及中性粒细胞激活,可减轻急性胰腺炎严重程度。     

清胰汤对大鼠急性坏死性胰腺炎时胰腺腺泡细胞凋亡的影响

目的：研究清胰汤对大鼠急性坏死性胰腺炎时胰腺腺泡细胞凋亡的影响。方法：选用健康雄性SD大鼠30只，随机分为假手术组、模型组和清胰汤治疗组，每组10只。采用TUNEL技术检测胰腺腺泡细胞的凋亡；RT-PCR检测胰腺组织Bax和Caspase一8mRNA的表达；免疫组化分析胰腺组织Bax和Gaspase-8蛋白表达。结果：与模型组比较，清胰汤组大鼠胰腺腺泡细胞凋亡显著增多（P＜0.01），BaxmRNA及蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）；血清淀粉酶及TNF-α、IL-6水平显著降低（P＜0.05），胰腺组织病理损害明显减轻。结论：清胰汤可能通过上调Bax基因的表达促进胰腺腺泡细胞凋亡，减轻胰腺组织病理损害。     

奥曲肽对大鼠急性胰腺炎腺泡死亡方式的影响

目的探讨奥曲肽对急性胰腺炎(Acute Pancreatitis,AP)腺泡细胞死亡方式的影响。方法使用奥曲肽对急性胰腺炎大鼠模型进行治疗,采用原位TUNEL及RT-PCR等技术,观察各组胰腺组织内Bax mRNA变化及胰腺腺泡细胞凋亡情况、胰腺病理学改变及组织学评分变化情况。结果大鼠胰腺细胞凋亡指数与胰腺组织病理学评分呈负相关;奥曲肽可使AP模型的胰腺组织内Bax mRNA表达增加,诱导胰腺腺泡细胞凋亡增加,使胰腺病理学改变及组织学评分改善。结论奥曲肽可能诱导AP腺泡细胞的凋亡,减轻胰腺炎的严重程度。     

大鼠急性胰腺炎胰腺细胞凋亡改变的实验研究

目的: 了解急性胰腺炎(AP)发病过程中胰腺腺泡细胞凋亡情况. 方法: 将48只SD大鼠随机分为两组(胰腺炎组和假手术组),每组24只.经十二直肠行胆胰管逆行加压注射4%牛磺胆酸钠,诱导大鼠AP模型,于术后3小时、6小时、12小时和24小时分批处死动物,应用末端脱氧核苷酸转换酶(TdT)介导的末端标记(TUNEL)方法检测胰腺组织中的腺泡细胞凋亡. 结果: 假手术组胰腺组织中存在极少量的凋亡细胞,数量相对恒定,与时间无关;胰腺炎组术后病变加重,胰腺凋亡细胞明显增多,3小时、6小时、12小时凋亡指数均明显高于假手术组([WTBXP<0.01),术后24小时接近假手术组水平. 结论: 急性胰腺炎胰腺存在腺泡细胞凋亡的改变,胰腺细胞凋亡可能是急性胰腺炎病变过程中的一个重要特征.     

茵陈承气汤对大鼠急性出血坏死性胰腺炎腺泡细胞凋亡及调控基因的影响

目的 :研究茵陈承气汤对大鼠急性出血坏死性胰腺炎腺泡细胞凋亡及调控基因Bax表达水平的影响。 方法 :胰胆管内注射去氧胆酸钠制备大鼠急性出血坏死性胰腺炎模型 ,随机分为对照组 ,模型组 ,中药 (茵陈承气汤 )治疗组 ,观察各组大鼠胰腺组织病理学、血清淀粉酶、IL - 6、IL - 8的变化 ,应用TUNEL法分析急性胰腺炎时胰腺腺泡细胞凋亡情况 ,WesternBlotting检测凋亡调控基因 -Bax的表达情况。 结果 :中药组大鼠血清淀粉酶 ,IL - 6、IL - 8水平较模型组低 ,病情明显改善 ,两组差异有显著性 (P <0 0 5 ) ;模型组凋亡指数为 2 34± 1 15 ,中药组为 11 5 2± 3 41,P <0 0 1;模型组Bax的表达水平为 96 8± 2 76 ,中药组为 1331± 112 ,P <0 0 1。 结论 :茵陈承气汤可能通过上调促凋亡基因Bax的表达水平 ,诱导已受损的腺泡细胞发生凋亡 ,减轻腺泡细胞坏死 ,减少胰酶及炎性介质的释放 ,从而有利于防止急性胰腺炎的病理损害恶化     

区域动脉灌注5-FU诱导大鼠急性胰腺炎腺泡细胞凋亡及Caspase-3表达

目的 探讨区域动脉灌注（regional arterial infusion,RAI）5-氟尿嘧啶（5-fluorouracil,5-FU）对大鼠急性胰腺炎（acute pancreatitis,AP）胰腺腺泡细胞凋亡的影响及其对急性胰腺炎的治疗作用。方法 18只健康成年SD大鼠随机分成3组：对照组（C组）、急性胰腺炎组（AP组）和5-FU治疗组（5-FU组）。各组均行胃左动脉置管,AP组和5-FU组以大剂量雨蛙素（每小时腹腔注射50 μg/kg,连续6 h）诱导建立大鼠急性胰腺炎模型,对照组注射同等剂量的生理盐水。5-FU组在第一次腹腔注射雨蛙素1 h后立即区域动脉灌注5-FU（40 mg/kg）治疗,C组和AP组区域动脉灌注等量的生理盐水。建模成功后3 h取标本并处死大鼠,检测血淀粉酶浓度,RT-PCR法检测胰腺组织内TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA表达水平,胰腺标本送病理学检查,Western blotting法检测胰腺组cleaved Caspase-3的蛋白表达,同时TUNEL法检测大鼠胰腺腺泡细胞凋亡情况。结果 与AP组比较,5-FU组血淀粉酶浓度明显降低（P＜0.05）;胰腺组织内TNF-α、IL-1β、IL-6  mRNA表达水平下降（P＜0.05）;胰腺组织病理学改变减轻;胰腺组织cleaved Caspase-3的蛋白表达增加;胰腺腺泡细胞凋亡增加（P＜0.05）。结论 区域动脉灌注5-FU对大鼠急性胰腺炎有改善作用,其作用机制可能与诱导胰腺腺泡细胞凋亡有关。     

大鼠急性胰腺炎胰腺细胞凋亡改变的实验研究的实验研究

目的 :了解急性胰腺炎 (AP)发病过程中胰腺腺泡细胞凋亡情况。方法 :将 48只SD大鼠随机分为两组 (胰腺炎组和假手术组 ) ,每组 2 4只。经十二直肠行胆胰管逆行加压注射 4%牛磺胆酸钠 ,诱导大鼠AP模型 ,于术后 3小时、6小时、12小时和 2 4小时分批处死动物 ,应用末端脱氧核苷酸转换酶 (TdT)介导的末端标记 (TUNEL)方法检测胰腺组织中的腺泡细胞凋亡。结果 :假手术组胰腺组织中存在极少量的凋亡细胞 ,数量相对恒定 ,与时间无关 ;胰腺炎组术后病变加重 ,胰腺凋亡细胞明显增多 ,3小时、6小时、12小时凋亡指数均明显高于假手术组 (P <0 .0 1) ,术后 2 4小时接近假手术组水平。结论 :急性胰腺炎胰腺存在腺泡细胞凋亡的改变 ,胰腺细胞凋亡可能是急性胰腺炎病变过程中的一个重要特征     

磷脂酰肌醇3-激酶γ基因敲除对急性胰腺炎小鼠腺泡细胞的影响

目的:探讨磷脂酰肌醇3-激酶γ(PI3Kγ)基因敲除对急性胰腺炎(AP)小鼠病变程度、腺泡细胞功能以及对HSP70表达的影响。方法:雄性野生型(WT)C57BL/6小鼠和雄性PI3Kγ基因敲除(KO)小鼠各12只,随机均分为对照组和AP组,采用腹腔内注射蛙皮素诱导在体AP模型,对照组以同样的方式和体积给予生理盐水;另取两种动物各8只,行胰腺腺泡细胞体外分离,用胆囊收缩素(CCK-8)刺激作为离体AP模型,对照组给予二甲基亚砜(DMSO)。观察胰腺组织病理变化、血清淀粉酶水平、胰腺组织和腺泡细胞胰蛋白酶活性和腺泡细胞淀粉酶释放率。Western blot检测胰腺组织及腺泡细胞中HSP70蛋白的表达。结果:病理学观察,两种小鼠的对照组胰腺未见异常,而AP组均出现不同程度的水肿、出血、坏死,经定量分析,KO小鼠胰腺炎腺泡细胞坏死数量和空泡数量明显少于WT小鼠(均P0.05);两对照组间胰腺组织胰蛋白酶活性和体外腺泡细胞胰蛋白酶活性无明显差异(均P0.05),但AP组(在体、离体)KO小鼠胰腺组织及腺泡的胰蛋白酶活性均低于WT小鼠(均P0.05)。两种小鼠间血清淀粉酶水平及腺泡细胞淀粉酶释放曲线差异无统计学意义(P0.05);与对照组比较,AP组(在体、离体)小鼠胰腺组织和腺泡细胞HSP70表达均增加,且KO小鼠表达量明显大于WT小鼠(均P0.05)。结论:AP时,PI3Kγ可能通过下调HSP70表达水平和增强胰蛋白酶原活化促进腺泡细胞坏死,而对淀粉酶的分泌过程无明显影响。     

软骨寡聚基质蛋白在慢性胰腺炎损伤中退变腺泡细胞内的表达

目的 研究正常胰腺、慢性胰腺炎与胰腺癌组织中软骨寡聚基质蛋白(cartilage oligomeric matrix protein,COMP)mRNA和蛋白表达水平的差异,揭示COMP在慢性胰腺炎样损伤中的意义。方法 采用Northern印迹法、Western印迹法、原位杂交法与免疫组化方法对14例慢性胰腺炎、14例胰腺癌及15例正常胰腺组织进行分析。结果 在慢性胰腺炎组织中和胰腺癌组织中类似慢性胰腺炎损伤的退变腺泡细胞胞浆内,存在高水平的COMP mRNA信号与免疫反应;而在胰腺癌细胞、正常胰腺组织的导管细胞与胰岛细胞的胞浆内,COMP mRNA信号与免疫反应微弱或缺如。结论 COMP在慢性胰腺炎及胰腺癌中类似慢性胰腺炎损伤的退变腺泡细胞内高表达,可能与慢性胰腺炎中腺泡细胞功能异常有关。     

大黄素诱导细胞凋亡对不同类型急性胰腺炎腺泡死亡方式的影响

目的 探讨大黄素(emodin)诱导细胞凋亡对不同类型急性胰腺炎(AP)腺泡细胞死亡方式影响及其可能机制.方法 制作大鼠急性水肿型胰腺炎(AEP)与急性坏死型胰腺炎(ANP)模型.使用大黄素进行治疗.采用原位TUNEL及RT-PCR等技术,观察胰腺组织内细胞凋亡、NF-κBmRNA、Bax mRNA及TNF-α mRNA等变化情况.结果 各组大鼠胰腺细胞凋亡指数与胰腺组织病理学评分呈负相关;大黄素治疗可诱导各型AP模型腺泡细胞凋亡,胰腺病理学改变及组织学评分改善,胰腺组织内NF-κB mRNA及Bax mRNA表达增加.结论 诱导不同类型AP胰腺细胞凋亡可明显减轻AP病情.大黄素为治疗AP的有效药物,可能通过影响NF-κB活化及Bax的表达来诱导AP时腺泡细胞的凋亡,减轻胰腺炎的严重程度.     

细胞凋亡在急性胰腺炎发病中的作用及川芎嗪对其影响

目的:探讨细胞凋亡在急性胰腺炎发病机制中的作用,了解川芎嗪在急性胰腺炎中对细胞凋亡的影响.方法:经十二指肠胆胰管逆行加压注射5%牛磺胆酸钠,诱导大鼠胰腺炎模型并建立对照组、治疗组,通过病理评分和TUNEL法检测三组胰腺组织的病理形态和胰腺细胞的凋亡指数.结果:胰腺炎在早期以细胞凋亡为主,病变程度轻;晚期以细胞坏死为主,病变程度重;诱导细胞凋亡有利于胰腺炎的预后.川芎嗪可促进AP胰腺腺泡细胞的凋亡.结论:通过诱导细胞凋亡可以减轻胰腺炎的病变程度,但具有一定的时间性.川芎嗪具有活血化瘀、抗血小板凝血、扩张小动脉、疏通微循环的作用,可通过促进AP腺泡细胞凋亡而改善AP的病理进程.     

大鼠胰腺炎模型中腺泡细胞凋亡的观察

目的: 探讨胰腺腺泡细胞凋亡在胰腺炎发病机制中作用.方法: 复制大鼠胰腺炎模型,将45只SD大鼠分成3组,即重症胰腺炎组18只,轻型胰腺炎组18只和正常对照组9只.在术后第6,12,24小时3个时相点行胰腺组织病理学检测评分和腺泡细胞TUNEL法凋亡检测.结果: 重症胰腺炎组凋亡少见,以细胞坏死为主,且随时间凋亡趋减少,各时相点凋亡指数与轻型组和正常相比差异有显著性意义.轻型组以细胞凋亡为主,随着炎症减轻凋亡增多,术后第24小时达高峰.正常组为正常胰腺组织,少见凋亡.结论: 胰腺炎腺泡细胞中存在细胞凋亡现象,细胞凋亡与坏死呈反相关,细胞凋亡有减轻胰腺炎严重程度的作用.     

细胞凋亡在急性胰腺炎发病机制中所起作用的研究进展

细胞凋亡和细胞坏死是胰腺腺泡细胞两种完全不同的死亡方式，两者的比例将决定急性胰腺炎表现为水肿型还是出血坏死型。急性胰腺炎时不仅有胰腺腺泡细胞的凋亡同时伴有炎症因子的释放，而不同的炎症因子对于细胞凋亡的调控大都不一样。笔者就此进行综述。     

异搏定对胰腺腺泡细胞内游离钙离子浓度的影响

目的:探讨细胞内钙超负荷在急性胰腺炎(AP)发生发展中的作用.方法:使用140只SD大白鼠胆胰管逆行加压注射4.5%牛磺胆酸钠制成AP模型,用荧光指示剂Fura-2/Am测定游离胰腺腺泡细胞内游离钙离子浓度([Ca~(2 )]i).结果:注射后2小时和3小时胰腺呈急性出血坏死性炎症早期改变,制AP模型后AP组[Ca~(2 )]i较对照组明显增高(P<0.001),AP组胰腺腺泡细胞内[Ca~(2 )]i增高值与胰腺病理变化程度呈正相关关系(r_s=0.9727,P<0.001),异搏定治疗可明显提高病鼠生存率和改善胰腺组织出血坏死程度和腺泡细胞超微结构损害.结论:胰腺腺泡细胞内钙超负荷在胆汁性急性水肿性胰腺炎向出血坏死性胰腺炎转变中起明显作用,钙通道阻滞剂异搏定可明显阻止胰腺细胞内钙离子超负荷,是其治疗急性胰腺炎的主要机理之一.     

肝细胞生长因子与急性胰腺炎

肝细胞生长因子(HGF)是一种高效的多效性因子,对多种器官的不同类型细胞均有生物学作用。其受体c-Met在多种组织和细胞中表达,HGF通过与其特异性受体c-Met结合引起一系列信号转导蛋白的酶促反应,促发相应的生物学效应。近期研究表明,在急性胰腺炎患者中可检测到血清HGF水平增高,并与患者的预后相关;给予外源性HGF能减轻急性胰腺炎的炎症反应,并能促进腺泡细胞的凋亡,降低胰腺细胞中的氧自由基水平。     

微小RNA-92b在大鼠急性胰腺炎中对腺泡细胞凋亡的影响

目的 观察微小RNA-92b(miRNA-92b)在大鼠急性胰腺炎中的表达及其对急性胰腺炎腺泡细胞凋亡的影响.方法 以50μg/L肿瘤坏死因子(TNF)-α诱导大鼠胰腺腺泡细胞(AR42J)建立体外急性水肿型胰腺炎模型,未处理的AR42J作为对照,检测干预12 h后培养基中淀粉酶含量,实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测miRNA-92b在1、3、6h时表达量变化.慢病毒携带miRNA-92b的模拟物(miRNA mimic)及反义寡核苷酸链(miRNA AMO)转染AR42J,转染空病毒组作为对照.建立体外急性胰腺炎模型后,使用FQ-PCR检测miRNA-92b表达量;流式细胞术检测AR42J细胞凋亡率,Western blot法检测活性半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶3(Caspase-3)表达量变化.结果 TNF-α诱导AR42J建立的体外急性胰腺炎模型,miRNA-92b 3 h表达水平较对照组升高(1.81 ±0.09)倍(P＜0.05);转染miRNA-92b mimic组miRNA-92b表达量较空病毒组升高(3.71±0.33)倍(P＜0.05),AR42J凋亡率[(41.20±2.42)％]较空病毒组[(23.50±1.85)％]明显升高(p＜0.05),活性Caspase-3表达量明显升高;转染miRNA-92b AMO组较空病毒组miRNA-92b表达量降低(0.58±0.15)倍(P＜0.05),AR42J凋亡率[(13.80±0.40)％]较空病毒组[(23.50±1.85)％]明显降低(P＜0.05),活性Caspase-3表达量明显降低.转染空病毒组较未转染组miRNA-92b表达量、细胞凋亡率、活性Caspase-3表达量差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 急性水肿性胰腺炎发生时miRNA-92b表达量明显升高;上调miRNA-92b的表达,胰腺腺泡细胞的凋亡率增高,下调其表达胰腺腺泡细胞的凋亡率降低.     

中性粒细胞对大鼠急性重症胰腺炎胰腺腺泡凋亡的作用

目的探讨中性粒细胞在大鼠急性重症胰腺炎时对胰腺的病理损害及对胰腺腺泡凋亡的作用。方法氨甲蝶呤（MTX）腹腔注射制成大鼠低中性粒细胞模型，然后以脱氧胆酸胰胆管注射诱发急性重症胰腺炎，造模后0、3、6、9、24、48、72h随机分批处死动物，按各时间点检测胰腺组织髓过氧化物酶活性（MPO），血清淀粉酶，应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的DUPT末端标记染色（TUNEL）和电镜技术检测胰腺腺泡凋亡情况，胰腺组织的病理学检查。结果实验组MPO在造模24h开始明显低于对照组（P〈0．01），胰腺组织的病理损害程度也较对照组轻。两组胰腺腺泡凋亡在造模3和6h均仅出现少量凋亡，在24和48h显著增多，以后逐渐下降；实验组胰腺腺泡凋亡指数明显高于对照组胰腺腺泡凋亡指数（P〈0．01）。结论适当地降低外周血的中性粒细胞水平能够增加胰腺腺泡凋亡，从而减轻急性重症胰腺炎时胰腺的病理损害程度。